HA与HI实验.doc

实验HA与HI一、 实验原理某些病毒（如新城疫病毒，减蛋综合症）能凝集某些动物的红细胞，这种现象虽非抗原抗体，但利用这一现象可检查样品中是否有病毒存在，测病毒滴度，病毒红细胞血凝由于能被相应抗体所抑制，因此可以通过病毒的血凝抑制试验测定抗体的效价。二、实验试剂与器材 1、实验器材 小烧杯、电子天平、离心机、离心管、采血针、玻璃棒、微量移液器（50l）、枪头（50l）、培养皿、96孔板恒温箱 2、实验材料 免疫过的鸡 3、实验试剂 3*1 0.9%生理盐水（200ml） 称取1.8gNaCl,溶解于200ml蒸馏水中，即可制成 3*2 1%红细胞配制 （1）、取抗体凝血，离心（10001500rpm,5min） （2）、弃上清，取5ml生理盐水，离心（10001500rmp,35min） （3）、弃上清，取5ml生理盐水，离心（3000rmp , 35mim） （4）、以红细胞体积，加入生理盐水，制成1%浓度 3*3 抗体制备 （1）、从鸡翅取血，放入离心管中（2000rmp , 35min） （2）、吸取上清，即为抗体（黄色清亮） 3*4 抗原制备 （1）、取新城疫病毒干粉，加生理盐水（灭菌过）、 （2）、溶解，即为抗原三、实验步骤 1、HA实验步骤孔口 项目123456789101112稀释液50505050505050505050不加50病毒液5050 50 505050 5050 5050，弃5050不加病毒液稀释倍数1：21：41：81：161：321：641：1281：2561：5121：1024阳性对照阴性对照红细胞505050505050505050505050作用时间与温度放37 恒温箱20min结果凝集凝集凝集凝集凝集凝集凝集不凝不凝不凝凝集不凝 （1）、前10孔与第12孔，每孔加50l生理盐水 （2）、第11孔加50l病毒液，第12孔不加，前10空依次倍比 每孔50l生理盐水病毒倍比稀释1211101弃50l50l 50l 50l 50l病毒液50l生理盐水50l病毒液 （3）、每孔加入50l红细胞 （4）、放37 恒温箱20min，观察结果 2、HI实验步骤 （1）、四单元抗原：取病毒滴度2n/22 ,则取1ml抗原液，加 入2(n-2) 1ml生理盐水。 (2)、前10孔与第12孔每孔加入50l生理盐水，第11孔50l生理盐水孔口 项目123456789101112稀释液50505050505050505050不加50被检抗体505050505050 50 50 5050，弃5050不加血清稀释倍数1：21：41：81：161：321：641：1281：2561：5121：1024阳性对照阴性对照4单位抗原505050505050505050505050作用时间与温度放37 恒温箱15min红细胞505050505050505050505050作用时间与温度放37 恒温箱15min 结果不凝不凝不凝不凝不凝不凝不 凝不凝不凝凝集不凝凝集121101150l50l50l弃50l50l抗体l每孔50l生理盐水50l抗体50l生理盐水抗体的倍比稀释（3）、第11孔加入50l抗体，前10孔倍比稀释 （4）、每孔加入50l四单位抗原 （5）、放37 恒温箱15min （6）、每孔加入50l 1%细胞 （7）、放37 恒温箱15min （8）、取出观察，记录抗体效价四、实验结果与分析 1、HA实验结果与分析 （1） 实验结果第7孔 （2）分析第3排，第7列红细胞下滑可能是由于洗板的问题 2、HI实验结果与分析(1) 实验结果 第9孔 （2）实验分析 取血清时，鸡的血脂太高，或者是由于该鸡血液中蛋白质含量偏高、血清黏稠，离心后不易分离。 第7排，第9列红细胞有点凝集可能是红细胞没有混匀注意事项（1）1%红细胞配制时洗涤干净并且转速要合适，过高过低都会对结果造成影响（2）红细胞与4单位抗原从右往左加入（3）吸取红细胞与病毒液，充分混匀边搅边加（4）4单位抗原现用现配，此时病毒凝集力强，且较易混匀（5）在静置过程