GB-T5511-2008谷物和豆类氮含量测定和粗蛋白质含量计算凯氏法.pdf

ICs 67,040X l o中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB/T55l l -2008/Is o 20483:2006代替GB/T55111985谷物粗蛋和豆类氮含量测定和白质含量计算凯氏法Cereals and pulses-Determination of the nitrogen content and calculationof the crude protein content-Kjeldahl method(ISo 20483:2006,IDT)08-022发布200B-1 01实施局会蛐员跚岍鹏管桅鲴标脚眩轶国中中发布GB/T55l 1-2008/Is o 20483:2006本标准等同采用国际标准Is O483:2006谷物和豆类 氮含量测定和粗蛋 白质含童计算 凯氏法 。为了便于使用,本标准对Is O20483:200C进行了下列编辑性修改:“本国际标准”-词改为“本标准用小数点“。”代替作为小数点的逗号“,” ;删除国际标准的前言; 将 引 用 文 件 中 的 O712替换 为 现 行 国 家 标 准GB/T21305,Is o 65替 换 为GB/T10362。本标准是对GB/T5511-1985粮食、 油料检验 粗 蛋白质测定法 的修订。本标准与GB/T55111985相比主要变化如下:增加了原理、 规范性引用文件、 术语和定义、 扦样、 试样制备、 含水量浏定、 精密度和测试报告。本标准 自实施 日期起代替GB/T55111985。本标准的附录A、附录B相附录C均为资料性附录。本标准由国家浪食局提出。本标准由全国稂油标准化技术委员会归口。本标准起草单位:国家粮食局科学研究院。本标准主要起草人:张佳欣、 郝希成、 吴春华。本标准所替代标准的历次版本发布情况为:GB/T55111985。一日一刖GB/T55l i -2008/Is o 20483:2006谷物和豆类 氮 含量测定和粗蛋白质含量计算 凯 氏法t 告:使 用本标准可能涉及到具有危险的物质 、 操作和设备 .本 标准的主 旨不是陈述与使用该标准有关的所有安全 问题 ,在使用本标准前 ,标 准的使用者应建立适当的安全措施和规定应用的限制。1 范围本标准规定 了用凯 氏法测定谷物 、 豆类及衍生产 品中氮含量 的测定方法和粗蛋 白质含 量 的计算方法 。本方法不能区分蛋 白质氮和非蛋 白质氮 。如果测定非蛋 白质氮含量非常重要 ,可 以使用其他合适的方法 。注:在 特定情况下,使用本方法测定硝酸盐和亚硝酸盐中的氮无法达到完全回收。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件,其 随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可便用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。G B / T 1 0 3 6 2 玉米 水 分 测 定 法( G B / T 1 0 3 6 2 1 9 8 9 , e q v o 6 5 4 0 : 1 9 8 0 )G B / T 2 1 3 0 5 谷物 及 谷 物 制 品 水 分 的 测 定 常规 法 ( G B / T 2 1 3 0 5 - 2 0 0 7 , I s o 7 1 2 : 1 9 9 8 , I D T )3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3 1蜃民噌扌彐【 n i t r o g e n c o n 】e n 】应用本标准所规定的程序测得的氮含量。注 :以 干物质 的质量分数表示 。3.2租蛋白质合且 c r u d e p m t e i n c t , n t e n t将应用本标准所规定的程序测得的氮含量乘以不同谷物或豆类的蛋白质换箅系数,得到粗蛋白质含量。注:以 干物质的质量分数表示。4 原理试样在催化剂存在下用硫酸消解,反应产物用碱中和后蒸馏。释放出的氨被硼酸溶液吸收,吸收液用硫酸溶液滴定,测定氮含量并计算粗蛋白质含量。5 试剂除参考物质外,只使用经确认无氮的分析纯试剂,试验用水为蒸馏水或去离子水或同等纯度水.耆告: 5 , 4 、5 . 8 、5 . ll和5 1 2 中提到的试剂应谨慎使用。5.1 硫酸钾 (K2s o )。5.2 五水硫酸铜 (Cu s o 45H20)。1丿GB/T5511-2008/Is o 20483:20065,3 二氧化钛 (Tl O2)。5,4 硫酸(H2s o ):c (H2s o 4)=18m o l /L,F,9(H2s )=184g /m L。55 石蜡油 。