GB-T9695.27-1991肉与肉制品维生素B1含量测定.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准肉与肉制品维生素含量测定国家技术监督局批准实施主题内容与适用范围本标准规定了肉与肉制品中维生素含量的测定方法本标准适用于肉与肉制品中维生素含量的测定引用标准肉与肉制品取样方法原理试样用酸水解使维生素硫胺素 游离 维生素经酶解 纯化后在碱性高铁氰化钾作用下定量氧化成具有蓝色荧光的硫色素在激发波长发射波长处测定其荧光强度 荧光强度与硫色素含量成正比 以此计算维生素的含量试剂所用试剂均为分析纯 水为蒸馏水或同等纯度的水乙酸钠溶液盐酸溶液溴甲酚绿指示剂 变色范围值为绿蓝指示剂与氢氧化钠溶液在玛瑙乳钵中研磨溶解 以水稀至溴酚蓝指示剂 变色范围值为黄蓝指示剂与氢氧化钠溶液在玛瑙乳钵中研磨溶解 以水稀至高峰淀粉酶溶液氯化钾溶液酸性氯化钾溶液 每升氯化钾溶液中加入浓盐酸氢氧化钠溶液铁氰化钾溶液氧化剂铁氰化钾溶液用氢氧化钠溶液稀释至临用前配制异丁醇乙醇溶液酸性乙醇乙醇溶液用盐酸溶液调节为人造沸石 市售品要经活化处理活化方法 将粒度目的人造沸石置于烧杯中 加约倍量的热水搅拌 静置后倾出上清液弃去 重复此操作 直至上清液透明 接着加入倍量的乙酸溶液搅拌浸泡静置后倾去上清免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载液 重复此操作次然后加入约倍量热的酸性氯化钾溶液 在沸水浴中加热弃去上清液 加乙酸溶液洗涤两次后 用水反复洗至无氯离子为止 用硝酸银溶液检查将处理过的人造沸石浸没于水中保存 也可于干燥备用维生素回收率要大于维生素标准溶液标准贮备液称取维生素标准品于棕色容量瓶中 用酸性乙醇稀释至刻度 置冰箱保存标准工作液取标准贮备液用酸性乙醇定容至棕色容量瓶中仪器和设备实验室常规设备绞肉机 孔径不超过培养箱 可控制温度棕色具塞试管荧光分光光度计人造沸石玻璃层析柱 构造如图层析柱可控制流速为准备方法 将脱脂棉置于毛细管顶端防止沸石流出和控制溶液流速把悬浮于水中的人造沸石倾入层析柱中 其高度约约用人造沸石 仔细洗下贮液槽壁上的人造沸石颗粒在吸附过程中液面要始终高于沸石表面 防止柱内有气泡单位图玻璃层析柱高压釜试样按取样取有代表性的试样于绞肉机中至少绞两次使其混匀 贮于密闭容器中备用 尽快分析试样分析步骤水解免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载称取试样 精确至约含维生素于具塞锥形瓶中 加入盐酸溶液搅匀 于沸水浴中水解或者用高压釜水解取出冷却至室温酶解用乙酸钠溶液调节试样水解液 使为用溴甲酚绿指示剂在点滴板上检查加入高峰淀粉酶溶液混匀 在培养箱中保温取出冷却后用盐酸调整为左右 用溴酚蓝指示剂在点滴板上检查将溶液全部转移到容量瓶中 用水稀释至刻度摇匀用滤纸过滤 取滤液备用净化取酶解滤液注入人造沸石层析柱 层析柱流速控制在左右 弃去流出液用份近沸热水洗涤层析柱 弃去流出液 用热的酸性氯化钾溶液分次洗脱维生素收集于容量瓶中 冷却后用酸性氯化钾溶液定容混匀备用氧化取支具塞棕色试管 加入氯化钾或氯化钠 再加入净化后的样液一支试管中加入氧化剂立即旋摇试管 混匀 加入异丁醇萃取 塞上塞子振摇静置分层 另一支试管作为空白对照 加入氢氧化钠溶液旋摇混匀 加入异丁醇萃取 静置分层 异丁醇层用无水硫酸钠脱水荧光测定准备好荧光分光光度计 调节激发波长为发射波长为狭缝为取异丁醇萃取液 置于比色皿中 测定氧化样品管中的荧光强度为空白样品管中的荧光强度为维生素标准的测定取维生素标准工作液于具塞锥形瓶中 同样按条操作步骤进行水解 酶解 净化 氧化 测定氧化标准管中荧光强度为空白标准管中荧光强度为分析结果的计算计算公式式中试样维生素的含量氧化样品管中的异丁醇液的荧光强度空白样品管中的异丁醇溶液的荧光强度氧化标准管中的异丁醇溶液的荧光强度空白标准管中的异丁醇溶液的荧光强度试样质量当符合允许差规定的要求时 取两次测定结果的算术平均值作为结果允许差由同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过其算术平均值的免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载附加说明本标准由中华人民共和国商业部提出本标准由中国肉类食品综合研究中心归口本标准由中国肉类食品综合研究中心起草本标