（临床兽医学专业论文）重庆产杜仲叶的质量及指纹图谱研究.pdf

摘要 曼量曼曼量曼曼曼曼量皇曼曼量鲁毫i oi ；e e i i 一。e e i ；i il i 暑曼量 重庆产杜仲叶的质量及指纹图谱研究 临床兽医学硕士研究生马金花 指导教师王健教授 摘要 杜仲( e u c o m m i au l m o i d e so l i v e r ) 为杜仲科杜仲属植物。具有显著的清热解毒、抗菌消炎、保肝 利胆及提高机体免疫力等作用，具有良好的发展前景。杜仲在我国应用已有两千多年的历史，传 统以皮入药。张康健等研究表明，杜仲叶和皮含有基本相同的化学成分，且具相同药效，某些成 分含量比皮还高。杜仲叶现已被中国药典( 2 0 0 5 年版) 收录，并规定绿原酸为质量控制的指 标性成分。重庆是杜仲的主产区之一，为更好的开发利用这一名贵中药，控制其质量，本课题对 重庆产杜仲叶的质量进行了系统的研究，主要内容： l 重庆产杜仲叶生药学鉴定 通过观察重庆杜仲叶的外观性状、显微结构以及薄层色谱鉴别，对杜仲叶进行生药学鉴定。 结果：重庆不同产地杜仲叶外观性状一致：不同年龄杜仲叶的显微结构相似；薄层色谱鉴别发现， 样品色谱图在与对照药材、绿原酸对照品色谱图相应的位置上显示相同颜色的荧光斑点。说明杜 仲叶的外观性状与产地关系不大，不同年龄杜仲叶显微结构差异不大，薄层色谱鉴别表明重庆杜 仲叶样品的真实性。 参照中国药典( 2 0 0 5 年版) 规定的检测内容，对杜仲叶的水分、总灰分、酸不溶性灰分 及醇溶性浸出物等进行检查，结果均符合中国药典杜仲叶项下有关规定，表明重庆产杜仲叶 质量稳定。 2 重庆产杜仲叶重金属的测定 运用原子吸收分光光度法和原子荧光光度法测定重庆产杜仲叶药材铅、镉、砷的含量。结果： 铅、镉的含量均符合标准，但部分地区产杜仲叶样品砷的含量超标。因此，应增加对重庆产杜仲 叶砷含量的监控。 3 重庆产杜仲叶绿原酸含量的测定 首先考察了不同提取溶剂、提取方式对绿原酸提取率的影响，并用正交设计法优化了绿原酸 的提取工艺；然后采用高效液相色谱法，测定并比较了重庆不同产地杜仲叶、皮中绿原酸的含量； 结果：重庆各区县杜仲叶中绿原酸含量有差异以南川、城口产含量较高；杜仲叶绿原酸含量与 树龄呈负相关，且杜仲树叶的绿原酸含量远高于树皮：不同采收月份杜仲叶绿原酸含量差异极显 著( p 0 0 1 ) ，以6 月份采收的含量最高。城口应作为杜仲的重点种植区；杜仲叶的药用功效确 实，值得开发利用，且利用杜仲幼树叶提取绿原酸，可作为生产绿原酸的新途径：采收时间对杜 仲叶绿原酸的含量影响很大，6 月采收最佳。 4 重庆杜仲叶h p l c 指纹图谱的建立 摘要 用h p l c 法对l o 杜仲叶样品进行分析，对色谱峰进行统计，得到1 8 个共有峰，从中筛选出 1 3 强峰作为特征指纹峰，并对此1 3 强峰的相对峰面积和相对保留时间进行统计，得到重庆产杜 仲叶药材的数字化特征指纹图谱。该数字化指纹图谱可以有效控制重庆杜仲叶的质量。 5 重庆杜仲叶质量标准的建立 在全文实验研究的基础上，初步建立了重庆产杜仲叶的质量标准，为重庆产杜仲叶质量控制 提供了基础数据。 关键词：杜仲叶质量研究指纹图谱重庆 a b s t r a c t r e s a r c ho nq u a l i t ya n d f i n g e r p r i n to f f o t i u me u c o m m i ao fc h o n g q i n g i t u m m a s t e rc a n d i d a t e ：m aj i n h u a a d v i s o r ：p r o w a n gj i a n a b s t r s c t e u c o m m i a , ( e u c o m m i au l m o i d e sd 脚e r ) ，w h i c hh a sf u n c t i o n so fd e t o ) 【i f i c a t i o n , a n t i b a c t e r i a l ， a n t i - i n f l a m m a t od i ：, c h o l e r e t i ca n ds i g n i f i c a n ti m m u n i t y e n h a n c e m e n t , h a sag o o dp r o s p e c t i th a sb e e n u s e df o rt h o u s a n d so f y e a r s e u c o m m i ai su s e df o rt r a d i t i o n t h er e s e a r c hs h o w e dt h a tf o l i u m e u c o m m i ah a dt h es a m ec h e m i