蚕豆左旋多巴(L-DOPA)含量的研究-硕士论文

分类号：$ 5 5 1 4 密级： 单位代码：10 3 8 9 学号：1 0 7 0 2 0 8 福建农林大学硕士学位论文 蚕豆左旋多巴( L - D O P A ) 含量的研究 学科门类：农学 一级学科名称：作物学 二级学科名称：作物遗传育种 研究方向：作物品质遗传育种 研究生：曹奕鸯 指导教师：郑金贵教授 郑开斌研究员 完成时间：二0 0 年四月 C l a s s i f i c a t i o nN o ：S 5 5 1 4 C o n f i d e n t i a l i t y ： U n i v e r s i t yC o d e ：1 0 3 8 9 S m d e n tN o ：1 0 7 0 2 0 8 T h e s i sf o rM a s t e rD e g r e eo f F u j i a nA g r i c u l t u r ea n d F o r e s t r yU n i v e r s i t y S t u d yo nL D O P A c o n t e n to fv i c i af a b aL D i s c i p l i n eC a t e g o r y ：A g r o n o m y P r i m a r yS u b je c t ：C r o pS c i e n c e S e c o n d a r yS u b j e c t ：C r o pG e n e t i ca n dB r e e d i n g R e s e a r c hF i e l d ：C r o pQ u a l i t yG e n e t i ca n dB r e e d i n g P o s t g r a d u a t eN a m e ：C a oY i y a n g I n s t r u c t o r ：Z h e n gJ i n g u i ，P r o f e s s o r Z h e n gK a i b i n ，R e s e a r c hA s s o c i a t e S u b m i t t e dT i m e ：A p r i l ，2 010 独创性声明 本人声明，所呈交的学位( 毕业) 论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位( 毕业) 论文作者亲笔签名： 论文使用授权的说明 日期：加易名f 么 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位( 毕业) 论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。 学位( 毕业) 论文作者亲笔签名：善 指导教师亲笔签名： 日期：砒亿 日期：加触2 ， 福建农林大学硕士学位论文 目录 摘要1 A b s t r a c t Oo o 2 前言4日U 舌” 第一章文献综述5 1 1 L D O P A 研究进展5 1 1 I L D O P A 的性质和分子结构5 1 1 2 L D O P A 的生理功能5 1 1 3 L - D O P A 的合成7 1 1 4 L D O P A 在植物体内的分布1 0 1 1 5 L - D O P A 的调控1 2 1 1 6 L D O P A 分析方法研究1 2 1 2 本论文的研究内容及意义1 3 第二章L - D O P A 分析方法的建立1 4 2 1 材料与方法1 4 2 1 1 供试材料8o 1 4 2 1 2 方法1 4 2 2 结果与分析1 5 2 2 I H P L C 分析条件的确立1 5 2 2 2 H P L C 分析方法的验证1 7 2 3 结论与讨论1 9 第三章蚕豆籽粒和芽苗L - D O P A 含量的影响因素研究2 0 3 1 材料与方法2 0 3 1 1 供试材料2 0 3 1 2 方法2 0 3 2 结果与分析2 3 3 2 1 蚕豆不同品种L D O P A 含量的差异研究2 3 3 2 2 不同生长阶段蚕豆芽苗L - D O P A 含量的差异研究2 6 3 2 3 蚕豆苗不同部位L - D O P A 含量的差异研究3 0 3 2 4 - _ - - 种药剂浸种处理对蚕豆苗L - D O P A 含量的影响3 1 3 3 结论与讨论3 3 第四章蚕豆花L - D O P A 含量的影响因素研究3 4 4 1 材料与方法3 4 4 1 1 供试材料3 4 4 1 2 方法3 4 4 2 结果与分析3 5 4 2 1 不同干燥方式处理蚕豆花L D O P A 含量的差异研究3 5 4 2 2 蚕豆同一花序不同小花L D O P A 含量差异研究3 6 4 2 3 不同开放程度蚕豆花L - D O P A 含量的差异研究3 7 4 2 4 不同品种蚕豆花L - D O P A 含量差异研究3 7 4 3 结论与讨论4 2 参考文献4 3 福建农林大学硕士学位论文 摘要 蚕豆是我国重要的食用豆类作物，具有较高的营养价值和药用价值。