（临床兽医学专业论文）猪圆环病毒2型灭活疫苗安全性与免疫效力试验.pdf

d i s s e r t a t i o nf o rm a s t e rd e g r e eo f f u j i a na g r i c u l t u r ea n df o r e s t r yu n i v e r s i t y t h e s a f e t ya n di m m u n ee f f i c a c yt e s t so fi n a c t i v a t e dv a c c i n e a g a i n s tp o r c i n ec i r c o v i r u st y 7 p e2 d i s c i p l i n e ：a g r o n o m y f i r s tl e v e l d i s c i p l i n e ：v e t e r i n a r ym e d i e i n e s e c o n dl e v e l d i s c i p l i n e ：p r e v e n t i v ev e t e r i n a r ym e d i e i n e r e s e a r e hf i e l d ：p r e v e n t i o na n dc o n t r o lo f a n i m a li n f e c t i o u sd i s e a s e s s u m m i t t e dd a t ei nm a r c h ，2 011 独创性声明 f i i ii ii llr l ti i iul liii 18 7 8 3 0 6 本人声明，所呈交的学位( 毕业) 论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的 研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的 地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献 的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行 为，由本人承担应有的责任。 学位。毕业，论文作者亲笔签名椭皂魄伽。多i i 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位( 毕业) 论文的规定，即学校有权送交论文 的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文。 保密，在年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。 学位。毕业，论文作栋笔签名僻 指导教师亲笔签名方pf 牟沁 日期：乃j 刁l 、 日期：矽f i 万，y 目录 摘要i a b s t r a c t i i i 英文缩略。v i 第一部分前言l lp c v 2 的病原学与致病性。l 1 1 病原学l 1 2 致病性2 1 2 1 断奶仔猪多系统衰竭综合征( p m w s ) 2 1 2 2 猪呼吸道疾病综合征( p r d c ) 2 1 2 3 猪皮炎与肾病综合征( p d n s ) 3 1 2 4p c v 2 相关的繁殖障碍( p c v 2 a s s o c i a t e dr e p r o d u c t i v ef a i l u r e ) 。3 1 2 5 仔猪先天性震颤( c o n g e n i t a lt r e m o r s ，c t ) 3 2p c v 2 疫苗的应用现状与研究进展3 2 1 传统疫苗3 2 1 1 灭活疫苗3 2 1 2 减毒活疫苗4 2 2 基因工程疫苗4 2 2 1 亚单位疫苗5 2 2 2 活载体疫苗。5 2 2 3 基因重组疫苗6 2 2 4 核酸疫苗7 2 3 p c v 2 疫苗的应用现状7 2 4p c v 2 疫苗的研究中存在问题8 2 4 1 抗原含量低8 2 4 2 母源抗体的存在。9 2 4 3复杂的饲养环境9 2 4 4 疫苗的检验和生产效力判定1 0 2 4 5 疫苗的免疫方式l o 第二部分材料和方法1 l l 试验材料l l 1 1 疫苗1 l 1 2安慰剂1 1 1 3 病毒1l 1 4 试验动物1 l 1 5 主要试剂。1 1 1 6 主要仪器设备1 l 2 试验方法1 2 2 1 疫苗的试验前检查1 2 2 2 汞类含量测定l2 2 3 无菌检验l3 2 4 试验前猪的选择13 2 5 动物试验13 2 5 1 实验室安全检验1 3 2 5 2 实验室效力检验1 4 2 5 3 普通猪场安效检。