c a lc o m p o s i t i o na n de f f e c t sw i t he u c o m m i ae s s e n t i a l l y ，e v e ns o m ec e r t a i n c o m p e n t si nf o l i u me u c o m m i aw e r eh i g h e rt h a nt h a to fi ne u c o m m i a f o l i u me u c o m m i ah a db e e n i n d e x e db y ( c h i n e s ep h a r m a c o p o e i a ( 2 0 0 5e d i t i o n ) ，a n dm a k ec h l o r o g e n i ca c i da st h ec o m p o n e n t i n d i c a t o ro f t h eq u a l i t yc o n t r 0 1 c h o n g q i n gi so n eo f t h em a i no r i g i no f e u c o m m i a i no r d e rt ot a k e a d v a n t a g eo f t h i sc h i n e s eh e r b a la n dt oc o n t r o li t sq u a l i t y , w ed 0r e s e a r c h e so nt h eq u a l i t yo f f o l i u m e u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n gs y s t e m a t i c a l l y t h i sc o n t e n tm a i n l yi n c l u d e ： 1p h a r m a c o g n o s yi d e n t i f i c a t i o no ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n g w eh a v ed o n er e a e a r c h e so nt h ep h a r m a c o g n o s yi d e n t i f i c a t i o nb yo b s e r v i n gt h eo u t w a r d a p p e a r a n c e ，m i c r o s t r u c t u r e a n dt h et l ci d e n t i f i c a t i o no ff o l i u me u c o m m i a p r o d u c e d i n c h o n g q i n g r e s u l t s ：t h eo u t w a r da p p e a r a n c e so f f o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n gs h o w e dn o d i f f e r e n c e s ；t h em i c r o s t r u c t u r eo fd i f f e r e n ta g e so ff o l i u me u c o m m i aw e r es i m i l a r 1 n h et l ch a df o u n d t h a tt h es a m p l e sh a dt h es a m ec o l o u rf l u o r e s c e n ts p o t s i ts h o w e dt h a tt h eo u t w a r da p p e a r a n c eo ff o l i u m e u c o m m i ah a dl i t t l et od ow i t l lt h eo r i g i n , t h em i c r o s t r u c t u r eo fd i f f e r e n ta g e so ff o l i u me u c o m m i ah a d l i t t l ed i f f e r e n c e ，a n dt l ci d e n t i f c a t i o nd e c l a r e dt h ea u t h e n t i c i t yo ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di i l c h o n g q i n g a c c o r d i n gt ot h e c h i n e s ep