PCR检验.doc

聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1973年，台籍科学家钱嘉韵，发现了稳定的TaqDNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95高温时变性会变成单链，低温（经常是60C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5-3)的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。荧光定量PCR技术检测的报告形式一，拷贝数的意义：表示原始标本内可供探针结合的核酸片段数量 二，拷贝数与病原体的关系：拷贝数与病原体的数量成正相关三，报告形式：1如果标本量是可以定量的，如血液等，则检测结果报告为：IU/ml(可溯源到国际标准物质的标准品)如HBV-DNA：检测下限：100IU/毫升 即：10的六次方IU/ml“小三阳”与HBV-DNA： “ HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）”，HBV-DNA阳性率为40-80%左右，且病毒载量10的六次方IU/ml。一般情况下HBeAb（+）表明HBV复制处于较低水平并可能和宿主DNA发生整合，导致含量较低，应进行HBV-DNA定量检测。常规结核病实验室诊断方法及不足-细胞培养“金标准”,周期长-痰涂片作抗酸染色：灵敏度差，检出率30%。特异性差，无法将结核杆菌和其他分枝杆菌区分开-血清学诊断：交叉反应，假阳性FQ-PCR诊断结核的关键点-痰液，肺及支气管灌洗液-肺结核-血液-播散性结核和各脏器的结核病-脑脊液-中枢神经系统结核病-宫颈拭子，尿道拭子-泌尿生殖系统结核病-胸水-结核性胸膜炎-腹水-结核性腹膜炎HCV的基因型/亚型 6个型，68个亚型-1a,b,c,d,e,f,g,h,i,j,k,l,m-2a,b,c,d,e,f,g,h,i,k,l,m-3a,b,c,d,e,f,g,h,i,k,-4a,c,d,e,f,g,h,k,l,m,n,o,p,q,r,s,t-5a-6a,b,d,f,g,h,i,j,k,l,m,n中国亚型1b（66%），2a（14%），对抗病毒治疗应答不同，因此治疗方案不同。HCV的基因耐药突变特异基因靶向治疗（小分子抑制物）中靶点编码区的耐药-HCV蛋白酶（NS3-4A）-RNV酶（NS5b）HCV的基因型与药物治疗-现知欧美国家多数HCV-1型感染，而亚洲国家以2型为主，三型次之-三型感染临床症状较重，有引起严重肝病的倾向-1b型感染对干扰素治疗不敏感，效果差，2a型感染用干扰素治疗效果好。HCV RNA 定量的临床意义？TORCH感染特点-母婴传播的主要病原体-引起胎儿畸形新生儿缺陷的重要原因-自然状态下呈隐性感染-怀孕，多次输血，AIDS等易发生显性感染-可致多发性，全身性感染-只有风疹可获得长久的免疫力，可用疫苗预防TORCH相关病原体检测-弓形虫（TOX）-风疹病毒（RV）-人巨细胞病毒（HCMV）-单纯疱疹病毒（HSV-2）基因检测与预测医学 基因检测使预测医学称为可能。疾病分险基因，易感基因的检测，不同人群差异基因的检测，可以全面评估个体对相关疾病的患病风险，从而预测疾病的发生，早期干预，预防。结核杆菌与呼吸道病原体检测-结核杆菌（TB）-EB病毒（EBV）-肺炎衣原体（CP）-肺炎支原体（MP）