（中药学专业论文）微滤技术精制中药水提液的研究.pdf

摘要 摘要 微滤是基于筛分原理，对溶液中0 0 5 - - 1 0g m 的悬浮颗粒和一些大分子杂质 进行分离的技术，具有分离无相变，可在室温进行、节省能耗、操作简单易行等 特点。 本课题有针对性地选择4 种河南道地或常用中药材( 何首乌、大黄、金银花 和甘草) 的水提液进行了研究，实验考察了膜通量随时间的变化趋势和中药水提 液微滤前后在性状、浊度、总固体等方面的变化情况。结果显示：何首乌、大黄、 金银花和甘草的水提液经微滤技术精制后，透过液全部为澄清溶液，与水提液相 比浊度分别由6 3 5n t u 、 5 9 0n t u 、5 2 0n t u 、6 1 0n t u 降为4 6n t u 、4 4n t u 、 5 2n t u 、6 3n t u ，透过液中总固体去除率分别为6 7 9 、6 6 2 、4 5 7 和5 6 6 ， 澄清效果明显。采用高效液相色谱法和紫外分光光度法考察4 种中药水提液微滤 前后有效成分的变化情况。结果显示：有效成分二苯乙烯苷、大黄酸、绿原酸和 甘草酸在透过液中的含量分别是水提液的2 0 4 倍、1 5 6 倍、1 2 5 倍、1 2 3 倍，这 4 种有效成分在透过液中得到了富集；何首乌中的何首乌多糖在截留液中的含量是 水提液的1 9 6 倍，何首乌多糖在截留液中得到了富集。结果表明微滤技术对上述 4 种中药水提液有较好的精制效果。 对何首乌水提液微滤前后的样品对小鼠免疫作用的影响进行了对比试验。结 果表明：何首乌水提液、透过液、截留液对小鼠迟发型变态反应均有抑制作用， 说明三者都具有一定的抗炎活性。何首乌截留液与对照组和水提液比较，对小鼠 碳粒廓清有明显的促进作用。何首乌水提液、透过液、截留液均能提高小鼠b 淋巴细胞增长率，每组的最佳剂量为0 5 - - 1 01 1g m l ，三组的增强作用顺序为截 留液 水提液 透过液。 关键词：中药；微滤技术；精制；h p l c ；免疫作用 a b s t r a c t a b s t r a c t m i c r o f i l t r a t i o nt e c h n o l o g yi sat e c h n o l o g yw h i c hc a ns e p a r a t es u s p e n d e dp a r t i c l e s i ns i z ea b o v e0 0 5 10 “mu t i l i z i n gs i e v i n gp r i n c i p l e i t sa d v a n t a g e sl i e si n ：n o p h a s e - c h a n g ed u r i n gs e p a r a t i o np r o c e s s ，b e i n gc a r r i e do u ta tr o o mt e m p e r a t u r e ，s a v i n g e n e r g yc o n s u m p t i o n ，e a s yo p e r a t i o na n ds oo n t h i s s u b j e c t c h o s ep r o p o s e l yf o u re x t r a c to ft r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n e ( p o l y g o n u mm u l t i f l o r u m ，r h u b a r b ，l i c o r i c e a n dh o n e y s u c k l e ) t or e s e a r c h t h e e x p e r i m e n ts t u d i e do nt h et r e n do fm e m b r a n ef l u x 谢t ht i m ea n dt h ec h a n g e so f w a t e r e x t r a c to fc h i n e s em e d i c i n ei n 血ec h a r a c t e r sb e f o r ea n da f t e rm i c r o f i l t r a t i o n s u c ha s t u r b i d i t y ，t o t a ls o l i d s f o u rk i n d so fs o l u t i o nt h r o u g ht h em i c r o f i l t r a t i o nt u r n e dt ob e s e t t l e d t h et u r b i d i t yo ff o u rk i n d so fs o l u t i o nt h r o u g ht h em i c r o f i l t r a t i o nc o m p a r e d w i t ht h ew a t e re x t r a c t ，f r o m6 3 5n t u ，5 9 0n t u ，5 2 0n t u ，6 10n t ud o w nt o4 6n t u ， 4 4n t u ，5 2 n t u ，6 3n t u 。