左旋多 巴( L D o P A ) 是治疗帕金森病的基础药物，还兼具有治疗弱视、促进骨折早期 愈合、治疗肝昏迷、心力衰竭等的作用。本研究建立了蚕豆L - D O P A 的检测体系， 研究了蚕豆品种间、部位间L D O P A 含量的差异以及不同生育时期、不同干燥方 式等对蚕豆L D O P A 含量的影响，结果如下： 1 建立了H P L C 法分析检测蚕豆中L D O P A 含量的检测体系：色谱柱 C A P C E L LP A KC R ，检测波长2 8 0 n m ，流动相比例为C H 3 C N ：l H C O O H = 5 ：9 5 ， 流速l m l m i n ，进样量1 0 9 L ，柱温3 5 。 2 分析检测了1 9 7 个品种蚕豆花、5 2 个品种蚕豆青籽粒和3 2 个品种蚕豆苗 L D O P A 的含量：5 2 个品种蚕豆青籽粒L - D O P A 含量变化范围为0 0 0 9 0 0 9 5 ( 8 7 9 , - - , 9 5 1 2 m g 1 0 0 9 ，D W ) ，L - D O P A 含量最高品种是C 1 1 8 ，含量为0 0 9 5 ( 9 5 1 2 m g 1 0 0 9 ) ，是对照品种陵西一寸含量( O 0 3 4 ) 的2 8 0 倍；1 9 7 个品种 蚕豆花L - D O P A 含量变化范围为3 9 8 7 一- , 1 0 1 8 l ( D W ) ，L D O P A 含量最高品 种是C 0 0 1 ，含量为1 0 1 8 1 ，是对照品种陵西一寸含量( 1 6 2 0 8 ) 的1 4 7 倍；3 2 个品种蚕豆苗L D O P A 含量变化范围为4 3 9 3 - 7 6 4 0 ( D w ) ，含量最高的品 种是C 2 0 5 ，含量为7 6 4 0 ，是对照品种陵西一寸含量( 5 5 3 4 ) 的1 3 8 倍。 3 研究了蚕豆发芽和出苗过程中L D O P A 含量的变化趋势：蚕豆种子在发芽过 程中，L - D O P A 含量均呈先降低( 0 d ) ，后升高( 3 d ，对照品种) 的趋势；蚕豆种 子在出苗过程中L - D O P A 含量均呈先升高( O d ) ，后降低( 3 d ，对照品种) 的趋势。 4 研究了不同部位蚕豆苗L - D O P A 含量差异，不同时期、不同部位蚕豆花 L D O P A 含量差异：结果表明不同部位中：蚕豆苗 蚕豆根 蚕豆籽粒；不同时 期中：花蕾期 开花期；同一花序不同小花L D O P A 含量之间无显著差异。 5 研究了干燥方式对蚕豆花L D O P A 含量的影响：4 0 烘干条件下，L D O P A 含量与冻干相比无显著差异。烘干温度越高，蚕豆花L D O P A 含量降低幅度越大。 1 0 0 烘干条件下，蚕豆花L D O P A 含量( 3 4 7 0 ) 仅为冻干处理( 7 4 1 9 ) 含 量的3 8 4 8 - 4 6 7 7 。 关键词：蚕豆：蚕豆苗；蚕豆花；左旋多巴；检测体系 福建农林大学硕士学位论文 A b s t r a c t B r o a db e a ni sam a i nc r o pi nC h i n a , w h i c hh a sh i 【g hn u t r i t i o na n dm e d i c i n a l v a l u e L D O P Ai sa ne s s e n t i a ld r u gt oc u r ep a r k i n s o n Sd i s e a s e I ta l s oh a ss o m e e f f e c t so nc u r i n ga m b l y o p i a ，f r a c t u r eh e a l i n g ，h e p a t i cc o m a , h e a r tf a i l u r e I nt h i ss t u d y ， w ee s t a b l i s h e dt h eb r o a db e a nL - D O P Ad e t e c t i o ns y s t e m T h ee f f e c t so ft h ef a c t o r s i n c l u d i n gd i f f e r e n tv a r i e t i e s ，p a r t s ，d e v e l o p m