乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比.doc

乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比 张怡莎 河南省商丘市第一人民医院检验科，河南商丘476100 摘要目的探讨化学发光免疫分析技术（ECLIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）在乙肝病毒血清学检验中的应用效果。方法选取xx年1月xx年1月在我院就诊的疑似乙肝患者150例，分离血清后分别应用ELISA和ECLIA进行检测，比较两种检测方法的效果。结果ELISA和ECLIA检测出HBsAg阳性分别63例和82例，两者比较差异显著（P0.05），同时ECLIA法检测的批内CV和批间CV的重复性均明显高于ELISA法（P0.05）。结论与ELISA检验法比较，ECLIA法具有更高的HBsAg阳性检出率，且能进行精确的定性定量检测，值得临床推广应用。 关键词乙肝病毒；血清学检验；elisa；eclia R373.21A1672-5654（xx）11（b）-0032-02 作者简介张怡莎(1982-)，女，汉族，河南省太康县，本科，技师，研究方向：免疫类，从事的工作：医学检验。 我国是乙型肝炎病毒（HBV）感染率较高的国家，且目前尚无针对该病的特效疗法，因此对于该病进行早期诊断尤为重要。目前采用标记免疫学方法检查HBV血清学指标是诊断HBV感染的主要手段，目前常用的免疫学方法主要包括化学发光免疫分析技术（ECLIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）两种，本文就这两种方法在乙肝病毒血清学检验中的应用进行比较，以为临床选择有效的诊断手段提供依据。 1资料与方法 1.1一般资料 选取xx年1月xx年1月来我院就诊的疑似乙肝患者150例，所有患者诊断标准均参照WS299-xx乙型病毒性肝炎诊断标准，其中男性86例，女性64例，年龄1856岁，平均年龄（41.35.7）岁。 1.2检验方法 1.2.1仪器和试剂对所有患者均分别行化学发光免疫分析技术（ECLIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检验。 1.2.2方法所有患者均于检验当天清晨空腹抽取肘部静脉血10mL，以3000r离心率离心10min后分离出血清待检。将所有患者的血清均分为两份，先后采用ELISA和ECLIA进行检验，每次以定值参比血清作为质控，操作均严格按照试剂盒说明书进行。 1.2.3ELISA检验方法和判定标准采用双抗原夹心法进行测定，用去离子水稀释将50mL的浓缩洗涤液至1000mL置于专门的洗液瓶中，并将酶标试剂置于试剂预定位置读取吸光度值，以阴性对照平均吸光度（A）值2.1为临界值，以标本OD值与临界OD值的比值（S/OD）1.00判定为阳性，否则判定为阴性。 1.2.4ECLIA检验方法和判定标准同样也采用双抗体夹心法进行检验，将配套反应杯、吸头和洗液等放置在预定位置，采用75%酒精棉球擦洗试剂，将HBsAg和生物素标记的HBsAb与待测样品共同培育，再和亲和素标记的磁微粒孵育，经过反复洗涤使游离的抗原和抗体与复合物分离，并加入三丙胺，启动ECL反应，用其激光强度判定HBsAb浓度，若HBsAb10mlU/mL则判定为阳性，否则判定为阴性。 1.2.5重复性比较选取HBsAg含量低、中、高浓度的阳性血清共分成20份进行冷冻保存，每天测量1次，其中10份计算批间重复性，其余10份用来计算批内重复性。 1.3统计学方法 应用SPSS15.0处理所有数据，计数资料应用2检验，以P0.05表示差异有统计学意义。 2结果 2.1HBsAg阳性率比较 对ELISA和ECLIA两种检测方法的阳性率比较，ECLIA测定的HBsAg阳性率明显大于ELISA，且差异显著（P0.05），详见表1。 