r e m o v a lr a t eo ft o t a ls o l i d sw e r e6 7 9 ，6 6 2 ，4 5 7a n d 5 6 6 t h ee f f e c to fc l a r i f yi ss i g n i f i c a n t u s eh p l ca n du vt os t u d yt h ec h a n g e so f t h ea c t i v ei n g r e d i e n ti nf o u rw a t e re x t r a c to fc h i n e s em e d i c i n eb e f o r ea n da f t e r m i c r o f i l t r a t i o n t h ec o n t e n to fa c t i v ei n g r e d i e n ts t i l b e n eg l u c o s i d e ，r h e i n ，c h l o r o g e n i c a c i da n dg l y c y r r h i z i ca c i di nt h es o l u t i o nt h r o u g ht h em i c r o f i l t r a t i o nm e m b r a n ew e r e 2 0 4t i m e s ，1 5 6t i m e s ，1 2 5t i m e s ，1 2 3t i m e st h a ni nw a t e re x t r a c t s t h ec o n t e n to f p o l y g o n u mm u l t i f l o r u mp o l y s a c c h a r i d ei n t h es o l u t i o nw h i c hd i dn o tt r a v e r s et h e m i c r o f i l t r a t i o nm e m b r a n ew a s1 9 6t i m e st h a ni nw a t e re x t r a c t s t h ei m p a c to fi m m u n ef u n c t i o no fp o l y g o n u mm u l t i f l o r u me x t r a c t so fw a t e r s a m p l e sb e f o r ea n da f t e rm i c r o f i l t r a t i o nw e r ec o m p a r e d t h r e es a m p l e sc o u l di n h i b i t d e l a y e dt y p eh y p e r s e n s i t i v i t y i nm i c e t h es o l u t i o nt h a td i dn o tt r a v e r s et h e m i c r o f i l t r a t i o nm e m b r a n ep r o m o t e dt h ec a r b o nc l e a r a n c ei nm i c e t h r e es a m p l e sc o u l d r a i s et h eb - l y m p h o c y t eg r o w t hr a t ei nm i c e t h eb e s td o s ef o re a c hs a m p l ew a s0 5 1 0 p g 。m l t h eo r d e ro fe n h a n c e m e n tp r o p e r t yo ft h et h r e es a m p l e si s ：t h es o l u t i o nt h a t d i dn o tt r a v e r s et h em i c r o f i l t r a t i o nm e m b r a n e w a t e re x t r a c t t h es o l u t i o nt r a v e r s et h e i i i m i c r o f i l t r a t i o nm e m b r a n e 河南大学硕士学位论文陈尚义 k e y w o r d s ：c h i n e s em e d i c i n e ；m i c r o f i l t r a t i o nt e c h n o l o g y ；r e f i n e ；h p l c ； i m m u n i f a c t i o n i v 关于学位论文独立完成和内容创新的声明 硼椭说一燃瀣一 彳吒麓参l 毫爹 ，夕胡。