e n t a ls t a g e s ，d r y i n gm e t h o d so nb r o a d b e a nL D O P Ac o n t e n t sw e r es t u d i e d T h em a i nr e s u l t sw e r ea sf o l l o w s ： 1 E s t a b l i s h e dL D O P Ad e t e c t i o ns y s t e mb yH P L Cm e t h o d ：c 玳 m a t o 伊印1 1 i c c o l u m n ：C A P C E L LP A KC R ，U Vd e t e c t i o nw a v e l e n g t h ：2 8 0 n m ，m o b i l ep h a s e ： a c e t o n i t r i l e ：1 o H C O O H ( 5 ：9 5 ，啪，f l o wr a t e ：1 0 r r r L m i n ，i n j e c t i o nv o l u m e ：1 0 I _ t L , c o l u m nt e m p e r a t u r e ：3 5 2 T h ec o n t e n to fL D O P Ai n19 7d i f f e r e n tv a r i e t i e so fb r o a db e a nf l o w e r s ，5 2 d i f f e r e n tv a r i e t i e so fb r o a db e a ns e e d sa n d3 2d i f f e r e n tv a r i e t i e so fb r o a db e a n s e e d i n g sw e r ed e t e r m i n e d T h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h e c o n t e n to fL D O P Ai n d i f f e r e n tv a r i e t i e so f b r o a db e a ns e e d sr a n g e df r o mO 0 0 9 - - 。0 0 9 5 ( 8 7 9m e g l O O g t o9 5 1 2 m e g l O O g ，D W ) ，t h eh i g h e s tc o n t e n tv a r i e t yw a sC 11 8 ，w h o s eC o n t e n tw a s 0 0 9 5 ( 9 5 1 2 m e 9 1 0 0 9 ) ，2 8 0t i m e so f t h ec o n t r o ll i n gx iy ic u r l ( O 0 3 4 ) T h e c o n t e n to fL D O P Ai nd i f f e r e n tv a r i e t i e so fb r o a db e a nf l o w e r sr a n g e df r o m3 9 8 7 t o1 0 181 ( D W ) ，t h eh i g h e s tc o n t e n tv a r i e t yw a sC 0 0 1 ，w h o s ec o n t e n tw a s 1 0 1 8 1 ，1 4 7t i m e so f t h ec o n t r o ll i n gx iy ic u r l ( 1 6 2 0 8 ) T h ec o n t e n to f L D O P A i nd i f f e r e n tv a r i e t i e so f b r o a db e a ns e e d i n g sr a n g e df r o m4 3 9 3 t o7 6 4 0 ( D W ) ， t h eh i g h e s tc o n t e n tv a r i e t yw a sC 2 0 5 ，w h o s ec o n t e n tW a s7 6 4 0 ，1 38t i m e so ft h e c o n t r o ll i n gx iy ic a l l ( 5 5 3 4 ) 3 F i n d i n go u tt h ev a r i a t i o no ft h ec o n t e n to fL D O P Ad u r i n gt h eg e r m i n a t i o na n d s e e d l i n gg r o w t ho f t h r e eb r o a