比较猪去氧胆酸与牛磺熊去氧胆抗神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的作用.pdf

中国临床康复第9 卷第7 7 期2 0 0 5 0 5 0 7 出版 c h i 聊卵如M m D f0 ，c f i n 妇f 舶 n 6 以血耐j f 0 肘步72 0 D 5 己9 ，o ，7 比较猪去氧胆酸与牛磺熊去氧胆抗神经细胞缺氧缺糖再给氧 损伤的作用 张壮1 ，闰彦芳2 ，孙塑伦2 ，何丽云2 ，王硕仁1 ，朱陵群2 ，牛福玲 北京中医药大学，1 中医内科学教育部重点实验室；2 东直门医院中医脑 病研究室，北京市1 0 0 7 0 0 通讯作者：张壮，男，1 9 7 0 年生，黑龙江省哈尔滨市人，汉族，1 9 9 8 年中国中医研究院毕业，博士，副研究员，副主任医师，主要从事脑保护 中药的药效机制与效应成分的相互关系和中药复方配伍的科学依据。 l i y u e b j s o h u c o m 中图分类号：R 7 4 3 文献标识码：A 文章编号：1 6 7 1 5 9 2 6 ( 2 0 0 5 ) 1 7 0 1 3 4 0 3 收稿日期：2 0 0 4 0 8 2 3 修回日期：2 0 0 5 一0 3 2 8( 0 4 s M Y w ) P r o t e c t i v ed ! f b c t so fh y o d e o x y c h o U ca c i dv e r s u st a u r o u r s o d e s - 慨y c h o l i c 孔沁帆t h ei 川u r yi n d 眦e db yh y p o 妇a h y p o g I y c e m i a a n dr x y g e 船t i o ni n 耻r v e I l sz h a n gz h u a n 9 1 ，Y a nY a n f a n 9 2 ， S u nS u I u n 2 H eL j y u n 2 ，W a n gS h u O r e n l ，Z h uL i n g q u n 2 N i uF u l i n g ，1 K e y L a b o r a l o r yo fM j n i s l r yo fE d u c a t i 咖，I n t e n 】a lM e d i c j 玎eo f7 I r a d i t i o n a 】C h j n e s e M e d i c i n e ，B e i j i n gU n i v e r s i t yo fC h i n e s eM e d i c i n e ，B e i i i n gl 0 0 7 0 0 ，C h i n a ； 2 D e p a r t m e n to fN e u r o l o g y ，D o n g z h i m e nH o s p i t a l ，B e 巧i n gU n i V e r s i t yo fC h i n e s eM e d i e i n e ，B e i i i n g1 0 0 7 0 0 ，C h i n a C o r r p o n d e n c et o ：Z h a n gZ h u a n g ，M D ，A s s o c i a t er e s e a r c h e r ，A s s o c i a t ec h i e fp h y s j c i a n ， K e yL a b o r a t n r y “M i n i s r y E d u c a i 鲫， I n e m 止 M e d i c i n eo f1 Y a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e ， B e i i i n gU n i v e r s i t yo fC h i n e s e M e d i c i n e ，B e i i i n g1 0 0 7 0 0 ，C h i n al i v u e b i s o h u c o m R e i v e d ：2 0 0 4 一0 8 2 3 A c c e p t e d ：2 0 0 5 一0 3 2 8 A b s t I 墨c t A I M ：T os t u d yt h ep m t e c t i v ee f k c t so ft h em a i nc h o l i ca c i d l i k ec o m p o n e n t s o fp o r c i n eg a Up o w d e rh y o d e o x y c h o l i ca c i da n db e a rg a l lp o w d e rt a u m u r - s o d e s o x y c h o l i ca c i do nt h ei n j u r yi n d u c e db yh y p o x i a h y p o g l y c e m i a 肌d r e 0 1 y g e n a t i o ni nn e r v ec e l l s M E T H o D S ：T h ee