h a r m a c o p o e i a ) ) ( 2 0 0 5e d i t i o n ) ，w ed i dt h ef o l l o w i n ge x a m i n a t i o n s ， m o i s t u r e ，t o t a la s h , a c i di n s o l u b l ea s ha n de t h a n o l - s o l u b l ee x t r a c t f i n a l l y , t h er e s u l t sa l lc o i n c i d e dw i t h t h es t a n d a r d s i tp o i n t e dt h a tt h eq u a l i t yo ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n gw a ss t a b l e 2d e t e r m i n a t i o no fh e a v ym e t a l so ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n g d e t e r m i n a t i o no fp b ，c d ，a so ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n gw e r es t u d i e db ya t o m i c a b s o r p t i o ns p e c t r o m e t r ya n da t o m i cf l u o r e s c e n c es p e c t r o m e t r y r e s u l t ss h o w e dt h a tt h ep ba n dc d c o n t e n t sc o n f o r m e dw i t ht h es t a n d a r d s ，b u tt h ea sc o n t e n t so ff o l i u me u e o m m i ap r o d u c e di ns o m e a r e a sw e r ee x c e s s i v e s o ，t h ec o n t e n t so fa so ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n gs h o u l db e f u r t h e rm o n i t o r e d 3d e t e r m i n a t i o no fc h l o r o g e n i ca c i do ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n g 两南大学硕士学位论文 f i r s t l y t h ed i f f e r e n te x t r a c t i o ns o l v e n t sa n dw a y sw e 聘s t u d i e d t oo b s e r v et h ee f f e c t so nc h l o r o g e n i c a c i de x t r a c t i o nr a t e o r t h o g o n a ld e s i g nw a su s e dt oo p t i m i z et h ee x t r a c t i o no f c h l o r o g e n i ca c i dp r o c e s s t h e n , t h ec h l o r o g e n i ca c i di nf o l i u me u c o m m i aa n de u c o m m i aw e r em e a s u r e db yh p l c a sar e s u l t , t h ec o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i do ff o l i u me u c o m m i ao fd i f f e r e n ta r e a so fc h o n g q i n gh a d d i f f e r e n c e ，a n dt h ec o n t e n t so f t h es a m p l e sf r o mn a n c h u a na n dc h e n g k o uw e r eh i g h e r t h es t u d ya l s o f o u n dt h a tc o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i