络、扣。 学位牵请零，| c 擘住论袁作者签名：t 。筐荭丕垄垒 解蕊：黔誉愁 学住获得者( 学位论文作者) 签名：玉壶遨 2 0 学位论文指导教师釜名： 2 0 第一章前言 第一章前言 膜分离是在2 0 世纪初出现，2 0 世纪6 0 年代后迅速崛起的一门分离新技术， 被喻为是2 1 世纪最有发展前途的绿色技术。膜分离技术是利用天然或人工合成的， 具有选择透过性的薄膜，以外界能量或化学位差为推动力，对双组分或多组分体 系进行分离、分级、提纯或富集的技术。 膜分离具有下述方面的特点：( 1 ) 膜分离通常是一个高效的过程。( 2 ) 大多 数膜分离过程都不发生相的变化，并且通常是在室温下进行，特别适用于对热敏 物质的处理。( 3 ) 膜分离过程一般无需从外界加入其它物质，可节约资源和保护 环境。( 4 ) 选择范围广，适用性强。 膜分离过程主要分为微滤、超滤、纳滤、反渗透、透析、电渗析、气体分离 等。膜分离技术目前已广泛应用于食品、医药、生物、环保、化工、冶金、能源、 石油、水处理、电子、仿生等领域。 第一节微滤技术简介 1 微滤技术的原理及特点 微滤技术是基于微孔膜发展起来的一种精密过滤技术，是开发最早、应用最 广、市场最大的滤膜技术。微滤技术是在压差推动力作用下进行的筛孔分离过程， 含有高分子溶质和低分子溶质的混合溶液流过膜表面时，溶剂和小于膜孔的低分 子溶质透过膜，成为透过液被收集，大于膜孔的高分子溶质则被膜截留而作为截 留液被收集。微滤技术一般分离大小为o 0 5 1 0g , m 以上粒子。在常温下进行， 有效成分损失极少，特别适用于热敏性物质分离。无相态变化，保持原有的 风味，能耗极低。无化学变化，典型的物理分离过程，不用化学试剂，产品 不受污染。适应性强，工艺简单，操作方便，易于自动化。陶瓷微滤膜分离 设备主要有膜、泵、料液筒、管路和控压阀门等组成。其核心部件是膜，陶 瓷膜是工业化中应用最多的一种无机膜，占据8 0 以上的市场，它是以陶瓷 河南大学硕士学位论文陈尚义 材料经特殊工艺制备而成的非对称膜，呈多通道管式结构。 2 微滤膜材料 微滤膜根据膜材料主要分为无机微滤膜和有机高分子微滤膜。无机微滤膜 的材料主要有氧化锆、氧化铝、多空玻璃、二氧化硅等；有机高分子微孔滤 膜的材料主要有聚乙烯、聚砜、聚酰胺、醋酸纤维素等。无机微滤膜与有机 高分子膜相比，具有以下性能特点：化学稳定性好，能耐酸、耐碱、耐有机溶 剂；抗微生物能力强，不与微生物发生作用，可以在生物工程和医学科学领域应 用；耐高温，适于处理高温、高粘度流体；机械强度高耐冲洗，易再生使用，寿 命长等，所以，无机微滤膜在工业中得到了广泛的应用。 3 微滤过程中膜的污染与控制 微滤过程中膜的污染问题严重影响膜的分离效果，也在一定程度上限制了微 滤技术的进一步推广。膜污染通常是膜表面的附着层和膜孔堵塞，针对不同的分 离体系，控制膜污染的方法主要有：原料液预处理；膜表面改性；外加电场、离 心场和超声波场；采用气体和液体两种介质进行高压反冲等。膜清洗方法通常分 为物理方法和化学方法。物理方法是指采用高压水清洗、海绵球机械清洗等去除 污染物；化学方法是采用对膜材料本身没有破坏性，对污染物有溶解或置换作用 的化学试剂对膜进行清洗。 4 微滤技术在中药领域的应用研究 中药的化学成分非常复九【l 】，通常含有生物碱、苷类、黄酮类、萜类、有机酸、 氨基酸、树脂、糖类、蛋白质、鞣质、植物色素、油脂和无机盐等，相对分子质 量从几十至几百万，如表1 1 所示。一般说来，相对分子质量高的物质主要是胶体 和纤维素等非药用成分或药用性较差的成分，而药物有效成分的相对分子质量一 般小于10 0 0 ，可以利用微滤技术对中药提取液进行除杂和澄清过滤，除出不溶性 微粒、细菌和部分大分子物质。近年类，微滤技术在中药领域中应用的研究很多。 2 第一章前言 4 1 微滤技术在富集中药有效成分的应用研究 4 1 1 富集黄酮类成分 董洁等嘲对黄芩、陈皮和淫羊藿的水提液进行微滤试验，微滤前后指标性成分 黄芩苷、橙皮苷和淫羊藿相对含量提高率分别为4 5 8 、7 3 4 和7 8 4 ；相对 成分转移率分别为7 5 8 4 、7 3 o o 和7 1 0 9 ；总固体去除率分别为2 7 5 5 、 3 2 2 5 和3 0 2 9 ，表明微滤对以上中药提取液具有较好的精制效果。金万勤等 【3 】用微滤法处理苦参水提液，与醇沉法相比，除杂率及有效成分总黄酮得率接近， 但微滤法操作简单，常温下进行，又省去了大量乙醇。 