药物分析实验指导书(11版大纲).doc

药物分析实验指导书实验一 烟酸原料药的鉴别实验一、实验目的 1、掌握鉴别烟酸的原理及方法 2、掌握紫外分光光度法鉴别烟酸的方法原理及紫外吸收图谱的解析 3、熟悉紫外分光光度计的操作要点及紫外分光光度法效能指标评价的内容与要求二、实验原理 1、鉴别反应 （1）烟酸加2,4-二硝基氯苯加热溶化后，生成季铵化合物，再加乙醇制氢氧化钾溶液，即显紫红色，以此鉴别烟酸，反应式为： 本反应需在无水的条件下进行 （2）烟酸与氢氧化钠发生酸碱中和反应，遇石蕊试纸显中性，遇硫酸铜生成淡蓝色烟酸酮沉淀，以此鉴别烟酸，反应式为： （3）烟酸加水溶解后，照紫外-可见分光光度法测定，在262nm的波长处有最大吸收，在237nm的波长处有最小吸收，且237nm波长处的吸光度与262nm波长处的吸光度的比值应为0.350.39；而烟酰胺也在262nm的波长处有最大吸收，在245nm波长处有最小吸收，在A254nm/A262nm为0.630.67。因此可用该方法来区别烟酸和烟酰胺。三、实验内容与操作 （一）仪器和试剂1、仪器 紫外分光光度计、配对比色杯一对、试管（25ml，2支）、电炉、药物天平、烧杯（50ml，2只）、容量瓶（100ml、10ml各2只）、移液管（1ml，2只）、乳钵（小号1个，配乳槌）。 2、试剂 烟酸、0.4%氢氧化钠试液（取氢氧化钠0.4g，加水使溶解成100ml，即得）、2,4-二硝基氯苯、乙醇制氢氧化钾试液（取氢氧化钾3.5g，加100ml95%乙醇使溶解，静止后取上清液）、硫酸铜溶液（取硫酸铜12.5g，加水溶解成100ml，即得），蒸馏水、95%乙醇 （二）实验步骤 1、鉴别 （1）取烟酸约4mg，加2,4-二硝基氯苯8mg，研匀，置试管中，缓缓加热溶化后，再加热数秒钟，放冷，加乙醇制氢氧化钾试液3ml，即显紫红色。 （2）取烟酸约50mg，加水20ml溶解后，滴加0.4%氢氧化钠溶液至遇石蕊试纸显中性反应，加硫酸铜试液3ml，即缓缓析出淡蓝色沉淀。 （3）取烟酸，加水溶解并稀释制成每1mL中约含20g的溶液，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版附录A）测定，在262nm的波长处有最大吸收，在237nm的波长处有最小吸收；在237nm波长处的吸光度与262nm波长处的吸光度的比值应为0.350.39。四、思考题 1、计算烟酸的A235nm/A262 nm五、实验报告书写要求1、实验目的；2、实验原理；3、主要仪器与试剂；4、实验结果；5、思考题答案。实验二 阿司匹林原料药的鉴别试验及其特殊杂质的检查一、实验目的1、掌握鉴别阿司匹林的原理及方法。2、掌握阿司匹林中游离水杨酸的检查原理及方法。3、熟悉阿司匹林中由于合成工艺所带来的其它特殊杂质的检查原理及方法。二、实验原理1、鉴别反应（1）阿司匹林加热水解产生的水杨酸在中性或弱酸性条件下与三氯化铁试液反应，生成紫堇色配位化合物，以此鉴别阿司匹林，反应式为： COOH COOH OCOCH3 + H2O OH + CH3COOH COOH COO6OH + 4FeCl3 Fe + 12HCl(O)2Fe 3本反应极为灵敏。反应适宜的pH值为46，在强酸性溶液中配位化合物分解。（2）阿司匹林与碳酸氢钠试液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并发生醋酸的臭气，以此鉴别阿司匹林。反应式为：COOH COONa OCOCH3 + Na2CO3 OH + CH3COONa + CO2 COONa COOH 2OH + H2SO4 2 OH + Na2SO4 2 CH3COONa + H2SO4 2 CH3COOH + Na2SO4 沉淀物于100105干燥后，熔点为156161。2、特殊杂质检查（1）溶液的澄清度 本实验系检查碳酸钠试液中不溶物。不溶物杂质有未反应完全的酚类，或水杨酸精制时温度过高，产生脱羧副反应的苯酚，以及合成工艺过程中由副反应生成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等。这些杂质均不溶于碳酸钠试液，而阿司匹林可溶解，利用溶解行为的差异，由一定量的阿司匹林在碳酸钠试液中溶解应澄清来加以控制。（2）游离水杨酸 用高效液相色谱外标法对样品中游离水杨酸的量进行测定三、实验内容与操作（一）仪器和试剂1、仪器 烧杯（50ml， 4只）、电炉、药物天平、配对比浊管（内径1516mm、平底、具塞、以无色、透明、中性硬质玻璃制成）2支、移液管（5ml 2支）、量瓶（10ml、50ml、 1000ml各2只）。2、试剂 阿司匹林、水杨酸、三氯化铁试液（取FeCl39g，加水使溶解成100ml，即得）、蒸馏水、碳酸钠试液（取无水Na2CO310.5g，加水使溶解成100ml，即得）、稀硫酸（取硫酸57ml，加水稀释至1000ml,即得）、四氢呋喃、冰醋酸、乙腈（色谱纯）、甲醇。（二）实验步骤1、鉴别（1）取本品约0.1g，置50ml烧杯中，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。（2）取本品约0.5g，置50ml烧杯中，加碳酸钠试液10ml,煮沸2分钟后，放冷，加过量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并发生醋酸的臭气。2、检查（1）溶液的澄清度 【供试品溶液制备】 取本品0.50g，置50ml烧杯中，加温热至约45的碳酸钠试液10ml溶解后，制成供试品溶液（供试品溶解后应立即检视）。操作方法：将规定浓度的供试品溶液在黑色背景下检视（2）游离水杨酸 取本品0.10g，精密称定，置10ml容量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（临用新制）；取水杨酸对照品约10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml容量瓶中，用1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。照高效液相色谱法试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5:5:70）为流动相；检测波长为303nm。