MSC检定规程模板2015版药典.doc

委托检验检验项目和规程检品名称： 委托单位名称（公章）： 委托单位地址： 联系人和联系电话： 日期：第5代细胞1 鉴别试验 1.1 细胞形态检定标准：在倒置显微镜下观察，细胞应贴壁生长，呈长梭形。1.2 STR图谱鉴别检定标准：应表达人的16个等位基因，为单一细胞来源。1.3流式细胞仪检测细胞表面标记物按照BD公司的人间充质干细胞分析试剂盒(BD货号562245)说明进行。检定标准：CD73、CD90、CD10595%；CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR2%。1.4种属间细胞污染检查（PCR法）检定标准：应为人源细胞，无种属间交叉污染。1.5染色体核型分析检定标准：参考正常中国人体细胞的G显带带型标准，染色体数量应为46 XX或者46 XY，染色体结构应无缺失、重复、倒位、易位。2 细菌、真菌检查取细胞培养上清液样品, 参照中华人民共和国药典2015年版无菌检查法（通则1101）进行检查，应为阴性。3 分支杆菌检查取至少107个活细胞样品用培养上清制备细胞裂解物, 参照中华人民共和国药典2015年版无菌检查法（通则1101）进行检查，应为阴性。4 支原体检查4.1培养法取细胞培养上清液样品, 参照中华人民共和国药典2015年版（通则3301）进行检查，应为阴性。4.2 DNA荧光染色取细胞培养上清液样品, 参照中华人民共和国药典2015年版（通则3301）进行检查，应为阴性。5细胞内、外病毒因子检查5.1细胞形态观察及血吸附试验细胞接种于细胞培养瓶中，参照中华人民共和国药典2015年版第三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程进行，细胞持续培养2周逐日镜检，细胞形态正常，无病变，血吸附试验阴性。5.2体外不同指示细胞接种培养法检测病毒因子细胞接种于细胞培养瓶中，按照体外不同指示细胞接种培养法（中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程）进行。细胞形态正常，血吸附试验阴性，血凝试验阴性。5.3动物体内接种法 5.3.1乳鼠脑内及腹腔接种取细胞悬液注射于出生24小时内的乳鼠腹腔和脑内，按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，21天后乳鼠应至少有80%健存。5.3.2小鼠脑内及腹腔接种取细胞悬液注射于小鼠腹腔和脑内，按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，21天后小鼠应至少有80%健存。5.3.3豚鼠腹腔接种取细胞悬液注射于豚鼠腹腔，按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，42天后豚鼠应健存，解剖无结核病变。5.4鸡胚接种检查取细胞悬液注射于57日鸡胚卵黄囊，按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应至少80%存活。取细胞悬液注射于911日龄鸡胚尿囊腔，按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应至少80%存活，尿囊液血凝试验应为阴性。5.5 特殊人源病毒检查5.5.1 HIV检查按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。5.5.2 HBV检查按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。5.5.3 HCV检查按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。5.5.4 HCMV检查按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。5.5.5 EBV检查按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。5.5.6 HPV检查按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。5.5.7 HHV检查按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。5.6牛源病毒检查按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。5.7 猪细小病毒检查按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。5.8逆转录病毒检查参照中国药典2015版三部附录 逆转录酶活性检查法，应为阴性。6 免疫学反应检测6.1淋巴细胞增殖抑制试验按照淋巴细胞增殖抑制试验法检测，应具有抑制淋巴细胞增殖的能力。6.2 特定淋巴细胞亚群检测按照特定淋巴细胞亚群检测法检测淋巴细胞Th1Th17增殖抑制率和Treg增殖促进率。6.3淋巴细胞分泌TNF-抑制试验按照淋巴细胞分泌TNF-抑制试验法检测，应具有抑制淋巴细胞分泌TNF-能力。7 诱导分化能力检查7.1 成骨分化细胞在体外成骨诱导培养后，茜素红S染色分析成骨细胞分化能力。7.2 成脂分化细胞在体外成脂诱导培养后，油红O染色检测细胞内红色脂肪滴。8细胞活性检测8.1 细胞数和细胞存活率血细胞计数板对细胞计数，台盼蓝染色法检测细胞平均存活率应不低于90%8.2细胞生长曲线用细胞计数方法绘制细胞生长曲线来判断细胞活力。8.3细胞周期测定用流式细胞术进行细胞周期测定。9成瘤性检测9.1裸鼠体内接种试验按照中国药典2015版三