氨中毒实验报告

1 / 21 氨中毒实验报告 氨中毒在肝性脑病发病中的作用 摘要：通过复制家兔急性肝功能不全模型，用十二指肠灌注复方氯化铵法，来探究氨中毒对家兔脑功能影响；通过用耳缘静脉注射谷氨酸钠法治疗肝性脑病，来探讨其治疗机制。全班分为三大组，其中第组为假手术组，第 3,4组为轻症状治疗组，第 5,6,7 组为症状明显抢救组。 Abstract: through the replication of rabbit acute liver insufficiency model, with duodenal perfusion compound chloride method, to explore ammonia poisoning; the effect of rabbit brain function Through using ear rim intravenous glutamate treatments for hepatic encephalopathy, to discuss the treatment mechanism. The class is divided into three groups, the first for JiaShouShu group, groups for the first 3 groups in treatment group, the first light symptoms 5, 6, 7 group for symptoms first-aid group. 关键词：氨中毒；肝性脑病；肝功能不全 Keywords: ammonia poisoning; Hepatic encephalopathy; Hepatic insufficiency 引言和背景：肝性脑病是继发于严重肝脏疾病的一系列精神神经综合症。正常情况下，血氨的来源与清除保持2 / 21 动态平衡，而氨在肝中合成尿素是维持此平衡的关键。病理情况下当肝功能严重受损时，或慢性肝硬化等疾病使肠壁吸收肠道内生成的氨过多，或经侧枝循环进入体循环，均可导致血氨升高。增高的血氨可通过血脑屏障进入脑组织 ，通过干扰脑组织的能量代谢，使脑内神经递质发生改变等作用，引起脑的功能障碍，从而出现相应的症状和体征谷氨酸可与血中过多的氨结合而成为无毒的谷氨酰胺，由尿排出，进而降低血氨。谷氨酸还可参与脑细胞的代谢，改善中枢神经系统的功能。肠道给予醋酸溶液可使肠道 PH 降低，减少氨的重吸收。【 1】 材料和方法： 1.实验材料 对象：家兔； 实验试剂：氨基甲酸乙酯，复方氯化铵溶液，复方谷氨酸钠溶液，醋酸，生理盐水。 实验仪器： 10ml 注射器和 50ml 注射器及针头，手术剪，镊子，止血钳，兔手术 台，棉线若干，婴儿秤，缝针，导管。 2.实验方法 实验分组 本组实验为症状明显抢救组，出现角弓反张开始抢救。 麻醉 家兔称重，按 5ml/kg 剂量由耳缘静脉注射10ml 氨基甲酸乙酯。待家兔麻醉后背位固定于兔手术台上。 急性肝功能不全动物模型复制 从胸骨剑突下沿腹正中线行长 8cm 的切口，打开腹腔；暴露肝脏，向下压肝脏，3 / 21 剪断肝与横膈之间的镰状韧带，再将肝叶上翻，钝性分离肝胃韧带， 使肝叶游离，辨明肝脏各叶，用粗棉线绕肝左外叶、左中叶、右中叶和方形叶根部一周，结扎肝脏。 找出十二指肠，找其上壁血管较少的一处做一环形缝合，在环形中间剪一个小口，沿小肠方向插入导管并向下推进 45cm，切口荷包缝合固定导管，用止血钳关闭腹腔切口。 试剂注射每隔 5min 向十二指肠插管中注入 25g/L 复方氯化铵溶液 5ml，观察并记录各项指标的变化，直至出现全身性抽搐、角弓反张为止，记录所用的复方氯化铵溶液的总量，并计算每公斤体重的用量。 治疗：自耳缘静脉缓慢注入 25g/L 复方谷氨酸钠溶液 20ml/kg，并按 5ml/kg 剂量向十二指肠注入 10g/L 醋酸，观察并记录治疗后症状有无缓解 。 结果： 本组结果，共注射了 35ml 复方氯化铵溶液，当注射到 20ml 时，家兔开始出现嘴角微抽，到 25ml 时，家兔嘴角抽搐明显，到 30ml 时，出现全身性的抽搐抖动，到 35ml 时，家兔全身性抽搐明显，并发生角弓反张现象。对其实施抢救，最终死亡。 班级结果统计 手术 实验类型 组数 4 / 21 前呼吸频率 第一 假手术组 组 第二组 第三 治疗组 组 第四组 第五组 抢救组 第六组 第七组 讨论：氨的毒性作用 降低 CNS 内 Na+-K+-ATP 酶的活力： NH3 与其他毒性代谢产物如硫醇、酚、短链脂肪酸等有协同毒性作用，能直接损害 BBB 及神经细胞膜上的 Na+-K+-ATP 酶活力。 