现代组织化学免疫组化.ppt

,免疫组织化学的应用,病理学系 张志刚,原理: 抗原、抗体的特异性结合； 组织内定位、形态结合功能 应用: 广泛性 生理活动或病理过程,举例： 生理活动 胚胎发育过程 内分泌（旁分泌、自分泌功能） 免疫反应（细胞免疫、体液免疫） 活动状态（静止、活动或转化）, 炎症反应（炎症细胞、炎症介质） 修复过程（细胞外基质沉积，间质 细胞活化） 肿瘤（起源、良恶性） 致病原检测（外来致病原检测、内 源性抗原沉积）,病理过程,食道鳞癌-HPV,食道腺癌-HPV,慢性胃炎胃溃疡的病因发现 马歇尔获2019年诺贝尔医学奖,1979年，沃伦教授初步发现幽门螺杆菌，之后马歇尔与他合作开展研究,最终发现幽门螺杆菌与慢性胃炎的关系。,免疫组化hp阳性,一. 检测致病原,（一）外源性 1. 细菌类 溶链球菌M蛋白 肾小球肾炎、风湿热 伤寒杆菌Vi抗原 肾小球肾炎 葡萄球菌抗原 肾小球肾炎 白喉杆菌抗原 肾小球肾炎,2. 病毒 肝炎病毒（甲、乙、丙型肝炎病毒等） 病毒性肝炎 肝细胞肝癌,肝 HBsAg+,肝 HBcAg+,肝 HCV Ag+,肾小球肾炎 （乙、丙型肝炎病毒）,肾小球 HBcAg +,肾小管 HBcAg +,人类免疫缺陷病毒 AIDS 病 乳头状瘤病毒 湿疣（6，11型） 宫颈癌（16，18，31型） 单纯疱疹病毒 宫颈癌 巨细胞病毒 巨细胞病毒性肺炎等 EBV病毒 Burkitt 淋巴瘤 鼻咽癌 传染性单核细胞增生症 人类T细胞病毒型 急性T细胞白血病 型 蕈样霉菌病,其他病毒： 出血热病毒（流行性出血热） 麻疹病毒（亚急性硬化性全脑炎） 乳多空病毒（SV40等）（进行性多灶性白质脑病） 呼吸道合胞病毒、腺病毒（间质性肺炎）,3. 寄生虫类 卡氏孢子虫 卡氏孢子虫肺炎 血吸虫卵 肝肠血吸虫、肾小球肾炎 疟原虫 疟疾、肾小球肾炎 4. 螺旋体 梅毒螺旋体 梅毒、肾炎 5.支原体 肺炎支原体 间质性肺炎,（二）内源性 DNA SLE 线粒体 原发性胆汁性肝硬化,DNA,线粒体, 微粒体 甲状腺炎 平滑肌抗原 狼疮性肝炎,甲状腺微粒体,血管平滑肌, 壁细胞抗原 慢性萎缩性胃炎 甲状腺球蛋白 慢性甲状腺炎 Col NCI抗原 Goodpasture 综合征 肾小管刷状缘抗原 膜性肾炎 中性粒细胞胞质抗体（ANCA） ANCA相关性血管炎,胃壁细胞抗原,大鼠hyemann 肾炎,二. 免疫性损伤 （变态反应性疾病）, 免疫活性细胞 1. T 细胞 静止T细胞 CD1CD8,可分为CD4细胞、CD8细胞 活化T细胞 CD9（J2）、CD25（IL2R）、Ia(HLA-D) 其他标志：CD80、CD95、CDw109、CDw122,2. B 细胞 静止B细胞 SIg(G、M、D), CD19-22、CD24、 Ia（HLA-D） 活化B细胞 CD23（Blast-2, BCGF) CD25(IL-2R) 其他标志 CD80、CD86,3.NK细胞 CD11b、CD11c、CD16、CD35、CD57、CDw122等 4.