do ff o l i u me u c o m m i aw a sn e g a t i v e l yc o r r e l a t e dw i t ha g e s ，b e s i d e s ， t h ec o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i di nf o l i u me u c o m m i aw a sm u c hh i g h e rt h a nt h a to fi ne u c o m m i a t h e c o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i do ff o l i u me u c o m m i ah a r v e s t e da td i f f e r e n tt i m eh a ds h o w nas i n i g i f i c a n t d i f f e r e n c e ( p 0 o1 ) ，t h es a m p l e sh a r v e s t e di nj u n ew e r et h eh i g h e s t w ec a ns e ef r o mt h ea b o v er e s u l t s t h a tn a n c h u a na n dc h e n g k o us h o u l db et h ed o m i n a t e dp l a n t i n ga r e a s f o l i u me u c o m m i ah a sm e d i c i n a l e f f e c t i v e n e s si n d e e d l y , i ts h o u l db ew e l ld e v e l o p e d t a k i n ga d v a n t a g eo f f o l i u r ne u c o m m i as a p l i n g sc a l l b ean e ww a yo fp r o d u c i n gc m o r o g e n i ca c i d h a r v e s tt i m eh a sg r e a ti n f l u e n c et ot h ec o n t e n to f c h l o r o g e n i ca c i da n dj u n ei st h eb e s t 4e s t a b l i s h m e n to fh p l cf i n g e r p r i n to ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n g w i t ht h em e t h o do fh p l c ，w eo b t a i n e d18m u t u a lc h a r a c t e r i s t i c p e a k sb ya n a l y z i n g t h e s e c h r o m a t o g r a p hp e a k so f10b a t c h so fs a m p l e s ，s e l e c t e d13s t r o n gp e a k sa st h ec h a r a c t e r i s t i cf i n g e r p r i n t p e a k , a n da n a l y z e dr e l a t i v ep e a l 【a r e aa n dr e l a t i v er e t e n t i o nt i m eo ft h e s e13s t r o n gp e a k st oo b t a i nt h e d i g i t a lc h a r a c t e r i s t i ch p l c - f m g e r p r i n to ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n g t l l i sd i g i t a l c h a r a c t e r i s t i ch p l c - f i n g e r p r i n tc a nc o n t r o lt h eq u a l i t yo ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n g 5e s t a b l i s h m e n to fq u a l i t ys t a n d a r d so ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n