x D e r i m e n t w a s 6 n i s h e di nt h eI n t e r n a lM e d i c i n eo f T m d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e ，B e i i i n gU n i v e r s i t yo fC h i n e s e M e d i c i n e f r o m J u l y2 0 0 0t oA u g u s t2 0 0 2 T I l eh u m a nn e u m b l a s t o m aw a sc u l t u r e d ， 粕d m o d e l so fh v p o x i a h v p o g l y c e m i aw a se s t a b l i s h e dw i t hE a d es o l u t i o no f s o d i u md i t h i o n a t ew i t h o u tg l u c o s e T h em o d e l sw e r ed i v i d e dr a n d o m l yi n t o c o n t r o lg r o u p ，h y p o x i a h y p o g I y c e m i aa n dr e 0 1 y g e n a t i o ng r o u p ，3 1 2 5 ，1 5 6 3 ， O 7 8 l 斗m o l Lh y o d e o x y c h o l i ca c i dg r o u p s ，3 1 2 5 ，1 5 6 3 ，0 7 8 1 斗m 0 1 L t a u r o u r s o d e s o x v c h o l i ca c i d 舯u p s T h ec e n u l a rm o r t a l i t yw a sd e t e c t e dw i t l l t r v D a nb l u es t a i n ；t h ec e Us u r v i v a lr a t ew a sd d t e c t e dw i t l lM T Ta s s a y ；t h e c e l l u l a rl a c t a t ed e h y d r o g e n a s er e l e a s er a t ew a sd e t e c t e dw i t hc h r o m o m e t r y ； t h ec e l l u l a rn e c r o s i sr a t ea n dt h ec e l l u l a ra p o p t o s i sr a t ew e r eo b s e r v e d w i t hn u o r e s c e n c e m i c r o s c o p eo fH o e c h s t3 3 3 4 2a n dP Id o u b ks t a i n i n g 讯 R E S U L T S ：( 1 ) T h ec e l ls u r v i v a lr a t ei nt h eg r o u p so f3 1 2 5 ，1 5 6 3 ， O 7 8 1丘m o l Lh v o d e o x v c h o l i ca c i da n dt a u r o u r s o d e s o x y c h o l i ca c i di n - c r e a s e ds i g n i f i c a n t l ya sc o m p a r e dw i t ht h a t i nh y p o x i a h y p o g l y c e m i aa n d r e o x y g e n a t i o ng m u p ( 3 4 1 7 1 ) ，( 3 2 8 8 2 ) ，( 2 9 4 9 8 ) ， ( 2 7 7 6 9 ) ，( 2 6 8 9 4 ) ，( 2 6 2 1 1 1 ) ，( 7 1 2 9 2 ) ， P O 0 0 1 T h ec e l l u l a rl a c t a t ed e h y d m g e n a s er e l e a s er a t ei nt h e g r o u p so f3 12 5 ，1 5 6 3 ，O 7 81 m o l Lh y o d e o x y c h o l i ca c i da n dt a u r o u r _ s o d e s o x v c h o l i ca c i dd e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l va sc o m p a r e dw i t ht h a ti nh y p o x i a h y p o g l y c e m i aa n dr e 0 1 y g e n a t i o ng r o u p 【( 4 6 6 5 6 ) ， ( 4 9 8 5 3 ) ， ( 4 7 O 4 O ) ，4 8 5 