1 4 第三部分结果与分析。2 2 l疫苗的试验前检查结果2 2 1 1夕h 观：! ：! 1 2剂型2 2 1 3 稳定性2 2 1 4黏度2 2 1 5汞类含量2 2 1 6 无菌检验2 2 1 7 试验前猪的选择( 实验室) 2 2 2 实验室安全检验结果2 3 3 实验室免疫效力检验结果一一2 4 4 普通猪场安效检结果2 6 4 1 试验前猪群p r r s v 和p c v 2 感染情况2 6 4 2 临床观察结果2 6 4 3平均日增重2 6 4 4 种母猪产仔观察结果2 7 4 5 尸体剖检结果2 8 4 6 商品猪死亡率2 8 4 7 商品猪接种疫苗后抗体阳转率2 8 4 8 商品猪抗体检测结果2 9 4 9 经免种母猪所产仔猪母源抗体滴度2 9 第四部分讨论3l 第五部分结论3 6 参考文献3 7 攻读硕士学位期间发表的文章4 3 致谢。4 4 摘要 猪圆环病毒( p c v ) 包括p c v i 和p c v 2 两种基因型，p c v 2 能引起断奶仔猪多系统 衰竭综合征( p m w s ) 、猪皮炎与肾病综合征( p d n s ) 、增生性坏死性肺炎( p n p ) 、 繁殖障碍等疾病。p m w s 患猪渐进性消瘦、呼吸困难、腹泻，怀孕母猪感染后经胎盘 传染给仔猪。p c v 2 在我国猪场广泛存在并造成了巨大的经济损失。 1 、试验目的 检测猪圆环病毒2 型( p c v 2 ) 灭活疫苗安全性及免疫力，评价由福州大北农生物 技术有限公司生产的p c v 2 灭活苗的临床应用效果。 2 、试验方法 包括试验前检查、疫苗的实验室安全检验、免疫效果检测和临床免疫试验四个方 面。 ( 1 ) 试验前检查：对疫苗进行外观、剂型、稳定性、粘度和汞类含量进行测定。 检测试验猪p c v 2 抗原和p c v 2 抗体，选取p c v 2 抗原、p c v 2 抗体均为阴性的猪 用于实验室检测。 ( 2 ) 实验室安全检验：1 4 2 1 日龄健康仔猪4 头，肌肉注射疫苗2 0 m l ，观察 1 4 日。 ( 3 ) 实验室免疫效果检测：1 4 2 1 日龄健康仔猪1 5 头。随机分为3 组，每组 5 头。第l 组为免疫组，注射灭活苗，1 4 日后加强免疫1 次。第2 组为攻毒对照组， 接种圆环病毒。第3 组为空白对照组，不免疫不攻毒。3 组猪隔离饲养。二免后第2 1 日，用d b n s x 0 7 株病毒液( 含1 0 5 0 t c i d 5 0 m 1 ) 对第l 、2 组猪攻毒，逐日测定体 温并观察2 5 日。二免后第2 1 日，对所有猪采血，测定血清中的p c v 2 抗体效价。攻 毒到期后对所有猪进行病理剖检。 ( 4 ) 临床免疫试验：试验猪4 5 0 头，包括商品仔猪3 5 0 头，后备母猪6 0 头， 经产母猪4 0 头，进行低剂量、推荐剂量和超剂量免疫，观察猪只的临床状况、全身 和局部不良反应，检测商品猪死亡率和免疫后p c v 2 抗体水平，并每组随机抽取5 头进行病理剖检。 3 、试验结果 ( 1 ) 疫苗的试验前检查表明：疫苗外观、剂型、稳定性、黏度、汞类含量、 无菌检验等均合格。 i ( 2 ) 实验室安全检验和效力检验表明：所有免疫猪健活，精神状态、行为活动 和饮食正常；呼吸和体温均正常，无全身和局部不良反应。免疫效力检验表明，猪二 免后2 1 日免疫组p c v 2 抗体滴度1 ：8 0 0 ，攻毒后2 5 日免疫组4 5 保护，对照组3 5 发病。尸体剖检结果显示，攻毒组出现肺实变，肠系膜淋巴结肿大；免疫组、空白对 照组均未见明显病变。 ( 3 ) 临床免疫试验表明：所有免疫猪精神状态、行为活动和饮食正常；呼吸和 体温均在正常范围内；无全身反应，接种部位无其它不良反应。商品仔猪平均日增重 统计结果表明，免疫组平均日增重均比对照组明显提高，差异显著。所有注射疫苗种 母猪妊娠、分娩和泌乳情况均正常，平均产仔数与初生重与对照组相比无明显差异。 剖检超剂量接种猪，未见明显病变。商品猪免疫组的死亡率均小于对照组，差异显著。 ( 4 ) 免疫前的抗体检测结果表明：各猪场均有部分试验猪p c v 2 抗体阳性，但 抗体滴度较低。接种疫苗后1 4 日，商品仔猪体内即可检测到p c v 2 抗体，抗体阳性 率为4 0 0 一5 0 0 ；免疫后3 5 日，抗体阳性率为8 0 以上，平均抗体滴度1 ：1 8 0 0 1 ：2 0 0 0 ，达到保护标准。此后5 个月进行的抗体检测，平均抗体滴度均在保护标准 ( 1 ：8 0 0 ) 以上。免疫种母猪所产仔猪2 8 日龄时平均母源抗体滴度为l ：1 7 2 0 1 ：1 8 0 0 ， 3 5 日龄时降至1 ：8 0 0 。 4 、试验结论：试验用灭活苗安全性良好，商品猪、怀孕母猪免疫后无不良反应。 