2.2重复性比较 对ELISA和ECLIA两种检测方法的重复性比较，除高浓度HBsAg含量比较外，其余指标结果的比较均显示ECLIA的重复性明显优于ELISA，且差异显著（P0.05），详见表2。 3讨论 乙型肝炎病毒是一种全球性传染性疾病，我国乙肝病毒表面抗原（HBsAg）携带者高达10%1，其中HBsAb（乙肝病毒表面抗体）是人体感染HBV后针对HBsAg产生的特异性抗体，由于目前尚无特效疗法，所有早期诊断HBsAb尤为重要2。在本研究中我们对乙肝病毒血清学检验分别应用ELISA和ECLIA进行检验比较，结果显示ECLIA法HBsAg阳性检出率为54.7%，明显高于ELISA法的42.0%（P0.05），这主要与两种不同检验的具体方法有关，其中ELISA法是临床中传统的诊断乙肝方法，因其具有简便、快速、价格低廉的特点，因此被广泛应用于HBsAg的检测中，但该方法仅能进行定性分析，不能进行定量分析，同时当待测标准中物质浓度过高时可能会出现假阴性，且由于不同厂家生产的抗原和抗体试剂具有较大的差异，加之反复洗板带来的误差，更易出现较高的假阴性3-4。ECLIA技术是一种采用生物素-亲和素技术，其在电极表面可由电化学引发的特异性化学发光反应，是目前最为先进的化学发光免疫测定系统之一5。 ECLIA技术使用的载体是受电磁铁控制的顺磁性微粒，其全面的实现了检测的自动化和标准化，减少了因人工操作带来的误差，并可精确的进行定性定量分析，大幅度减少了批内、批间的误差6-7。同时电磁铁的电磁快速消失性有利于游离抗体和复合抗体的分离，从而降低了由游离抗体所导致的假阴性结果，提高了ECLIA检测的特异性8-9从本研究批内、批间重复性的研究结果中发现，两种方法检出率的差异主要集中在低浓度，而高浓度无显著差异（P0.05），这可在一定程度上说明ELISA更适用于高浓度HBsAb，而ECLIA的检测范围更广，而加大对低浓度HBsAg的检出率可更加有效的控制传染源10-11。 总之，与ELISA法比较，ECLIA法在乙肝病毒血清学检验中具有更高的优越性，可明显提高HBsAg的阳性检出率，并能准确的进行定性和定量分析，并可早期发现病情，从而更好的为临床及时可控制传染源提供依据，为改善患者病情赢得时间，意义重大，因而值得临床推广应用。 参考文献 1朱火星.化学发光法和酶联免疫法应用于乙肝病毒血清学效果比较J.当代医学,xx,16(16):89-90. 2何宗忠.三种检测方法对乙型肝炎病毒血清标志物的比较研究D.南方医科大学，xx. 3严伟玲,严春玲,赖在真.化学发光免疫分析法检测乙肝病毒感染性标志物的临床应用J.中国卫生检验杂志,xx,14(12):1748-1749. 4梁秀云.时间分辨荧光免疫法和化学发光免疫分析法检测人血清乙肝病毒表面抗原浓度的差异性分析J.医学信息（上旬刊）,xx,24(8):4946-4947. 5HiggsDR，EngelJD，StamatoyannopoulosGThalassaemiaJ.Lancet,xx,379(13):373-383 6HarteveldCL，HiggsDRAlpha-thalassaemiaJ.OrphaJRareDis,xx,5(13):20-21 7成军,孙长贵,陈瑜,等.低浓度HBsAg人群HBV-DNA与HBV-M定量结果的关系及评价J.细胞与分子免疫学杂志,xx,25(7):631-636. 8朱雪娟,张欣欣.乙型肝炎病毒HBsAg定量检测的临床意义J.中华肝脏病杂志,xx,19(8):637-640 9王秀华.化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法检测乙肝病毒标志物临床探讨J.求医问药(下半月),xx,14(12):522-523. 10MendyME，FortuinM，JackAD，eta1.HepatitisBvirusDN