宫颈癌与癌前病变组织中HPV16整合感染状态的分析研究.doc

宫颈癌与癌前病变组织中HPV16整合感染状态的分析研究 廖林 （四川省眉山市第二人民医院/四川省眉山市仁寿县人民医院四川眉山620000） 【摘要】 目的：探索宫颈癌与癌前病变组织中的HPV-16整合感染状态的研究。方法：对我院xx年1月xx年12月接受的241例患者的宫颈病变组织的蜡块进行研究，宫颈上皮内瘤样病变（CIN）196例，其中CINI122例，CINII44例，CINIII30例；宫颈癌45例，取22例正常宫颈上皮作为对照组，对HPV-16感染标本的病毒整合状态进行测定分析。结果：经检测发现，在正常的宫颈组织、宫颈癌、CINI、CINII、CINIII组织中，HPV-16的阳性检出率分别为4.5%，66.7%，19.7%，34.1%，43.3%，不同组织的HPV-16的阳性检出率均有明显差异（P0.05），CINIII的HPV-16整合的感染率（38.5%）明显高于CINI、CINII（16.7%，20.2%，P0.05），宫颈癌的HPV-16整合的感染率（60.0%）明显高于CINI、CINII、CINIII（16.7%，20.2%，38.5%，P0.05）。结论：宫颈疾病的病变程度与HPV-16整合感染状态具有正相关的关系，在检测的过程中辅助HPV感染状态的检测能提高对宫颈癌疾病的预测。 关键词宫颈癌；整合；人乳头状瘤病毒 【】R711.32【】B【】1674-9561（xx）07-0128-02 宫颈癌是具有高致死率的常见恶性肿瘤1，对妇女的生存和健康造成严重威胁。人乳头状瘤病毒（humanpapilloma-virus，HPV）是发生宫颈癌的重要因素，有研究表明单纯的HPV感染并不能导致宫颈癌的发生，DNA整合进入宿主细胞以及持续存在的高危型HPV是细胞变性的主要因素2。HPV整合可在不同的DNA开放读码框架处发生，由于其不稳定性，E2基因铰链区成为宿主细胞常见的断裂或缺失部位3，4。在本次研究中，通过对E2基因缺失的检测，来判断HPV-16对临床宫颈癌预测的作用和意义。 1材料与方法 1.1一般资料：对我院xx年1月xx年12月接受的241例患者的宫颈病变组织的蜡块进行研究，所有的病变组织均得到病理确认，患者年龄为（48.715.3）岁，患者均已婚，本次研究均在家属及患者知情的情况下，得到医院伦理会的审核和批准。根据WHO关于女性生殖道肿瘤的分类标准5，宫颈上皮内瘤样病变（CIN）196例，其中CINI122例，CINII44例，CINIII30例；宫颈癌45例，取22例正常宫颈上皮作为对照组。患者的病变组织均未进行放射或化疗，对蜡块进行常规切片，HE染色后在显微镜下进行观察分析，确定无大片出血、坏死以及自溶后进行研究。采用美国典型生物物种保藏中心的宫颈癌细胞株SiHa，将病变组织置于10%的胎牛血清的DMEM培养基，在饱和湿度、37、5%CO2的条件下进行培养。 1.2方法：对病变组织切片的DNA进行提取并进行测量，利用Digene公司的HPV检测盒并依照操作步骤对其进行检验。HPV-16的感染：DNA水平：根据相关文献，HPV引物序列为：下游为5-TTATGGTTTCTGAGAACAGA-3，上游为5-AGAAACCCAGCTGTATCAT-3。蛋白质水平：免疫组化SP法检测切片组织中HV-16的表达。HPV-16整合的确认：通过重叠的PCR扩增HPV-16E2基因序列间有相互交叉的三个片段来确认病毒的整合。当三个片段不能同时进行阳性扩散时，表明HPV-16E2基因有缺失，表明HPV-16整合状态。 1.3观察指标：对HPV-16感染以及整合进行记录分析。 1.4统计学分析：选择spss18.0进行数据分析，用均数标准差（s）的形式表示计量资料，并用t检验进行其检验，用率的形式表示计数资料，并用2检验对其进行检验，用秩和检验（Wilcoxon两样本比较法）的方法，对等级资料进行检验，当P0.05时统计学有意义。 2结果 2.1HPV的检测与分型：经检测发现，在正常的宫颈组织、宫颈癌、CINI、CINII、CINIII组织中，HPV的阳性检出率分别为13.6%，93.3%，32.8%，54.5%，70.0%，不同组织的HPV的阳性检出率均有明显差异（P0.05），具体数据见表1。 2.2HPV-16感染的确定：经检测发现，在正常的宫颈组织、宫颈癌、CINI、CINII、CINIII组织中，HPV-16的阳性检出率分别为4.5%，66.7%，19.7%，34.1%，43.3%，不同组织的HPV-16的阳性检出率均有明显差异（P0.05），具体数据见表1。 2.3HPV-16整合的确定：经检测发现，在正常的宫颈组织、宫颈癌、CINI、CINII、CINIII组织中，HPV-16整合的感染率分别为0%