多种自身抗体联合检测在类风湿性关节炎诊断中的应用

1 / 7 多种自身抗体联合检测在类风湿性关节炎诊断中的应用 作者：赵玲莉 ,刘淑敏 ,马慧英 ,王芳 【摘要】 目的： 探讨多种自身抗体联合检测在类风湿性关节炎（ RA）早期诊断中的意义 . 方法： 采用散射比浊法检测类风湿因子（ RF）；间接免疫荧光法检测抗核抗体（ ANA），抗角蛋白抗体（ AKA）； ELISA 法检测抗 Sa 抗体，抗环瓜氨酸肽抗体（抗 CCP 抗体）；斑点法检测抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（ AFA） . 结果： 各组自身抗体检测的阳性率比较，抗AKA 抗体， RF 和抗 CCP 抗体的阳性率较高，分别为 46.8%，45.8%和 61.4%，为多种自身抗体联合检测中的最佳实验； RF，抗 CCP 抗体，抗 AKA 抗体三种抗体联合检测 RA，为较好的组合项目，在 RA 检测中有较高的应用价值 . 结论： 选择适当的自身抗体指标联合检测有助于提高 RA 检测的阳性率 . 【关键词】 自身抗体；关节炎，类风湿；类风湿因子 0 引言 风湿病是由不同病因引起并以累及多器官损伤为特征的自身免疫性疾病，临床上多有反复发作性和渐进性，典型的特征是存在多种变异体和重叠综合症，给诊断带来一定困难 1 . 类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis， RA)的早期临床表现不典型，且多样性 2，至今仍没有大家公认的2 / 7 特异的生化、免疫或组织学诊断指标，常造成误诊，其单项自身抗体检测的灵敏度和特异性均有不足，类风湿因子的检出率偏低 2-3 . 因此，诊断以特定的症状，检出特定的自身抗体为依据，寻找合适的检测项目是提高 RA 早期确诊率的关键 . 我们通过对 RA 患者进行多种自身抗体的联合检测，以探讨 RA 早期诊断的临床意义 . 1 材料和方法 1.1 材料标本选择我院 XX 01/XX 12 风湿专科门诊确诊为 RA 患者 96 例（ RA 组），年龄 50 65 岁 . 其中 63 例其他自身免疫疾病 患者：系统性红斑狼疮 (SLE) 45 例 (SLE 组 )；干燥综合征（ PSS） 8 例（ PSS 组）；系统性硬化症（ SSc） 10例（ SSc 组） . 另外选择近期在我院健康体检者 30 例，作为对照组 . 类风湿因子（ rheumatoid factor， RF）检测试剂（ 浙 江 伊 利 康 公 司 ）； 抗 核 抗 体 （ anti nuclear antibodies， ANA），抗角蛋白（ antikeratin antibodies，AKA）抗体，抗 Sa 抗体，抗环瓜氨酸肽 (cyclic citrullinated peptide， CCP)抗体（抗 CCP 抗体），抗聚角蛋白微丝蛋白（ antifilaggrin antibody， AFA）抗体检测试剂（德国欧蒙公司） . 1.2 方法 1.2.1RF 检测（散射比浊法）人微球蛋白胶合于乳胶微粒，与待测样本中的 RF 发生免疫反应，引起微粒的凝集，增加3 / 7 浊度， 20 IU/mL 为阳性 . 1.2.2 抗 ANA 抗体，抗 AKA 抗体检测（间接免疫荧光法）稀释血清（ ANA 起始稀释度 1100 ， AKA 起始稀释度 110 ）与包被基质反应，抗原与抗体结合，加入荧光素标记，与基质上的抗体反应形成特异性荧光 . ANA 阳性可根据不同的荧光模式 进行判定其阳性结果， AKA 阳性于角质层出现线性或板层状荧光判定为阳性 . 1.2.3 抗 Sa 抗体，抗 CCP 抗体检测（ ELISA 法）将稀释血清加入包被孔，血清中的特异性抗体与包被在固相上的抗原结合，酶标记的抗人抗体与已结合的抗体反应，结合的标记抗体与底物液作用阳性呈现蓝色，颜色深浅与抗体浓度成正比 . 1.2.4 抗 AFA 抗体检测（斑点法）将已稀释标本加入反应板，稀释血清中的抗体与抗原结合，酶标记的抗人抗体与结合的抗体反应，加入底物液显色，阳性出现蓝色条带，条带颜色深浅与抗体含量成正比 . 统计学处理：应用 SPSS10.0 软件统计，组间计量资料比较采用方差分析 . 2 结果 2.1 各组自身抗体检测的阳性率 96 例 RA 患者、 63 例其他4 / 7 自身免疫疾病患者及 30 例健康体检者采用 RF，抗 ANA 抗体，抗 Sa 抗体，抗 AKA 抗体，抗 AFA 抗体，抗 CCP 抗体自身抗体检测结果如表 1 所示 . 检测中， RF，抗 Sa 抗体，抗 AKA抗体，抗 AFA 抗体以及抗 CCP 抗体的检出率明显高于其他自身免疫性疾病患者及健康体检者，其中，抗 CCP 抗体的检出率最高 .