该灭活苗免疫后可产生良好的免疫保护作用。 关键词：猪圆环病毒2 型；灭活苗；安全性；免疫效力 t h es a f e t ya n di m m u n e e f f i c a c yt e s t so fi n a c t i v a t e dv a c c i n e a g a i n s tp o r c i n ec i r c o v i r u st y p e2 a b s t r a c t p o r c i n ec i r e o v i r u s ( p c v ) h a sg e n o t y p e sp c v - 1a n dp c v - 2 ，p c v - 2c a nc a u s e d i s e a s e ss u c ha sp o s t w e a n i n gm u l t i s y s t e m i cw a s t i n gs y n d r o m e ( p m w s ) ，p o r c i n e d e r m a t i t i sa n dn e p h r o p h a t h y s y n d r o m e ( p d n s ) ，p r o l i f e r a t i v ea n dn e c r o t i z i n g p n e u m o n i am ) a n dr e p r o d u c t i v ef a i l u r ee t c p i g ss u f f e r i n gf r o mp m w sm a y l o s e w e i g h t ，h a v eb r e a t h i n gd i f f i c u l t i e sa n dd i a r r h e ap r o g r e s s i v e l y i n f e c t e dp r e g n a n ts o w s w i l li n f e c tt h e i rp i g l e t st h r o u g hp l a c e n t a p c v - 2i sw i d e l ye x i s t e di np i gf a r m so fo u r c o u n t r y , a n dh a sc a u s e dg r e a te c o n o m i cl o s s e s t h i se x p e r i m e n ta i m sa td e t e c t i n gt h es a f e t ya n di m m u n ee f f i c a c yo ft h ep c v 2 i n a c t i v a t e dv a c c i n e ，a n de v a l u a t i n gt h ec l i n i c a la p p l i c a t i o ne f f e c to ft h ei n a c t i v a t e d v a c c i n ew h i c hi sp r o d u c e db yf u z h o ud a b e ia g r i c u l t u r a l & b i o l o g i c a lt e c h n o l o g y c o ，l t d t h em e t h o d si n c l u d e sp r e - t e s ti n s p e c t i o n , s a f e t yt e s to fv a c c i n e s ，d e t e c t i o no f i m m u n ee f f i c a c ya n dc l i n i c a li m m u n et e s t p r e - t e s ti n s p e c t i o n ：d e t e r m i n e dt h ea p p e a r a n c e ，f o r m u l a t i o n , s t a b i l i t y , v i s c o s i t y a n dm e r c u r yc o n t e n to ft h ev a c c i n e d e t e c t e dp c v 2a n t i g e na n dp c v 2a n t i b o d yo f t e s tp i g s ，a n dt h ep i g sw h i c hw e r en e g a t i v eo fp c v 2a n t i g e na n dp c v 2a n t i b o d yw e r e s e l e c t e df o rd e