2 7 1 ，( 4 4 1 4 3 ) ，( 4 0 2 7 5 ) ， ( 6 6 4 7 6 ) ，P 0 0 0 1 】T h ec e Us u 州v a lr a t ei nt h eg m u p so f 3 1 2 5 ，1 5 6 3 ，O 7 8 1 汕m 0 1 Lh v o d e o x v c h o l i ca e i da n dt 8 u r o u r s o d e s o x y c h o l i ca c i di n c r e a s e ds i 舯i f i c a n t l ya sc o m p a r e dw i t ht h a ti nh y p o x i a h y p 0 g l v c e m i aa n dr e o x y g e n a t i o ng r o u p 【( 4 4 5 3 2 ) ，( 4 5 3 2 0 ) ， ( 4 1 5 1 6 ) ，( 4 1 6 2 4 ) ( 3 7 6 2 8 ) ，( 4 0 1 1 8 ) ， ( 2 5 6 3 7 ) ，P O O l 一0 0 5 1 ( 9W i t hd o u b l es t a i n i n g ns i t “，t h e c e u l a rn e c r o s i sr a t ei nt h eg r o u p so f3 1 2 5 ，1 5 6 3 ，O 7 8 l 肛m o l Lh y o d e o x y c h o l i ca c i da n dt a u m u r s o d e s o x y c h o l i ca c i dd e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l ya s c o m p a r e dw i t l l t h a t i n h y p o x i a h y p o g l y c e m i a a n dr e 0 1 y g e n a t i o ng m u p 【( 1 9 7 6 2 ) ，( 2 3 9 土7 O ) ，( 2 6 O 6 9 ) ，( 2 1 8 5 6 ) ， ( 1 8 7 6 1 ) ，( 2 5 4 5 8 ) ，( 4 6 8 土l O 4 ) ，P O 0 1 】； T h ec e l l u l a ra p o p o s j sr a t ei n h eg r o u p so f3 1 2 5 ， 1 5 6 3 脚o l Lh y o - d e o x y c h o l i ca c i da n d3 1 2 5 ，1 5 6 3 ，0 7 8 1 肛m o l Lt a u m u r s o d e s o x y c h o l i c a c i dd e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l ya sc o m p a r e dw i t ht h a ti nh y p o x i a h y p o g l y c e m i a a n dr e o 。y g e n a t i o ng r o u p 【( 7 4 2 7 ) ，( 8 3 4 O ) ，( 6 9 士3 8 ) ， ( 9 2 4 5 ) ，( 8 7 3 6 ) ，( 1 6 0 土4 8 ) ，p O 0 5 】 C o N C L U S I o N ：B o t hh y o d e o x y c h o l j ca c j da n d a u m u r s o d e s o x y c h o l j ca c i d c a ni n h i b i tt h en e c m s i sa n da p o p t o s i 8o fn e r v ec e l l s a f t e rt h eh y p o x i a h y p o g l y c e m i aa n dr e o 。y g e n a t i o n ， a n dt h ed i f f e r e n c eo ft h ep r o t e c t i v ee f k c t s 中医康复研究 b e t w e e nh y o d e o x y c h o l i ca c i da I l dt 叫r o u r s o d e s o x y c h o l i ca c i di si n s i g I l i f i c 8 n t Z h o n gZ ，Y a nY F ，S u nS L H eL Y ，W a n gS R ，Z h uL 0 ，N i uFL P r o t e 酬v ee 忏e c f so f h v o d e o 州c h o I i ca c i dv e r s u st a u r o u r s o d 髂o ) ( y c h o I i ca c i d0 nt h ei n i u r yi n d u c e db y h y p d a h y p o g f y c e m aa n dr e o x y g 悖n 训o ni nn e r v ec e | s z 抽，l g g 瑚厶M wK h ，咖 2 0 0 5 ：9 1 1 7 l ：1 3 4 6C C h i n a l 张壮闫彦芳孙塑伦何丽云，王硕仁，朱陵群，牛福玲、比较猪去氧胆酸、牛磺熊 去氧胆抗神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的作用中国临床康复，2 0 0 5 ，9 1 7 l ： 1 3 4 6I wz g I c 时c o m 】 摘要 目的：研究猪、熊胆粉的主要成分猪去氧胆酸及牛磺熊去氧胆对神经细 胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用。 