（参考课件）过敏原检测.ppt

过敏原检测,我武公司市场部学术推广组,1,2,过敏原,过敏原/变应原-常见诱因,凡经吸入或食入等途径进入体内后能引起IgE类抗体产生并导致变态反应的抗原性物质。过敏原种类,食入性：牛奶、鱼虾、鸡蛋等；吸入性：尘螨、花粉、动物皮屑、真菌、昆虫等；接触性：油漆、清洁剂、乳胶等；药物过敏：磺胺类、抗生素类等；昆虫毒液,3,螨是主要过敏原,4,尘螨致敏：中国多中心研究,Allergy2009;64:1083-1092.,SPT结果：经气道致敏率最高的两种变应原为屋尘螨(Dp,57.6%)和粉尘螨(Df,59.0%),中国4个地区17个城市的变应性哮喘和/或鼻炎患者6304例进行13种常见气传变应原皮肤点刺试验（SPT）,5,（1）过敏性疾病的诊断必须明确过敏原,过敏原检测的临床意义(1),ARIA2008：型变态反应性疾病的诊断是根据典型的过敏症状病史和与其相一致的试验诊断结果而共同做出的,典型的过敏症状病史：症状、发作环境、家族遗传史、体格检查等试验诊断：体内试验、体外试验,6,国内过敏性疾病的诊断的严峻形势,13个省/自治区+4个直辖市，214家医院，508名医师,7,调查诊断情况结果,症状+体征，不进行过敏原检测：61%29综合病史+过敏原检测：35%28%（正确诊断）可进行皮肤点刺试验和血清特异性sIgE检查的医师比例分别为74和20,AR患者的诊断依据在各省市的分布情况,8,过敏原检测的临床意义(2),（2）过敏性疾病的治疗必须明确过敏原,避免过敏原对症药物治疗：抗炎、缓解症状特异性免疫治疗：SLIT、SCIT患者教育,过敏性疾病的治疗是一项系统工程，WHO推荐“四位一体”的最佳治疗方案。,9,过敏原检测的临床意义(3),针对性地对患者进行教育早期确定出有可能发展成变态反应疾病的高危婴幼儿，提供机会来防止疾病加重,（3）给指导病人提供依据,10,过敏原检测方法,体外实验：血液特异性IgE检测体内试验：,（1）激发试验鼻粘膜激发、舌下激发、支气管激发、食物激发、药物激发、现场激发（2）皮肤试验划痕试验；点刺试验；挑刺试验；皮内试验；特应性斑贴试验,目的：检出游离或与细胞结合的sIgE,11,过敏原检测方法的比较,特异性IgE检测,体内试验,12,皮试、血清检测与过敏症状的关系,特异性体质者1,特异性体质者2,特异性体质者3,正常情况点刺、血清阳性表现症状者,皮肤反应差的过敏患者,sIgE水平低于阳性临界值的过敏患者,皮肤反应，血清检查都假阴性的过敏患者,点刺阳性,血清阳性,表现出过敏性症状,13,对定性和定量的特别说明,血清sIgE与点刺检测都属于定性检测,症状明确，血清sIgE与皮肤点刺（采用标准化的变应原）均能明确引起患者过敏的变应原，但上述两者都是定性检查，其检测结果只能确定病人是否过敏，但分级并不代表过敏的严重程度,定性检查,为什么都是定性,虽然与疾病相关性比较好，也有分级，但点刺影响因素太多，严重度还是个相对值，同时风团的绝对大小受患者个体皮肤反应、点刺部位、季节、操作手法、药物、年龄影响，所以定量不准确，只能定性,点刺,血清,血清检测所提到的定量检测，是定sIgE的量，而不是过敏强度的量，通常sIgE值与症状严重程度无相关性（ARIA），所以也只是定性,14,皮肤点刺试验,SkinPrickTests(SPT),15,皮肤点刺优势,安全性高，操作简便，快速（10-15分钟出结果）灵敏度高，临床相关性好患者几乎无痛苦，小儿也能接受费用低EAACI推荐为最佳体内诊断方法，现为欧美公认的最方便、最有效的过敏原诊断方法,16,原理,皮肤点刺试验是一种体内特异性免疫学检测方法当有少量变应原进入皮肤时，如皮肤肥大细胞上有相应的IgE抗体，该变应原与之结合，经过一系列的变化，肥大细胞脱颗粒释放组胺等炎症介质，这些介质使局部毛细血管扩张(红斑)，通透性增强，渗出增加，最后出现风团和红晕反应，临床根据风团和红晕反应的出现确定患者的致敏变应原。