db e a nv a r i e t i e s T h ec o n t e n to fL - D O P Ad e c r e a s e da t f i r s t ( 0 d ) a n dt h e ni n c r e a s e d ( 3 d ，C K ) d u r i n gt h eg e r m i n a t i o n T h ec o n t e n to f L D O P Aw a si n c r e a s e d ( O d ) a tf i r s ta n dt h e nd e c r e a s e d ( 3 d ，C K ) d u r i n gt h es e e d l i n g g r o w t h 4 F i n d i n go u tt h ev a r i a t i o no ft h ec o n t e n to fL - D O P Ai nd i f f e r e n tp a r t so fb r o a d 2 福建农林大学硕士学位论文 b e a ns e e d l i n g sa n df l o w e r si nd i f f e r e n ts t a g e sa n dd i f f e r e n tp a r t s T h er e s u l t ss h o w e d t h a tt h ec o n t e n to fL - D O P Ai nd i f f e r e n tp a r t so f s e e d l i n g sr a n k e df r o mh i g l lt ol o w w a sa sf o l l o w s ：b r o a db e a ns e e d l i n g s r o o t s e e d F o rf l o w e r st h ec o n t e n to f L D O P Ai nb u ds t a g eW a sh i g h e rt h a nf l o w e r i n gs t a g ea n dW a sn os i g n i f i c a n t d i f f e r e n c ei nf l o w e r so fd i f f e r e n tp a r t 5 F i n d i n go u tt h ev a r i a t i o no ft h ec o n t e n to fL - D O P Ai nd i f f e r e n td r y i n g m e t h o d so fb r o a db e a nf l o w e r s T h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ec o n t e n to fL D O P AW a s n os i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nd r y i n ga t4 0 。Ca n df r e e z e - d r i e d A st h et e m p e r a t u r e i n c r e a s e s ，t h eh i g h e rt e m p e r a t u r et h el o w e rL D O P Ac o n t e n ta c h e i v e d A tt h e t e m p e r a t u r eo f10 0 ( 2 ，t h eL - D O P Ac o n t e n t ( 3 4 7 0 ) w a so n l y3 8 4 8 - - 。4 6 7 7 o f t h ec o n t r o l ( 7 419 ) K e yw o r d s ： B r o a db e a n ；B r o a db e a n s e e d l i n g ； B r o a db e a nf l o w e r ；L D O P A ； D e t e c t i o ns y s t e m 3 福建农林大学硕士学位论文 前言 蚕豆( V i e i af a b aL ) 又名胡豆、佛豆、罗汉豆等，是一年生( 春播) 或越年生 ( 秋播) 的草本植物，是豆科( L e g u m i n o s a e ) ，蝶形花亚科( p a p i l i o n o i d e a e ) ，蚕 豆属( V i c i aL ) 下唯一的栽培种【l 】。 。 