BBB 酶活力降低时，则 BBB 酶屏障作用减弱，某些在正常情况下被该酶分解的毒性产物如 GA-BA，可以不受阻挡地进入 CNS，引起 HE。脑神经细胞和星形胶质细胞膜上的 Na+-K+-ATP 酶有 40 46 46 37 未记录 32 33 第一次给药呼吸频率 42 50 44 37 未记录 43 45 第二次给药呼吸频率 72 52 49 42 未记录 56 58 第三次给药呼吸频率 66 54 50 48 未记录 60 65 40min 后仍未发生 40min 后仍未发生 33min36s 15min 23min 25min 30min 40ml 50ml 40ml 30ml 23ml 35ml 35ml 5 / 21 未死亡 / / 未记录 / / / / 95ml 2ml 42ml 50ml / 抽搐痉挛发生时间 用药总量 药物体重比 死亡时间 复发谷氨酸钠用量 很高的活力，以维持 CNS 兴奋性传导离子梯度， NH3可通过与 K+竞争抑制 Na+-K+-ATP 酶活力，不仅可引起神经冲动传导障碍，且可引起星形胶质细胞水肿或脑水肿。 干扰 CNS 的能量代谢：正常情况下，葡萄糖通过 BBB进入 CNS 时，是依赖其酶系统逆浓度差转运至 CNS 内， BBB功能受损时，葡萄糖逆浓度差转运减少；此外，高 NH3 血症时， NH3 通过 -酮戊二酸 -谷氨酸 -谷氨酰胺途径代谢，消耗大量的 -酮戊二酸；以上分别影响 CNS 的能量供应及干扰其能量代谢。 干扰谷氨酸能神经传递：谷氨酸是中枢神经的兴奋性神经递质，也是脑中分布最广的一种递质。正常情况下，谷氨酸能突触的神经冲动传导，是通过谷氨酸 -谷氨酰胺循环来调节的。 NH3 由 BBB 进入 CNS 后，首先由星形细胞摄取，在其谷氨酰胺合成酶催化下，生成谷氨酰胺，后者一部分进6 / 21 入突触前神经元，另一部分则汇入脑脊液内。突触前神经元内的谷氨酰胺，在其谷氨酰胺酶作用下，生成谷氨酸，贮存于囊泡内并释放至突触间隙， 一部分与突触后神经元的谷氨酸受体结合，由此启动谷氨酸能的神经传递，另一部分则由星形细胞再摄取，重新开始另一轮谷氨酸 -谷氨酰胺循环。高氨血症时，星形细胞内的谷氨酸与 NH3 结合大量被消耗而减少，相应地谷氨酰胺生成明显增加；前突触神经元内谷氨酰胺，因谷氨酰胺酶活力受 NH3 的毒性作用而减弱，不能生成谷氨酸，从而阻断了正常的谷氨酸 -谷氨酰胺循环，干扰谷氨酸能的神经传递。近代研究还表明：细胞内谷氨酰含量过高时，还可引起细胞毒性脑水肿。 干扰神经的动作电位： NH3 可使神经元的氯离子驱出泵灭活，使神经元去极化， 抑制突触后兴奋性电位的形成以及抑制轴突的传导。 谷氨酸钠的作用分析 血氨增高以后，随血流到达脑组织的氨增多，氨与脑内 -酮戊二酸结合，生成谷氨酸及谷氨酰胺，使 -酮戊二酸消耗，而血脑屏障又阻碍了血中 -酮戊二酸进入脑组织，这样使脑内 -酮戊二酸减少，三羧酸循环发生障碍，脑组织得不到足够的能量供应而发生功能紊乱甚至昏迷。根据这个原理，应用谷氨酸钠治疗肝昏迷，它可以和氨结合成谷氨酰胺，以降低血氨，有一定疗效。 醋酸的作用分析 醋酸可降低血液 pH值，可以中和血液中呈碱性的氨 ,7 / 21 并有效阻止氨继 续通过血脑屏障进入脑内。 注意事项： 1剪镰状韧带要小心，勿伤及膈肌、肝脏及后方的下腔静脉。 2游离肝脏时，动作宜轻柔，以免损伤肝脏。结扎线应扎于肝叶根部，结扎要牢固。 3十二指肠插管不要插向胃的方向，插管结扎要牢固，避免药液外漏。 4做好抢救准备，谷氨酸钠溶液有刺激性，注射时避免漏出血管。 结论：复方氯化铵可使家兔大脑功能受影响 ,而肝可解氨中毒，醋酸灌肠佐以静脉注射谷氨酸钠对肝性脑病有明显的解毒作用。 参考文献 : 陆源，林国华，杨午鸣 .机 能学实验教程 .第二版 .北京：科学出版社， 浙江中医药大学实验报告 日期： 2016-11 地点：机能学实验室 15109 氨中毒在家兔肝性脑病发病机制中的作用观察 【摘要】 1.目的：复制家兔急性肝功能不全模型，用十二指肠灌注复方氯化铵法，观察氨中毒对家兔脑功能影响；用耳缘静脉注射谷氨酸钠法治疗肝性脑病，探讨其治疗机制。 2.方法：全班分为五大组，其中第一组为肝叶不结扎型，第二组为肝叶结扎，也做手术，但不注射氯化铵。第三组为发病后不治疗，其余小组为症状明显抢救 组。本小组8 / 21 做了第一组。 3.结果：复方氯化铵可使家兔大脑功能受影响 ,而肝可解氨中毒，复方谷氨酸钠也可缓解其作用。 4.结论：肝具有解毒作用，肝功能不全在肝性脑病的发生中占极大地作用。 