5 6 M 乙酰苯胺( C : H 9 N O ) : 熔点1 1 4 , 氮含量1 0 3 6 g/ 1 0 0 g。5 . 7 色氨酸( C 】1 H 1 2 N 2 0 2 ) : 熔点2 8 2 , 氮含量1 3 . 7 2 V 1 0 0 g。5,8 五氧化二磷 (P205)。5.9 硼酸 :水溶液 ,宀 。 (H3Bo 3)=40酊L,或所使用仪器推荐的浓度 。5.10 指示剂 :按照所使用仪器 的推荐 ,加人=A ( 5 1 0 . D 和溶液B ( 5 . 1 0 2 ) ( 例如: 5 体积溶液A和1体积溶液B)。注1:有 可能准各使用的硼酸溶注2:溶液A和溶液B的比也可以使用 p H电5 1 0 1 溶液A : 2 0 01 0 0 mL 溶液。(C2Hs OH),配制成5102 溶液B:200) , 配制成1 0 0 mL溶液 。51l 氢氧化钠水也可以使用含氮量少于或等于0,512 硫酸 :标准因为硫酸5.13也可以选择5l 0 浮石 :颗粒515 蔗糖 (可选6 仪器机械研磨机 。筛子 :孔径0,8分析天平 :分度消化、 蒸馏和滴定仪消化单元应确保温度 的通过使用两种参考物质(5温度的均匀性 ,并同时测定回收率 。蒸馏仪器也应通过进行 已知量铵盐的应大于或等于998%.7 扦样铵溶液(5.13)彐和检查回收率,回收率实验室接受的样品应具有代表性 ,在运输或储藏过程中不应受损或改变。本标准不规定扦样方法,推荐Is o 66狃和Is o 13690给出的扦样方法。8 试样制备如果需要,样品要进行研磨 ,使其完全通过0.8m m 孔径的筛子。对于粮食,至少要研磨200g 样品,研磨后的样品要充分混匀。26 1626. 36. 4含有指示剂(,p H电极需要每天校准。(Ca H14Br 4O5s )溶于体积分数为液 ,c (H2溶液,c (含氮 。0 , 0 5 mol/ L .GB/T55l 1-2008/k s o 20483:20069 水分测定用本标准第8章制备的部分样品测定水分(H)。 测定水分 的方法要适合测定对象(例 如谷物和谷物制品按GB/T21305测定 ;玉米按GB/T10362测定 .或 者使用参考文献E10彐中描述 的适合特殊种子的方法)。10 操作步骤10.1 通则如果需要检查是否满足重复佳限(12,2)的要求 ,可按照10.2到10.5的步骤迸行两次独立 的测定 。10.2 称样依据预估含氮量称量试样(第 8章 ),精 确到0001g ,使试样的含氮量在0005g 02g 之间 ,最好大于0 . 0 2 g。10.3 测定10.31 消化苷告 :下 列操作应在通风 良好 ,具有硫酸防护罩的条仵下进行。转移试样 (102)到消解烧瓶 ,然后加人 :10g硫酸钾(5.1);0 , 3 0 g五水硫酸铜( 5 2 ) ;030g 二氧化钛(53)(也可以使用符合规定成分的粒状催化剂);2 0 mL 硫酸( 5 4 ) 。 可根据仪器情况调整硫酸的加人量,但应确认此改进可以满足对N-乙酰胺的回收率达到99.5% 和对色氨酸的回收率达到99.0%。| 小心混合以确保试样的完全浸润。将烧瓶置于顶热到420 10的消化单元。从消化单元温度再次达到厶 20 10时开始计时,至少消化2h ,然后取下自然冷却。注 :建 议加人浮石(51衽 )作 为沸腾调节器和加人如石蜡油(55)的消泡剂 。最短消化时间应使用参考物质进行检验 ,因为参考物质很难达到 回收率的要求(见 105)。遵循设备制造商关于蒸汽排空的建议 ,因为过强的吸力可能导致氮的损失 。10.32 蒸馏小心地 向冷却后 的消解烧瓶 中加人50m L水,放冷至室温。量取50m L硼酸(5.9)到接收瓶中,无论是使用 目测 比色或光学探头 ,均要向其中加至少10滴指示剂 (5.10)。连接好蒸馏装置 ,向消解烧瓶 中加人5m L过量的氢氧化钠溶液完全 中和所使用的硫酸 ,然后开始蒸馏 。根据仪器 ,所用的试剂量可以变化 。10.3.3 滴定使用硫酸溶液(5.12)进行滴定 ,滴定既可以在蒸馏过程中进行 ,也可以在蒸馏结束后对所有蒸馏液进行滴定 。滴定终点的确定可以使用 目测 比色 、 光学探头或用 p H计的电位分析判定 。10.4 空白试验使用10.3.1到10.3.3的试剂 ,不加试样进行空 白试验 。注:可 以用1g 蔗糖 5.15代替试验样品。10.5 参考物质测试 (检 查试验)在五氧化二磷 (58)的存在下 ,60 80真空干燥参考物质 。进行检查试验 ,试样 的最小量根据N-乙酰胺或色氨酸的含氮量决定 ,至少0.15g 。注 :可 以在参考物质 中加人 1g 蔗糖 (5.15 。3GB/T5511-2008/Is o 20483:2006JN乙酰胺 的氮 回收率至少为99.5%,色氨酸的氮 回收率至少为99.0%。l l 结果表述l 11 氮含且氮含量(叨N),以 干基质量分数表示 ,按式(1)计 算 :纳= 斋戋扩嬲( 1 )式 中:V。