表1 ，l 部分中草药所含的主要成分的相对分子量 t a b 1 1r e l a t i v em o l e c u l a rw e i g h to ft h em a jo rc o m p o n e n t so f s o m ec h i n e s eh e r b a lm e d i c i n e s 河南大学硕士学位论文陈尚义 4 1 2 富集生物碱类成分 刘陶世等对黄连的水提液进行微滤试验，水提液微滤前为浑浊液体，微滤 后成为颜色变浅的澄明液体，其总固体去除率分别为1 5 3 8 ，有效成分小檗碱损 失率为1 0 4 6 ，有效成分损失率小于总固体去除率。金万勤等 3 1 用微滤法处理 枳实水提液，与醇沉法相比，除杂率及有效成分辛弗林得率接近，但微滤法操作 简单，常温下进行，又省去了大量乙醇。董洁等【：1 对青风藤和大青叶的水提液进行 微滤试验，微滤前后指标性成分青藤碱和靛玉红的相对含量提高率分别为8 4 8 和 5 1 7 ；相对成分转移率分别为8 1 3 6 、7 4 2 9 ；总固体去除率分别为2 9 8 4 和2 9 1 8 ，表明微滤对这两种中药提取液具有较好的精制效果。 4 1 3 富集萜类成分 姜淑【5 】对微滤三七水提液做了研究，三七提取液微滤前为浑浊液体，微滤后为 澄明液体，固体去除率为3 1 3 ，有效成分转移率为8 4 8 ，有效成分含量提高 率为2 3 5 ，说明微滤对三七提取液具有较好的精制效果。刘陶世等【- 】对白芍、 甘草、桔梗和生地黄的水提液进行微滤试验，水提液微滤前均为浑浊液体，微滤 后成为颜色变浅的澄明液体，其总固体去除率分别为3 5 5 5 、3 7 4 4 、2 4 1 9 和2 2 9 8 ，有效成分芍药苷、甘草酸、桔梗皂甙和梓醇损失率分别为2 0 8 1 、 3 2 8 3 、2 7 2 7 和2 8 3 3 ，有效成分损失率一般小于总固体去除率。 4 1 4 富集苯丙素类成分 吴正奇等【6 】研究了微滤、超滤和纳滤处理金银花水提液后绿原酸的含量变化， 微滤后绿原酸的含量由有2 8 提高到3 7 。董洁等1 2 厚朴的水提液进行微滤试 验，微滤前后指标性成分和厚朴酚相对含量提高率8 6 4 ，相对成分转移率为7 0 5 9 ，总固体去除率为3 4 9 0 ，表明微滤对厚朴提取液具有较好的精制效果。 4 第一章前言 4 2 制备中药制剂 崔元璐等【7 】采用吸附澄清高速离心一微滤法制备菖蒲益智口服液，人参皂苷和 多糖的含量高于醇沉法，可以实现连续化生产，具有简化工艺，生产周期短，提 高制剂稳定性的优点。柴国墉等【8 】用0 4 5 啪、2u l t i 、4 5u l t i 的微滤膜和1 0 0 0 0 、3 0 0 0 0 道儿顿的超滤膜对血府逐瘀口服液进行了终端膜分离试验，结果表明膜分离可以 使产品得到澄清，芍药苷的含量提高了2 - - - 6 。 姜淑等1 9 1 考察了微滤技术对小儿健脾平肝颗粒剂水提液的澄清效果，结果表明 微滤法处理的水提液澄清除杂效果与醇沉技术基本相近，但微滤液有效成分含量、 总量、转移率、提高率等各相指标却优于醇沉技术。刘陶世等1 1 0 用孔径为0 2 u r n 的 无机陶瓷膜对排毒净颗粒的水提液进行微滤，水提液微滤前均为浑浊液体，微滤 后成为颜色变浅的澄明液体，总固体去除率为2 7 5 8 ，绿原酸和大黄酸的损失率 分别为18 2 8 和2 2 8 6 ，对排毒净颗粒的水提液具有较好的澄清除杂效果。 第二节何首乌研究概述 何首乌为蓼科植物何首乌( p o l y g o n u mm u l t i f l o r u m t h u n b ) 的干燥块根。 1 化学成分 何首乌含有多种化学成分，如葸醌类、二苯乙烯苷类、磷脂类和多糖类等。 蒽醌类主要有大黄素、大黄素甲醚、大黄素1 。6 二甲醚、大黄素8 甲醚、羟基 大黄素、( ) 羟基大黄素8 甲醚、2 乙酰基大黄素；二苯乙烯苷类主要有：2 ，3 ，5 ， 47 四羟基二苯乙烯2 0 - f l - d 一葡萄糖苷、( z ) 2 ，3 ，5 ，47 一四羟基二苯乙烯2 伊 f l - d 葡萄糖苷、2 ，3 ，5 ，47 四羟基二苯乙烯2 ，3 二伊d 葡萄糖苷、2 ，3 ，5 ，4 7 四羟基二苯乙烯2 0 ( 6 ”d 乙酰基) 一f l - d 葡萄糖苷、2 ，3 ，5 ，47 四羟基二苯乙 烯2 d ( 6 ”d 卅d 吡喃葡糖) f l - d 吡喃葡糖苷；磷脂类主要有：1 o 正十八烷酰 2 d - 47 77 正十二碳二烯酰3 d 磷脂酸d - 夕d 葡萄糖苷，1 d 正十八烷酰 2 - 0 a 4 77 正十二碳二烯酰3 0 磷脂酸0 ( 6 ”0 卅d 葡萄糖) 8 - d 葡萄糖 5 河南大学硕+ 学位论文陈尚义 2 二苯乙烯苷和何首乌多糖的含量测定方法 中国药典2 0 0 5 年版用高效液相色谱法测定二苯乙烯苷的含量，以十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂；以乙腈水( 2 5 ：7 5 ) 为流动相，检测波长为3 2 0 n m 。