g b a s e do nt h ea b o v e - m e n t i o n e ds t u d i e s ，t h eq u a l i t ys t a n d a r d so ff o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di n c h o n g q i n gh a v eb e e ne s t a b l i s h e dp r e l i m i n a r y , w h i c hp r o v i d eb a s i cd a t a sf o rt h eq u a l i t yc o n t r o lo f f o l i u me u c o m m i ap r o d u c e di nc h o n g q i n g k e y w o r d s ：f o l i u me u c o m m i a q u a l i t ys t u d yf i n g e r p r i n tc h o n g q i n g i v 独创性声明 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加 了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同 仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者：暑金抛 签字日期：山7 年 多月肛日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院( 筹) 可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密， 口保密期限至年月止) 。 学位论文作者签名：g 金铀 签字日期： 扣口7 年占月陟日 导师签名：丑皮 一，o 一 签字日期：卅年多月 文献综述 第一章文献综述 1 中药质量标准研究现状 1 1 中药质量标准及其发展阶段 中药的质量标准是国家对中药材、中药饮片、中药制剂等的质量和检验方法所做的技术 规定，是中药生产、供应、使用以及管理部门共同遵循的法定依据，也是中药制品现代化生产 和质量管理的重要组成部分。现行中药质量标准包括 中国药典、部( 局) 颁标准和少数地方 标准，其中 中国药典和部( 局) 颁标准属于国家标准的范畴。 中药质量标准的发展大致可分为三个阶段。1 9 5 3 年版和1 9 6 3 年版为第一阶段：1 9 7 7 年 版为第二阶段；1 9 8 5 年版至2 0 0 5 年版为第三阶段。 第一阶段，1 9 5 3 年版中药质量标准基本参考国外药典标准制定，品种也只收载了几十种 国际通用生药，无专属性鉴别，缺定量指标。1 9 6 3 年版分为两部，一部为中药，突出了中药 标准地位；一部除收载的品种大大增加外，为体现中药特色，增收了炮制、性味、功能与主 治、用法与用量等项内容，并增加了鉴别项。但是受当时科技发展水平的限制，仍处于只能 靠外观形态的经验鉴别阶段。经验鉴别主要根据药材的外观性状( 形、色、气、味) 直接利 用感官，即用看、摸、闻、尝等方法，必要时加用水试与火试法连达到鉴别的目的。这主要 是由于生物种遗传上的原因，任何动、植物药种类都有特定的外观性状及某些特性所致。但 也有不足之处的，那就是有时他同基原的药材偶然性的貌似而实异，或由于其生物体长期适 应相同环境致使其药材外形亦趋于近似，或者是近缘品种外形大同小异，但生物种的个性特 征专靠外形难以突出表现出来。在此情况下，直观观察就难以准确的下结论了。 第二阶段，1 9 7 7 年版中药质量标准中大量收载了显微鉴别项目，尤其是粉末显微鉴别， 在制剂中初步解决了难辨丸、散、膏、丹的问题。 第三阶段，现代检测技术由于中药从制剂工艺到生产方式都发生了很大的变化，片剂、 胶囊剂、气雾剂等现代剂型已逐渐上升为主流剂型，制剂主料也由提取物代替了原料药，中 药生产发展迅速的同时中药质量标准也迅速提高。从1 9 8 5 年版开始，薄层色谱法( t l c ) 正 式用于药典中药质量的控制，结束了中药无专属性鉴别的历史；1 9 9 0 年版中药t i e 设置了对 照药材，通过对照药材完整的色谱图像与供试品色谱比较；自1 9 9 0 年版开始，首次引用现代 仪器检测方法测定含量，如高效液相色谱法( ，l c ) 、气相色谱法( g c ) 、薄层扫描法等，到 2 0 0 5 年版 ，l c 法测定的品种达4 7 9 个，g c 法测定的品种为4 7 个，t i c 法测定的品种为4 5 项l l l 。中药指纹图谱技术也应运而生。 在研究健全以特定成分含量为质量控制指标控制的同时，建立相应的药材指纹图谱，包 括d n a 指纹图谱、h p l c 指纹图谱等的质量标准，确保优质、道地药材有标准可依。