方法：实验于2 0 0 0 0 7 2 0 0 2 一0 8 在北京中医药大学中医内科学教育 部重点实验室完成。培养人神经母细胞瘤细胞，以含连二亚硫酸钠的无 糖E a r l e 液模拟造成缺氧缺糖再给氧损伤，随机分为正常培养对照组， 缺氧缺糖再给氧组，猪去氧胆酸3 1 2 5 ，1 5 6 3 ，O 7 8 l 斗m o l L 浓度组， 牛磺熊去氧胆3 1 2 5 ，1 5 6 3 ，O 7 8 1 斗m o l L 浓度组。应用锥虫蓝染色测 定细胞死亡率，应用比色法测定乳酸脱氢酶漏出率，四甲基偶氮唑蓝比 色法测定细胞存活率，应用以H o e c h s t3 3 3 4 2 和碘化丙啶原位双染法荧 光显微镜检测细胞坏死率和凋亡率。 结果：细胞死亡率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3 1 2 5 ，1 5 6 3 ， O 7 8 l 斗m 0 1 几浓度组细胞死亡率均明显低于缺氧缺糖再给氧组 ( 3 4 1 7 1 ) ，( 3 2 8 8 2 ) ，( 2 9 4 9 8 ) ，( 2 7 7 6 9 ) ， ( 2 6 8 9 4 ) ，( 2 6 2 1 1 1 ) ，( 7 1 2 9 2 ) ，P 0 0 0 1 】。乳酸脱 氢酶漏出率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3 1 2 5 ，1 5 6 3 ，O 7 8 l 斗m 0 1 L 浓 度组乳酸脱氢酶漏出率均明显低于缺氧缺糖再给氧组【( 4 6 6 5 6 ) ， ( 4 9 8 5 3 ) ，( 4 7 0 4 O ) ，( 4 8 5 2 7 ) ，( 4 4 1 土4 3 ) ， ( 4 0 2 7 5 ) ，( 6 6 4 7 6 ) ，P O 0 0 l 】。细胞存活率：猪去氧胆酸、 牛磺熊去氧胆3 1 2 5 ，1 5 6 3 ，o 7 8 1 正m o l L 浓度组细胞存活率均明显高于 缺氧缺糖再给氧组 ( 4 4 5 士3 2 ) ，( 4 5 3 2 O ) ，( 4 1 5 1 6 ) ， ( 4 1 6 2 4 ) ，( 3 7 6 2 8 ) ，( 4 0 1 1 8 ) ，( 2 5 6 3 7 ) ，P 0 0 1 一O 0 5 】。细胞坏死率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3 1 2 5 ， 1 5 6 3 ，O 7 8 l 汕m o l L 浓度组细胞坏死率均明显低于缺氧缺糖再给氧 组 ( 1 9 7 6 2 ) ，( 2 3 9 7 O ) ，( 2 6 O 6 9 ) ，( 2 1 8 5 6 ) ， ( 1 8 7 6 1 ) ，( 2 5 4 5 8 ) ，( 4 6 8 l O 4 ) ，| p O 0 1 】。( 9 细 胞凋亡率：猪去氧胆酸3 1 2 5 ，1 5 6 3 m o l L 浓度组和牛磺熊去氧 胆3 1 2 5 ，1 5 6 3 ，o 7 8 l 斗m o l L 浓度组明显低于缺氧缺糖再给氧组 【( 7 4 2 7 ) ，( 8 3 4 O ) ，( 6 9 3 8 ) ，( 9 2 4 5 ) ， ( 8 7 3 6 ) ，( 1 6 O 4 8 ) ，P O 0 5 】。 结论：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸均可明显地降低神经细胞缺氧缺糖 再给氧损伤时的细胞坏死率、凋亡率，显著提高细胞存活率，显著减少 乳酸脱氢酶的漏出，表明猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸均具有显著的抗 神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的作用，并且猪去氧胆酸与牛磺熊去氧 胆酸之间没有显著差异。 主题词：脱氧胆酸；牛磺熊去氧胆酸；神经元；缺氧；细胞凋亡 O引言 熊胆粉经实验与临床研究证实对脑卒中急性期具有 清热解毒化痰功效，但由于动物保护等原因。近年来大量 使用猪胆粉替代熊胆和熊胆粉。本文用连二亚硫酸钠造 成人神经母细胞瘤细胞缺氧缺糖再给氧损伤模型，比较 猪、熊胆粉的主要成分猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆对神经 细胞缺氧缺糖再给氧损伤保护作用的差别，为猪胆粉替 代熊胆粉治疗脑卒中急性期提供初步实验依据。 