理论 塔板数以2 ，3 ，5 ，47 一四羟基二苯乙烯2 d - 伊d 葡萄糖苷计不低于2 0 0 0 。t 1 7 1 二苯乙烯苷的其它测定方法主要有：薄层扫描法【1 8 】，高效毛细管电泳法【1 9 】、流动注 射化学发光法1 2 0 1 等。何首乌多糖的含量测定方法主要是苯酚一硫酸法制得糖醛衍生 物，用紫外分光光度法测定含量，测量波长为4 9 0 n m 。【2 l 】 3 提取分离方法 何首乌的提取分离方法主要有水加热回流法、乙醇加热回流法、微波辅助萃 取法、超声波辅助提取法、超临界c 0 2 萃取法、大孔吸附树脂法等。水加热回流 法提取工艺为何首乌饮片与水比例1 ：1 0 5 ，每次加热提取1 5h ，提取3 次，此 条件下何首乌中二苯乙烯苷和何首乌多糖提取量分别达2 7 0o 1 2 2 和6 2 3 ；乙 醇加热回流法提取条件为乙醇6 0 倍量和回流时间3 0m i n ，并测得此条件下制首乌 二苯乙烯苷的含量为1 2 1 2m g g t 2 3 ；与传统的加热回流法相比，微波萃取法可以减 少乙醇用量，缩短萃取时间，提高二苯乙烯苷含量1 2 4 1 超声波辅助提取法也可以缩 短提取时间，提高提取效率t 2 s l ；超临界c 0 2 萃取法以萃取压力2 8m p a ，萃取温度 6 0o c ，解析釜压力为6m p a ，解析釜温度6 5o c 的条件，二苯乙烯苷的含量达4 5 5 m g g t ：e j ；采用d 6 0 0 大孔树脂纯化二苯乙烯苷，最佳纯化工艺为：体积分数3 0 乙醇洗脱，p h 4 0 ，流速3 m l m i n ，纯度达8 3 3 。闭 4药理作用 4 1 降血脂及抗动脉粥样硬化作用 二苯乙烯苷( 7 0 ) 能够减少脑ab 的生成，降低血清胆固醇、低密度脂蛋白 6 第一章前言 胆固醇水平，改善血液流变学，具有治疗a d 的应用前景。二苯乙烯苷能减弱 血浆中胆固醇、低密度脂蛋白、低密度脂蛋白胆固醇的增长，可能与抑制泡沫细 胞中的i c a m 1 和v e g f 的表达有关。l ：9 】 4 2 抗衰老作用 何首乌水提液可明显降低老年小鼠脑和肝组织丙二醛( m d a ) 含量，增加脑内 单胺类递质( 5 羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺) 水平，增强s o d 活性，还能明显 抑制老年小鼠脑和肝组织内单胺氧化酶b 的活性，从而延缓衰老和疾病的发生 1 3 0 。制首乌多糖可明显升高d 半乳糖所致衰老小鼠血中s o d 、c a t 、g s h l p x 的 活力，降低血浆、脑匀浆中l p o 的水平。【3 l 】 4 3 抗炎与免疫作用 何首乌乙醇提取物可明显抑n - 甲苯所致的小鼠耳急性炎症肿胀和角叉菜 胶所致的足跖肿胀，且维持时间较长，对醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性亢 进及蛋清所致大鼠足肿胀有显著抑制作用，在醋酸所致小鼠扭体反应实验中发现， 其还有一定的镇痛作用i ，：1 。何首乌水提物能明显促进小鼠脾细胞对c o n a 和l p s 的增殖反应，并且本身对脾细胞具有丝裂原作用。进一步研究表明，何首乌能明 显增强小鼠特异抗体分泌细胞的功能，增强异型小鼠脾细胞诱导的迟发型超敏反 应，并能促进细胞毒性t 淋巴细胞对靶细胞的杀伤功能【3 3 1 。制何首乌多糖可显著 提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，促进溶血素及溶血空斑形 成，促进淋巴细胞转化，有较好的免疫增强作用阻，。何首乌多糖能显著拮抗环磷酰 胺所致免疫功能低下小鼠的免疫器官重量减轻和白细胞数量减少，明显增加小鼠 腹腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数，显著增加血清溶血素含量，且能明显促进t 淋巴细胞酯酶阳性率和c o n a 诱导的脾t 淋巴细胞增殖反应。【，s 】 4 4 防治老年痴呆和提高记忆能力作用 何首乌中的二苯乙烯苷明显改善模型大鼠的学习记忆能力，降低血清t c 水 7 河南大学硕士学位论文陈尚义 平，说明二苯乙烯苷可改善高胆固醇血症引起的学习记忆障碍，其作用机制与降 低血清t c 、改善脂质代谢等作用有关1 3 6 1 。何首乌水提物能提高谷光甘肽过氧化物 酶活性，降低脑和血清中乙酰胆碱脂酶的活性，证明何首乌水提物能显著改善因 注射夕淀粉样蛋白片段2 5 - - - 3 5 引起的认知缺陷。1 3 7 4 5 抗肿瘤作用 何首乌中二苯乙烯苷具有抑制蛋白激酶c 的作用，从而抑制肿瘤生长1 3 8 1 。何 首乌水提物有抗染色体突变活性，此活性随给药浓度的降低而降低。何首乌的抗 癌、抗诱变活性可能与何首乌的抗氧化、促进或彻底修复d n a 的作用有关。