据F A O 生产年鉴统计，蚕豆是目前世界上第七大食用豆类作物【2 】，2 0 0 5 年 世界干蚕豆种植面积为2 6 7 7 4 x 1 0 4 l 1 1 2 ，总产量为4 3 4 2 3 x 1 0 4 t ，主要分布中国、 埃塞俄比亚、澳大利亚、埃及、摩洛哥、法国等。中国干蚕豆种植面积为 1 0 5 0 x 1 0 4 h m 2 ，产量约1 8 0 O x l 0 4 t 。在世界蚕豆生产中所占的比重分另I 上为3 9 2 2 和4 1 4 5 。蚕豆按生态类型分为秋蚕豆和春蚕豆，主要分布在云南、四川、湖 北等秋播区( 约占全国蚕豆种植面积的9 0 ) 和甘肃、青海、宁夏等春播区( 占 全国蚕豆种植面积的1 0 ) 【3 】。 蚕豆具有较高的营养价值，主要成分是淀粉，其含量高达4 5 - 4 7 。蚕豆蛋 白质含量高达2 5 - 3 0 ，在豆类中仅次于大豆，居第二位，显著高于其它植物蛋 白源。并且，其氨基酸组成也接近于人体和动物所需要的理想比例，其中，赖氨 酸含量比谷类高出三倍。蚕豆中微量元素含量较高，尤其是磷、镁、硒的含量远 远高于青豆、菜豆、豇豆和扁豆。蚕豆的维生素含量也较高，成熟蚕豆中B 族维 生素含量是其它豆类无法比拟的，而未成熟蚕豆则是维生素A 和维生素C 的上等 来源【4 5 】。蚕豆还具有较高的药用价值，除根以外，蚕豆全身都可入药。豆：健 脾利湿，主治脚气水肿。花：凉血止血，止带降压，主治咯血，吐血，便血，白 带，高血压病。豆荚：敛疮，主治天疱疮，脓疱疮，烧烫伤。梗：止血止泻，主 治各种内出血，腹泻。叶：解毒，主治蛇咬伤 6 7 1 。 蚕豆全身都是宝，蚕豆果实含有丰富的蛋白质、淀粉，普遍当作粮食和加工 成副食品，鲜嫩豆粒可作蔬菜上桌，其荚壳、茎、叶均可作饲料、绿肥或燃料， 根系富集根瘤菌，是培肥地力的优质肥料。 1 9 1 3 年G u g g e n h e i m f 8 】第一次从蚕豆中分离出左旋多巴，同时测得蚕豆荚壳中 左旋多巴含量为0 2 5 。1 9 6 1 年，B i r k m a y e r 等【9 1 发现小剂量左旋多巴对帕金森病 有治疗效应，使得吃蚕豆替代性治疗帕金森病成为可能。 4 福建农林大学硕士学位论文 第一章文献综述 1 1L D O P A 研究进展 1 1 1L D O P A 的性质和分子结构 左旋多巴英文名称L e v o d o p a 另U 名为L D O P A ，它的化学名称为【广3 ，4 二羟基 苯丙氨酸，也即L 广3 ，4 - d i h y d r o x y p h e n y l a l a n i n e 。 L - D O P A 的分子式为C 9 H l l N 0 4 ，分子量为1 9 7 1 9 ，白色或类白色的结晶性粉 末，无臭，无味。易溶于稀酸，微溶于水，不溶乙醇、三氯甲烷或乙醚。其结构 式为【1 ： H 0 H 0 0 H 1 1 2L D O P A 的生理功能 1 1 2 1 治疗帕金森病 帕金森氏病( P a r k i n s o n Sd i s e a s e ) 叉称震颤麻痹症，是中、老年人群常见的中 枢神经系统变性疾病之一，临床上以运动障碍、震颤和肌肉强直为最突出症状 坦】。 一般在5 0 6 5 岁开始发病，发病率随年龄增长而逐渐增加，6 0 岁发病率约为1 o ， 7 0 岁发病率达3 - 5 0 ，我国目前大概有1 7 0 多万人患有这种疾病3 1 。 1 9 6 0 年E h r i n g e r 首次发现P D ( 帕金森病) 患者纹状体内D A ( 多巴胺) 耗竭， 当患者黑质多巴胺能神经元减少5 0 以上，D A 浓度减少8 0 则出现临床症状【1 4 1 。 1 9 6 1 年B i r k m a y e r 、H o m y k i e w i c z 和B a r b e a u l 9 1 5 1 报道小剂量L D o P A 对P D 有治疗效 应0 5 , 16 】，1 9 6 7 年C o t z i a s 等的研究结果表明口服大剂量L D O P A ( 4 8 9 d ) 的疗 效更为显著，因此6 0 年代起确立了L D O P A 替代治疗的基本原则。随后研究发现 L D O P A 联合多巴脱羧酶抑制剂能减少外周副反应、提高疗效，使L D O P A 在 7 0 年代中期成为治疗帕金森病的金标准。 自1 9 7 3 年美多芭( 左旋多巴与脱羧酶抑制剂苄丝肼) 经F D A 批准上市，至今 已3 7 年。依2 0 0 9 年中华医学会神经病学分会帕金森病及运动障碍学组公布的中国 帕金森病治疗指南( 第二版) 中的帕金森病早期治疗策略( 见图1 ) B 9 ，可明显看 出虽然帕金森病已有新药D R 激动剂( 多巴胺受体激动剂) 、M A O B 抑制剂( 单 胺氧化酶B 型抑制剂) 或加用维生素E 、金刚烷胺和( 或) 苯海索，但不管是有 5 福建农林大学硕士学位论文 认知障碍还是无认知障碍的患者，均需复方左旋多巴( 苄丝肼左旋多巴、卡比多 巴左旋多巴) 或加儿茶酚氧位甲基转移酶( C O M T ) 抑制剂进行治疗。 