空 白试验滴定的硫酸溶液V1试样滴定的硫酸溶液o0 滴定1 mL O , 5c 滴定所使用的仍试样 的质量 ,勿H试样 的水分结果保 留两位l l .2 粗蛋 白含旦根据谷物乘 以测定获得 的氮含量 (11.1)值,结果保 留两12 精密度121 实验室间附录A详述的其他浓度范围。122 重复性用 于附录以外在同一实验室互独立进行测试获式(2)计 算 :式 中:一被试对象相%,重复性限按z t P以干基产品质对于粗蛋 白含量在7%12,3 再现性在不 同实验室 ,由不 同的操作者方法 ,对 同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差箅:情况不超过5%,再现性 限R按式 (3)计R=(0.014t LP)28对于粗蛋白含量在7% 80%的产品,见表A1和图A1。124 临界差1241 同-实验室两组测定结果的比较在重复性条件下进行两组测定的结果平均值之间的临界差按式(4)计 算 :CDr =1.98s =1.98(0063四P)=0.01247v P (4)12.4.2 两个实验室间两组测定结果的比较在不 同实验室在重复性条件下进行两组测定的结果平均值之间的临界差按式(5)计 算 :攻2 )3)歹 单位为毫升(m D;浓度 ,单位为摩尔/升 (干物质验结果可立 测情 况= (0,006的样品粗蛋 白含量(见表B.DA.1和图A1同的设各,按相同GB/T551-2008/Is o 20483:2006R = 2 , 8 s炱一0 . 5 s: = 2 8 丽。o1 4 劭P ) z0 . 5 ( 0 , 0 0 6 3 vP ) 2= 0 0 3 7 1 6 勿P ( 5 )13 测试报告测试报告应规定 : 完整 的识别样品所需的全部信息 ;b ) 如果 已知取样方法 ,应说 明使用的扦样方法 ;o 采用的参考本标准的测定方d ) 使用的换箅系数(见 11,o 所有本标淮中没有能影响测试结果的操作细节 ;D 测试结果 ,结果 。,应说 明两次测定i凵巳GB/T5511-2008/Is o 20483:2006附 录 A(资 料性附录)实验室间测试结杲方法的重复性 、 再现性和临界差是通过依据05?25中第2、 3和6章的要求进行的两组实骏室 间环 比测定建立 的。10家实验室参与了此次测定 。分析了 14种产品和4种标准物质 .结 果见表A1。表A.1 实验室间实验统计结果参数样口m1234567911剔除溢出值后实验室数10910109(干 基 )蛋 白质含 量哂( 纳5 7 ) 平均值7 038 9衽9 0211 8813 9015 5416 1921 9122 8031 5761 3362 1979 4679 99重复性标准偏差 ,s ,0 11o 0衽0 070 150 060 070 170 090 170 10o 850 270 570 19变异 系数 标 准偏差 平均值)/%1 560 450 781 260 430 衽 51 050 还 1o ?50 321 39o 430 720 2衽重 复 性 限 ,r(=28s )0 310 110 200 42o 1?0 200 衽80 250 80 282 380 761 60o 53再现性标淮偏差 ,s R0 19o 1衽0 08o 280 160 14o 340 290 460 么 61 37o 791 02o 83变异 系数 (标 准偏差R/平均值)/%2 ?1 5?0 892 361 150 902 101 322 021 462 231 271 281 04再 现 性 限 ,R R=28s R)o 530 39o .220 78o 衽 5o 39o 95o 811 291 293 842 212 862 32样品:1普通小麦粉1;2玉米J大麦“普通小麦;5普通小麦粉3;6杜伦麦;?普通小麦粉2;8豌豆2;9豌豆10蚕豆1小麦谷蛋自1;12犭、麦谷蛋白213玉米谷蛋自1;1么玉米谷蛋自2。GB/T55l l -2008/1s o 20483:2006X蛋 白y 标准图A1表给出了建观察到这o 5i 的线b ) 决定系c ) s R 自勺 线o 决定系数GB/T55l l -2008/Is o 20483:2006附录B(资 料性附录)重复性限和再现性限对不同蛋 白质含且的临界偏差和实际应用B.1 同-实验室两组实验的对 比重复性条仵下获得 的两组测定结果 的两个平均值之间的临界偏差(CD)D按式 (B,1)计算 : = 2 . 8 , 卉+ 斋式 中:,重复性标准偏差 ;,a l 和 /Iz 每个平均值对应的测定结果数 。如果 幼 和,a z 均等于2,等式简化为 : (B1)=2 8rB2 两个实验室间两组测定的对 比重复性条件下两个实验室获得 的两组测定结果 的两个平均值之 间的临界偏差 (CDR)按式 (B.3)计算 :R=28s 炱 (卜卉一舟)(B.3)式 中:s 重复性标准偏差 ,s R再现性标准偏差 ;幻 和 砀每个平均值对应的测定结果数 。