1 3 9 1 4 6 其他作用 何首乌煎剂使去卵巢大鼠的骨小梁面积百分率( t b a r ) 增加( p 第二章微滤技术精制中药水提液的研究 2 微滤 将5 5 0 0m l 提取液加入无机陶瓷膜料筒中，加入蒸馏水5 5 0 0m l ，进行微滤， 每隔3m i n 记一次膜通量，过滤结束，测量透过液与截留液的体积，分别为7 0 5 0m l 和3 7 2 0m l ( 膜分离设备的最小循环量约为3 5 0 0m l ) 。取透过液1 0 0m l ，减压浓 缩至干，得到样品b 3 ，另取5 0m l 留样待测；取截留液1 0 0m l ，减压浓缩至干， 得到样品c 3 ，另取5 0 m l 留样待测。 3 含量测定 3 1 色谱条件与系统适应性 色谱柱：迪马柱( 2 5 0m m 4 6m m ，5 岬) ；流动相：乙腈0 4 磷酸溶液( 1 3 ： 8 7 ) ；检测波长：3 2 7 n m ；柱温：2 5 ；流速：1 0m l m i n 。理论塔板数按绿原酸计 不少于1 0 0 0 。 3 2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品3 9 0m g 置1 0m l 容量瓶中，加5 0 甲醇液稀释至 刻度配制成3 9 0 0 p g m l 的储备液，精密量取储备液2m l 置1 0m l 容量瓶中， 加5 0 甲醇稀释至刻度，摇匀，0 4 5 岬微孔滤膜滤过，取续滤液，即得浓度为 7 8 0 肛触的对照品溶液。 3 3 供试品的制备 精密称取样品a 31 5 5 9m g ，样品b 31 4 3 9m g ，样品c 31 5 7 8m g ，置于1 0m l 容量瓶中，用5 0 甲醇溶液超声溶解，放置至室温后定容至刻度，用0 4 5 岬微孔 滤膜过滤，取续滤液即得。 3 5 河南大学硕士学位论文陈尚义 3 4 线性关系考察 分别取对照品溶液2l a l 、6p l 、1 0 “l 、1 4 皿、1 8p l 、2 2 此，测定峰面积， 以峰面积积分值( y ) 对进样量( x ) 进行线性回归， 得回归方程 y = 2 6 9 9 2 3 1 7 3 x + 3 6 0 9 6 5 ，r = 0 9 9 9 9 ( 见图2 1 4 ) 。结果表明，绿原酸检测量在0 1 5 6 1 7 1 6l x g 范围内呈现良好的线性关系。 4 0 0 0 0 0 0 0 3 5 稳定性试验 00 5 进样量( u g ) 图2 1 4 绿原酸标准曲线 f i g 2 14t h es t a n d a r dc u r v eo fc h l o r o g e n i ca c i d 1 5 取浓度为7 8 0 “g m l 的绿原酸对照品溶液，分别于0 、2 、4 、8 、1 2 h 进样l o p l 测定峰面积，r s d 为0 9 4 ( 见表2 1 4 ) ，结果表明，绿原酸在1 2 h 内稳定。 3 6 精密度试验 按上述色谱条件，取浓度为7 8 01 t g m l 的绿原酸对照品溶液，分别连续进样 5 次，每次进样1 0 此测定峰面积，r s d 为o 8 6 ( 见表2 - 1 5 ) 。 o o 0 o 0 o o o 0 o o 0 o 0 o o o o q u o 厶 1 娶喧警 第二章微滤技术精制中药水提液的研究 3 7 重现性试验 精密称定样品a 31 0 m g ，5 份，按供试品的制备和测定方法，计算样品百分含 量，r s d 为1 7 4 ( 见表2 1 6 ) 3 8 加样回收率试验 取样品a 36 份，每份约1 0 m g ，精密称定，精密加入绿原酸储备液适量，按“3 3 项下的方法制备供试品溶液，按上述条件进行测定，结果见表2 1 7 3 9 样品测定 取供试品溶液，进样量2 0 此，记录色谱图峰面积，按标准曲线法进行计算。 表2 1 4 稳定性试验结果 t a b 。2 14s t a b i l i t yo fh p l cm e t h e d 3 7 河南大学硕+ 学位论文陈尚义 表2 1 5 精密度试验结果 t a b 2 15 p r e c i s i o no fh p l cm e t h e d 表2 1 6 重现性试验结果 t a b 2 - 16r e p e a t a b i l i t yo fh p l cm e t h e d ( n 2 5 1 3 8 第二章微滤技术精制中药水提液的研究 表2 1 7 收回率试验结果 t a b 2 - 17r e c o v e r yo fh p l cm e t h e d ( n = 6 、 4 总固体的测定 按2 0 0 5 年版中国药典( 一部) 中附录x a 法测定。 5 浊度的测定 分别取水提取液、透过液、截留液3 0 m l 加入水样杯内，放入浊度计样品室内， 按仪器操作方法测定供试溶液的浊度。 