t e c t i o no fi m m u n ee f f i c a c y s a f e t yt e s to fv a c c i n e s ：4p i g l e t so f1 4t o 21d a y so l dw e r ev a c c i n a t e d 、析t h2 0 m lv a c c i n eb yi n t r a m u s c u l a ri n j e c t i o n , o b s e r v e d f o r1 4d a y s d e t e c t i o no fi m m u n i z i n ge f f i c a c y ：15p i g l e t so f1 4t o21d a y so l dw e r e r a n d o m l yd i v i d e di n t o3g r o u p s ，w i t h5p i g l e t si ne a c hg r o u p g r o u p1w e r eu s e da s i m m u n eg r o u p ，i n o c u l a t e dw i t hi n a c t i v a t e dv a c c i n e ，a n db o o s t e ri m m u n i t y14d a y s l a t e rg r o u p2w e r eu s e da sc h a l l e n g ec o n t r o lg r o u p ，i n j e c t e dw i t hp c v 2 ，a n d g r o u p 3w e r eu s e da sb l a n kc o n t r o lg r o u p ，r i oi m m u n e da n dc h a l l e n g e d t h e3g r o u p so f p i g sw e r er e a r e ds e p a r a t e l y , c a r r i e do u ta n t i b o d yd e t e c t i o na n dp a t h o l o g i c a la u t o p s y r e s p e c t i v e l y c l i n i c a li m m u n et e s t ：4 5 0p i g s ，i n c l u d i n g3 5 0c o m m e r c i a lp i g l e t s ，6 0 i i i r e p l a c e m e n tg i l t sa n d 4 0m u l t i p a r o u ss o w s w e r ev a c c i n a t e d 、j ，i t i li n a c t i v a t e dv a c c i n e o fl o w - d o s e ，r e c o m m e n d e dd o s ea n do v e r d o s e ，o b s e r v e dt h ec l i n i c a ls i t u a t i o n , s y s t e m i ca n dl o c a la d v e r s er e a c t i o n s ，d e t e c t e dt h em o r t a l i t ya n dp c v 2a n t i b o d y l e v e l s ，a n d5p i g sw e r er a n d o m l ys e l e c t e df r o me a c hg r o u pf o rp a t h o l o g i c a la u t o p s y t h ep r e - t e s ti n s p e c t i o no fv a c i n n es h o w e dt h a tt h ea p p e a r a n c e ，f o r m u l a t i o n ， s t a b i l i t y , v i s c o s i t y , m e r c u r yc o n t e n ta n ds t e r i l i t yt e s tw e r eq u a l i f i e d s a f e t yt e s ts h o w e dt h a ta l li m m u n i z e dp i g sl i v e dh e a l t h i l y ，t h em e n t a ls t a t e ， b e h a v i o u ra n dd i e tw e r en o r