翻l 早期P D 的治疗镶酶 1 1 2 2 治疗弱视 左旋多巴是多巴胺的一种前体，能穿过血脑屏障后再转化为多巴胺。多巴胺 是中枢神经系统重要的神经递质。研究表明：视觉的很多方面受到多巴胺的影响， 包括视觉敏感度、色觉、视力、空间信号等【2 0 1 。 1 9 9 0 年G o t t l o b 掣2 1 1 首次将单次剂量左旋多巴卡比多巴用于弱视，发现服药 后视力、对比敏感度、注视暗点均有所好转。1 9 9 5 年L e g u i r e 等f 2 2 】应用左旋多巴 联合卡比多巴治疗1 5 例6 1 5 岁儿童弱视，并予部分遮盖( 3 小时日) 治疗，共计 治疗7 周。结果表明在治疗期间平均视力增加2 行；视力改善与年龄及治疗前视力 状态无关；斜视性弱视和屈光参差性弱视眼的视力改善程度基本一致。 诸力伟等【2 3 1 利用思利巴( 主要成分是左旋多巴) 联合综合疗法治疗弱视患 6 福建农林大学硕士学位论文 ) L 4 6 例，结果表明服药3 个月后轻度弱视患者的矫正视力均提高到O 8 以上。中度 弱视患者中3 例矫正视力达到O 8 以上，8 例矫正视力达到O 6 以上，2 例矫正视力勉 强提高1 行。重度弱视患者只有1 例矫正视力勉强提高了1 行。视力进步者，即治 疗有效者共计3 6 例，占7 8 3 。 吴小影等对3 6 例( 6 3 眼) 4 5 1 4 岁经遮盖治疗未愈，视力稳定6 月无变化的 患儿予以左旋多巴联合卡比多巴治疗。结果表明左旋多巴联合卡比多巴能有效提 高难治性弱视患儿视力，视力提高维持时间至少6 周，融合、立体视觉及黄斑光 敏感度保持稳定。 刘岚等【2 5 1 应用左旋多巴联合卡比多巴治疗单眼弱视儿童8 0 例，弱视程度轻 度3 例( 3 7 5 ) ，中度4 9 例( 6 1 2 5 ) ，重度2 8 例( 3 5 ) 。结果显示用左旋多巴联合 卡比多巴治疗后的弱视眼其P V E P ( 图形视觉诱发电位) 潜时显著缩短，波幅值 明显上升，客观表明左旋多巴联合卡比多巴对弱视眼的视功能有改善作用。 1 1 2 3 促进骨折早期愈合 汤文辉等 2 6 】通过对4 6 8 例不同部位和类型的骨折患者分别给予伤科接骨片、 左旋多巴、左旋多巴合用伤科接骨片治疗。结果表明左旋多巴能促进骨折早期骨 痂生长，促进骨折愈合，与伤科接骨片联用有协同作用。 1 1 2 4 治疗肝昏迷 邬晓婷等【2 7 】通过对4 1 例肝性脑病( 肝昏迷) 患者的治疗，结果表明左旋多巴治 疗肝性脑病疗效可靠，同时建议治疗肝性脑病应在消除诱因，减少肠内毒物生成 吸收的基础上选择左旋多巴及降氨药物。 1 1 2 5 治疗心力衰竭 蔡兆斌等【2 8 1 通过用O 2 5 0 7 5 9 左旋多巴治疗充血性心力衰竭4 2 例，一个疗程 ( 4 周) 后，临床显效率为6 2 ，总有效率为9 0 。因此左旋多巴治疗充血性心 力衰竭有满意疗效。 1 1 3L D O P A 的合成 1 1 3 1L D O P A 在植物体内的合成途径 L D O P A 的合成首先从光合作用产生的葡萄糖开始，葡萄糖通过糖酵解途径 产生的磷酸烯醇式丙酮酸( P E P ) 、通过戊糖磷酸途径产生赤藓糖- 4 磷酸 7 福建农林大学硕士学位论文 ( E r y t h r o s e 4 P ) ，这两个产物再经莽草酸途径形成分支酸( C h o r i s m a t e ) ，经分支 酸合成酪氨酸( T y r ) ，酪氨酸经酪氨酸羟化酶作用形成左旋多巴( L - D O P A ) 。 同磊鬲面函再丽订r _ 两丽弭 - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - - _ _ _ _ - _ _ _ _ _ - _ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ - - _ 一_ _ _ _ _ _ G I 骼喜P ，伽磊龛e 6p 漩，鼬糯_ ，蛔，p 女_ 一J - ：1 阳删S y s t e m so n l y 1 N O p N D P H) l 8 _ P 均捌I I - 6 删帕哪咖如日期喇豳l 口呐 痹柏秘1 - 瓣 上 捌 l l l I 之，辫4 e IShiktm。一ate P a l h w l 唆_ _ J P 妒譬捌瞻 酬舭上 + 3 - d b o x y a r a l ：a o k 咖嘲7 4 俞T C A 恤p t u I o n 嘲 ，、 m 岬 芝夕 、_一， S h 棚m a t e 上 C m r m m a t e J r 删l ，。