（参考课件）医用化学实验.ppt

医用化学实验,生物化学教研室张丽娜,1,实验课注意事项：不迟到，不早退，做好课前预习工作穿好白大褂使用煤气时注意安全试剂用后及时归位保持严肃认真的实验态度及时记录实验结果，按时完成实验报告,2,实验报告格式：1、实验目的2、实验原理3、实验操作4、实验结果（真实、客观）5、讨论（实验报告的核心）6、意见与建议（可选择）,3,实验一医化实验基本操作,玻璃仪器的洗涤吸量管的使用注意：右手食指按住吸量管口溶液的混匀指弹混匀、搅拌混匀、倒转混匀、旋涡混合器混匀等,4,实验二电离平衡与缓冲溶液,实验目的1、掌握同离子效应的原理2、学习通过韩-哈方程式配制缓冲溶液3、观察稀释对缓冲溶液pH值的影响4、学习吸量管及pH计的使用,5,1、同离子效应,实验原理,HAcH+Ac-,NaAcNa+Ac-,例：,同离子效应使得HAc的电离度降低，溶液的pH升高,6,酸碱指示剂：,红,橙,黄,红,淡红,黄,无色,绿,蓝,3.1,4.4,8,10,6,7.6,甲基橙,酚酞,溴麝香草酚蓝,7,pH=pKa+lg,盐酸,韩-哈方程式,也可表示为：,（盐的摩尔数）（酸的摩尔数）,n盐/V溶液n酸/V溶液,当酸与盐混合前的浓度相等时：,=pKa+lg,V盐V酸,pH,2、缓冲溶液,8,缓冲溶液加水稀释时，盐浓度与酸浓度作相同比例稀释，因此，缓冲溶液的pH几乎不因稀释而改变。,缓冲溶液的缓冲能力有一定限度，超过该限度缓冲溶液的pH也会发生较大改变,9,实验操作,1、同离子效应,（1）,各1支+NH3.H2O2ml+1滴酚酞,1滴NH4Cl,1滴H2O,摇匀观察结果,1ml=15滴,（2）,各1支+醋酸2ml+1滴甲基橙,1滴NaAc,1滴H2O,摇匀观察结果,10,2、缓冲溶液,（1）,测完pH值后2管保留,大试管3支,11,另取2支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验,溴麝香草酚蓝各1滴,（2）,12,（3）另取3支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验,溴麝香草酚蓝各2滴，混匀,NaOH3滴，摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时所加NaOH滴数,HCl3滴，摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时所加HCl滴数,13,2号管缓冲液测好pH后切勿立即倒去吸量管的使用pH计的使用,注意事项：,14,1、看清刻度，选择适当容量的吸量管2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管口，稳住液面3、拿吸量管的时候，刻度面向自己4、读刻度时，眼睛与刻度线同一水平，以下凹面为准5、吸取另外一种试剂时，要润洗,吸量管的使用,15,实验三功能基反应,实验目的,1、掌握几功能基的主要化学性质2、了解乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象,16,1、双键与卤素的加成反应,实验原理,红棕色的溴褪色，可用于鉴定有机物中是否存在不饱和键,17,2、酚性羟基的反应,（1）苯酚的弱酸性,可用于鉴别酚和醇,18,3、醛基的反应,O|R-C-H+2Cu（OH）2,O|R-C-OH+Cu2O+2H2O,砖红色沉淀,（班氏试剂）,酮无此反应，故可用于鉴别醛和酮,19,20,4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象,使三氯化铁溶液呈紫红色反应具有烯醇式结构,与苯肼反应生成苯腙，颜色？,使红棕色溴的四氯化碳溶液褪色具有双键结构,OO|CH3-C-CH2-C-O-C2H5,21,说明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式两种异构体的混合物，两者之间相互转变，处于动态平衡。