微生物室工作流程.ppt

细菌室学习体会,苏长青,细菌室的主要任务：,一、培养、鉴定病原菌的类别 二、做出致病菌的药敏结果 三、监测院内感染 四、菌种保存及科研,细菌室的工作流程：,标本采集标本接收编号登记接种培养鉴定做药敏发报告,合抱之木始于毫末,标本采集主要由临床科室负责 标本接收做好核对工作 患者基本信息 核对 标本类型 标本采集时间 标本量 不确定标本应与临床科室联系 不合格标本就予以退回,标本接收后应及时处理，因一些细菌对环境比较敏感，比如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等在脱离人体后极易死亡； 如不能及时处理则应该妥善保存：,标本不能冷冻或冷藏,编号：目的是为保证标本号的唯一性 细菌室标本采用每日编号形式，用7位数“月、 日、标本号”联合编号 如0708082 07为七月 08为七月八号 082为七月八号的第82个标本 90 91,培养基选择,根据标本的不同需要接种不同的平板 首先了解一下平板的性质和用途： 血平板（BA）：除含有普通营养琼脂所包含的所有营养之外，还加入了5%的羊血，大大增加了其中的蛋白质和生长因子，适用各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离都应接种在此平板。,麦康凯（MAC）：内含有胆盐可抑制革兰阳性菌的生长，有利于革兰阴性菌的生长，是常用的选择性培养基；发酵型革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同，在此平板上菌落颜色不同，便于鉴别菌种。 巧克力平板（CA）：内含有V和X因子，嗜血杆菌、奈瑟菌等生长良好。凡疑有这些菌种存在的标本，均须接种巧克力平板。,SS琼脂：因胆盐含量较高，具有较强的抑制力，是常用的强选择性培养基。其中的胆盐抑制革兰阳性菌的生长，枸椽酸盐和粕绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病菌的沙门菌、志贺菌容易分离到。因选择性过强，可能会影响检出率，使用时常加弱选择性培养基以配对互补。 小BB：即为营养肉汤，用于标本和各类细菌的增殖。,标本类型 培养基 血 血培养瓶 中段尿 血平板、麦康凯平板 脑脊液 小BB、血平板、巧克力平板 穿刺液 小BB、血平板、麦康凯平板、巧 克力平板 胆汁 血平板、巧克力平板、麦康凯平 板 呼吸道标本 血平板、麦康凯平板、巧克力平 板、沙宝氏平板 粪便标本 SS平板、MAC平板和血平板 病灶分泌物 血平板、巧克力平板、麦康凯平 板,接种,血培养：将血培养瓶上条形码贴到化验单上，点击血培养瓶图标进入输入窗口 扫描条形码（血培养箱右侧） 打开右侧抽屉将血培养瓶放入亮灯空位点击“”关上血培养箱。 痰培养：接种环在加热器内烧红冷却后，取脓性部分一环分三区划线，分别接种于BA、Cho、Mac(CO2温箱)、SDA(30温箱)培养。,粪便培养：接种环在加热器内烧红冷却后，取粪便病变明显部位标本适量，分别在SS平板，BA和MAC平板上三区划线。 注意：在划第二区之前应再次灭菌接种环以分出单个菌落。 小便培养：用加样器无菌取10ul分区划线接种于BA 、Mac，置CO2温箱培养。,脑脊液 穿刺液 首先接种小BB：取600ul标 其它无菌体液 本打入小BB试管中，再各 取一滴分别接种在BA、 CA 、 MAC，灭菌接种环后三区 划线 棉拭子 用灭菌后的镊子钳取标本后在 BA、 组织标本 MAC、CA、SDA上滚动接种，然后三 区划线,深静脉导管（PICC）：用无菌移液管将小BB移入装有PICC的无菌试管中。 支原体：将棉拭子标本与营养液R1充分混匀后，取出棉拭子，将营养液R1与营养液R2混匀，然后将混合液加入药敏板，每孔55ul.,注意事项,接种环使用前后均应灭菌，以免造成环境污染及交叉污染。 脑脊液与其他无菌体液均应先接种小BB进行增菌，以免小BB污染造成假阳性结果。 接种标本时应待接种环冷却后进行，以免将细菌烫死从而造成假阴性结果。 三区划线时应轻柔，不破坏平板；线条应疏密合适，从而更好分离出单个菌落。,培养,需氧培养：临床细菌室最常用的培养方法，将已接种好的平板置于35度温箱中孵育。 二氧化碳培养：有些细菌初次分离培养时需置5%-10%CO2环境才能生长良好，如一些奈瑟菌属，布鲁菌属等。,鉴定及药敏,依据细菌的菌落形状、气味、颜色、溶血类型及有无等和一系列的生化反应对细菌进行鉴定，然后进行药敏试验。,“无菌概念”,“无菌概念”