国家食 品药品监督管理局于2 0 0 4 年起对所有的中药注射剂执行指纹图谱的质控办法，中药指纹图谱 的研究已经成为我国中药研究和产业界的热点。 1 2 中药的质量标准检测内容 中药质量标准的内容应包括：从原料到成品的每一环节，是一个系统工程。具体应涉及 到：中药材质量标准、中药饮片( 炮制) 质量标准、药品标准物质规范、制剂质量标准、辅料质 西南大学硕士学位论文 量标准、非实验研究性物品标准( 包装材料、制剂通刚、产品说明书) 等。 1 2 1 中药材的质量控制 中药材的质量控制主要应包括两个方面的内容，一是品种的控制，主要是解决真伪的问 题。由于相当干中药材收购量7 0 的中药材，仍来自于野生品，在采收过程中已发生形态类 似植物的混淆，一些不法分子为牟取暴利也会将一些伪品药材充作正品销售，这些均会严重 威胁使用者安全更谈不上有效。其二，中药材的有效物质是次生代谢产物其积累主要与其 合成关键酶的表达及表达量等有关，而不像粮食那样主要受遗传基因调控，其质量会受产地、 气温、栽培年限等多种因素的影响，因此同一品种的采收地、栽培年限、采收时间等的不同， 质量会出现明显差异，直接影响药物的有效性。为此在国家有关部门的组织下，成立了“常 用中药村品种整理及质量研究”重点课题，对包括大黄、贝母、黄连、麻黄、党参等在内的 2 0 0 种左右常用中药材从品种、成分，药理，含量测定、质量标准等多方面进行系统研究， 中国药材公司也组织力量开展了类似工作，通过这些研究工作为常用中药材的质量控制提供 了更加深入细致的科学资料，在此基础上，“九五”期间又组织了。中药材质量标准规范化 研究”为主题的攻关研究，对7 l 类中药材进行了质量标准研究，并找出其活性成分和特征性 成分为质量评价依据。 1 2 2 中药饮片的质量控制 中药饮片是中药材从农产品走向工业产品的第一步，它既是直接投放市场的药品，又是 中药制剂的直接原料。对中药材饮片的质量控制应包括对加工、炮制、贮藏，运输等的相关 研究。侧如：不同的贮藏时间的温度、湿度，往往对药物所含成分有明显影响如荆芥，贮存 一年后与采收当年相比，挥发油含量相对损失2 9 ，两年后则相对损失4 2 ，三年后相对损 失5 4 ，而制成饮片后损失则更快，一年相对损失3 7 ，两后相对损失5 4 ，三年相对损失 6 0 2 1 。中药炮制对中药的药理作用也有很大的影响，如附子中含有乌头碱对心脏有毒性，可 致心律失常甚至心室纤维颤动，经过浸漂、煎煮等炮制过程，使乌头碱分解破坏，毒性降低。 其次是增加药效。延胡素中生物碱与醋酸结合成易溶于水的醋酸盐，使水煎液中溶出的总生 物碱含量增加。 1 2 3 中药复方制剂的质量控制 中药复方制剂是建立在复杂体系上的复杂巨体系。目前大多数的中药复方制剂来源于古 代经典方和一些经过长期临床应有的经验方，对它们中多数的方剂的疗效无须置疑。但对其 进行现代科学体系下的诠释是摆在中药和天然药物研究和生产者面前的艰巨任务。仅就质量 控制而言，由于中医辨证施治、同病异治、异病同治等治疗原则加上中药材成分的复杂性， 就对质量控制的科学性、有效性、严谨性带来了巨大的挑战。如大黄在不同的治疗思想指导， 作用的特点不同，活性物质也不同。用于泻下作用，活性物质是结合性葸醌；用于抗菌作用， 活性物质是游离葸醌；用于收敛作用，活性物质是鞣质。因此当大黄出现在不同的制剂中， 所需控制的质量指标应有所不同。对于大黄来说，它的化学成分与药效的关系是了解较为清 楚的一种，而对大多数的中药材来说，活性物质基础并不清晰。况且中药复方与合成药物最 大的不同在于中药复方自身就是一种复杂制剂，为药物与辅料、药物前体与催化剂，药物与 体内代谢菌或酶、或药物与减毒剂的共生体。如就体外而言，复方的煎煮过程可能由于某种 类辅料成分的催化作用使药物前体化合物转化为药物或促进了某类活性成分的溶出等；在体 2 文献综述 置量l l 一一i 皇曼量曼量量量量虽皇曼量曼量曼置量曼窒曼曼曼曼皇曼曼曼曼量曼曼量曼曼皇曼曼曼鲁量量皇曼曼皇曼量曼鼍量曼量曼曼曼曼置量量量内，组成药物间的相互作用对活性成分的转化，吸收、转运、分布、代谢、解毒等各个环节 都有影响。如人参皂甙体内吸收仅为百分之一，按此折合成有效剂量，需服用人参量远超过 临床服用量。由此可推测人参或复方中的其它成分对人参皂甙的吸收有影响；柴胡皂甙在体 内吸收约为2 0 ，而肠内双歧杆菌的存在造成了甙类的选择性转化与吸收等。这些因素都会 给质量控制方法的选择、标准的制定带来困难。目前的质量的制定方法主要针对组成药材中 的已知化学物质或活性成分，尚无法考虑组成制剂过程中的复杂因素，因此其质量控制的科 学性、有效性、严谨性有待进一步加强。如能建立一套将化学组成与药效活性相关的质量评 价体系将会大大提高中药复方制剂质量控制评价体系的科学性和说服力，使中药复方制剂能 为更广泛的人群所接受。 