单核巨噬细胞 CD16、CD23、CD32、CD115 酶类：1抗胰蛋白酶、1抗糜蛋白酶 溶菌酶,肾小球MAC387+细胞,肿瘤溶菌酶,肺1-ACT,代表性疾病： 移植物排异反应 甲状腺炎 干燥综合征 病毒性肝炎, 抗体介导的变态反应性疾病 免疫球蛋白 IgG、IgA、IgM、IgE、 、链 补体 - C1、C2、C3、C4 经典途径 C3备介素 替代途径,代表性疾病： 肾小球肾炎 发病机制 免疫复合物型 颗粒状荧光 抗GBM型 线状荧光,球蛋白类型 IgG为主 感染后肾炎、膜性肾炎、 膜增生性肾炎 IgA为主 IgA肾病、紫癜性肾炎 IgM为主 IgM肾病、FSGS 、 淀粉样肾病、轻链肾病,IgAN,FSGS, SLE 血浆 自身抗体种类多 肾组织 复合物中球蛋白和补体种类多、数量大、 范围广 皮肤 狼疮带,IgG,IgA,IgM,SLE,C3,C1q, 变态反应性血管炎（结节性多A炎、显微镜型多血管炎） IgG、IgM、IgA沉积 ANCA CANCA（胞浆型） 韦格纳肉芽肿 pANCA（核周型） 显微镜型多血管炎等, 移植物排异反应 血管壁 IgG、C3沉积 肾小球 复发性肾炎 其他自身免疫性疾病 混合性结缔组织病：血管、 肾小球内IgG、C3沉积 硬皮病：结缔组织、 血管壁IgG沉积,硬皮病,G,三. 修复、纤维化机制的研究 肉芽组织是不完全性修复的物质基础,常见疾病 A粥样硬化 冠心病 肝硬化 肝昏迷、上消化道大出血 肾小球硬化 肾功能衰竭 肺纤维化 肺心病、肺性脑病,(一)物质基础 间质细胞群 A壁平滑肌样细胞 肝星状细胞 肾小球系膜细胞 肺成纤维细胞, ECM 胶原蛋白 间质型 、型胶原 基膜型 、型胶原,Col-I,Col-IV,粘连性糖蛋白 FN、LN、TBS、透明质酸 糖胺聚糖（蛋白氨基多糖）: 硫酸化氨基多糖 软骨素、肝素、肤质 小分子氨基多糖 胶原修饰蛋白等,Col-IV,FN, 生长因子及其受体 EGF 上皮细胞生长 PDGF 结缔组织生长（血管、肾小球硬化） TGF ECM合成增加 （肝、肺、肾纤维化） bFGF 肝、肺纤维化和脑胶质化, ECM 受体（整合蛋白,integrin） 、 链组成的糖蛋白 主要分为： 1类 FNR： 5 1、 v 1 LMR： 6 1 、 1 1 ColR: 1 1、 2 1、 3 1 2类 动脉内皮细胞表面粘附分子 3 类 血小板gpb/a：Fb、FN、vWF、Vn v 3 ：Vn、Fb、vWF、TBS, 基质降解酶及其抑制因子 纤溶酶降解系统: PAs（uPA、tPA） PAI-1,2,3,4 基质金属酶降解系统: MMPs TIMPs 细胞内传递信使 PKC依赖途径 非PKC依赖途径 Smad信号通路,四. 肿瘤的病理诊断, 组织相关性标志物 ( tissue associated marker) 又称组织特异性标志物 ( specific tissue marker) 用于区分肿瘤的组织来源,表1. 上皮细胞常用标志物 -,名 称 英文缩写 分子量（KD） 意 义 - 细胞角蛋白 CK 40-68 上皮（腺、鳞上皮） 上皮细胞膜抗原 EMA 45-400 内脏器官上皮 桥粒蛋白 DSP 215-285 细胞连接结构 甲状腺球蛋白 TGB 670 甲状腺上皮 前列腺特异抗原 PSA 34 前列腺上皮 组织多肽抗原 TPA 20-25 肝、胆管上皮 -,1. 