表 1 各组自身抗体检测的阳性率 2.2 不同自身抗体对 RA 诊断效能比较结果显示，各组自 身抗体在 RA 的早期实验诊断中均有一定的诊断价值 . RF 为 RA筛检的常用指标，其阳性率为 45.8，支持早期 RA 的倾向性诊断，但诊断缺乏特异性；抗 ANA 抗体的检测阳性率为35.4，是活动性 SLE 非常敏感的参数，但并非 SLE 特异的；抗 Sa 抗体检测阳性率为 39.6，其在 RF 阳性和阴性 RA 患者中均可呈现阳性，尤其对 RF 阴性的患者，可成为诊断 RA的一个指标；抗 AKA 抗体阳性率为 46.8，可作为 RA 检测的特异性指标和 RA 诊断的辅助实验诊断项目，适合于早期不典型及血清阴性 RA 的诊断；抗 AFA 抗体检测阳性率为37.5，其对 RA 早期诊断有意义，敏感性和特异性高，可出现于 RF 阴性的 RA 血清中；抗 CCP 抗体检测阳性率为61.4，可作为 RA 早期诊断指标 . 抗 CCP 抗体含量与 RA病情严重程度及病程进展有关 . 其中抗 AKA 抗体， RF 和抗CCP 抗体的阳性率较高，三项抗体联合检测，在临床的应用中具有较高的检测价值 . 5 / 7 3 讨论 RA 是一种慢性全身性炎性疾病，目前仍以临床表现为主要诊断依据 . 多年来，人们试图寻找一种 RA 特异的诊断指标，但仍没有一个大家公认的诊断指标 . 为此，我们对 96 例 RA患者进行了多种自身抗体的联合检测与分析 . 研究结果表明，自身抗体检测是 RA 确诊的重要的实验诊断，从各组自身抗体检测的阳性率比较可以看出，抗 AKA 抗体， RF 和抗CCP 抗体的阳性率较高，可为最佳的联合检测方案 . RF 识别的自身抗原是变性的 IgG Fc 部分，是最早发现的RA 的自身抗体 . 近年的研究 3-4表明， RF 与临床表现和关节损伤程度密切相关，是损伤指标中最强有力的预后因子，其他自身抗体不能取代 RF 在诊断和预后判断中的地位 . 但 RF 阳性还存在于 RA 阴性的患者中，正常人尤其是高龄者可有 5%的阳性，因而， RF 对 RA 的诊断特异性欠满意， RF 阳性不能作为诊断 RA 的唯一标准 5 . 抗 AKA 抗体是由 Inanc 等 6以 Wistar 大白鼠中段食管的角质层为底物，采用间接免疫荧光法，在患者血清中发现的一种抗食管上皮角质层的自身抗体，本研究中抗 AKA 抗体检测的阳性率为 47，而其检测的特异性近 90 100，可作为 RA 检测的特异性指标及辅助实验诊断项目，以提高诊断的阳性率，特别是当 RF 检测阴性时， RA 具有补充诊断6 / 7 的意义 . 抗 CCP抗体是 RA 早期诊断的标志物 7，是 RA 早期诊断较好的指标，也是鉴别浸蚀性、非浸 蚀性 RA 的灵敏指标 . 本研究中抗 CCP抗体的检测阳性率为 61.4，其检测阳性率为各项自身抗体最高，因此，将抗 CCP 抗体检测用于 RA早期诊断具有非常重要的临床意义 . 综上所述，抗 AKA 抗体， RF 和抗 CCP 抗体三种抗体联合检测，弥补了单一的 RF 对 RA 诊断的不足，提高了 RA 的检出率及检测特异性，为联合检测较好的组合项目，为 RA 的早期诊断及判断预后提供了较为可靠的实验指标 . 鉴于各项自身抗体检测在 RA 的早期诊断中有着不同的意义，可以按照自己的实验条件，选择适当的项目组合，有助于提高 RA的早期确诊 . 【参 考文献】 1 Kuhn KA, Kulik L, Tomooka B, et al. Antibodies against eitrullinated proteins enhance tissue injury in experimental autoimmune arthritis J . J Clin Invest， XX， 116(4)： 961-973. 2 Matsuo K, Xiang Y, Nakamura H, et al. Identification of novel eitrullinated autoantigens of synovium in rheumatoid arthritis using a proteomie approach J . Arthritis Res Ther, XX, 8(6)： 1-3. 7 / 7 3 Harrison MJ, Paget SA. Anti CCP antibody testing as a diagnostic and prognostic tool in rheumatoid arthritis J . QJM, XX, 100(4)： 193-201. 4 梅品玉 ,商新梅 . 类风湿因子测定方法及测定意义评价 J . 临床和实验医学杂志 , XX, 5(12):2034. 5 赵超，王雪 . 类风湿因子定量检测在类风湿关节炎诊治中的应用 J . 实用医技杂志， XX,12(5)： 1345. 6 Inanc N, Dalkilic E, Kamali S, et al. AntiCCP antibodies in rheumatoid arthritis and psoriatic arthritis J . Clin Rheumatol, XX, 26(1):17-23. 7 Brownlie