医学检验溯源性和标准化ppt课件.ppt

病人标本检验结果 的溯源性和标准化,1,.,一、基本概念,2,.,溯源性,溯源性 traceability 通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。VIM：1993，定义6.10,3,溯源性,临床检验的目的： 对病人新鲜标本检验报告可靠的结果。 临床检验的传统：对收集的患者标本只做一次检验，就发出报告。因此，发出报告的可靠性必须体现两个基本要求: 精密度：重复性好； 准确度：和参考方法具有可比性。,4,溯源性,临床检验公认：在参考实验室内，由具有认可资格的操作人员使用参考方法、或以参考品为标准，对新鲜标本进行的检测结果是参考值结果。 参考实验室的所有参考方法是手工方法；或使用参考品校准的方法，在实现参考值的传递上非常烦琐。在日常检测中，无法使用这样的参考方法或参考品进行大量病人标本的检测，出报告。,5,溯源性,现实问题是：是否可以让常规的检测系统，对病人标本的检测，在计量单位一致的前提下，得到和参考系列相同的检测量值。这就是通过一条不间断的比较链（方法学比较），使检测结果或检测标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准；或和参考方法检测值联系起来。为此，生产厂商必须对完成检测涉及的检测系统各组分（仪器、试剂、校准品、和操作程序）进行严格的标准化程序，实现溯源性。,6,标准化,1972年，由ISO出版TRBSanders主编的标准化的目的与原理一书对标准化下的定义是：“标准化是为了所有有关方面的利益，特别是为了促进最佳的、全面的经济并适当考虑到产品使用条件与安全要求，在所有有关方面的协作下，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程。”,7,标准化,和临床检验的实践和需求结合起来，可以简单理解为：为了实现临床检验结果的溯源性，检测系统的生产厂商的所有努力，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程为标准化。,8,理解临床检验的特点,1检验的检测对象是病人标本，而且一定绝大多数是新鲜的标本。实验室使临床和病人满意的是检验结果的可靠性。实现结果可靠性的质量管理有许多内容。在保证收集和处理的标本质量、在检验后不存在处理检测数据和发出报告的差错前提下，获得可靠结果的主要阶段是分析过程的质量。,9,理解临床检验的特点,2临床检验的习惯是对每份病人标本只做一次检测，就发出报告；而且，每个标本内究竟内含多少分析物无法知道。因此，度量检验的分析质量不能以工业上的多次采样、多次检测或测量、取均值和预定标准比较等方式来观察。,10,理解临床检验的特点,3病人结果可靠性的含义是准确度。国际上准确度的定义为：检测结果和被检测物/分析物真值间的一致性。（VIM93-3.5）。注：a）作为结果，在真值和该值间的差异，通常表示为相同的计量单位；此时，表示差异的更确切的词为“不准确度”。b） 可以使用“可接受的参考值”替代“真值”。（ISO3534-1,3.11）c）特别是对每个标本只作一次测定时，差异不仅包括分析过程的不准确度，也包括了分析过程的不精密度。NCCLS,11,理解临床检验的特点,4检验质量的首要问题是分析过程（即检测的）精密度。定义为：各个重复检测值间的一致性。度量精密度的指标是不精密度。也即：临床要求结果的重复性好。 自动化分析仪的推广应用，极大地改善了检验中不精密度的水平。,12,理解临床检验的特点,5.自动化在临床检验的应用，极大地提高了检验的效率和质量 非常显著地改善了重复性，即精密度的水平。 认识到保持检验必需的自动化仪器、试剂、校准品、和操作程序的固定组合，是实现溯源性的前提。否则，一事无成。因此，要使检验结果的量值和参考系统结果一致，也就是对涉及检验的检测系统各组分的标准化。,13,理解临床检验的特点,6.完成检验所需要的仪器、试剂、校准品、和操作程序的组合为检测系统。 只有使检测系统的组合固定下来，才能使检验结果具有明确的性能。 实现检验结果溯源性的重要前提，也只能在检测系统中予以体现。