姜黄素对脂多糖诱导腹腔巨噬细胞释放炎症因子的影响.doc

姜黄素对脂多糖诱导腹腔巨噬细胞释放炎症因子的影响 宋志华毕小宝 【摘要】目的探讨姜黄素对脂多糖（lipopolysaharide，LPS）刺激腹腔巨噬细胞（peritonealmacrophages，PMs）分泌炎症因子的影响。方法分离、培养腹腔巨噬细胞，用不同浓度姜黄素（12.5、25、50mg/L）预处理细胞12h，进而使用100ng/mlLPS刺激细胞，12h后收集培养基上清液，ELISA检测促炎介质肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor-，TNF-）、白介素6（interleukin-6，IL-6）的含量；30min后收集细胞裂解物，Westernblot检测p38MAPK激酶活性。结果未经处理的腹腔巨噬细胞经LPS刺激12h后，上清中TNF-、IL-6的表达水平显著上升（p0.05）；而50、25mg/L姜黄素可以明显抑制LPS诱导的TNF-、IL-6的表达（p0.05）；且25mg/L姜黄素能够明显抑制LPS激活的p38MAPK激酶的磷酸化水平。结论一定浓度的姜黄素可以抑制LPS刺激腹腔巨噬细胞炎症因子TNF-、IL-6的分泌，进而减轻炎症反应的程度。 【关键词】姜黄素腹腔巨噬细胞脂多糖炎症因子 【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofcurcuminoninflammatorycytokinereleasebyperitonealmacrophages（PMs）stimulatedbylipopolysaharide（LPS）.MethodPMswereisolatedandcultured，thenpretreatedwithdifferentconcentrationsofcurcumin（12.5、25、50mg/L）for12hfollowedby100ng/mlLPSstimulation.TNF-andIL-6inthecellsupernatantsweredetectedbyELISAafter12hLPSstimulation；theactivityofp38MAPKinthecelllysateswasinvestigatedbyWesternblotafter30minLPSstimulation.ResultTNF-andIL-6levelsincreaseddramaticallyafter12hstimulationinthecontrolgroup（p0.05）.However，bothexpressioncanbeinhibitedby50and25mg/Lcurcumin（p0.05）.Furthermore，thephosphorylationofp38MAPKcanbeinhibitedby25mg/Lcurcumin.ConclusionCertainconcentrationsofcurcumincaninhibitorthereleaseofTNF-andIL-6byPMsstimulatedbyLPS，whichcanfurtheralleviateinflammation. 【Keywords】Curcumin，Peritonealmacrophages，Lipopolysaharide，Inflammatorycytokines 【Authorsaddress】PharmacyDepartmentofNanfangHospital，SouthernMedicalUniversity DepartmentofAnesthesiology，GuangzhouWomenandChildrenMedicalCenter doi：10.3969/j.issn.1671-332X.xx.10.003 姜黄素（curcumin）是从植物姜黄、郁金、莪术等的根茎中提取、分离出的一种低相对分子质量的多酚物质。近年研究显示，姜黄素具有广泛的生物活性，包括抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等。本实验主要探讨姜黄素对脂多糖（lipopolysaharide，LPS）刺激腹腔巨噬细胞分泌炎症因子的影响，为研究姜黄素的抗炎机制提供相关理论依据。 1材料和方法 1.1实验动物 8周雄性BALB/c小鼠以无特定病原体动物（specificpathogenfree，SPF）级饲养条件饲养，由南方医科大学动物中心提供，动物合格证号为：44002100002747 1.2主要仪器和试剂 细胞培养箱、酶标仪、DMEM、胎牛血清、mouseTNF-ELISAkit、mouseIL-6ELISAkti、phospho-p38MAPKantibody。 1.3统计学分析 1.3.1小鼠腹腔巨噬细胞的分离、培养8周BALB/c小鼠乌拉坦（0.6ml/100g）腹腔注射麻醉后，置于解剖板上，用针头固定四肢，腹腔注射无菌的磷酸盐缓冲液（PBS）5ml，轻柔小鼠腹部23min，无菌条件下打开腹腔，用注射器抽取腹腔液，1000rpm/min离心5min，弃上清。重悬于含10%胎牛血清的DMEM培养液中，接种于24孔板中，2h后更换培养液，置于37、5%CO2培养箱培养过夜，次日用于实验研究。同时台盘蓝染色鉴定细胞存活状况。 1.3.2ELISA检测TNF-和IL-6分为六组：对照组；单独LPS刺激组；12.5mg/L姜黄素+LPS刺激组；25mg/L姜黄素+LPS刺激组；50mg/L姜黄素+LPS刺激组；单独50mg/L姜黄素刺激组。实验组细胞预先使用不同浓度姜黄素处理12h，进而100ng/mlLPS刺激，12h后收集细胞上清，ELISA试剂盒检测TNF-和IL-6的水平。 1.3.3Westernblot检测p38MAPK激酶活性分为四组：对照组；单独LPS刺激组；25mg/L姜黄素+LPS刺激组；单独25mg/L姜黄素刺激组。实验组细胞预先使用姜黄素处理12h，进而100ng/mlLPS刺激，30min后收集细胞裂解物，Westernblot检测p38MAPK磷酸化水平。 1.3.4统计学处理 采用SPSS13.0软件，计量资料采用s表示。方差齐时，各组间进行单因素方差分析，p0.05时具有统计学差异。 2结果 2.1不同浓度姜黄素对LPS诱导腹腔巨噬细胞TNF-、IL-6水平的调节未经处理的腹腔巨噬细胞经LPS诱导12h后，细胞培养上清中TNF-、IL-6蛋白表达水平明显上升，与阴性对照组相比，差异有统计学意义（p0.05）。50mg/L、25mg/L姜黄素能显著降低LPS诱导的TNF-、IL-6蛋白表达，与LPS刺激组相比，差异有统计学意义（p0.05）。50mg/L、25mg/L姜黄素对二者蛋白表达抑制率接近50%。 2.2姜黄素对LPS