哟糖删 匦亟巫夏卜 u 翩眦 匝墅幽亟塑圃 1 1 3 2 从植物中提取 植物中的天然D O P A 都是L 型的。1 9 1 3 年G u g g e n h e i m 第一次从蚕豆中分离 出天然L D O P A ，1 9 4 9 年从野生植物藜豆中提取出L D O P A t 3 叫。国内于1 9 7 2 年利 用3 0 K , 醇和0 1 醋酸从藜豆种子中提取L D O P A 获得成功，收率1 5 ( 3 l 】。1 9 9 0 年广西药物研究所张晓等利用0 2 m o l L 盐酸提取，采用离子交换树脂法，从猫 豆中提取L D O P A 得率提高到3 5 2 【3 2 1 。中国药科大学杨星吴等采用水提取，活 性炭分离纯化的工艺，从猫豆中提取L D O P A 得率提高到4 O 【3 3 】。 1 1 3 3 组培法生产 1 9 7 6 年英国B r m n 等【3 卅首次报道油麻藤组织培养可以产生L - D O P A ，含量可达 8 孓 p 酬 蚓 |l一 福建农林大学硕士学位论文 1 ( W V ) 。W i t h e r s 等【3 5 3 6 1 研究表明，经过黎豆( M u e u n ap r u r i e n sL ，) 细胞悬浮 培养，可产生0 2 - 2 ( D W ) 的L - D O P A ，经过8 天的培养，产量达0 0 3 0 4 9 L 。 N i e s k o 等【3 7 1 研究表明，在2 的蔗糖和1 0 0 0 1 u x 的光照条件下，黎豆( M u c 吼a p r u r i e n sL ) 细胞悬浮液可产生高达6 ( D w ) 的L - D O P A ，经过6 天的培养后， 产量可高达1 2g L 。 1 9 8 9 年国内高山林掣3 8 1 选用油麻藤属三种植物进行组织培养，诱发愈伤组 织，结果表明表明，常春油麻藤愈伤组织中L D O P A 含量高达1 4 1 0 ，宁油麻藤 愈伤组织中为1 0 0 0 ，猫豆愈伤组织中L - D O P A 含量最低，为4 5 8 。 1 1 3 4 酶法合成 彭珍荣等【3 9 】利用从根系土壤中分离，筛选获得的高酪氨酸酶活性的假单胞 菌菌株。加入从胱氨酸生产废液中提取的L 酪氨酸为底物，催化合成L D O P A ， 试验的结果表明L - 酪氨酸加入的量8 8 5 m g m l ，分5 次或6 次加入，其转化率可达 9 3 以上，并且L D O P A 的产量可达7 5 m g m l 以k 。 H i d e y u k i S 等 4 0 对E r w i n i ah e r b i c o l aA J 2 9 8 2 的T P L ( 酪氨酸酚解酶) 基因克隆 到E c o l i 中进行表达，再将培养的细胞转入多巴合成体系中，反应3 0 h 后，反应 液中多巴含量为2 0 7 m g m l 。 李华钟等【4 1 l 以P C R 技术扩增得到弗氏柠檬酸细菌A T C C 8 0 9 0 d 尸酪氨酸酚裂 解酶的结构基因T P L ，定向连接到质粒p U C l l 81 - 得到重组质粒p T P L ，并转入E c o l i J M l 0 9 d O ，并以重组菌细胞作为酶源将底物转化成L - D O P A ，产量为1 5 3 6 9 T 4 2 A 3 1 Lo 李伟平删等以P C R 技术扩增得到弗氏柠檬酸细菌A T C C 8 0 9 0 酪氨酸酚裂 解酶的结构基N T P L ，与表达载体p Q E 3 0 连接后构建质粒p Q T P L ，并转化到E c o l i M 1 5 中进行表达，在以邻苯二酚、丙酮酸钠和氨为底物，加入0 2 m m o l L 的I P T G ( 异 丙基p D 硫代半乳糖苷) 、1 8 。C 表达1 4 h 的诱导条件下，重组的大肠杆菌合成 L D O P A 产量高达5 5 9 L 。 1 1 3 5 化学合成 美国孟山都公司在2 0 世纪7 0 年代中期就成功应用不对称氢化反应合成 L - D O P A ，使用的催化剂为R h D L 蝴P + ，n ( 底物) ：n ( 催化剂) = 2 0 0 0 0 ：1 ，得至U 9 4 单一对映体【4 5 删。 9 福建农林大学硕士学位论文 一1 o _ _ _ o _ _ _ _ _ _ _ _ - _ 。_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - - _ _ _ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ o _ _ _ _ _ _ 一 ： 孙晓莉等【4 7 1 以香兰素或胡椒醛为原料采用不对称催化合成法合成L - D O P A ， 总产率约5 0 ，e e 值( 对映体过量) 为9 0 9 3 。 