理论塔板数按水杨酸峰计算不低于5000，阿司匹林与水杨酸的分离度应符合要求。立即精密量取供试品溶液、对照品溶液各20l，分別注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图如有与水杨酸峰保留一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过0.1%。四、思考题1、计算水杨酸的限量。五、实验报告书写要求1、实验目的；2、实验原理；3、主要仪器与试剂；4、实验结果；5、思考题答案。实验三 高效液相色谱法测定阿司匹林原料药的含量一、实验目的1、掌握外标法的实验步骤和结果计算方法。2、熟悉高效液相色谱仪性能检查和色谱参数测定的方法。3、了解高效液相色谱仪的使用方法。二、实验原理 （一）阿司匹林的含量测定1、色谱参数 本实验仅测定下列色谱参数：（1）理论板数：n=5.54(tR/W1/2)2 理论塔板高度：HL/n 如果测得的理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。（2）分离度：定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为： 式中 为相邻两峰中后一峰的保留时间； 为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1 及W2为此相邻两峰的峰宽。除另外有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5。（3）拖尾因子 为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合各品种项下的规定，拖尾因子计算公式为 式中，为5%峰高处的峰宽；为峰顶点至峰前沿之间的距离。除另有规定外，峰高法定量是T应在0.951.05之间。中国药典规定，在采用HPLC法检测药品时，必须对仪器进行系统适用性试验，其试验内容即为理论板数、分离度、拖尾因子以及重复性。2、高效液相色谱仪的性能指标：本实验仅检查重复性。重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0。3、外标法定量分析阿司匹林含量 精密称取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积，按下式计算含量：式中 为供试品的峰面积或峰高 为对照品的峰面积或峰高 为对照品的浓度 为供试品的浓度三、实验内容与操作（一）仪器和试剂1、仪器 高效液相色谱仪、ODS柱、万分之一分析天平、量筒 （100ml、 1000ml 各1个）、0.45mm微孔滤膜（油系膜）、量瓶（100 ml，2只）2、试剂 阿司匹林、四氢呋喃、乙腈（色谱纯）、冰醋酸（AR）、重蒸馏水。（二）实验步骤1、阿司匹林含量测定：照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5:5:70）为流动相；检测波长为276nm。理论塔板数按阿司匹林峰计算不低于3000，阿司匹林与水杨酸的分离度应符合要求。测定法 取阿司匹林原料适量，精密称定，加1%冰醋酸的甲醇溶液适量，振摇使溶解，并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为供试品溶液；另取阿司匹林对照品同法配制，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液、对照品溶液各20l，分別注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。（三）注意事项实验中可通过选择适当长度的色谱柱，调整流动相中有机相与水相的比例或流速，使阿司匹林峰、水杨酸峰的分离度达到定量分析的要求。四、思考题1、配制供试品溶液时，为什么要使其浓度与对照品溶液的浓度相接近？2、什么是分离度？如何提高分离度？五、实验报告书写要求1、实验目的；2、实验原理（简述）；3、主要仪器与试剂；4、实验结果；5、回答思考题。实验四 中和滴定法测定烟酸的含量一、实验目的1、掌握中和滴定法测定烟酸含量的原理及方法2、掌握中和滴定法测定烟酸含量的操作要点、注意事项与结果计算3、熟悉中和滴定法的终点确定、效能指标评价的内容与要求二、实验原理 烟酸为一元强酸性物质，因此，可直接采用强酸的酸碱滴定法测定其含量。具体方法为以酚酞为指示剂，用氢氧化钠标准滴定液滴定烟酸的水溶液，根据消耗的氢氧化钠标准滴定液的用量，计算以C6H5NO2计的烟酸的含量，并将滴定的结果用空白试验校正。三、实验内容与操作 （一）、仪器与试剂 1、仪器：三角烧瓶（100ml、 12只）、碱式滴定管（25ml、一根）、酸式滴定管（50ml，1根）、量筒（50ml，2只）、万分之一电子天平 2、试剂：0.1mol/L氢氧化钠滴定液（取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新沸过的冷水使成1000ml，即得）、水、酚酞指示液（取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得） （二）、实验步骤 1、氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的标定取在105干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。平行测定3次，3次结果的相对平均偏差不得大于0.1%注：本滴定液应置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。 2、烟酸的含量测定 （1）、实验方法：取本品0.3g，精密称定，加50mL新沸过的冷水溶解后，加3滴酚酞指示液，用氢氧化钠标准滴定液（0.1mol/L）滴定至粉红色，记录消耗氢氧化钠滴定液的体积数（mL），每1 mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于12.31mg的烟酸（C6H5NO2），即得。 （2）结果计算 烟酸（以C6H5NO2计）的质量分数w1，数值以%表示，按下式计算： 其中：V-消耗氢氧化钠标准滴定液的体积数，单位为mL； V0-空白实验消耗氢氧化钠标准滴定液的体积数，单位为mL；