,14,检测系统的要素,15,16,17,理解校准品,1衡量一个检测系统（检验方法）的基本分析性能有4点： 不精密度、 不准确度、 病人结果可报告范围、 分析灵敏度。,18,理解校准品,使用了自动化分析仪，日常检验的精密度得到了显著的提高；在优良试剂盒的配合下，病人结果的可报告范围也可以满足临床要求；大多常规检验项目没有对极低浓度的临床要求。这样，结果的可靠性的关键是准确度，即对校准品值的调节。因此，实现新鲜病人标本结果的溯源性，成为使校准品值实现溯源性。,19,理解校准品,2标准品 传统的临床检验，要使检验结果可靠或有依据，往往有一个标准品(Standard)。 标准品的定值由称量和容积计算确定。检定不合格即报废，决不可将实测值替代修正。,20,理解校准品,3校准品和定值 为了克服因纯标准液和病人样品间的基体差异，对检验结果的严重误差，20年前开始引用具有与病人样品基体相似的校准品替代标准品，用于日常工作。,21,理解校准品,可是，尽管校准品的主要来源是人的血清，为了使校准品内的一些分析物水平达到某个程度，而且形成稳定的产品，所有的校准品、控制品、室间调查品等都是处理过的血清。和原来的天然血清间又产生了新的基体差异。,22,理解校准品,（1）校准值随方法而异 校准品中被检分析物的含量无法由称量法和容量法确定，只能倚赖于分析方法。校准品的校准值必须取决于分析方法或检测系列。,23,理解校准品,（2）新鲜病人标本是最佳校准品 须明确的，所有用于检验中的检测方法、仪器、试剂等都是用来检测病人新鲜标本的，不是用来检测校准品这样的处理过样品。,24,理解校准品,如果先用公认的参考方法检测病人标本，再以具有参考值的病人标本去校准某检测系列（包括方法、试剂、仪器），此时该检测系列再检测其他新鲜病人标本时，被检测的病人标本结果的溯源性可上溯至公认的参考方法。也即用新鲜病人标本是校准检测系列的最佳校准品。由于新鲜病人标本的局限性，加工的稳定血清将成为商品化的校准品材料。,25,理解校准品,由于所有校准品都是处理过的样品，和新鲜病人标本有着基体差异。若使用公认的参考方法去标化测定校准品，测定值是可靠的，但使用该测定值去校准常规的检测系列时，校准品中被检分析物参与反应时的表现明显不同于新鲜病人标本，校准品的测定值不能将参考方法系列的准确度通过校准品传递给病人标本。,26,理解校准品,使用校准品的目的，是使检测系统对病人标本检测结果，实现溯源性。(在计量单位一致的前提下，检验结果的量值和参考系统对病人标本检测的结果量值具有可比性。） 校准品定值方案在系列标准化内容中，是一个最突出的课题。 实现病人结果的溯源性，必须在校准品定值过程中，自始至终使用病人新鲜标本。 坚持使用方法学比较实验，反复传递和验证结果的可靠性。,27,校准品定值,原则上，以具有参考值的新鲜病人标本去校准某检测系列（包括方法、试剂、仪器）后，检测系列再去检测候选的校准品（处理过样品），得到的检测值为初始校准值。以初始校准值反过来再校准组合的检测系列后，该检测系列又去检测病人的新鲜标本。观察病人标本的检测值是否和参考方法的测定值具良好的可比性。,28,校准品定值,实践说明，只有不断地调整校准值，直至用该校准值校准指定的检测系列（加上具有校准值的校准品，即组合成检测系统）后，检测系统再检测病人标本，得到的测定值和病人标本的参考方法测定值具有满意的可比性，此时，校准品的校准值可以确认。,29,公司校准品标准化的 大致内容和步骤,30,.,实现溯源性的必备条件,1建立“公司一级参考品”：准备多个混和血清，经离心、过滤等处理后，各个混和血清分装成小包装。-70保存。试验说明，这样保存的血清复融后具有的性能和新鲜血清相似。由参考实验室使用参考方法，或采用参考品对这些血清定值，使血清具有参考值。所以，这些血清组是公司产品标准化的“公司一级参考品”。,31,实现溯源性的必备条件,对于公司“一级参考血清”的参考值定值，由公司选择国际上知名的参考实验室委托定值。这些参考实验室在国际上的数量很少，每个实验室只是对某一个或几个项目接受定值委托，费用昂贵。但是，这是公司校准品定值的依据。,32,2设立公司内部使用的“一级校准品”：由于参考系统或参考材料的使用常常是很有限的，因此，必须设立内部使用的参考系统（或材料）复制品即设立公司一级校准品（Master Calibrator）。