上皮细胞类抗原 细胞角蛋白（CK）低分子量 腺状上皮 高分子量 鳞形上皮 全细胞角蛋白 腺、鳞和移行上皮,CK（宫内膜 ） CK（ 卵巢黏液腺癌 ） CK ( 食管腺癌 ) CK ( 皮肤 ),特异性上皮标志 甲状腺球蛋白（TGB）甲状腺滤泡上皮 前列腺特异性抗原（PSA） 前列腺上皮 甲胎蛋白（-FP） 肝癌细胞、生殖细胞肿瘤 胚胎性硫糖蛋白（FSA） 胃癌细胞,TGB（甲状腺） PSA（前列腺癌） PSA（转移癌） -FP（卵黄囊癌）,上皮膜抗原（EMA） 特异性较CK差，因浆细胞瘤、 淋巴瘤细胞等可为阳性 癌胚抗原（CEA） 腺癌的标记物,EMA（乳腺癌） EMA（肾癌） CEA（结肠癌）,表2. 间叶组织常用标志物 - 名 称 英文缩写 分子量（KD） 意 义 - 波形蛋白 Vm 57 间叶组织 结蛋白 Dm 53 肌组织 血友病因子 VWF 200-240 血管、淋巴管 (F-RAg) 肌红蛋白 MG 17.8 横纹肌、中胚叶组织 溶菌酶 14.4 组织细胞 1-抗胰蛋白酶 1-AT 1-抗糜蛋白酶 1-ACT -,2.间叶组织类抗原 间叶细胞性: 波形蛋白（Vm） 间叶性肿瘤,Vm ( 结肠间质 ) Vm ( 恶性纤维组织细胞瘤 ),肌源性: 结蛋白( Dm ) 肌源性肿瘤 肌动蛋白( actin ) 肌源性肿瘤 肌凝蛋白( myosin ) 骨骼肌 肌红蛋白( myoglobin，MGB ) 横纹肌肿瘤,Dm （平滑肌肉瘤） actin （乳腺导管） MGB（横纹肌）,血管（淋巴管）源性: 因子相关抗原（FRag）血管内皮细胞、 外皮细胞阳性 荆豆凝集素（UL） 血管内皮、外皮细胞阳性 CD 34 -血管（淋巴管）内皮细胞,FRag,表3. 神经组织常用标志物 - 名 称 英文缩写 分子量（KD) 意 义 - 胶质纤维酸性蛋白 GFAP 50-52 神经胶质 神经丝蛋白 NF 68 神经元 S-100 20-25 神经及外胚层源性组织 突触囊泡蛋白 Sy 38 神经元突触前囊泡、 肾上腺髓质等 -,3. 神经源性 神经微丝( neurofilament, NF )神经元及神经 内分泌肿瘤 S100 神经胶质细胞、鞘膜细胞、黑色素 细胞、肌上皮来源肿瘤,脑胶母瘤-NF 小脑星胶瘤-NF 皮内痣-S 100 神经纤维束-S100,神经元特异性烯醇化酶（NSE）神经元胞体和 胞突结构阳性 胶质纤维酸性蛋白（GFAP）神经胶质细胞阳性,NSE （胰岛） GFAP（大脑皮质）,表4. 淋巴造血组织常用标志物 - 名 称 英文缩写 分子量（KD） 意 义 - 全白细胞抗原 CD45 180-200 T、B 细胞 表面免疫球蛋白 SIg B 细胞 全B 细胞抗原 CD19 95 CD20 35-37 B 细胞 CD22 135 全T 细胞 CD2 46-50 T 细胞 CD3 19-29 CD5 67 CD7 40 -,- T 细胞亚群抗原 CD4 55 T 细胞 CD8 34 髓单核细胞抗原 CD11b 165 髓、单核细胞 CD13 15 CD14 55 CD15 105-200 髓单核细胞 也可见于R-S 细胞 CD33 67 