6 实验结果与数据处理 金银花水提液为黄绿色浑浊溶液，过膜后的透过液为黄色澄清溶液，截留液 为黄绿色浑浊溶液，透过液中绿原酸含量是水提液的1 2 5 倍，透过液中总固体去 3 9 河南大学硕士学位论文陈尚义 除率为4 5 7 ，浊度由5 2 0n t u 降为5 2n t u 。膜通量的衰减变化见图2 1 5 1 金银 花水提液的微滤效果见图2 1 6 - - 一1 9 和表2 1 8 。 望 晏 6 0 f5 0 皇 4 0 o3 0 理2 0 型1 0 o o2 04 06 08 0 时间( m i n ) 图2 1 5 膜通量衰减图 f i g 。2 - 15t h ed e c a yo f f l u xo fm e b r a n e 0 02 55 07 51 0d1 25 1 50 1 752 0 1 2 2 25 2 5 02 7 53 m i n l l t e $ 图2 1 6 绿原酸对照品h p l c 色谱图 f i g 2 16h p l cc h r o m a t o g r a mo f c h l o r o g e n i ca c i d 0 1 0 0 0 8 0d 6 0 0 4 00 2 0 0 0 0 0255 o7 51 0 0 1 2 5 150 1 752 0 02 252 5 02 75 m i n u t , s 图2 1 7 样品a 3h p l c 色谱图 f i g 2 - 17h p l cc h r o m a t o g r a mo f s a m p l e sa 3 5 j_二iiiiii 一 伫恤 宝 叫： 0 0 0 o o o 0 第二章微滤技术精制中药水提液的研究 0 02 55 07 51 00 1 2 与150 1 752 0o 2 252 502 75 m i n t a e s 002 55 07 51 001 25 1 50 1 75 2 00 2 2 5 2 502 75 ： m i n u t e s 图2 - 18 样品b 3h p l c 色谱图图2 1 9 样品c 3h p l c 色谱图 f i g 2 18h p l cc h r o m a t o g r a mo f s a m p l e sb 3 f i g 。2 - 19h p l cc h r o m a t o g r a mo f s a m p l e sc 3 表2 18 金银花水提液的微滤效果 t l b 2 18t h em i c r o f i l t r a t i o ne f f e c to ff l o s l o n i c e r a ee x t r a c t 注：固体去除率( ) = ( 水提液总固体透过液总i 古i 体) 水提液总固体1 0 0 第四节微滤技术精制甘草水提液的研究 1 甘草水提液的制备 取甘草饮片，粉碎，过2 0 目筛，称取2 0 0g ，加入1 0 倍量水煎煮1h ，过滤， 收集滤渣，加入1 0 倍量水煎煮1h ，过滤，收集滤渣，加1 0 倍量水煎煮1 h ，过滤， 合并三次滤液，即得水提取液，共计5 4 5 0m l 。取提取液1 0 0m l ，减压浓缩至干， 得到样品，另取提取液5 0m l 留样待测 4 1 0 0 0 0 0 0 望0 0 0 0 0 0 0 0 丑i o 河南大学硕士学位论文陈尚义 2 微滤 将5 3 0 0m l 提取液加入无机陶瓷膜料筒中，加入蒸馏水5 3 0 0m l ，进行微滤， 每隔3m i n 记一次膜通量过滤结束，测量透过液与截留液的体积，分别为6 4 1 0m l 和3 6 5 0m l ( 膜分离设备的最小循环量约为3 5 0 0m l ) 。取透过液1 0 0m l ，减压浓 缩至干，得到样品b 4 ，另取5 0m l 留样待测；取截留液1 0 0m l ，减压浓缩至干， 得到样品c 4 ，另取5 0m l 留样待测。 3 含量测定 3 1 色谱条件与系统适应性 色谱柱：依利特柱( 1 5 01 t u t i 4 6i n l t l ，5g i n ) ；流动相：甲醇一0 2 m o l 1 醋酸铵 溶液冰醋酸( 6 7 ：3 3 - 1 ) ；流速：1 0m l m i n ，柱温：2 5 。c ；检测波长：2 5 0r l l t l g 理论塔板数按甘草酸峰计算不小于2 0 0 0 。 3 2 对照品溶液的制备 精密称取甘草酸单铵对照品2 1 0m g 置1 0m l 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度 摇匀，0 4 5 岬微孔滤膜滤过，取续滤液，即得浓度为2 1 0 0 肛g m l 的对照品溶液。 3 3 供试品的制备 精密称取样品1 4 1 3m g ，样品b 49 8 8m g ，样品c 49 0 6m g ，置于1 0m l 容量瓶中，用甲醇溶液超声溶解，放置至室温后定容至刻度，用o 4 5 岬微孔滤膜 过滤，取续滤液即得。 