,实现溯源性的必备条件,33,除了有公司一级校准品外，还需要建立公司生产用的应用校准品（Working Calibrator）、日常供应的校准品为商品校准品（Business Calibrator）。所有各种校准品的原料要求和加工制备工艺一样。只是在定值方案上有区别。,实现溯源性的必备条件,34,3自始至终以方法学比较实验为确定、验证、或传递定值的手段。因此，除了上述的混和血清组外，随时还需要实际的新鲜病人标本，供方法学比较用。,实现溯源性的必备条件,35,4确定定值的实验室：按照德国法律规定，为Roche诊断公司控制品和校准品确定定值的实验室，遵从法律上接受委托的质量导则和管理要求，所以完全符合专业实验室的规定。选择合适的实验室是定值质量的先决条件。,实现溯源性的必备条件,36,5确定公司产品对病人标本检测结果可溯源的参考方法或参考品。 （和什么参考系列比较？）,实现溯源性的必备条件,37,校准品的溯源性依据（示例）,38,实现溯源性的必备条件,6方法学比较的标准化（对公司一级校准品定值过程） 这个方式在临床化学中是最常用的。首先，对一批具有参考结果（X参考方法的结果， X参考）的样品（即公司准备的一级参考品血清），在将成为常规检测系统的组合系统（指定的分析仪试剂操作程序校准品等）上检测，得到真实（至少通过转换）的初步结果（X真实）。,39,实现溯源性的必备条件,第二步，以方法学比较分析评价参考结果和初步检测值结果的差异。又用方法学比较的回归线来调整样品在公司组合的检测系统上的初步结果数值，向大家公认的参考系统（或方法）的参考结果数值靠拢。,40,实现溯源性的必备条件,实际上，是调整校准品在公司组合的检测系统上的定值，将它调整到：公司组合的检测系统再次被该校准品的校准品校准后，对参考样品的检测结果尽可能和原有的相应参考结果一致。 再用新鲜病人标本核实，确实实现了参考样品的检测结果和原有的相应参考结果一致。说明：校准品定值可以使病人标本在检测系统上检测的结果，溯源至参考系统。,41,42,43,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,1参加定值的实验室数量：在上世纪的80年代，德国诊断厂商协会（German Diagnostics Manufacturers Association, VDGH）依据大量研究，提出一个高效而可靠的定值测定模式。“VDGH模式”要求每个校准品每个项目的结果至少由6个实验室各做5个天间样品的测定。,44,要求每个实验室同时进行“未知控制品”的检测。只有负责靶值设定的Roche诊断公司，知道“未知控制品”的定值。所有被评估的参加实验室必须能“回收”这个值。 各实验室同项目的精密度不一；而且数据分布不呈正态分布。因此，确定靶值的做法是：将所有实验室结果合在一起，去除5的极值后的中位数为定值。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,45,2公司一级参考品和一级校准品的标准化 病人样品总是使用于参考标准化中。始终使用单一献血员血清或混合血清。 这些人来源的样品或者直接用参考方法检测；或者在罗氏诊断分析系统上，经参考品校准后检测得到参考值。以后它们作为参考血清组（公司一级参考品）服务于公司一级校准品校准值的定值。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,46,在参考标准化中为了避免未处理过人样品稳定性问题，单个供体样品只使用一次。混合人血清的参考方法值最多被认可6个月（-70 保存） ；需要重新用于参考标准化时，应重确定。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,47,对公司一级参考血清定值的最高计量水平是国际认可的参考方法（如：ID-MS）。若没有参考方法可用，则选择合适的正式官方参考品（如：CRM 470）。若这个也没有，则可使用一级标准的水标准液（如：乳酸锂）为参考，或者某个确定的检测方法。