1 材料和方法 设计：随机对照单盲法实验。 单位：北京中医药大学中医内科学教育部重点实验 室和东直门医院中医脑病研究室。 万方数据 I s s N1 6 7 1 5 9 2 6C N2 1 1 4 7 0 R 群什笙比较猪去氧胆酸与牛磺熊去氧胆抗神经细胞缺氧缺糖再给氧 础槲mk f 2 3 3 8 5 0 8 3 5 i n a c o m“。+ 损伤的作用 材料：实验于2 0 0 0 0 7 2 0 0 2 0 8 在北京中医药大 学中医内科学教育部重点实验室完成。细胞：人神经母细 胞瘤细胞株( S H S Y 5 Y ) 由首都医科大学宣武医院药理研 究室赠送，本研究各次级实验所用细胞为1 1 3 0 代。主 要器材：日本O L Y M P U SB X 6 0 万能荧光显微镜配备美国 D i a g n o s t i cS p o t2 e 显微图像分析系统；日本O L Y M P U S M I T 2 倒置相差显微镜；德国H e r a e u sc e l l 型二氧化碳培 养箱；G D V 公司D V9 9 0 B V 4 型酶标仪；上海分析仪器厂 7 5 2 0 型分光光度计。 药物与试剂：药物：猪去氧胆酸为北京中医药大学 中药学院李云谷教授赠送，高效液相色谱归一化法检 测纯度为9 8 2 ；牛磺熊去氧胆酸钠购自中国药品生 物制品检定所，批号0 8 1 6 9 7 0 2 ；三七总皂苷为北京中 医药大学中医内科学教育部重点实验室提取，含量以 人参皂苷R b 。单体计算为8 3 2 。主要试剂：D M E M 培 养液为美国G i b c o 公司产品；新生小牛血清美国H y C l o n e 公司产品；胎牛血清为美国H y C l o n e 公司产品；胰 酶、L 一谷氨酰胺为美国S i g m a 公司产品；青霉素、链霉 素为华北制药股份有限公司产品；四甲基偶氮唑蓝试 剂、碘化丙啶均购自美国S i g m a 公司产品；H o e c h s t 3 3 3 4 2 购自美国M o l e c u l a rP r o b e 公司；乳酸脱氢酶试剂 盒为北京中生生物工程高技术公司产品( 批号： 0 1 0 1 0 1 ) ；二甲基亚砜，分析纯，天津市天河化学试剂厂 产品；连二亚硫酸钠、椎虫蓝等其他试剂均为国产分析 纯，水为三蒸水。 设计、实施、评估者：设计为第一作者，资料收集为第 六、七作者，干预实施为第二、四作者，评估为第三、五作 者，以上人员均接受过正规培训。盲法评估。 干预措施：人神经母细胞瘤细胞复苏及细胞传代及 种板：人神经母细胞瘤细胞的复苏、传代参照文献 1 操 作。血球计数板计数，调至1 1 0 8L “浓度，分别接种于 9 6 孔培养板，每孔1 0 0i x L ；2 4 孔培养板，每孔1 0m L ；6 孔培养板，每孔3 0m L ；体积分数为0 0 5 的C O ：培养箱 3 7 培养2 4h 后用于实验。 神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤模型的建立：种板 培养2 4h 后，各孔弃去培养液，用无糖E a r l e 液( 氯化 钠1 4 3m m o l L ，氯化钾5 4m m o l L ，氯化钙1 8m m o l L ， 硫酸镁1 0m m o l L ，磷酸二氢钠1 0m m o l L ，N 2 羟乙 基哌嗪一N 一2 磺酸乙烷2 4m m o l L ，p H7 4 ) 轻洗2 次，正常对照孔加入无血清的D M E M 培养液；模型孔加 入含连二亚硫酸钠终浓度为1 0m m o l L 的无糖E a r l e S 液，体积分数为0 0 5 的C O ：培养箱3 7o C 孵育6h ，取出 培养板，吸弃各孔液体，各孔用无糖E a r l e S 液洗细胞2 次，换无血清D M E M 培养液，继续培养1 2h ，造成细胞缺 氧缺糖再给氧损伤模型。 实验分组：随机分为正常培养对照组：不经缺氧缺 糖再给氧处理，始终给予含血清D M E M 培养液培养；缺 氧缺糖再给氧组；阳性对照药物三七总皂苷组：三七总 皂苷终浓度为3 1 2 5m g L ；猪去氧胆酸3 1 2 5 ，1 5 6 3 ， 0 7 8 1p , m o l L 浓度组；牛磺熊去氧胆3 1 2 5 ，1 5 6 3 ， 0 7 8 1I z m o l L 浓度组。药物于缺氧缺糖和再给氧处理时 13 5 加入含连二亚硫酸钠1 0m m o l L 的无糖E a r l e 液和含血 清D M E M 培养液中，其余同缺氧缺糖再给氧组。 锥虫蓝染色计数法测定细胞死亡率：锥虫蓝配制成 4 0g L 母液，4 保存，使用时稀释成4g L 工作液。采 用2 4 孑L 培养板实验，造模实验后，取出培养板，各孔吸 上清液入对应编号的试管中，细胞层用2 5g L 胰酶 消化，用新生小牛血清终止反应，每孔加0 0 1m o l L 磷酸盐缓冲液( p H 7 4 ) 1m L ，收集细胞悬液于对应编 号的试管中，8 0 0r m i n 离心5m i n ，吸弃上清液，留 0 3m L ，轻轻吸吹为细胞悬液，取细胞悬液9 滴移入小 试管中，加一滴4g L 锥虫蓝溶液混匀，在3m i n 内， 用血球计数板计数蓝染的死细胞数和拒染的活细胞共 2 0 0 个，细胞死亡率( ) = 死细胞数( 活细胞数+ 死 细胞数) 1 0 0 。 