阳性者表示对该抗原过敏,17,我武皮肤点刺试剂盒,畅点皮肤点刺试剂盒阴性，阳性，33种过敏原吸入组15种，食物组18种,18,食物组,18种,19,吸入组,15种，微粒,备注：猫毛/猫上皮是猫毛和猫上皮的混合物；狗毛/狗上皮是狗毛和狗上皮的混合物蟑螂（德国小蠊）蟑螂有很多种，我们是用德国小蠊做的；蒿属花粉就是艾蒿，蒿属花粉的叫法更准确一些。,20,过敏原,21,过敏原-蟑螂,虽以德国为名，但实际上它的原产地是非洲。因国际间的贸易往来，在商品流通的过程中输入我国。由于其体态与常见的其它蟑螂极为相似，个体的大小如一般蟑螂成虫的四分之一，属蟑螂的一个品种。,22,过敏原-法国梧桐花,法国梧桐在植物分类学上属悬铃木科，科下仅有一属即悬铃木属，属下约7种，原产东南欧、印度及美洲。但我国引入栽培的仅3种，即二球悬铃木也称英桐。和该杂交种的亲本一球悬铃木又称美桐、三球悬铃木又称法桐。现在我们通常把这三个种统称法桐。中国现在常见的悬铃木是美洲悬铃木和东方悬铃木的杂交，由西班牙传入英国，在伦敦盛植，误名”伦敦大叶树Londonplane“。此类树在美国叫sycamore（长球球像桑的树），在英国叫plane（大叶的树），跟法国没有球关系。花期5月。,23,过敏原-蒿草（艾蒿）,蒿属植物很多，如黄花蒿、青蒿、茵陈蒿、艾蒿等等等。公司所用过敏原为艾蒿花粉，花果期9-10月,24,过敏原-葎草,又称拉拉秧、拉拉藤。雄株7月中、下旬开花，雌株8月上、中旬开花。9月中、下旬成熟。,25,过敏原-青霉菌,26,过敏原-酵母菌,酵母是一些单细胞真菌，可以通过出芽进行无性生殖，也可以通过形成子囊孢子进行有性生殖。以人类食用和作动物饲料的不同目的可分成食用酵母和饲料酵母，食用酵母中又分成面包酵母（即酒精酵母）、食品酵母和药用酵母等。,27,试验前,点刺液应储存在28C的冷藏柜中询问患者服药情况如果以下准则未得到遵循，点刺试验必须延迟试验前3天必须停服所有抗组胺药；息斯敏需停药7天以上试验前1天,必须停用10mg的全身性强的松龙试验前1天,不能在将行点刺试验的臂部使用可的松油膏其他药物可如常使用请注意，每次都要询问患者是否遵循了上述的准则如果使用了浴液/保湿剂/香波，患者需在进行试验前清洗臂部,排除因素或注意事项,28,询问患者是否有过过敏性休克或严重的过敏性不良反应,有过敏休克病史的患者，建议用血清sIgE检测有严重食物过敏史，出现过严重不良反应的患者，如食物引起的急性全身性荨麻疹，建议使用血清sIgE检测,试验前,排除因素或注意事项,29,询问患者是否有“晕针”,没有经验的医护人员常会把晕针误诊为过敏性休克针刺过程中病人突然发生头晕、目眩、心慌、恶心，甚至晕厥的现象。