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,48,酶活力检测通常以酶催化活力为检测量。依据规定的检测方法，在指定的系统上指示底物的转换速率即为检测量。IFCC方法是在正式的研究单位（他们是这些方法的发表者）进行手工检测的参考方法，以基本的活力计算公式得到酶活力。国家认可的方法，是在实验室内或各个实验室间，使用系统试剂作为参考进行手工检测的方法。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,49,公司一级校准品的基体大致和各批市售校准品（常规校准品）相当；另外，这些一级校准品储存于-70，并定期检查稳定性。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,50,几乎所有的分析物，确定溯源性的程序归纳如下：用参考方法、或以参考品为校准品，对人血清的检测。公司一级校准品以这些参考方法值标准化。市售校准品和控制品则以公司一级批号校准品（真实性控制）在罗氏诊断分析系统上作校准。这样保证了在这些系统上确定的患者结果值的溯源性。每个分析仪平台（罗氏/日立、COBAS INTEGRA）对每个方法各自都以相同方式，按照该参考系统程序标准化。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,51,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,52,校准品定值的两种方式： 相对于参考方法的标准化（有公认的参考方法和/或参考品）； 相对于参考品的标准化（没有公认的参考方法，但是有公认的参考品）。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,53,参考方法示例,总胆固醇测定 确认方法为同位素稀释质谱（ID-MS）法； 参考方法为改良Abell-Kendall方法（皂化-抽提-浓硫酸、磷酸显色）； 常规方法为酶法（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、Trinder显色终点法）。 美国NIST建立的标准参考品有： 纯胆固醇SRM911；冻干人血清SRM909。,54,相对于参考品标准化示例,14种特定蛋白测定 公认参考品为CRM470。 可以适用的检测方法为：放射免疫扩散、免疫透射比浊、和免疫散射比浊。 没有指定这些项目的参考方法。,55,（1）相对于参考方法的参考标准化 测定参考方法值，如ID-MS参考方法，一定要在认可的参考检测实验室，如ZRI（Reference Institute of Bioanalysis）以参考方法作检测，每次对使用的510个混合血清检测，但是检测费用非常昂贵。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,56,每个混合血清由约100个供血员血液组成。混合血清中的各个分析物浓度或活力，尽可能分布于整个相应的检测范围。混合血清内不可添加任何处理过的材料，也不可用氯化钠溶液稀释。以确保在参考标准化中使用的样品，和天然的患者血清没有任何差别。另外，使用天然的人材料，能对出现在校准品的任何基体效应进行补偿。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,57,系列混和血清的形成,58,人混合血清分装后冰冻于-70，在参考实验室和7个外部实验室（使用罗氏诊断分析仪系统）同时对混合血清平行检测。在罗氏/日立或COBAS INTEGRA系统上检测的统计模式相当于用于确定定值的模式。公司一级校准品为具有初步校准值的校准品。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,59,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,60,参考血清对校准品的定值程序,61,在进行标准化的分析仪上，每个样品在该检测系统上所有可接受检测结果的中位数，和该样品的参考方法值作比较。公司一级校准品值的标准化通过方法学比较（线性回归）实现。