乳酸脱氢酶漏出率的测定：收集2 4 孔培养板上清 液于对应编号的试管中，培养板加人无血清D M E M 培 养基1m L ，分别置一8 6 低温冰箱冷存。测定前取出， 孔内细胞反复冻融2 次，使细胞破裂，混匀，30 0 0r m i n 离心5r a i n ，按照乳酸脱氢酶试剂盒说明书操作，分光光 度计3 4 0n m 处测定每分钟平均吸光度变化值，计算上清 液和相应胞浆中的乳酸脱氢酶活性，乳酸脱氢酶漏出率 ( ) = 上清液乳酸脱氢酶活性( 上清液乳酸脱氢酶活 性+ 胞浆乳酸脱氢酶活性) 1 0 0 。 四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞存活率：按照文献 2 】操作。H o e c h s t3 3 3 4 2 和碘化丙啶原位双染法荧光显微 镜检测细胞坏死率和凋亡率：参照文献方法 2 ，3 】操作。 主要观察指标：细胞死亡率。乳酸脱氢酶漏出 率。细胞存活率。细胞坏死率及凋亡率。 统计学分析：由第四作者采用S P S S1 0 0f o rW i n d o w s 中O N EA N O V A 程序进行统计学分析，以方差分析法进 行组问均数比较。 2 结果 猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆对细胞死亡率、乳酸脱氢 酶漏出率、细胞存活率、细胞坏死率、细胞凋亡率的影响， 见表l 。 H o e c h s t 3 3 3 4 2 和碘化丙啶原位双染色法检测时，在 荧光显微镜下可观察到正常细胞发蓝色荧光，染色质均 匀分布；凋亡细胞也发蓝色荧光，但染色质凝集，核皱缩、 碎裂，细胞皱缩出芽，凋亡小体产生；坏死细胞发红色荧 光。正常组只可见极少量的的坏死细胞和凋亡细胞。模型 组可见大量的坏死细胞及凋亡细胞，猪去氧胆酸、牛磺熊 去氧胆各浓度和三七总皂苷均能够显著降低细胞坏死率 和凋亡率。 3 讨论 缺血和缺血再灌注性脑损伤是急性脑血管病的共 同病理环节，正常情况下，脑内只有少量糖原存在，一 旦脑组织缺血失去葡萄糖供应，脑内糖原迅速耗竭，引 起缺氧缺糖状态，代谢紊乱，毒性产物积聚，导致脑组 织神经细胞严重损伤。缺血再灌注性脑损伤过程中存 在着神经细胞的凋亡，抑制神经细胞凋亡的发生有利 于急性脑血管病缺血再灌注性脑损伤的治疗，中药可 万方数据 13 6 I S S N1 6 7 1 5 9 2 6C N2 1 1 4 7 0 R 洲z g l c k f c o m中国临床康复2 0 0 5 年5 月7 日 第9 卷第1 7 期 通过干预细胞凋亡过程阻止其进一步发生而发挥对神 经元损伤的保护作用，在这方面具有不可忽视的重要 作用。“。 、 表1 各组猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆对细胞死亡率、乳酸脱氯酶漏出 率、细胞存活率、细胞坏死率、细胞凋亡率的比较( j s ，n = 8 ，) 组别细胞死亡率 乳鐾譬摹酶细胞存活率 正常培养 缺氧缺糖 三七总皂 猪去氧胆 猪去氧胆 猪去氧胆 牛磺熊去 牛磺熊去 牛磺熊去 对照组 再给氧组 苷组 5 0 7 1 2 2 5 62 酸3 1 2 5w m o l L 浓度组3 4 I 酸1 5 6 3I L m o l L 浓度组 3 2 8 酸0 7 8 1w m o l L 浓度组 2 9 4 氧胆3 1 2 5t r m o l L 浓度组2 7 7 氧胆1 5 6 3w m o I L 浓度组2 6 8 氧胆0 7 8 1O , m o l L 浓度 2 6 2 l 2 22 0 14 - 5 8 9 2 6 6 4 7 6 6 7 d4 6 8 3 7 。 7 I o 4 6 6 5 6 0 8 2 84 9 8 5 3 。 9 8 。4 7 0 4 0 0 6 9 d4 8 5 2 7 。 9 4 d4 4 1 4 3 8 1 184 0 2 7 5 4 0 0 0 4 4 2 5 6 3 7 4 5 6 4 7 。 4 4 5 3 2 。 4 5 3 2 0 4 1 5 1 6 。 4 1 6 2 4 。 3 7 6 2 8 “ 4 0 1 1 8 “ F1 9 5 59 9 71 3 0 8 9 111 ；! !i ! ；! !19 ；! ! 组别细胞坏死率细胞凋亡率 与正常培养对照组相比，P 0 0 0 1 ；与缺氧缺糖再给氧组相比，P 0 0 5 ，。P 0 0 1 。P 0 0 0 l 牛磺熊去氧胆酸是熊胆粉特有的主要成分，含量达 2 5 6 8 饰一1 ，具有清热解毒等功效，对于脑卒中的 治疗具有良好的疗效。各种动物胆汁本草记载均有清 热解毒化痰功效，已有报道牛磺胆酸和牛磺鹅去氧胆 酸在镇咳、祛痰、抗炎方面效果相近i s l ，兔胆在镇静、镇 咳、抗电惊厥、常压耐缺氧等药理作用方面优于或接近 熊胆【9 】o 猪去氧胆酸是猪胆粉、猪胆膏特有的主要成 分，具有与熊胆粉类似的生物学活性】，但是否可以用 能够大量生产、价格低廉的猪胆粉替代价格昂贵的熊 胆粉应用于脑卒中急性期，尚缺乏确切的实验资料。本 文结果表明。 