1 3 中药质量检测方法 中药质量检测常用的分析方法有分光光度法、薄层扫描法、气相色谱法和高效液相色谱 法等，今后中药质控的方向主要是对多组分含量的控制。在用某一分析方法能同时进行多组 分分析的情况下( 如使用气相色谱法、高效液相色谱法或高效毛细管电泳法) ，可对多组分含量 分别检测，用总量加和或面积归一法进行质量控制，该方法应为中药质量指标分析较理想的 方法之一，可较为真实地反映中药的内在质量。 中药质量标准分析方法验证指导原则制订药品标准必须坚持质量第一，充分体现“安全 有效，技术先进，经济合理”的原则，使药品标准起到提高质量、择优发展的作用。中药质 量标准中常用的分析方法有显微鉴别，理化性质鉴别，薄层色谱法，高效液相色谱法，气相 色谱法，紫外可见分光光度法。 1 3 1 中药质量检测的新技术、新方法 t l c 、h p l c 、g c 技术在中药质量控制中将占主导地位，但一些新技术、新方法随着时代 的发展和仪器的进步，也会逐步进入常规检验的层面。 超临界流体萃取超临界流体色谱( s f e s f c ) 处于临界温度和临界压力以上状态的物质 称为超临界物质。将其作为萃取剂称s f e ，将其作流动相称为s f c 。s f e - s f c 是一种兼有提取、 浓缩、分离和检测功能的二级分离分析方法。s f c 是介于g c 和h p l c 之间的一种色谱技术，具 有h p l c 和g c 的优点，能分离分析难挥发、遇热不稳定、h p l c 难检测的物质。s f e 具有省时、 省力、取样量少、萃取率高、选择性可调等优点，特别适用于中药的预处理。 高效毛细管电泳法( h p c e ) h p c e 是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据 样品中各组分之间的电泳淌度或分配行为的差异而实现分离的液相分离技术。它具有分析时 间短、分离效率高( 理论板数大于1 0 5 ) 、检测限低、进样量小、自动化程度高等优点。h p c e 特别适用于结构相近的多肽蛋白的分析。 分子生物学技术目前用于中药材鉴定的分子标记技术主要有两类，一类是d n a 指纹图 谱技术，主要是利用d n a 分子酶切片段长度的多态性或d n a 扩增片断长度的多态性来鉴别 中药材，如r e l p 、a p p c r 、r a p d 、a f l p 、s s r 等技术；另一类是d n a 测序技术，选取 特定的基因或d n a 片断测序，根据对被测序d n a 分子核苷酸序列多态性的分析在分子系统 学的基础上鉴别中药材，目前应用较多的是i t s 、5 sd n a 基因。 光谱技术鉴别中药材目前，采用紫外光谱，包括一阶导数光谱，红外光谱、核磁共 氢谱以及x 衍射技术等鉴别中药材已有大量的研究。这些方法已经成为中药材鉴别的新方法。 3 西南大学硕士学位论文 x 衍射技术在中药鉴别方面近年来比较活跃。用x 衍射对矿物类药材进行研究利用衍射特 征峰敏锐、指纹性强的特点，可有效鉴别。 电感耦合等离子体质谱i c p - m s ( i n d u c t i v e l yc o u p l e dp l a s m a - m a s ss p e c t r o m e t r y ) 这是8 0 年代初出现的将电感耦合等离子体( i c p ) 和质谱( m s ) 技术联合起来的一种新的分析技术。它具 有灵敏度高，图谱简单，高分辨能力和分析精度，分析元素范围宽、速度快的特点。可在一 定条件下根据所含微量元素的种类和含量鉴定中药的种属【3 j 。 色谱与光谱联用技术色谱技术分离能力强、检测灵敏度高、但对未知物定性方面往往 难于给出可靠信息；而光谱与波谱技术如质谱、红外光谱和核磁共振波谱等，具有很强的鉴 定未知物结构的能力，却不具有分离能力。因此，将色谱与光谱或波谱联合使用，取长补短， 已成为复杂混合物分析，尤其是定性分析的最重要的手段。目前，这类联用技术已十分普遍， 其中报道较多用于中药制剂分析的方法有g c m s 、g - c f t i r 、h p l c m s 、h p l c - n m r 、c e m s 。 色谱分析前处理新技术色谱分析中样品预处理主要是为了将待测定物质有效地从样 品基质中释放出来、除去杂质、纯化样品、富集浓缩样品。样品的预处理技术多种多样，包 括蒸发、浓缩、吸附、沉淀和过滤等传统技术，也包括新近发展起来的在线处理技术、超临 界流体萃取、固相萃取、固相微萃取、液相微萃取、电子鼻、电子舌等现代技术，还有化学 衍生化技术。 中药指纹图谱中药指纹图谱是一种创新型中药质量控制核心技术，它充分利用现代科 学技术手段，完整地表征中药复杂体系特征性的检测方法。目前指纹图谱研究和应用集中在 中药注射剂、有效部位提取和单味药材的质控方面，也应用到中药的生产过程，正在发挥越 来越重要的作用，现国际上也提倡将指纹图谱技术用于草药产品的质量评价。 