方法学比较回归线的截距若在允许限值内，可以从斜率的偏离计算出新校准品校准值。若截距超出了允许限值，则该方法学比较结果不能用于公司一级校准品校准值的标准化。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,62,63,64,65,（2）相对于参考品的参考标准化 若以参考品为参考标准化的基础，通常检测常规实验室的各个供血员的新鲜血清。一般，在4个实验室总共对50例患者血清每份独立地进行25次检测。这些血清中的分析物浓度尽可能分布于整个相应的检测范围。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,66,每个参与标准化的实验室，严格地在分析仪的2个通道上进行检测。一个通道用参考品校准，另一个用公司一级校准品校准；在任何情况下，都使用一个批号的试剂。在每批中同时对一个未知样品和2个校准品，当作样品一起检测，起质量控制作用。检测程序见图。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,67,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,68,使用方法学比较（Passing,Bablok回归统计）进行校准值的标准化；评价时通常需要200个样品，但是最少为50个。新批号公司一级校准品值的计算方法基本上和用参考方法进行标准化的方法一样。另外，在使用公司一级校准品校准后，要设定对参考品回收的允许限值。 公司确定最后在常规检测系统上对参考品检测结果，应为原参考值98%102。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,69,3常规校准品标准化 由于公司一级校准品具有和常规校准品相同的基体，使用公司一级校准品的单独校准，得到的常规校准品校准值预期不会和使用人血清校准得到的值有差异。校准值的真实性和检测不确定度主要取决于统计模式和检测性能的质量。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,70,但是，为了确认这个假设和认可常规标准化的程序，对每个方法（分析仪平台/校准品/试剂组成）进行下列的外部实验室的检测。使用相同批号的试剂，对一些病人样品（分析物含量分布于相应范围），用公司一级校准品和市售校准品任意批号分别校准后进行平行检测。为了肯定市售校准品和公司一级校准品在这个程序中的可比性，方法学比较的直线回归的截距必须接近0，斜率和1.00间的差异在规定的限值内。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,71,公司一级校准品校准后血清检测值,常规校准品校准后血清检测值,人血清 控制品,72,（1）常规标准化的趋势控制品 对校准品定值依据公司一级校准品（C.f.a.s.masterlot）。（在生产公司一级校准品和市售校准品中是一样的。）公司一级校准品的定值可以用具有整个生理相应检测范围分析物的人样品，直接溯源至参考方法或参考品。公司一级校准品的储存温度为-70，可以使用月23年。为了确认，在46年后对一级校准品重新用参考方法标准化。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,73,为了使参与标准化的实验室质量在连续的质量控制下，要求每个实验室对每批市售C.f.a.s.校准品的定值时，同时检测2个不同漂移/趋势控制品组成监视系统。一个控制品是储存于-70的市售校准品，以确保在储存期间有最好的稳定性。冰冻的（-70）天然人血清为第二个漂移控制品。这个混合血清的来源和罗氏诊断产品过程是独立的。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,74,两个趋势控制品至少可以使用2年以上。如果要变换这些控制品，应将近期的和新的控制品在一个试验中作平行检测。依据不确定度的计算，确定允许的可接受范围。 若有一个趋势控制品超出了允许范围，应开始重-标准化。若重标准化的C.f.a.s.值超出了预定的限值，公司一级校准品的定值应以此调整。