【关键词】氨中毒 肝性脑病 复方谷氨酸钠 【 Abstract 】 1. Purpose: copy of acute liver not whole model, with duodenal perfusion compound ammonium chloride method, observation ammonia poisoning brain function of rabbit influence; with the ear margin intravenous sodium glutamate treatments for hepatic encephalopathy, discussed the mechanism of treatment. 2. Methods: the whole class is divided into five groups, among which the first group for model group, the second group for the treatment group, and the third for JiaShouShu group, the fourth group for symptoms first-aid group, to prevent the fifth group. 3. The result: compound ammonium chloride can make the rabbit affected by brain function, and liver for ammonia poisoning, compound sodium glutamate also can alleviate its role. 4. Conclusion: liver with detoxification role, liver function is all in the occurrence of hepatic encephalopathy up greatly 9 / 21 effect. 【 Key Words 】 ammonia poisoning hepatic encephalopathy compound glutamic acid sodium 1 实验材料 对象：家兔； 实验试剂：氨基甲酸乙酯，复方氯化铵溶液，复方谷氨酸钠溶液； 实验仪器： 10ml 注射器、 50ml 注射器及针头，手术剪，镊子、止血钳、兔手术台、棉线若干、婴儿秤、缝针、导管； 2 实验方法 实验分组 本组实验为第一小组 麻醉 家兔称重，按 5ml/kg 剂量由耳缘静脉注射氨基甲酸乙酯。待家兔麻醉后背位固定于兔手术台上。 急性肝功能不全动物模型复制 从胸骨剑突下沿腹正中线行长 8cm 的切口，打开腹腔；暴露肝脏，向下压肝脏，剪断肝与横膈之间的镰状韧带，使肝叶游离，辨明肝脏各叶，用粗棉线绕肝左外叶、左中叶、右中叶根部一周，不结扎肝脏。 找出十二指肠，找其上壁血管较少的一处做一环形缝合，在环形中间剪一个小口，沿小肠方向插入导管并向下推进 45cm，切口荷包缝合固定导管，用止血钳关闭腹腔切口。 实验观察 10 / 21 观察并记录兔一般 情况，呼吸，角膜反射、对刺激的反应等指标。然后试剂注射 前两次分别向十二指肠内注入 10ml 的复方氯化铵溶液，之后的注射量都为 5ml 每次注射间隔 5min，直至全身性抽搐、角弓反张为止，仔细观察并记录所用的复方氯化铵溶液。 治疗 按 20ml/kg 体重剂量自耳缘静脉缓慢注入 25g/L 复方谷氨酸钠溶液，并按 5ml/kg 体重剂量向十二指肠注入10g/L 醋酸进行治疗处理，观察症状有无缓解。 3 实验结果 从以上实验数据及现场实验，兔子出现全身紫绀现象，最后也没有出现全身抽搐现象。说明本实 验最后失败。主要原因可能为注入麻药后，兔子的代谢产物因全身肌肉活动的减缓而逐渐堆积，到最后堵塞了气管及血管，从而出现紫绀现象。 现从其他小组获得数据并对结果进行讨论 4 小组讨论 假手术的目的：假手术组与模型组的不同点是其肝叶健全，即肝功能健全。主要用于对比证明肝对氨有解毒作用，肝功能不全的家兔对氨的解毒作用明显低于肝功能健全的家兔，说明肝有解氨中毒的作用。 复方氯化铵溶液对肝性脑病的作用机理，肝大部分结扎在实验中的作用： 据氨中毒学说，正常情况下，血氨的来源于清除保11 / 21 持动态 平衡，而氨在肝中合成尿素是维持此平衡的关键。在结扎大部分肝的基础上灌注氯化铵导致血氨增高，增高的血氨可通过血脑屏障进入脑组织，通过干扰脑组织的能量代谢，使脑内神经递质发生改变，引起脑的功能障碍，出现震颤、抽搐、昏迷等类似肝性脑病症状。 