m a l ；t h er e s p i r a t i o na n d b o d yt e m p e r a t u r ew e r e a l ln o r m a l ； t h e r ew e r en os y s t e m i cr e a c t i o n sa n dl o c a la d v e r s er e a c t i o n s i m m u n ee f f i c a c yt e s t i n d i c a t e dt h a tt h ep c v 2a n t i b o d yt i t e ri ni m m u n eg r o u pw i l t sn ol e s st h a n1 ：8 0 0a t21 d a y sa f t e rt h eb o o s t e ri n n o c u l a t i o n ；4 5i ni m m u n eg r o u pw e r ep r o t e c t e d ；3 5i n c h a l l e n g ec o n t r o lg r o u pf e l li l l ，2 5d a y sp o s tc h a l l e n g e p a t h o l o g i c a ln e c r o p s ys h o w e d t h a tp i g si nc h a l l e n g ec o n t r o lg r o u ph a dl u n gc o n s o l i d a t i o n ，m e s e n t e r i cl y m p hn o d e s e n l a r g e m e n t ；p i g si ni m m u n eg r o u pa n db l a n kc o n t r o lg r o u ph a v en os i g n i f i c a n t p a t h o l o g i c a lc h a n g e s c l i n i c a li m m u n et e s ts h o w e dt h a tt h em e n t a ls t a t e ，b e h a v i o u ra n dd i e to fa l l i m m u n e dp i g sw e r en o r m a l t h eb r e a t ha n db o d yt e m p e r a t u r ew e r ew i t h i nt h en o r m a l r a n g e ；t h e r ew e r en os y s t e m i c r e a c t i o n sa n da n dl o c a la d v e r s er e a c t i o n s t h e s t a t i s t i c a lr e s u l ts h o w e dt h a tt h ea v e r a g ed a i l yw e i g h ti n c r e a s eo fp i g l e t si ni m m u n e g r o u pw e r ei m p r o v e do b v i o u s l yc o m p a r e d 晰t l lc o n t r o lg r o u p ，t h ed i f f e r e n c ew a s s i g n i f i c a n t t h ep r e g n a n c y , d e l i v e r ya n dl a c t a t i o no fa l li m m u n e ds o w sw e r en o r m a l t h ea v e r a g el i n e rs i z ea n db i r t hw e i g h th a dn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e sc o m p a r e d 、i t h t h ec o n t r o lg r o u p a u t o p s yr e v e a l e dt h a tt h e r ew e r en ov i s i b l ep a t h o l o g i c a lc h a n g e si n t h ep i g si n o c u l a t e dw i t l lo v e r d o s e t h em o r a l i t yr a t eo fc o m m e r c i a lp i g si ni m m u