金黄色葡萄球菌检验PPT课件.ppt

金黄色葡萄球菌定性检验,1,1. 了解金黄色葡萄球菌生物学特性。 2. 掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和检验方法。,学习目的与要求,2,一、生物学特性菌体形态及培养特征,革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。,3,大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌(高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡黄色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落)。,4,最适生长温度37，最适pH为7.4； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； 可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下还能生长； 一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。,5,所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。 金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生磷脂环。,6,生物学特性 致 病 性,金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 d.耐热核酸酶 e.肠毒素：引起急性胃肠炎。,7,葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。,8,二、检验程序与操作方法,食品安全国家标准GB 4789.10-2016 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验,9,检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质,检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质,检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质,检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质,检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质,10,检验程序 样品处理,称取25g（mL）样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤的无菌均质杯内,8000r/min10000r/min均质1min2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min2min。,11,检验程序 增菌,利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。 361培养18h24h。,12,检验程序 分离培养（血平板和BP平板）,血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。 典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。,13,大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环,阳性,阴性,14,BP（贝尔德- 帕克）平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。,检验程序分离培养,15,在BP平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2mm3mm, 颜色呈灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。 有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清 晰带外,其他外观基本相同。 从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙,质地较干燥。,16,B-P平板,圆形、光滑、黑色有光泽, 周围绕以不透明圈,其外有清晰带,17,革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜,检验程序 确证鉴定1.革兰氏染色镜检,18,检验程序 确证鉴定2.血浆凝固酶试验,金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别的主要试验是测定其凝固酶。 试管法 挑取BP平板或血平板上至少5个可疑菌落（少于5个全选，分别接种于BHI肉汤和营养琼脂小斜面， 361 培养18h-24h。 取0.5mL无菌生理盐水加入瓶装冻干兔血浆中至完全溶解，加入培养后的BHI肉汤培养物0.2-0.3mL，振荡摇匀，放361恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如凝固体积大于原体积一半时，判定为阳性。 如结果可疑，从营养琼脂小斜面挑去菌落到BHI肉汤，重复凝固酶试验。,19,不凝固,少量、零散凝固,明显的块状凝固,巨大块凝固,完全凝固，倒置不流动,阴性,阳性,20,试管法,21,结果报告,在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。 即：检出/ 25g(mL) 或 未检出/ 25g(mL),22,小结,了解金黄色葡萄球菌的生物学特性（耐盐，能产毒素、凝固酶等） 掌握检验流程 知识点：增菌液，BP平板和血平板的典型菌落特征，凝固酶试验。,23,新旧标准主要差异,增菌液统一改成了7.5%氯化钠肉汤 这个标准主要是因为2008版本参照美国FDA的方法增加了10%胰胨大豆肉汤以来，