肝大部分结扎术在实验性肝性脑病中的作用：采用家兔大部分肝结扎，是为了复制急性肝功能不全的动物模型，造成肝解毒功能急剧降低，在此基础上经十二指肠灌入复方氯化铵溶液，导致肠道中氨生成增多并吸收入血。 家兔呼吸频率和肌紧张的改变 家兔呼吸频率的改 变：由实验数据可以看出，给药后家兔的呼吸频率是加快的，可以猜测家兔呼吸频率的增加是由于氨中毒引起的。 随着实验的进行家兔的肌紧张加剧，以至于出现抽搐甚至角弓反张等表现。 说明：血氨浓度升高，干扰脑组织的能量代谢，主要是干扰葡萄糖的生物氮化过程，而脑组织随时都要依赖血液中的葡萄糖提供能量。氨与脑内的 -酮戊二酸结合，生成谷氨酸，影响糖代谢，使 ATP 产生不足，产生谷氨酰胺为抑制神经的递质，并使脑内兴奋性神经递质减少，并且氨对神经细胞膜也有抑制作用是神经细胞兴奋性异常，并干扰神经传导活动。其中乙酰胆碱有扩张血管减慢心率的作用，从12 / 21 而可见家兔呼吸频率加快的原因。而其中肌紧张加剧可能由于脑组织中氨大量增加使大量谷氨酸转化成谷氨酰胺使氨中毒早期生成 -氨基丁酸的底物 -谷氨酸减少，引起脑内抑制性递质 -氨基丁酸减少有关。 复方谷氨酸钠溶液的影响和作用机理： 注射复方谷氨酸钠溶液后可以缓解家兔氨中毒的症状，且治疗组的效果最好，作为预防则其效果不大。 作用机理：谷氨酸可与血中过多的氨结合成为无毒的谷酰胺，由尿排出，进而降低血氨。谷氨酸还可参与脑细胞的代谢，改善中枢神经系统的功能。 5 结论 结扎肝脏后，注射氯化铵溶液，使血氨升高而引起肝性脑病；肝脏对氨具有清除作用，所以不结扎肝脏不会发生氨中毒；谷氨酸钠可以治疗肝性脑病。 6 注意事项 肝脏手术时，动作宜轻柔，以免肝脏破裂出血。 剪断镰状韧带时，注意不要损伤肝脏与膈肌。 十二指肠插管方向要向空肠方向，并防止复方氯化铵溶液溶液溢出漏入腹腔。 氨中毒在肝性脑病发病中的作用 【摘要】 目的：复制家兔急性肝功能不全模型，用十二指13 / 21 肠灌注复方氯化铵法，观察氨中毒对家兔脑功 能影响；用耳缘静脉注射谷氨酸钠法治疗肝性脑病，探讨其治疗机制。了解降低肠道 pH 及注射复方谷氨酸钠是针对氨中毒的一项基本治疗措施。 方法：全班分为 7 大组，其中第一，二组为假手术组，其他组为模型组，第二，六，七组为症状明显抢救组，第一，三，四，五组为早期治疗组。 结果：结扎肝脏并注射复方氯化铵溶液，家兔出现肝性脑病，注射复方谷氨 酸钠可解氨毒，醋酸也具有缓解作用；不结扎肝脏则不出现肝性脑病。 结论：血氨升高容易引起肝性脑病，肝脏对氨具有解毒作用，肝功能不全在肝性脑病的发生中占极大地作用。复方谷氨酸钠可以治疗肝性脑病。 【关键词】氨中毒 肝性脑病复方氯化氨 复方谷氨酸钠 Abstract Objective: Copy rabbit model of acute hepatic dysfunction, duodenal perfusion with ammonium chloride compound, observation ammonia poisoning effect on brain function in rabbits; by ear vein injection of monosodium glutamate treatment of hepatic encephalopathy disease, to explore its therapeutic mechanism. Understand the lower intestinal 14 / 21 pH and injection of sodium glutamate compound for ammonia poisoning is a basic treatment. Methods: The class is divided into 7 major groups, the first and second group, sham operation group, model group, the other group, the second, sixth, seventh group symptoms rescue groups, the first, three, four, five group early treatment group. Results: ligation and injection of compound ammonium chloride solution, the liver, hepatic encephalopathy in rabbits