CD34 105-120 前髓细胞、内皮细胞 Ki-1抗原 CD30 150-120 Ki+-1白血病, 霍奇金病 -,4.CD抗原 （前述） T、B 细胞抗原：用于区分白血病、淋巴瘤 等肿瘤的病理组织学类型 其他：CD45（LCA） 白细胞共同抗原 免疫球蛋白（SIg） B 细胞淋巴瘤 CD20 （L26）B细胞淋巴瘤 CD45R0（UCAL1） T 细胞淋巴瘤 CD15（LeuM1） 何杰金淋巴瘤（RS细胞） CD30（Ri-1） Ki-1+ 淋巴瘤 CD68(Kp-1) 组织细胞性淋巴瘤,1-ACT（淋巴结） (CD45)LCA +（霍奇金病） (CD15)LeuM +（白血病）,表5. 标记物对低分化恶性肿瘤的鉴别 - 肿瘤 CK EMA LCA S-100 Vm Dm - 癌 + + - -/+ -/+ - 恶黑 - - - + + - 恶淋 - - + - -/+ - 肉瘤 -/+ -/+ - -/+ + -/+ -,表6. 内分泌器官常用标志物 器官 名 称 英文缩写 肽类 意 义 垂体 促肾上腺皮质激素 ACTH 39肽 促肾上腺皮质功能 促甲状腺素 TSH 25-28KD 促甲状腺功能 促卵泡素 FSH 促卵泡发育、精子生成 黄体生成素 LH 促排卵、黄体生成、 雄激素分泌 生长激素 GH 191氨基酸 促组织生长 加压素 VP 9肽 促肾小管吸收，升压 催产素 OT 9肽 催产排乳,肾上腺 糖皮质激素（皮质） 糖原沉积 盐皮质激素 潴钠排钾 醛固酮 肾上腺素（髓质） 调节血压 去甲肾上腺素 甲状腺 甲状腺素（腺上皮） T3,T4 生长发育、代谢调节 降钙素（C细胞） 32肽 抑骨盐溶解,5. 内分泌类 腺垂体 促肾上腺皮质激素（ACTH） 生长激素（GH） 黄体生成素（LH） -促黑色素,ACTH GH LH - 促黑色素,胰岛素 胰高血糖素,表7. 弥散神经内分泌细胞(APUD)常用标记物 种类 名 称 英文缩写 肽类 意 义 A细胞 肠高血糖素 EG 69肽 升血压 D细胞 生长抑素 SS 14肽 功能多种 D1细胞 血管活性肠肽 VIP 28肽 舒平滑肌、促胰分泌 EC1细胞 P物质 SP 11肽 功能未明 EC2 促胃动素 Motilin 22肽 启肠运动 ECL细胞 组胺 HT 扩血管 G细胞 促胃液素 Gastropin 17肽 促胃液分泌,I细胞 缩胆囊肽 CCK 33肽 促胰淀粉酶分泌 K细胞 肠抑胃肽 GIP 43肽 抑胃液分泌 L细胞 肠高血糖样物 GLI 69肽 参与肠道免疫反应 N细胞 神经降压肽 Neurotesin 13肽 降压、抑促胃液 P细胞 铃蟾肽 Bombesin 14肽 促胃液素、CCK分泌 PP细胞 胰多肽 PP 抑胰液分泌 S细胞 促胰液素 Secretin 促胰液分泌 PYY细胞 PYY肽 PPY 功能未明,嗜铬细胞瘤,促胃液素瘤,6.激素受体 雌、孕激素受体 女生殖道肿瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌等 雄激素受体 中枢神经肿瘤、前列腺癌、肝癌等,ER（乳腺癌） ER（乳腺癌）,7. 