北极海泥菌群的分离鉴定及生物学特性的初步研究.ppt

北极海泥菌群的分离鉴定及生物学特性的初步研究,2013.12.19,实验目的,通过分离鉴定，建立整个系统发育树有助于了解整个系统的多样性,二、促进对极地微生物抗冻物质、多不饱和酸、抗紫外辐射、耐盐机制、抗肿瘤、新型药物的研究与应用,1材料与方法,1.1供试海泥的获得采集自北极海域的海洋沉积物样品B12(2024m)、N01(3333m)、P23(2028m)、R15(1732m)、P37(2216m)。,1.2菌体的分离,用到的培养基：2216E海洋细菌培养基:蛋白胨5g、酵母粉1g、柠檬酸铁0.1g、琼脂18g、陈海水1000mL、pH8。方法：样品稀释后涂布到2216E培养基上，4倒置培养7d以后挑取不同菌落划线在2216E培养基上纯化后保种转入-80保存,1.3细菌鉴定,1.3.1形态观察和生理生化试验,生理生化试验结果,生理生化试验结果表明：其耐盐的能力强有多株细株细菌产低温酶类:N014产淀粉酶,R151产明胶酶,P371产纤维素酶大多为革兰氏阴性细菌,1.3细菌鉴定,1.3.2温度生长试验,将8株菌接入2216E培养基分别放到4、15、28培养箱培养10d左右,观察生长状况,温度生长实验结论,N011、P371、P372为耐冷菌P231、R151、R152、N013、N014为嗜冷菌,1.3细菌鉴定,1.3.3基因组DNA的提取和16SrDNA系统发育分析,扩增16SrDNA采用的正向和反向引物为27F和1492R,使用Taq聚合酶进行测序后进行核酸序列比对,P231与Colwelliarossensis的16SrDNA序列有较高的同源性,其中与Colwelliasp.EM0379有98.8%的同源性,科尔维尔氏菌属,R151与Psychrobacterfrigidicola的16SrDNA序列有较高的同源性,其中与Psychrobactercellerstrain23有98.9%的同源性,嗜冷杆菌属,R152与Marinobacterguineae的16SrDNA序列有较高的同源性,其中与Marinobactersp.BSi20018有99.2%的同源性,海杆菌属,N013与Pibocellaponti的16SrDNA序列有较高的同源性,其中与Pibocellasp.MOLA312有99.7%的同源性,极地杆菌属,N014与Marinobactersegnicrescens的16SrDNA序列有较高的同源性,其中与Marinobactersp.ANT8277有99.2%的同源性,海杆菌属,系统发育分析结果,五株嗜冷菌的进化树可以确定P231属于科尔维尔氏菌属(Colwellia)R151属于嗜冷杆菌属(Psychrobacter)R152属于海杆菌属(Marinobacter)N013属于极地杆菌属(Pibocella)N014属于海杆菌属(Marinobacter),讨论,低温酶具有诸多优势是研究的热点淀粉酶在食品、医药、洗涤、造纸、纺织方面有着非常广泛的应用前景明胶酶在肿瘤抑制、脱色工艺上有着