,OO|CH3-C-CH2-C-O-C2H5,OHO|CH3-C=CH-C-O-C2H5,室温时酮型（93%）烯醇型（7%）,凡两种或两种以上的异构体能互相转变，并以动态平衡存在的现象互变异构现象,22,5、尿素的化学性质,OH-,紫红色物质,缩二脲反应：,缩二脲+CuSO4（少量）,23,1、烯基的反应,实验操作,+硬脂酸10滴,+油酸10滴,+植物油10滴,逐滴加入5%Br2的CCl4溶液，不断振荡试管，记录结果,24,2、酚性羟基的反应,（1）,+液体苯酚2滴水5滴，摇匀,+10%NaOH2滴摇匀，观察,（2）,+0.5%苯酚溶液10滴,+0.5%水杨酸溶液10滴,+苯甲醇10滴,各加入1%FeCl31滴，观察结果,25,3、醛基反应（大试管6支）,试剂（滴）12345640%乙醛液510%NaOH5丙酮液41%葡萄糖41%果糖41%蔗糖442mol/L盐酸10班氏试剂1010101010,1-5管于沸水中加热3分钟，观察结果；6号管加蒸馏水10滴，于沸水中加热10分钟，不时振荡，再加10%NaOH10滴，班氏试剂10滴混匀，于沸水中再加热3分钟，与5号管比较，记录结果,26,4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象,（1）,+10%乙酰乙酸乙酯2滴,+2，4-二硝基苯肼10滴，振荡，观察结果，写出反应式,（2）,+10%乙酰乙酸乙酯10滴,+1%FeCl31滴，观察结果,再加溴水1滴，观察变化，并加以解释,27,5、尿素的化学性质,+尿素1匙,小火加热，待尿素熔化,红色石蕊试纸放置管口，观察变化,继续加热,待管内物质凝固后冷却试管，加水2ml,玻棒搅动促溶，吸取上层溶液于另一试管中,再加入10%NaOH、1%CuSO4各1滴，观察变化,28,注意事项,1、注意区分以下试剂：液体苯酚5%苯酚溶液5%Br2的CCl4溶液溴水2、液体苯酚预先加热，盛放其的试管也要预热3、缩二脲反应中试管冷却后再加水，并用玻棒轻轻搅动4、挥发性试剂全部摆放在边台上，用后及时归位,29,实验三动物组织中核酸的提取与鉴定,实验目的：1、掌握组织中的核酸的提取与鉴定2、掌握离心机的使用3、熟悉加样器的使用,30,实验原理1、提取原理：a:DNA和RNA大部分与Pro结合成核蛋白。b:核蛋白可被三氯醋酸沉淀下来。c:10%NaCl溶液从沉淀中提取核酸，生成核酸的钠盐d:乙醇把核酸钠沉淀下来,31,核苷（B-R）磷酸（P）,2、鉴定原理,核酸核苷酸,嘌呤（AG）,嘧啶,核糖（CU）,脱氧核糖（CT）,32,a:磷酸+钼酸铵磷钼酸钼蓝b:嘌呤+AgNO3絮状嘌呤银c:核糖糠醛绿色化合物d:脱氧核糖-羟基-酮基戊醛蓝色化合物,氨基萘酚磺酸,H+,3，5-二羟基甲苯,H+,二苯铵,33,操作步骤,1、提取步骤制备肝组织匀浆：脱臼处死或断头处死剖腹取全部肝组织生理盐水冲洗血污，吸干净三氯醋酸2ml分散匀浆机匀浆,34,分离提取于全部匀浆内加入生理盐水2ml，玻棒混匀静置3min，3000rpm3min,弃上清沉淀加入10%NaCl2ml，沸水浴3min,玻棒搅拌取出冷却，3000rpm3min取上清，逐滴95%酒精2管，混匀静置5min，3000rpm5min弃上清，得白色核酸钠,35,核酸的水解：短试管内加入5%H2SO43.5ml玻棒搅匀沸水浴中10min,36,成分的鉴定,沸水浴35min，观察结果，静置15min,观察结果,嘌呤的鉴定,37,磷酸的鉴定,放置3min，沸水浴35min，观察颜色差异,38,核糖的鉴定,沸水浴510min，观察颜色差异,39,脱氧核糖的鉴定,沸水浴510min，观察颜色差异,40,注意事项,1、做鉴定部分时尽量用大试管，所有标号朝试管上方2、玻璃棒搅拌要轻柔3、胶头滴管使用要注意顺序，避免污染,41,移液枪的使用1、看清最大刻度，选择适当容量的移液枪（最大刻度和读数的关系）2、先调好刻度3、打至第一档吸入试剂4、打出试剂时要按至第二档5、使用加样器时要慢、稳，不要有气泡出现,42,离心机的使用台秤平衡对称插入定时定速,43,实验四蛋白质呈色反应、沉淀反应及等电点的测定,实验目的：1、掌握双缩脲法、茚三酮法、Folin法定性检查蛋白质的方法2、验证几种蛋白质沉淀反应的现象及酸碱性环境的影响3、了解蛋白质等电点测定,44,一、蛋白质的呈色反应,实验原理：双缩脲反应：含有CONH、CSNH、CH2NH等基团的化合物在浓碱液中与硫酸铜生成紫红色复合物。茚三酮反应：含有自由氨基的化合物与茚三酮共热，生成紫色化合物。Folin法：酚性羟基在碱性环境中，与酚试剂生成钼蓝,45,操作步骤,（1）,+1：10鸡蛋白2滴1%CuSO41滴,+10%NaOH5滴混匀，观察颜色,（2）,+1：10鸡蛋白4滴+蒸馏水10滴+0.1%茚三酮乙醇8滴，混匀，观察颜色,蒸馏水6滴+10%NaOH3滴，酚试剂1滴，混匀，观察颜色,+1：10鸡蛋白2滴,+0.25%白明胶0.25%酚溶液0.25%酪氨酸,46,二、蛋白质的沉淀反应,实验原理：1、盐析：破坏水化膜，中和电荷常用中性盐：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl,2、重金属盐类沉淀：条件：PHPI，蛋白质带负电荷重金属