可能因为体质虚弱、饥饿、疲劳，心理恐惧原因，刺激过强（因人而异）出现晕针晕针与过敏性休克的区别,过敏性休克是全身出现严重过敏反应，皮肤、呼吸道粘膜水肿，导致血压急剧下降，会出现：1、血压急剧下降到(80/50mmHg)以下；2、在休克出现之前或同时，会有皮肤粘膜表现（潮红、瘙痒荨麻疹）、呼吸道阻塞症状（气道水肿、分泌物增加，加上喉和/或支气管痉挛），循环衰竭表现，意识方面的改变（往往先出现恐惧感，烦躁不安和头晕；随着脑缺氧和脑水肿加剧，可发生意识不清或完全丧失；还可以发五笔型抽搐、肢体强直）晕针主要表现为突然出现精神疲倦，头晕目眩，面色苍白，恶心欲吐，多汗心慌，四肢发凉，血压下降，脉象沉细，甚至神志昏迷，仆倒在地，唇甲青紫，二便失禁，脉细欲绝,试验前,排除因素或注意事项,30,询问患者是否酒精过敏若酒精过敏，常规消毒操作时可用清洗后再用蒸馏水擦拭询问患者是否有划痕症,皮肤划痕症患者建议使用血清IgE检测如果点刺后发现是皮肤划痕症患者（出现假阳性），建议半小时后观察结果（点刺风团可以维持45分钟以上，划痕症风团维持30分钟）,试验前,排除因素或注意事项,31,试剂准备,变应原及阴、阳性对照点刺液阳性对照：磷酸组胺溶液阴性对照：生理盐水溶液一次性消毒点刺针,试验前,32,操作步骤,1.常规消毒：患者手臂放松，平放于桌上，用酒精清洁其前臂掌侧皮肤,2.滴点刺液：依次将变应原点刺液、阴性对照、阳性对照滴在消毒后的皮肤上，液滴之间距离为3-5厘米（间距不可小于2厘米），防止点刺后的红晕互相融合,33,3.点刺操作：绷紧皮肤，避开血管，点刺针透过液滴垂直刺入皮肤（刺破皮肤，使针尖下面有少量试液进入皮肤（深度1mm），点刺针停留1秒钟后提起），不同的液滴需更换新的点刺针,4.拭去残液：点刺2-3分钟后拭去皮肤上的残留试液，注意不要交叉污染,34,5.观察结果：点刺10-15分钟后观察点刺结果，测量阴性对照、粉尘螨点刺液、阳性对照的点刺部位产生风团的面积，并记录。,35,6.结果判定：,临床比较风团面积最简便的方法是目测，以阴性对照风团或红晕面积做校正，比较粉尘螨与阳性对照风团或红晕的面积，若粉尘螨风团和红晕面积为阳性对照面积的25%以上，即可判断该患者对粉尘螨过敏。,根据点刺液与阳性对照所致风团面积的比值判定反应级别,36,37,如何精确测量风团和红晕的面积大小,1.用油性笔描绘风团及红晕四周边线，2.然后用透明胶带将油性笔描绘的圈转移到mm心电图纸上，3.比较粉尘螨及阳性对照的风团所占格子数来确定该患者对粉尘螨变应原反应强度,38,点刺判定结果新标准,ARIAupdate2008,(1)皮试15min后观察，此时反应达到高峰；(2)对于点刺试验，对照部位完全阴性时，小于3mm的风团即表示阳性的免疫反应。,39,检测阳性的解读,点刺阳性反应的强弱，反应的是受试者皮肤敏感程度，并不表示疾病的严重程度。即并不是点刺反应越强，疾病越严重点刺分级与受试者过敏症状的严重程度有关系，但不是正相关血清sIgE的体外检测也是如此，如很多致敏个体sIgE水平低于临界值（0.35KU/L）,而很多无症状患者却有很好的sIgE,40,过敏原检测分级&症状严重程度,sIgE抗体（游离的sIgE、结合的sIgE）介质的释放靶器官对介质的反应服药影响非特异性过敏,过敏症状的严重程度的影响因素,41,过敏原检测分级&症状严重程度,患者个体皮肤反应、点刺部位服用药物操作手法年龄影响季节,皮肤点刺结果分级影响因素,42,操作步骤要点总结,划号（1-阴性对照，最后号-阳性对照）消毒点刺拭残液,43,点刺的安全性,点刺过敏原进入皮肤的量为1-510-9克（纳克级）点刺常见不良反应通常为局部反应吸入性过敏原点刺严重不良反应少，因为日常经常接触，有耐受能力，日常过敏原量甚至为微克级有无严重食物过敏史,44,常见问题,阳性对照出现阴性结果,操作手法：点刺针未刺破表皮，阳性对照液未进入皮肤用药：点刺前服用抗阻按药、皮质类激素等皮肤反应性差点刺液存放不当或时间过长而失效其他疾病