化学模式识别模式识别( p a t t e r nr e c o g n i t i o n ) 是- - f l 用计算机代替人对模式即所研究的 系统进行描述、分类、决策的新兴学科，已广泛用于生物学、心理学、医药学、水质和大 气质量评价、天气预报、地震预测、无线电工程学、物理学、化学等领域，解决了各该学科 一些长期不能解决的问题。该方法能够把各中药所含特征化学成分含量测定值的整体与该中 药的种属和临床疗效全面相关酬4 i 。 1 4 中药质量控制指标的选择 中药质量控制指标的选择趋势是由间接向直接，由单一指标成分向多组分整体分析方向 发展。但是，从整体上看，由于中药作用机制和有效成分研究的滞后，使多数中药质量标准 中的控制成分不具有代表性。 目前中药质量控制指标主要有：一是对提取物总量控制。对中药材或中药制剂来说，当 主要化学成分不清楚，或无法确定主要活性成分时，采用对粗提物( 如水提物，醇提物) 量的 控制间接反映其质量，常用的有重量法。但本方法的不足在于无法明确地考察实际有效物质， 必须与定性分析相结合，否则无法说明所检测的物质是否为想要控制的物质，难于解决真伪 问题。二是对主要组分的总量控制。当明确了解药材或制剂中某一类成分是活性组分或主要 化学组分时。可考虑对该类组分进行总量控制以反映其质量，如测定总黄酮、总蒽醌、总生 物碱、挥发油等，常用的有容量法、分光光度法等。三是对主要活性成分的控制。当检测样 品有明确的主要活性成分时，对其进行含量控制能直接并较为有效的反映该产品的质量。有 时虽然该样品中的有效物质不明确，但主要化学物质清楚，也可通过对主要化学物质含量的 4 文献综述 控制来反映样品的质量。本方法是自前中药质量控制常用的方法，其优点在于指标明确，分 析数据精确可靠；不足在于有时不能全面地反映中药综合作用的特点。 1 5 中药质量标准存在的问题 现行中药质量控制基本上是借鉴化学药品质量控制模式，但存在着以单一化学成分分析 的观点与中医理论的整体观念不相符的问题。中医学是整体医学，强调辨证论治，体现在中 药方面具有复杂性和整体性，在建立中药质量标准的过程中，应充分考虑到中药的特性。人 体本身是一个复杂的系统，而中药特别是中药复方往往含多类、多种成分，这也构成了一个 非常复杂的系统，因此在这个研究过程中，非线性、高维特征是主要考虑的方面，而模糊、 不确定性是其中的一种表现，可以通过现代科技的集成来解决和阐明。 收载种类和品种有限现行中药质量标准主要收载的是中药材和中成药的质量标准，少 数地方标准收载有中药饮片的炮制规范，中药提取物的标准也相对较少，一部标准不能囊括 所有的中药品种，这就造成了其他品种没有法定标准控制的局面【5 1 。 部分品种质量标准水平低下以 叶。杜仲胶是 一种天然高分子，国际上习称古塔波胶或巴拉塔胶。它与天然橡胶的化学组成完全一样，即 ( c 5 h 8 ) n ，只是两者分子链的构型不同，两者互为异构体，是易结晶的硬质塑料【5 引。 杜仲胶具有绝缘性强、耐水湿、抗酸碱、热塑性好和形状记忆等特性，这种特征可在工业上 充分利用。 4 2 7 维生素和挥发油 张康健等对杜仲皮、枝及杜仲叶中维生素和微量元素进行分析，发现杜仲皮、叶中含有 丰富维生素e 和b 胡萝卜素，两者大体相当，还含有微量元素b 2 和b l ，杜仲的抗衰老，增 强白细胞免疫与丰富的维生素有关m ；王俊丽等对杜仲皮及叶中氨基酸含量进行系统分析， 从杜仲中共检出包括丝氨酸、谷氨酸、甘氮酸、丙氨酸、精氨酸等1 7 种游离氨基酬4 8 】：微量 元素包括镍硒，锰，铬，相，铁，锌等1 6 种微量元素【4 列；中科院昆明植物研究所从杜中皮 中分离得到一种能抑制真菌生长的蛋白杜仲抗真菌蛋i 刍( e a f p ) 5 9 1 ，能明显抑制木霉，小麦赤 霉菌，烟草黑茎病和棉花枯萎病菌菌丝的生长。它的分子量小，不含糖单链蛋白，抗菌谱宽， 有很高的热稳定性。杜仲种子含油量高达2 7 、主要成分为亚麻酸( 6 7 3 8 ) 、亚油酸( 9 9 7 ) 、 油酸( 1 5 1 8 ) 、硬脂酸( 2 1 5 ) 和棕榈酸( 4 6 8 ) 及a t 种挥发成分1 6 0 。 4 2 8 其他化学成分 除了以上提到的化合物外，还从杜仲中分离出正二十八烷酸、二十四烷酸、白桦脂酸、 白桦脂醇、熊果酸及其衍生物等化合物以及抗真菌蛋白【6 l ，6 2 1 。 4 1 3 杜仲叶的药理作用 我国第一部药书神农本草经曾记载杜仲的药效，性微甘、微辛补中益精气、坚筋骨、 强志、益腰膝、除酸痛、除阴下痒湿、小便徐沥，久服轻身耐劳之功效。本草纲目则总结 了历代经验，对杜仲的药理认识进一步完备，认为杜仲“盖肝主筋，肾生骨，肾充则骨强， 肝充则筋键，屈伸利用。皆属于筋。杜仲叶的主要药理作用如下： 西南大学硕十学何论文 4 3 1 降压作用 自从前苏联学者证实1 0 及2 0 的杜仲配剂有降压作用后，引起国内外学者的广泛关注。 临床检验证明，杜仲是高质量天