n e g r o u pw a sl o w e rt h a nc o n t r o lg r o u p ，t h e r ew e r es i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n c e t h ep c v 2a n t i b o d yo fp a r to ft h et e s tp i g si na l lp i gf a r m sw a sp o s i t i v eb e f o r e i m m u n i z a t i o n ，b u tt h ea n t i b o d yt i t e rw a sv e r yl o w 14d a y sa f t e ri m m u n i z a t i o n , p c v 2 a n t i b o d yi nc o m m e r c i a lp i g l e t sc o u l dh ed e t e c t e d ，t h ea n t i b o d yp o s i t i v er a t ew a s 4 0 0 5 0 0 ；3 5d a y sa f t e ri m m u n i z a t i o n ，t h ea n t i b o d yp o s i t i v er a t ew a so v e r i v 8 0 ，t h ea v e r a g ea n t i b o d yt i t e rw a s1 ：18 0 0 - 1 ：2 0 0 0 ，w h i c hh a dr e a c h e dp r o t e c t i o n s t a n d a r d t h ea v e r a g ea n t i b o d yt i t e ri nt h ef o l l o w i n g5m o n t h sw a sb e y o n dt h e p r o t e c t i o ns t a n d a r d ( 1 ：8 0 0 ) t h ea v e r a g em a t e r n a la n t i b o d yt i t e ro f2 8 一d a y o l dp i g l e t s b o r n eb yi m m u n i z e ds o w sw a s1 ：17 2 0 - - 。1 ：18 0 0 ，a n dt h ea n t i b o d yt i t e rr e d u c e dt o 1 ：8 0 0a t3 5 - d a y - o l d i ti sc o n c l u e dt h a tt h ei n a c t i v a t e dv a c c i n ew a ss a f e a f t e ri m m u n i z i n gw i t ht h i s i n a c t i v a t e dv a c c i n e ，n e i t h e rc o m m e r c i a lp i g sn o rp r e g n a n ts o w sh a v ea d v e r s er e a c t i o n t h ei n a c t i v a t e dv a c c i n eh a sg o o dp r o t e c t i v ee f f e c to ni m m u n i z e dp i g s k e y w o r d s ：p o r c i n ec i r c o v i r u st y p e2 ；i n a c t i v a t e dv a c c i n e ；s a f e t y ；i m m u n e e f f i c a c y v 一 英文缩略 v i 由猪圆环病毒2 型( p o r c i n e 。这些疾病包括断奶仔猪多 系统衰竭综合征( p o s t w e a n i n gm u l t i s y s t e m i ew a s t i n gs y n d r o m e ，p m w s ) 、猪皮炎 与肾病综合征( p o r c i n ed e r m a t i t i sa n dn e p h r o p h a t h ys y n d r o m e ，p d n s ) 、猪呼吸道 疾病综合征( p o r c i n er e s p i r a t o r yd i s e a s ec o m p l e x ，p r d c ) 。