如果,a l 和 ,Iz 均等于2,等式简化为 :R = 2 8 s炱一0 . 5 s炱 ( B 4 )重复性限和再现性限对不同蛋 白质含量的实际应用见表B1。 乒=表B1 重复性限和再现性限对不同蛋白质含量的实际应用蛋 白质含量(ILN57)%重复性标淮偏差 5 )重复性 限(r 再现性标准偏差 (JR)再现性限 )两平均值的临界差(CD)在 同一实验室两实验室间o 06o 170 140 390.37o 090 250 210 59o 180 560 120 3衽0 780 20 150 衽 20 350 98o30 180 50o 众 21 18o 361 120 21o 590 491 37o 衽 21 310 2o 670 561 570 衽81 490 270 ?6o 631 76o 531 681) 临界偏差是重复性条件下两组实验结果的两个平均值之 间的差 ,见Is o 57孔“。GB/T5511-2008/Is o 20483:2006表(续 )假设实验室一:测 试1+囫亘彐=平均值1(测试1+测试2)/z实验室二 :测 试5+囫亘彐=匪均值2(测试5+测试6)目实验室 三 :测 试9+囫试1彐=匣均值3(测试9+测试10)目示例 :重复性 限被 用 于测试1一测试2之间或测试5一测试6之间。再 现性 限被 用 于测试1一测试6之间或测试2一测试9之间。临界差被 用 于平 均值1一平 均值2之间或平均值1一平均值3之间。B。 1一扌|匕| 、蛋 自质含量(v N57)%重复性标准偏差(s )重复性限(D再现性标准偏差(s R再现挂 限(R)两平均值 的临界差 (CD)在同一实验室两实验室间0 300 8么0 701 960 591 870 330 920.772 160 652 050 361 010.812 350.712 24o .391 09o .912 550.772 3o .么21.180 982.7 1o .832 61o 451.261 052.94o 892 800 481 341 123 14o 952.99GB/T551卜-2008/Is o 20483:2006附 录 C(资料性咐录冫氮含换耸蛋白质合的换奔系数氮含量换算蛋白质含量的校正因子见表G1。表C.1 狃含换多胥 白质含的校正因子农产品校正因子苷通小麦5 7杜伦麦57小芨研磨制品5.7或6.饲料小麦大 麦燕 麦5?或6.孔黑 麦5.7黑小麦6.25玉 米6.25豆 类6.25jfcBlT 551 l-2008/rso 20483:2006*+*tr1 ISO 1871 Agricultural food products-General directions for the determination o nitrogenby the Kjeldahl method.2 ISO 3188 Starches and derived products-Determination of nitrogen content by the Kje-dahl method-Titrimetric method.t3 ISO 5725-2: 1994 Accuracy ( trueness and precision) of measurement methods andresults- Part 2 : Basic method for the determination o repeatability and reproducibility o a standardmeasurement method.i4 ISO 5725-3:1994 Accuracy ( trueness and precision) of measulement methods andresults- Pait 3 : Intermediate measures of the precision of a standard measurement method.t5 ISO 5725-6:1994 Accuracy ( trueness and precision) of measurement methods andresults- Part 6 : Use in practice of accuracy values.t6l ISO 5983-1 Animal eeding stuffs-Determination of nitrogen content and calculation ofcrude protein contelrt-Part 13 Kjeldahl method.7 ISO 6644 Flowing cereals and milled cereal p