4 参考文献 1 司徒镇强，吴军正，主编细胞培养【M 】西安：世界图书出版公司，1 9 9 6 ：7 3 8 4 2 张壮，国彦芳，韦颖，等党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经 细胞凋亡的作用 J 】中国l 临床康复，2 0 0 5 ，9 ( 1 ) ：1 3 1 3 3 F a n gM ，Z h a n gH Q ，X u eS B ，e ta 1 A p o p t o s i sr e s i s t a n c ea n di t sr e v e r s a li nh a r - r i n g t o n i n er e s i s t a n tc e l ll i n e Y a oX u eX u eB a o1 9 9 4 ；2 9 ( 1 2 ) ：8 9 1 8 4 朱陵群，王硕仁，孙塑伦，等参麦注射液对大鼠海马细胞凋亡的影响【J 】 中国临床康复，2 0 0 2 ，6 ( 1 9 ) ：2 8 5 8 6 0 5 高唱，吴伟康，王景周，等H D 0 2 对慢性前脑缺血大鼠神经细胞凋亡中的影 响【J 】中国临床康复，2 0 0 3 ，7 ( 2 2 ) ：3 0 3 0 1 6 张启明，殷晓建，严克东，等高效液相色谱法直接测定熊胆粉中牛磺熊去 氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量【J 】药物分析杂志，1 9 9 3 ，1 3 ( 5 ) ：3 2 1 3 7 宋占军，邓振华，韩纠绶薄层扫描法测定熊胆中结合胆汁酸含量【J 药 物分析杂志，1 9 9 3 ，1 3 ( 3 ) ：1 9 4 6 8 梅和珊，石朝周，王凯平，等牛磺胆酸钠和牛磺鹅去氧胆酸钠的药效学比 较研究【J 】中国生化药物杂志，1 9 9 9 ，2 0 ( 4 ) ：1 9 8 2 0 0 9顾贤臣，李美德，常洁琴，等兔胆和熊胆的药效比较【J 】中国中药杂志， 1 9 9 4 ，1 9 ( 9 ) ：5 5 6 8 1 0 杨云，冯卫生，主编中药化学成分提取分离手册【M 】北京：中国中医药 出版社，1 9 9 8 ：2 4 4 中国临床康复第9 卷第，7 卿2 0 0 5 0 5 0 7 出版 C h i n e s eJ o u r n a lo fC l i n i c a lR e h a b i l i t a t i o n , M a y72 0 0 5V 0 1 9N o 1 7 银杏平颤方对帕金森病鼠黑质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶和 B c l 2 蛋白表达的影响蛐 孙红梅，张军，白丽敏，许红，吴海霞，崔龙 中医康复研究 北京中医药大学解剖教研室，北京市 1 0 0 0 2 9 通讯作者：孙红梅，女，1 9 6 2 年生，山东省烟台市人，汉族，2 0 0 4 年北京 中医药大学毕业，博士，教授，主要从事中医药防治脑病的基础研究。 h m s u n 1 6 3 c o r n 清华大学、香港浸会大学、北京中医药大学“中医研究计划”资助课题 ( 0 2 B J 4 ) - r 中图分类号：R 7 4 2 5 文献标识码：A 文章编号：1 6 7 1 5 9 2 6 ( 2 0 0 5 ) 1 7 0 1 3 6 0 3 收稿日期：2 0 0 5 0 3 0 2 修回E t 期：2 0 0 5 0 3 2 4 ( 1 7 S N Y W ) G i n k g ob i l o b ap i n g c h a nr e c i p ef o rt h ee x p r e s s i o no fC a s p a s e p r o t e i na n dB c l - 2i ns u b s t a n t i an i g r ai nm i c ew i t hP a r k i n s o n d i s e a s eS u nH o n g m e i Z h a n gJ u n ，B a it i m i n ，X uH o n g ，W uH o i x i a C u iL o n g ，D e p a r t m e n to fA n a t o m y ，B e i j i n gU n i v e r s i t yo fC h i n e s eM e d i c i n e ， B e i j i n g1 0 0 0 2 9 ，C h i n a C o r r e s p o n d e n c et o ：P r o f e s s o rS u nH o n g m e i D o c t o r ，D e p a r t m e n to f A n a t o m y ，B e i j i n gU n i v e r s i t yo fC h i n e s eM e d i c i n e ，B e i j i n g 1 0 0 0 2 9 ，C h i n a h m s u n 1 6 3 c o m S u p p o r t e db y ：t h eS t u d yS u b j e c to nT