这些做法的指标随不同分析物而不同，出现显著差异-这些指标和分析物有关-必须对所有市售校准品和控制品进行完全的重设定靶值。,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,75,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,76,常规临床化学的校准品 定值过程,77,常规临床化学和均相免疫测定的校准品定值过程,78,79,非均相免疫测定标准化,参考标准化 参考标准化的目的是：确保在新的免疫检测中，分析物浓度的结果和特定的参考系统相对应，和在未来的各个试剂和校准品批号中也能保持这个可靠性水平去创建一个基础。新免疫检测的标准化开始于确定相应的参考系统。,80,非均相免疫测定标准化,为了认可检测结果的准确度，对各个含有覆盖了免疫检测范围分析物浓度的人血清，用选定的参考系统和新的免疫检测系统（一级试剂、一级校准品、一级分析仪系统 Elecsys 2010）作分析。,81,非均相免疫测定标准化,一级校准品是公司内部校准品，代表了未处理过的天然人血清。理想条件下，这些血清组都是未处理过的。若这个做不到，可以收集一些高质量标准的、含有分析物浓度极低的人血清，再将分析物加入。一级校准品系列覆盖了整个检测范围，并且按照检测性能使设计为最佳化（即：校准品点的设定）。一级校准品系列的定值代表了参考系统的回收水平，依据参考标准化的基础，并确保这个水平可以保持较长的周期（应该在产品的效期内）。,82,非均相免疫测定标准化,通常，新的免疫检测系统的参考标准化有三个做法 。 相对于参考方法的标准化 ； 相对于确认的参考材料的标准化 ； 使用确定的候选参考方法的标准化,83,非均相免疫测定标准化,相对于参考方法的标准化 参考方法通常是一个物理-化学方法，可以对分析物含量得到准确和可重现的测定结果。它和样品状态无关，如：同位素稀释气相层析/质谱（Isotope Dilution Gas Chromatography/Mass Spectrometry，ID-GCMS）检测雌二醇（estradiol）、睾丸激素（testosterone）、和孕酮（progesterone）。在这个情况下，对一组人血清和一级校准品用选定的参考方法测定。在有资格的特定实验室进行参考方法值的测定，该实验室确定检测血清的定值。,84,非均相免疫测定标准化,85,非均相免疫测定标准化,相对于确认的参考材料的标准化 使用参考材料的标准化步骤如下。将含有确定分析物浓度的参考材料溶于一定体积复溶于无分析物的人血清中。这个储存溶液和无分析物的人血清形成系列参考标准。各个稀释的标准内浓度可以计算出来。而一组人血清和一级校准品的分析物含量可以从参考标准的校准曲线上获得。在参考系统上，用新的免疫检测系统的一级校准品进行所有检测。,86,非均相免疫测定标准化,这个类型参考标准化的结果受参考材料的质量和参考标准配制的严密性、无分析物人血清和一级校准品的质量、和一级分析仪性能等的影响。由此，可以理解，参考方法高于参考材料。,87,非均相免疫测定标准化,88,非均相免疫测定标准化,使用确定的候选参考方法的标准化 在没有参考方法或参考材料的情况下，只能相对于另外的确定方法，即候选的参考方法标准化。 在此情况下，一组人血清和一级校准品的分析物含量用候选的参考方法确定。,89,非均相免疫测定标准化,90,非均相免疫测定标准化,使用候选的参考方法参考标准化的结果，还要受到使用的批号质量、候选参考方法性能（精密度、检测范围等）的影响。未来影响方法间相关的重要点在于：使用的相应抗体的选择和它们的特异性。在连续发展为下一代检测技术时特别应予以注意。此时，所谓相对于候选参考方法的标准化，其实就是可允许的第一代的检测，不论有无参考方法或参考材料。,91,非均相免疫测定标准化,参考标准化的评价指标来自使用人血清的方法学比较，将参考系统结果和新的免疫检测系统作比较。在方法学比较中，使用Passing/Bablok算法。,92,非均相免疫测定标准化,可接受指标以斜率和截距为准，通常的限度为0.971.03（即：在整个检测范围内，和参考系统比较，平均回收率为97103）检测的变异依据浓度范围。