王伟文掣4 8 1 以愈创木酚为起始原料，经愈创木酚甲基化、邻二甲氧基苯氯 甲基化等八步反应得到多巴。 王熙卿【l o 】以左旋酪氨酸为原料，经酰化、氧化二步反应的合成路线合成 L D O P A ，二步反应，总收率达5 1 3 。 1 1 4L D O P A 在植物体内的分布 巫世红等【4 9 】测定了生长初期( 豆荚未饱满且为绿色) 、生长中期( 豆荚饱 满且为绿色) 、生长末期( 豆荚饱满已变黄) 、成熟期( 豆荚饱满已变黑) 、干 枯期( 豆荚干枯已变黑) 的猫豆L D O P A 含量，结果表明干枯期采收的猫豆 L D O P A 含量最高( 6 5 5 ) ，是猫豆的最佳采收时期。 欧阳建光等【5 0 】测定了猫豆各部位不同生长期L D O P A 含量，结果表明：采收 期的猫豆植株中，种子、豆荚、根、茎、叶、花中均含有L D O P A 。其中以种子 中含量最高，平均达6 2 6 ，其次是花为0 9 0 4 ，叶含量最低，含量仅为O 0 1 ， 另外豆荚含量为0 3 8 3 ，根含量0 2 0 7 ，茎0 0 3 9 。不同采收期的种子中L D O P A 在荚果成熟并开始干燥时含量最高，其最高含量为5 6 2 ( 白花) 、5 4 3 ( 紫花) ， 白花猫豆L D O P A 含量比紫花高。猫豆荚、茎、叶在幼嫩时期L D O P A 含量较高， 然而组织在生长、衰老过程中L D O P A 含量快速下降。花中L D O P A 贝, I J 在花蕾生 长至盛花期间快速积累，在花衰老过程中逐渐减少。 一矿 蒋伟哲等【5 3 1 对广西宜州市、百色市、北海市、东兰县、田东县五个产地的 猫豆的L D O P A 含量测定，结果表明：猫豆中L D O P A 的含量为5 6 2 - 6 8 3 ，去 皮后L D O P A 在种肉中的含量高达6 9 9 - 9 3 5 ，在种皮中的含量仅为0 2 9 O 4 3 。 何翠屏等通过分析狗爪_ O _ ( S t i z o l o b i u mc o c h i n c h i n e s i s ) 内L D O P A 含量，结 果表明，野生材料种子内L D O P A 含量略高于栽培材料，含量分别为5 1 3 和 4 4 9 ，荚果中含量分别为3 3 8 和3 3 0 ，藤蔓中含量微量，叶片中未检出。而 赵永成【5 2 1 用高效液相色谱法测得狗爪豆种子中L D O P A 含量为3 6 1 ，狗爪豆茎 中L D O P A 含量为0 5 9 ，豆荚中为0 0 9 4 。 蔡军等【蚓对产自云南、四川、福建、海南、广东、江西的9 种黎豆属植物的 1 0 福建农林大学硕士学位论文 , l e 。 L - D O P A 的测定，结果表明，各品种种子均含有L - D O P A ，其种子的L D O P A 含量 在1 9 6 - 9 1 0 。白花油麻藤L D O P A 含量为9 1 0 ，常绿黎豆的L D O P A 含量在 4 5 8 4 9 6 ，狗爪豆的L - D O P A 含量在3 1 9 - - 4 6 2 。 R o c c o 等酬对蚕豆的分析表明，在蚕豆生长的不同阶段，蚕豆中L D O P A 含 量不同( 见表1 ) ，其中以结果期含量最高，L - D O P A 含量达0 5 6 。在不同的器 官中，L - D O P A 含量不同。在开花前，植株L o D O P A 占全株重的0 2 4 ，在叶片中 L - D O P A 含量占叶重的0 3 6 ，茎中L D O P A 含量占茎重的0 1 7 ，根中L D O P A 含量占根重的0 3 5 ，绿荚中L - D O P A 含量占荚重的0 6 9 。 表l 蚕豆生长的不同阶段L D O P A 含量的变化 垫堇丕錾 绝堇：望重( 立生：里Q ! 垒盒量( 里虫垄焦堡主盟亘坌鱼量丝 0 0 3 ( s e e d ) 0 2 2 O 0 7 5 2 1 0 51 6O 3 2 3 34 2 1 5 2O 3 6 4 0 8 92 8 5O 3 2 5 4 2 76 1 OO 2 2 6 1 ( F l o w e r i n g ) 3 4 5 7 0O 16 8 9 ( F r u i t i n g ) 6 7 23 8 0O 5 6 D a x e n b i c h l e r 等【5 6 】曾从1 3 5 科4 4 7 属7 2 4 种植物种子中筛选高L - D O P A 含量的 资源，结果表明，唯有黎豆属植物的L D O P A 含量在0 5 以上。蚕豆中L D O P A 含量不高于0 1 。 C h e r t 掣5 7 】研究表明蚕豆皮 ( b r o a db e a ns k i n ) L - D O P A 含量为0 0 1 2 (