此外，p c v 2 跟新生仔 猪的先天性震颤( c o n g e n i t a lt r e m o r , c t ) 、增生性坏死性肺炎( p r o l i f e r a t i v ea n d n e c r o t i z i n gp n e u m o n i a , p n p ) 等有关【2 1 。从1 9 9 7 年，c l a r k 等首次分离到猪圆环 病毒2 型起，世界养猪业造成巨大的经济损失【3 1 。在2 0 0 8 年第2 0 届国际猪病大 会上，学者将其列为当前危害养猪业发展的头号疫病。我国自从2 0 0 0 年证实猪 群中存在p c v 2 感染以来【4 1 ，各地区已有陆续报道该病的发生，2 0 0 2 年由p c v 2 感染的引起的p w m s 在全国呈暴发流行【5 1 。据统计分析，近年来我国p c v 2 感 染率呈逐年上升趋势，目前该病的流行范围已经波及全国各地，已成为危害我国 养猪生产的重要免疫抑制性疫病之一【6 1 。 1 p c v 2 的病原学与致病性 1 1 病原学 猪圆环病毒2 型( p c v 2 ) 属于圆环病毒科圆环病毒属【7 ，引，病毒粒子为无囊 膜的二十面体，直径平均为1 7 舳【9 1 ，基因组结构为单股共价闭合环状d n a ， 全长为1 7 6 8 或1 7 6 7 n t ，包括3 个主要的开放阅读框( o i 疆s ) o i u l 、o r f 2 和o r f 3 。o r f l 编码与病毒复制相关的蛋白，o r f 2 编码病毒的主要结构蛋白【1 0 1 ， 其编码的衣壳蛋白是p c v 2 的主要免疫原o r f 3 编码的蛋白参与p c v 2 诱导的凋 亡作用【l l 】。 近十几年来，国内外学者对p c v 2 的分子流行病学及遗传变异做了大量的研 究工作，但不同学者对于p c v 2 的基因型表述上存在差异，为了统一p c v 2 的基 因型命名，欧盟猪圆环病毒疾病委员会提出了一个命名规则，即将p c v 2 分为三 个基因型p c v - 2 a 、p c v - 2 b 和p c v - 2 c t l 2 】。其中p c v - 2 c 是丹麦独有的基因型， 该基因型目前仅包括丹麦的3 个毒株【l3 1 ，至今尚无流行报道。但近几年的研究 表明，p c v 2 在一些国家已经发生了由p c v - 2 a 向p c v - 2 b 的转换【1 4 】。调查显示， 1 9 9 7 2 0 0 3 年间猪场以p c v 2 a 占主导，但自2 0 0 4 年后，p c v 2 b 则越来越普遍， 一般认为p c v 2 b 的毒力更强【1 s 1 。 1 2 致病性 断奶仔猪多系统衰竭综合征( p m w s ) 是最先被报道与p c v 2 相关的疾病， 但随着研究的深入，研究人员发现与p c v 2 有关的疾病除p m w s 外还有猪皮炎 与肾炎和呼吸道疾病综合征( p r d c ) 、仔猪先天性震颤与p c v 2 相关繁殖障碍 等多种病征。 2 0 0 2 年，有学者提出建议p m w s 应该被猪圆环病毒病( p c v d ) 替代1 6 】， 2 0 0 6 年3 月美国兽医协会( a a s v ) 提出了猪圆环病毒相关疾病( p c m ) 这 个术语。也就是说，猪圆环病毒相关疾病( p c w 圆) 既可以是亚临床型的，也 可以是有单一或者混合临床症状的多系统疾病。现在欧洲更简称猪圆环病毒病 ( p c v d ) 来概括p c v 2 所有相关疾病【1 7 1 。 1 2 1 断奶仔猪多系统衰竭综合征( p m w s ) 主要发生在5 1 6 周龄的猪。一般于断奶后2 天到3 天或一周开始发病。急 性发病病死率可高达到1 0 ，但常因为继发感染或并发其他疾病而加大死亡率。 猪群表现为进行性消瘦、发育障碍、皮肤苍白、发热、淋巴节肿大和黄疸，有时 候伴有腹泻或以喷嚏、咳嗽、呼吸加快及呼吸困难为特征的呼吸器官障碍。剖检 患猪呈现多器官的病理损伤，肺肿胀，间质增宽；肾脏肿大，灰白色；肝脾轻度 肿胀；胃无腺区形成溃疡；全身淋巴结显著肿大，切面湿润，可见出血；典型变 化为淋巴结、回肠淋巴结、扁桃体和脾的多灶肉芽肿炎症。 1 2 2 猪呼吸道疾病综合征( p r d c ) 主要出现在肥育猪身上，尤其易发生在1 6 2 2 周龄。发病率的死亡率一般在 2 0 9 0 。患猪被毛粗乱，喜堆一起，采食下降或无食欲，皮肤苍白，急促，呼 吸困难，有时腹泻、黄疸，进行性消瘦，衰竭而死亡。剖检见淋巴结肿大，肺脏 呈弥漫性间质性肺炎，肾脏肿大，并有白色斑点，偶见胃溃疡 2 1 2 3 猪皮炎与肾病综合征( p d n s ) 主要出现在哺乳期到肥育期的猪只。一般发病率不高，但是与其他病同时发 生死亡率高达1 5 以上。最典型症状为出现皮肤红疹，皮下有圆形的棕色或红 色的出血病斑，病变常见于脸、耳、腹侧、腿及臀部。