只有完全符合所有特定的可接受指标，才能认为参考标准化实现了。,93,非均相免疫测定标准化,试剂标准化和控制品血清靶值的设定 试剂标准化的目的是，将参考系统的可靠性水平传递给相应分析物的客户系统（近期的试剂/校准品），确保在整个产品效期内保持这个水平。为此，必须进行两项任务；首先，对新产生的校准品的校准值定值，第二，为新产生的试剂标准化。,94,非均相免疫测定标准化,试剂标准化 校准品值的设定 新批号校准品产生，必须对所有分析仪系统上的所有出厂的试剂批号设定校准品值。在校准品值设定过程中，校准品浓度值来自一级校准品和相应试剂的读数。在数个分析仪系统上，进行数个独立的系列检测，实施统计设计，获得这些读数。由这些所有系列上读数的中位数来确定设定的校准品值。,95,非均相免疫测定标准化,不同批号校准品有不同的独立设定值，对处于接近效期的试剂也具有不同的设定值。要注意的是，这些差异会很大，在试剂中校准品的基体效应越大，在分析仪上的差异也越大（见第2.2节）。,96,非均相免疫测定标准化,典型的曲线参数 新试剂形成后，它必须和市场上所有批号的校准品结合起来进行标准化。这个过程称为试剂标准化。,97,非均相免疫测定标准化,该工作分两步。第一步使用一级校准品和近期试剂组合，和在参考标准化中确定的靶值，去形成相应的一级校准品曲线。这个曲线使用人血清的方法学比较实验予以验证。一级校准品的校准曲线显示了对试剂特异的“典型方式”。由典型的校准曲线参数进行表达（见第2.3.1节），这是以这些一级校准品数据为基础确定的。,98,非均相免疫测定标准化,第二步，在每种相应类型的分析仪系统上，获得试剂一级校准品曲线的常规校准品值。,99,非均相免疫测定标准化,质量控制 为了确认标准化的准确度，对一批人血清，用一级试剂/一级校准品和近期试剂/校准品组（CalSet），在统计设计下进行方法学比较检测（也请见第2.6节）。对比较的结果进行Passing/Bablok方法比较的分析。,100,非均相免疫测定标准化,在第一步中，对一级校准品的设定值在近期试剂中的准确度，在和一级试剂比较中得到了确认。这个方法学比较证实了，在近期试剂中的一级校准品反映了人血清要求的回收率。 在第二步中，通过一级试剂/一级校准品对近期试剂/校准品组合的方法学比较，确认了校准品值设定的正确性能和形成典型的校准曲线参数。,101,非均相免疫测定标准化,102,103,104,非均相免疫测定标准化,105,非均相免疫测定标准化,106,溯源性,临床检验始终以分析过程准确度度量结果的准确度。 分析过程准确度：检测均值和作为真值的可接受值间的一致性。在所有标本仅作一次检测出报告时，度量分析过程准确度的方法为方法学比较。,107,溯源性,在方法学比较中，“真值”即是参考方法对患者标本的检测结果。因此，常用检测系统对患者标本的检测结果，在计量单位相同的前提下，若能使结果的量值和参考方法的结果量值一致，说明结果准确。 所以在溯源性和标准化中，传递结果可靠性的最重要方法为方法学比较。,108,检测方法的分类,检测方法分类有不同观点。但是，大致上可以分为三类： 确认方法（Definitive method）； 参考方法（Reference method）； 常规方法（Routine method）。,109,IFCC对方法分类的定义,确认方法：经过详尽的研究，没有发现具有已知的不准确度和不明确的方法。 参考方法：经过详尽的研究，说明：不精密度相比，仅具有可以忽略不计的不准确度的方法。 常规方法：具有系列书面的操作规程，说明检验人员为获得结果所必需的操作程序、材料、和仪器等的方法。 摘自：1978年IFCC认可文件。,110,检测方法的分类,示例：葡萄糖测定 确认方法为同位素稀释质谱法； 参考方法为去蛋白的己糖激酶终点法； 常规方法为葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-Trinder反应终点比色法。,111,检测方法分类示例,总胆固醇测定 确认方法为同位素稀释质谱（ID-MS）法； 参考方法为改良Abell-Kendall方法（皂化-抽提-浓硫酸、磷酸显色）； 常规方法为酶法（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、Trinder显色终点法）。