injected with compound sodium glutamate can be toxic ammonia, acetic acid also has a relief role; did not undergo hepatic encephalopathy is not the liver. Conclusion: The elevated blood ammonia easily lead to hepatic encephalopathy, a liver detoxification of ammonia, hepatic dysfunction in the pathogenesis of hepatic encephalopathy significantly accounted for the role. Sodium glutamate compound can be treated with hepatic encephalopathy. Key wordsAmmonia poisoning Hepatic encephalopathy Ammonium chloride compound Compound 15 / 21 sodium glutamate 【 引言】 肝性脑病过去称肝性昏迷，是严重肝病引起的，以代谢紊乱为基础，中枢神经系统功能失调的综合征，其主要临床表现是意识障碍，行为失常和昏迷。肝性脑病的主要病因为肝硬化、重症病毒性和中毒性肝炎、长期的阻塞性黄疸、肝脓肿，以及门腔静脉分流术都可引 起肝功能衰竭和肝性脑病。肝性脑病多在原发病的基础上由某些诱因引起。 正常情况下，体内氨不断产生，又不断被清除，血氨浓度不超过 67 mol L。当肝衰时体内产氨过多，肝清除能力下降，都可破坏血氨的相对稳定，使其浓度增高。游离状态的氨能透过细胞膜 对中枢神经系统产生毒性，诱发肝性脑病。氨代谢紊乱引起的氨中毒是肝性脑病，特别是门体分流性脑病的重要发病机 制。 【材料和方法】 1 实验材料 对象：家兔； 实验试剂：氨基甲酸乙酯，复方氯化铵溶液，复方谷氨酸钠溶液； 实验仪器： 10ml 注射器、 50ml 注射器及针头，手术剪，镊子、止血钳、兔手术台、棉 线若干、婴儿秤、 缝针、导管； 2 实验方法 16 / 21 实验分组 本组实验为假手术组，早期治疗组 麻醉 家兔称 重，按 5ml/kg 剂量由耳缘静脉注射 氨基甲酸乙酯。待家兔麻醉后 背位固定于兔手术台上。 急性肝功能不全动物模型复制 从胸骨剑突下沿腹正中线行长 8cm 的切口，打开腹腔； 暴露肝脏，向下压肝脏，剪断肝与横膈之间的镰状韧带，再将肝叶上翻，钝性分离肝胃韧带，使肝叶完全游离，辨明肝脏各叶，用粗棉线绕肝左外叶、左中叶、 右中叶根部一周，不结扎肝脏。 找出十二指肠，找其上壁血管较少的一处做一环形缝合，在环形中间剪一个小口，沿小肠方向插入导 管并向下推进 45cm，切口荷 包缝合固定导管，用止血钳关闭腹腔切口。 试剂注射 每隔 5min 向十二指肠导管中注入 25g/L复方氯化铵溶液 5ml，动态观察并记 录各项指标的变化仔细观察并记录。直至出现呼吸急促，口角抽搐为止，记录所用的复方氯化铵溶液的总量，并计算每公斤体重的用量。 治疗 按 20ml/kg 体重剂量自耳缘静脉缓慢注入25g/L 复方谷氨酸钠溶液，并按 5ml/kg 体重剂量向十二指肠注入 10g/L醋酸进行治疗处理，观察症状有无缓解。 【结果】 17 / 21 我们一组为假手术组，早期 治疗组。在家兔注射复方氯化铵溶液 10 次，总计 50ml 后出现呼吸急促，口角抽搐。此时自耳缘静脉注射复方谷氨酸钠溶液，同时向十二指肠注入醋酸进行治疗。最终，治疗及时，抢救成功。 手术前呼吸频 实验类型 假手术主 早期治疗 组 症状明显抢救组 第二组 第三组 早期治疗 组 第四组 第五组 46 46 37 40 44 44 37 41 49 49 42 47 50 50 48 51 33min36s 33min36s 15min 19min 40ml 40ml 30ml 35ml / / / / / 32 分 模型组 症状明显抢救组 18 / 21 第七组 40 42 72 66 第六组 未测 未测 未测 未测 3min 40min 后仍未发生 40ml 40ml 钟 未死亡 / / / 95ml 2ml / 第一组 46 50 52 54 19 / 21 组数 率 第一次给药呼吸频率 第二次给药呼吸频率 第三次给药呼吸频率 抽搐痉挛发生时间 40min 后仍未发生 50ml / / 用药总量 药物体重比 死亡时间 复发谷氨酸钠用量