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文档简介

实验目的 实验原理 在蛋白质溶液中加入一定量的中性盐（如硫酸铵、硫酸钠等）使蛋白质沉淀析出 。调节溶液的盐浓度可使各种蛋白质先后沉淀出来，使需要的酶与其它杂质蛋白分开，达到提纯目的，这就是分级沉淀法。 PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在波长290nm处有最大吸收值。如果酶的加入量适当，反式肉桂酸的生成速率即A290升高的速率可在几小时内保持不变，规定1小时内A290增加0.01为PAL的一个活力单位。,硫酸铵分级沉淀分离苯丙氨酸解氨酶,实验步骤 酶液提取 取小麦幼苗2.5克左右，剪碎于研钵中，加入预冷的酶提取缓冲液10ml，置冰浴上充分研磨成匀浆，最后用5ml冲洗研钵。10,000rpm、4离心20min，上清液全部转入刻度小试管中，准确记下体积 （酶粗提液） 硫酸铵分级沉淀酶蛋白 沉淀1、沉淀2 1.5ml沉淀液1、2(酶提取液溶解) 酶活力测定(用酶提取缓冲液稀释) 0.2ml沉淀液 1ml稀释沉淀液 蛋白质含量测定(用蒸馏水稀释) 0.2ml酶粗提液 10ml 0.2ml沉淀液 1 10ml 0.1ml沉淀液 2 10ml,结果计算 PAL活力计算 分别算出每ml酶粗提液、沉淀液1、沉淀2中PAL的总活力； 蛋白质含量计算 分别算出每ml酶粗提液、沉淀液1、沉淀2中蛋白质含量
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