,112,参考品定义,参考材料/参考制品RM（Reference material/Reference preparation），名词 1)某材料或物质，它的一个或多个特性值已被充分和完整地确定。用于设备的校准，测定方法的评估或对材料定值；（VIM93-6.13） 2)认证参考材料，CRM，名词某参考材料，由技术上证实的方法确认它的一个或多个值，并附有或可溯源于由公认团体签发的认可书或其它文件；(NRSCL13),113,校准品定义,校准材料/校准品（Calibration material/Calibrator），名词 已知或设定定量特性（如：浓度，活力，强度，反应性，应答性）的材料或装置。a）美国HCFA法规（Appendix C,Survey procedures,PC122）的导则文件中定义标准材料为“内含已知加入量分析物的溶液，或者用参考的或确认的检验方法重复检验得到定值的溶液”。,114,标准品、参考品和校准品,（一级）标准品：在使用时，完全依据称量确定用量，配制成标准液或参考液。 （二级）参考品：参考品值依靠公认的方法与定值方案检测确定的；或者认为指定单位数。是各公司确定校准品值的依据。 （三级）校准品：由各公司建立定值方案，确保准确度的传递。形成公司专用的校准品值。所以，校准品是公司专有的。,115,参考品（标准品）,检验专用的标准品（一级） 示例：部分美国国家标准和检测研究院（NIST）原国家标准局NBS提供的标准参考品（Stangdard Reference Material，SRM），如： SRM927B：牛血清白蛋白； SRM916：胆红素； SRM918：氯化钾； SRM912A：尿素。,116,二级参考品,检验专用的参考品 目前国际上提供的公认参考品有： 美国NIST的SRM； 欧洲共同体标准局（BCR）的CRM； 世界卫生组织（WHO）的参考品； 英国国立生物学及控制品研究院（NIBSC）参考品等。,117,参考实验室,所有确认方法和参考方法都是手工的操作方法。因此，使用自动分析仪的方法，尽管在检测原理上和参考方法相同，但不属于参考方法。如：自动分析仪上葡萄糖的己糖激酶动态法。反应原理和参考方法相同，但是，没有去除蛋白，不是终点法；还有，在自动分析仪上操作；而且，更重要的是：即使完全按照参考方法检测，可是不是参考实验室的检测，无法确认结果的可靠性。,118,参考实验室,以德国为例。 德国政府按照法规，指定德国医学会负责德国医学检验的质量管理、协调为室间调查品和厂商校准品或控制品的定值。 负责选择和确定参考实验室。,119,参考实验室,参考实验室必须得到医学会的认可，必须具备以下条件： 1参考实验室或他的主办者必须证实：愿意提供有资格和经验丰富的人员参与工作，具有必要的手段（房屋、设备等）。 2提供各种经费支持。 3若参考实验室有主办者，她应是具法定资格的科学/医学协会，一个相应的研究所或是一个政府部门结构。但是，和实验室所在机构行使的行政职责无任何必然的关系。 4和试剂、标准、控制品、仪器厂商/进口商无关。 条件不符，可撤销认可。有医学会监督参考实验室。,120,参考实验室,1依据上述要求，由医学会指定，任期2年。参考实验室履行本准则，应和具法定资格的医学或科技学会合作。若不符合先决条件，可在任何时候被取消。 2参考实验室是科技实验室，具有所有必须设备和技术，保证分析结果的可靠性。其负责人有专门知识和经验，具发展和试验新方法的能力，有有关参考方法的论著。 3不允许对建立参考方法值有关的工作做广告。,121,参考实验室,世界上被医学检验界认可的参考实验室，并不是可以对所有检验项目，使用参考方法对委托样品进行测定定值。他们只是在一个或几个项目上具有参考实验室的资格。,122,参考方法、参考品和参考实验室,如美国Dr.Doumas BT，在总蛋白、胆红素标准化中的贡献，获得全世界公认。他的实验室为专做样品总蛋白和总胆红素的参考实验室。完全为手工操作，人员要求高，效率低，收费昂贵。 该实验室使用Doumas双缩脲法进行总蛋白测定时，使用美国SRM927B为蛋白标准。,123,什么是检测系统？,完成一个检验项目检测所涉及的