3 4 线性关系考察 分别取对照品溶液2g l 、6l a l 、1 0i t l 、1 41 t l 、2 01 t l ，测定峰面积，以峰面积 4 2 第二章微滤技术精制中药水提液的研究 积分值( 对进样量( x ) 进行线性回归，得回归方程y = 6 1 4 1 3 0 x + 2 4 0 3 8 ( r = o 9 9 9 9 ) ( 见图3 - 2 0 ) 。结果表明：甘草酸单铵检测量在0 4 2 4 2 0 嵋范围内与峰面积积分 值线性关系良好。 3 0 0 0 0 0 0 2 5 0 0 0 0 0 。，2 0 0 0 0 0 0 漤 魁1 5 0 0 0 0 0 磐 1 0 0 0 0 0 0 5 0 0 0 0 0 o ol2345 进样量( u g ) 图2 2 0 甘草酸单铵标准曲线 f i g + 2 - 2 0 t h es t a n d a r dc u r v eo fa m m o n i u mg l y c y r r h i z i n a t e 3 5 稳定性试验 取浓度为2 1 0 0i t w m l 的甘草酸单铵对照品溶液，分别于0 、2 、4 、8 、1 2 h 进 样1 0 i _ t l 测定峰面积，r s d 为1 6 2 ( 见表2 1 9 ) ，结果表明，甘草酸单铵在1 2 h 内稳定。 3 6 精密度试验 按上述色谱条件，取浓度为2 1 0 0l x g m l 的甘草酸单铵对照品溶液，分别连续 进样5 次，每次进样1 0 此测定峰面积，r s d 为0 2 5 ( 见表2 - 2 0 ) 。 4 3 河南大学硕+ 学位论文陈尚义 3 7 重现性试验 精密称定样品a 41 5 m g ，5 份，按供试品的制备和测定方法，计算样品百分含 量，r s d 为0 9 5 ( 见表2 2 1 ) 3 8 加样回收率试验 取样品a 46 份，每份约1 0 m g ，精密称定，精密加入甘草酸单铵对照品溶液 适量，按“3 3 项下的方法制备供试品溶液，按上述条件进行测定，结果见表2 2 2 3 9 样品测定 取供试品溶液，进样量2 0 此，记录色谱图峰面积，按标准曲线法进行计算。 表2 1 9 稳定性试验结果 t a b 2 - 19s t a b i l i t yo fh p l cm e t h e d 第二章微滤技术精制中药水提液的研究 表2 2 0 精密度试验结果 t l b 2 2 0 p r e c i s i o no fh p l cm e t h e d 表2 2 1 重现性试验结果 t a b 2 21r e p e a t a b i l i t yo fh p l cm e t h e d ( n = 5 、 4 5 河南大学硕士学位论文陈尚义 表2 2 2 回收率试验结果 t a b 。2 2 2r e c o v e r yo fh p l cm e t h e d ( n = 6 1 4 总固体的测定 按2 0 0 5 年版中国药典( 一部) 中附录x a 法测定。 5 浊度的测定 分别取水提取液、透过液、截留液3 0 m l 加入水样杯内，放入浊度计样品室内， 按仪器操作方法测定供试溶液的浊度。 6 实验结果与数据处理 甘草水提液为棕灰色浑浊溶液，过膜后的透过液为棕黄色澄清溶液，截留液 为棕灰色浑浊溶液，透过液中甘草酸含量是水提液的1 2 3 倍，透过液中总固体去 第二章微滤技术精制中药水提液的研究 除率为5 6 5 9 ，浊度由6 1 0n t u 降为6 3n t u 。膜通量的衰减变化见图2 2 1 ；甘 草水提液微滤效果见图2 - 2 2 - 2 5 和表2 2 3 。 5 0 4 5 4 0 3 5 3 0 2 5 2 0 1 5 l o 5 o 厂 o2 04 06 08 0 时间( r a i n ) 图2 2 1膜通量衰减图 f i g 2 - 21t h ed e c a yo ff l u xo f m e b r a n e 图2 2 2 甘草酸单铵对照品h p l c 色谱图图2 2 3 样品a 4h p l c 色谱图 f i g 2 2 2h p l cc h r o m a t o g r a mo f f i g 2 2 3h p l cc h r o m a t o g r a mo f g l y c y r r h e t i n i ca c i ds a m p l e sa 4 4 7 氅-【v-囟d累 河南大学硕士学位论文陈尚义 图2 2 4 样品b 4h p l c 色谱图 f i g 2 - 2 4h p l cc h r o m a t o g r 锄o f s a m p l e sb 4 图2 2 5 样品c 4h p l c 色谱图 f i g 2 - 2 5h p l cc h r o m a t o g r a mo f s a m p l e sc 4 表2 2 3 甘草水提液的微滤效果 t a b 。2 2