流式细胞术在白血病和淋巴瘤中应用.ppt

流式细胞术 在白血病、淋巴瘤免疫分型中的应用,免疫分型的作用,区分淋系、髓系白血病 区分淋系白血病中的T、B-ALL 鉴定混合细胞性白血病的类型： T-M、B-M、T-B、T-B-M 于治疗过程中监测MRD，评价疗效 提示某些遗传学异常： CD56+APL-t（11；17）？ CD19+AML-t（8；21）（q22；q21）？ 提示预后： CD7、CD11b、CD56等阳性的AML患者预后不良 CD15阳性的AML患者CR率高,免疫分型的原理,正常造血细胞 白血病细胞 抗原表达遵循系列保守性 出现抗原跨系表达 髓系:CD33+,T系:CD7+ 髓系: CD33+ CD7+ 抗原表达有一定的时序性 出现抗原时序混乱表达 原始细胞:CD34+CD11B- 原始细胞:CD34+CD11B+ 各阶段细胞按一定的比例分布 出现分化阻滞 原幼细胞20%,免疫分型需要掌握什么理论知识？,正常造血细胞的抗原表达规律 不同系列的细胞表达的抗原？ 同一系列不同阶段的细胞表达的抗原？ 每种抗原的表达强度？,正常B系细胞分化图,源于王建中等编著的临床流式细胞分析,正常T系细胞分化图,源于王建中等编著的临床流式细胞分析,正常粒细胞分化图,源于王建中等编著的临床流式细胞分析,正常单核细胞分化图,源于王建中等编著的临床流式细胞分析,免疫分型中的重要抗原CD45,正常成人骨髓标本,成熟粒细胞：约占40-60%，表达CD11b、CD13、CD33、CD15、CD16、CD10、CD64, 不表达CD34、HLA-DR、CD14、CD117,有核红细胞：50%,表达GPA,成熟单核细胞：约占2-8%，表达CD11b、CD64、CD14、HLA-DR，不表达CD34、CD117,成熟淋巴细胞：约占20-40% T细胞：表达CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7,不表达CD10、CD34、TDT等 B细胞：表达CD19、CD20、CD22，不表达CD10、CD34、TDT等 NK细胞：CD3-(CD16+CD56)+,正常幼稚B细胞：5.0%,表达CD10、CD19、CD22、弱表达CD20，少量CD10stCD34+TDT+,幼稚髓系细胞：5.0,免疫分型常用的抗体,AML CD34、CD117、CD33、CD13、HLA-DR、CD11b、CD15、CD64、CD14、CD65s、MPO 怀疑M6加做CD71、GPA 怀疑M7加做CD61、CD41 B-ALL CD34、CD10、CD19、CD20、CD22、c/mIg、TDT、cCD22/CD79a T-ALL CD34、CD10、CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7、 HLA-DR 、CD1a、 TDT、cCD3 NK细胞 CD16、CD56、CD57 浆细胞 CD38、CD138、c、c、CD19、CD56,免疫分型的步骤一,第一步：初筛，初步筛选白血病类型 CD7/CD19/CD33/CD10/CD117/HLA-DR/CD34/CD45 CD7+CD19-CD33+/-HLA-DR-CD117+/-疑为T-ALL CD7+CD19-CD33+HLA-DR+CD117+疑为AML伴CD7+ CD19+CD7-CD33-CD10+/-CD117-疑为B-ALL CD19+CD7-CD33+CD10+CD117-疑为B-ALL伴CD33+ CD19+CD7-CD33+CD10-CD117+疑为AML伴CD19+ CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR+疑为AML CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-疑为APL,免疫分型的步骤二,第二步：确诊，进一步确定白血病类型，并且将某一系别的白血病根据分化程度的不同再分为不同亚型 根据初筛结果加做其他系别特异性标记 T-ALL:CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD1a、 TDT、cCD3 B-ALL: CD20、CD22、c/mIg、TDT、cCD22/CD79a AML:CD13、CD11b、CD15、CD64、CD14、CD65s、MPO,怀疑M6加做CD71、GPA,怀疑M7加做CD61、CD41,B-ALL免疫亚型,T-ALL免疫亚型,示例：T-ALL 初筛CD7+CD19-CD33+/-HLA-DR-CD117+/-,示例：AML伴CD7+ 初筛CD7+CD19-CD33+HLA-DR+CD117+,示例：B-ALL 初筛CD19+CD7-CD33-CD10+/-CD117-,示例：BALL+CD33 初筛CD19+CD7-CD33+CD10+CD117-,示例：AML+CD19 初筛CD19+CD7-CD33+CD10-CD117+,示例：AML 初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR+,示例：AML-M3 初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-,示例：AML-M3V 初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-,混合细胞性白血病的免疫分型,双表型：一种白血病细胞同时表达两个或两个以上系列标志。 双克隆型：同时存在两种或两种以上异常细胞，分别表达各自的系列特异性标志。 类型：T-M、B-M、T-B、T-B-M,白血病中各种抗原的积分情况,混合细胞性白血病判断标准：每个系列积分或=2.5分,示例：B-M型AL,示例：T-M型AL,示例：T-B-M型AL,免疫表型的预后价值,免疫分型在慢淋、淋巴瘤中的应用简介,肿瘤性B细胞鉴别关键：、轻链出现单克隆表达或双阴性或表达强度明显异常。 肿瘤性T细胞鉴别关键：CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7中出现抗原表达缺失或抗原表达强度的改变；CD45RA、CD45RO的表达情况出现异常；表达TDT、CD10等幼稚抗原；TCRV系列抗原出现单克隆表达。 浆细胞肿瘤鉴别关键：CD138+细胞表达CD56，不表达CD19，出现cy、cy轻链的单克隆表达。 NK细胞肿瘤鉴别关键：出现CD16、CD56、CD7、CD2等抗原的缺失，CD45表达强度的改变 每种类型都必须关注异常细胞CD45表达强度、SSC、FSC的变化。,示例：正常淋巴细胞,正常T细胞,正常B细胞,正常NK细胞,示例：B-CLL/SLL,示例：MCL,示例：HCL,示例：B