酶类 碱性磷酸酶（AKP） 肝癌、骨肉瘤 酸性磷酸酶（ACP） 前列腺癌 5核苷酸磷酸二酶脂（5NP） 肝癌 谷氨酰转肽酶（GT） 肝癌 M2型丙酮酸激酶（M2RYK） 肝癌 胎盘碱性磷酸酶（PLAP） 精原细胞瘤,8.其他 HMB45 恶性黑色素瘤 hCG 合体滋养叶细胞及其肿瘤 OC125 卵巢浆液性肿瘤,(二) 肿瘤相关性标志物 （tumour associated marker） 又称肿瘤预后性标志物 (tumour prognostic marker） 用于确定肿瘤的良恶性或预后,1. 癌基因与抑癌基因 表8. 癌基因与人类相关肿瘤 (一) - - 癌基因 恶性肿瘤 - abl 慢性粒细胞白血病 bcl-2 B 细胞淋巴瘤 bcl-3 慢性淋巴细胞性白血病 C-erbB 鳞状细胞癌、腺癌、星形胶质瘤 neu 乳癌、卵巢癌、胃癌 lck 结肠癌 lyt10 B 细胞淋巴瘤 Pml 急性髓性白血病 -,表8. 癌基因与人类相关肿瘤(二) - myc 多种肿瘤 ras 多种肿瘤 ret 甲状腺癌 K-sam 胃癌 sis 肉瘤 tal-1 急性淋巴细胞白血病 ros 急性白血病 fms 绒癌、外阴癌 -,表9. 抑癌基因与人类相关肿瘤 - 抑癌基因 相关肿瘤 - RB 视网膜母细胞瘤 p53 多种肿瘤 WT1 肾母细胞瘤 NF1 神经纤维瘤 NF2 神经鞘瘤 DCC 直、结肠癌 APC 结肠癌等 BRCA1、2 乳腺癌 p21 多种肿瘤 p16 多种肿瘤 p27 多种肿瘤 MSH2，MLH1 非息肉性结肠癌 -,nm-23（牙龈鳞癌）,P-53（平滑肌肉瘤）,P-21 （肺鳞癌） P-27（乳腺癌）,2. 粘附分子家族,A. 钙粘蛋白（cadherin） 又称钙依赖性粘附素家族 跨膜糖蛋白 主要分为E、P、N、 还有Ep、B、M、R、T、V等 723-748个氨基酸 存在于分化性肿瘤，低分化者降低或消失,B . 整合蛋白（integrin） 又称整合素家族 由亚单位组成的异二聚体，20多种 其中亚单位16种，亚单位8种 参与肿瘤转移和着落，侵袭性肿瘤时其表达增高,C . 免疫球蛋白超家族（IgCAMs） 种类多 细胞间粘附分子（ICAM1，2，3）、 血管细胞粘附分子（VCAM）、 杀伤T细胞相关抗原4（CTLA-4）、 血小板内皮细胞粘附分子-1（PECAM-1）， 也包括CEA 跨膜蛋白，含Ig 样结构区 血清ICAM-1，VCAM-1升高，可能与肿瘤发生转移有关,D. CD 44 家族 透明质酸受体，也介导其他ECM成份的结合 可分为3 种: 80-90103（CD44s） 120-160103（CD44v） 180-215103（CD+硫酸软骨素） 跨膜糖蛋白，341个氨基酸，MW 37.2103 糖基化的 CD44 蛋白为80-90103 糖基化变异体的 CD44 蛋白为120-1600103（10多种） 恶性肿瘤细胞 CD44 表达升高,E. 选择素家族（selectin family） 又称凝集素样细胞粘附分子 分为3 种 L-选择素-淋巴细胞归巢受体 P-选择素-血小板活化依赖性颗粒表面膜蛋白 E-选择素-内皮细胞-白细胞粘附分子 单链跨膜糖蛋白，MW75-140KD 其受体为寡糖