r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n ef r o mT s i “g h i l aU n i v e r s i t y ，H o n gK o n gJ i n h u iU n i v e r s i t ya n dB e i j i n gU n i v e r s i t yo f C h i n e s eM e d i c i n e ，N o 0 2 B J 4 - k R e c e i v e d ：2 0 0 5 一0 3 0 2A c c e p t e d ：2 0 0 5 0 3 2 4 A b s t r a c t A I M ：T oo b s e r v et h ee f f e c to ft h eg i n k g ob i l o b ap i n g c h a nr e c i p ea n di t st h r e e s e p a r a t e dp r e s c r i p t i o n so nt h ee x p r e s s i o no fC a s p a s e 一3 ，C a s p a s e 一9a n dB c l 一2 p r o t e i n si nt h es u b s t a n t i sn i g r ai nm i c ew i t hP a r k i n s o nd i s e a s ei ud i f f e r e n t t i m e sp o i n t s M E T H o D S ：7 r h ee x p e r i m e n tw a sp e r f o r m e di nt h eD e p a r t m e n to fA n a t o m y B e i j i n gU n i v e r s i t yo fC h i n e s eM e d i c i n ef r o mS e p t e m b e r2 0 0 2t oD e c e m b e r 2 0 0 3 T h ee x p e r i m e n t a la n i m a l sw e r ed i v i d e dr a n d o m l yi n t os i xg r o u p s ：n o r m a l g r o u p ，m o d e lg r o u p ，g n k g ob i l o b ap i n g c h a nr e c i p eg r o u p ，d e t o x i c a t i o ng r o u p ， p i n g g a ng r o u pa n ds t a s i s e l i m i n a t i n gg r o u p M i c ei na l lg r o u p sw e r es u b d i v i d e d i n t o1 4 a n d2 8 d a yg r o u p sa f t e rm o d e le s t a b l i s h m e n t , w i t h6m i c ei ne a c ht i m e p o i n t ，e x c e p t6 m i c ei nn o r m a lg r o u p M i c ee x c e p ti nn o r m a lg r o u pw e r ei n j e c t e d w i t h1 - m e t h y l4 - p h e n y ll ，2 ，3 ，6 - t e t r a h y d r o p y r i d i n e ( 3 0m g k gp e rd a y ) f o r f i v ed a y si n t oa b d o m i n a lc a v i t yt oe s t a b l i s hP a r k i n s o nd i s e a s em o d e l s F r o mt h e f i r s td a yo fe s t a b l i s h i n gm o d e l s ，m i c er e c e i v e d0 5m Lt r a d i t i o n a lC h i n e s e m e d i c i n e ( g i n k g ob i l o b ap i n g c h a nr e c i p ec o n t a i n i n g1 1 8g Ld r u g ，s e p a r a t e d p r e s c r i p t i o nc o n t a i n i n g0 6g Ld r u g ) M i c ei nm o d e lg r o u pr e c e i v e d0 5m L s a l i n e 7 r h ea n i m a l sw e r ek i l l e dr e s p e c t i v e l yo nt h e1 4 “a n d2 8 “d a y s I m m u n o h i s t o e h e m i s t r yt e c h n i q u ew a su s e dt oo b s