剖检常见肾炎，淋巴结肿 大、出血。 1 2 4p c v 2 相关的繁殖障碍( p c v 2 a s s o c i a t e d r e p r o d u c t i v e f a i l u r e ) 此症候群于1 9 9 9 年首次在加拿大报赳1 8 1 ，主要发生于刚配种的母猪。临床 症状包括流产、死产、木乃伊胎及仔猪断奶前死亡率增加。组织学病变在流产死 胎及新生仔猪常见非化脓性坏死性或纤维素性心肌炎。通过p c r 、病毒分离及 免疫组化发现p c v 2 在流产胎儿和新生仔猪的心脏和肝脏中大量存在。 1 2 5 仔猪先天性震颤( c o n g e n i t a lt r e m o r s ，c t ) 新生仔猪生后不久或出生后仅几个小时就发生震颤，有的是整窝发生也有的 是部分猪发生，临床症状轻重不一。有的仔猪是全身一致的、有节奏的震颤，无 法站立，被迫躺卧后，躺地后一会震颤减轻或停止，再站立又出现症状；有的仔 猪头部、颈部出现强烈震颤，或后躯震颤不能站立，震颤严重的仔猪吃奶困难， 导致较高的死亡率。但如能帮助仔猪吃到乳汁，一般预后良好；病情轻的猪可运 动，体温、脉博、呼吸均无明显变化，经数小时或数日自愈。本病仅从母猪垂直 传给仔猪，不能水平传播。 2p c v 2 疫苗的应用现状与研究进展 2 1 传统疫苗 传统疫苗的研制和生产主要是通过改变培养的条件，或在不同寄主动物上传 代使致病微生物毒性减弱，或通过物理、化学方法将其灭活来完成的。主要包括 有灭活疫苗和减毒活疫苗。 2 1 1 灭活疫苗 灭活疫苗是将p c v 2 的培养物或组织通过一定的理化方法进行处理，使其失 3 去感染性但又不丧失免疫原性，是技术上最容易实现且体液免疫效果较好的一种 疫苗形式。灭活疫苗具有安全、不存在散布病毒和造成新疫源的危险、便于贮存 和运输、对母源抗体的干扰作用不敏感等多项优点，目前研究开发的一般是 p c v 2 细胞培养物制备的灭活疫苗。梅里亚动物保健公司研究开发的p c v 2 疫苗 c i r c o v a c 且p 为全病毒灭活疫苗，比较适用于母猪免疫，即通过母源抗体的传递 来预防仔猪发生早期感染，待仔猪建立自身主动免疫后来抵御后期的野毒感染， 在5 周内能有效预防p c v 2 感染【1 9 , 2 0 】。该产品已于2 0 0 7 年在欧洲获得批准文号， 经过田间试验证明，接种该疫苗可减少淋巴组织的损伤，降低保育仔猪的死亡率， 同时生产性能也得到了明显的提高【2 l - 2 4 1 。我国研究学者刘长吲2 5 ，2 6 1 和姜平等【2 7 】 也进行了p c v 2 灭活疫苗的研究，结果显示这些灭活疫苗均有较好的安全性和免 疫保护效力，并且已经二者商品化疫苗现已面世。 2 1 2 减毒活疫苗 减毒活疫苗是通过一定方法，减弱或去除野生病毒的毒力而保留病毒在宿主 体内增殖能力的一类疫苗形式。减毒活疫苗对原宿主可模拟野生病毒感染的过 程，刺激机体免疫系统产生更强的、特异持久的免疫反应尤其是细胞免疫反应。 减毒的方法分为两类：一类是传统的减毒方法，如通过体外连续传代培养或不同 的细胞、培养基交替培养减毒等：另一类是基因重组方法，将毒力基因缺失或重 组，获得低致病性毒株。f e n a u x t 2 8 】等将p c v 2 于p k 1 5 细胞上传至1 2 0 代发现， 它比第一代的病毒滴度高，但将高代次毒株接种猪后，经检测其血液中的病毒载 量明显降低，而造成的组织损伤也明显减轻。全基因组测序分析结果表明，传至 1 2 0 代后其基因组有两处发生变异，并且这两处变异都位于编码衣壳蛋白基因 中，说明这两处变异能够提高p c v 2 的体外生长能力并降低其毒力，这个发现对 p c v 2 减毒活疫苗研究开发的可行性提供了一定的依据。但目前尚未有商品化的 p c v 2 减毒活疫苗。 2 2 基因工程疫苗 随着人类知识的不断进步，传统疫苗的局限性也日益暴露出来：( 1 ) 动物和 人类的病毒需要在动物细胞中培养，这使疫苗生产的成本很高；( 2 ) 疫苗中的致 病物质在疫苗生产过程中有可能没有完全杀死或充分减毒，这可能导致疫苗中含 4 有强毒性致病物质，进而使得疾病在更大的范围内传播；( 3 ) 减毒菌株有可能会 发生突变；( 4 ) 有些疾病用传统的疫苗防治收效甚微。2 0 世纪8 0 年代随着现代生 物学技术的兴起，特别是d n a 重组技术的出现，为研制新一代疫苗提供了崭新 的方法。基因工程疫苗使用分子生物学技术，对病原微生物的基因组进行改造， 以降低其致病性，提高它的免疫原性，或者将病原微生物基因组中的一个或多个 对防病治病有用的基因克隆到无毒的原核或真核表达载体上，制成疫苗，接种动 物，产生免疫力和抵抗力，从而达到防制传染病的目的。 目前利用基因工程技术已经和正在研制开发的