（内科学专业论文）免疫性血小板减少症患者外周血cd4t亚群的检测及意义.pdf

徐州医学院硕士学位论文 缩略词表 a b b r e v i a t i o n 缩略词英文全称中文全称 a p c a l l o p h y c o c y a n i n别藻蓝蛋白 b f ab r e f e l d i na布雷杆氏菌素a c i a c o l l a g e n i n d u c e da r t h r i t i s胶原蛋白诱导性关节炎 c dc l u s t e ro f d i f f e r e n t i a t i o n分化簇 d m s o d i m e t h y ls u l f o x i d e二甲基亚砜 e a e e x p e r i m e n t a la u t o i m m u n ee n c e p h a l i t i s实验性免疫性脑脊髓炎 e l i s a e n z y m el i n k e di m m u s o r b e n ta s s a y酶联免疫吸附试验 f i t cf l u o r e s c e i ni s o t h i o c y a n a t e异硫氰酸荧光素 f c mf l o wc y t o m e t r y流式细胞仪 g p g l o c o p r o t e i n糖蛋白 i t pi m m u n et h r o m b o c y t o p e n i a免疫性血小板减少症 i f n 吖i m e r f e r o n - 1 ,7 干扰素 i li n t e r l e u k i n e白细胞介素 i b d i n f l a m m a t o r yb o w ld i s e a s e炎症性肠病 o d o p t i c a ld e n s i t y 光密度 p e p h y c o e r y t h r i n 藻红蛋白 p m ap h o r b o lm y r i s t a t ea c e t a t e伏波酯 p b s ，p h o s p h a t e b u f f e r e ds a l i n e磷酸盐缓冲液 r t - p c r r e v e r s e n m s c r i p t i o n m d p o l y m e m s e c h a i n r e a s o n 逆转录聚合酶链反应 r ar h e u m a t o i da r t h r i t i s类风湿关节炎 t hth e l p e r辅助性t 细胞 l 徐州医学院硕士学住论文 t n f t r e g t g f - b t u m o rn e c r o s i sf a c t o r r e g u l a t o r yt c e l l t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - 1 3 2 肿瘤坏死因子 调节性t 细胞 转化生长因子- p 徐州医学院硕士学位论文 免疫性血小板减少症患者外周血c d 4 + t 细胞亚群的检 测及意义 中文摘要 目的检测免疫性血小板减少症( i m m u n et h r o m b o c y t o p e n i a ，i t p ) 患者外周血 t h l 、t h 2 、t h l 7 和调节性t 细胞( r e g u l a t o r ytc e l l s ，t r e g ) 等c d 4 + t 细胞亚群治 疗前后的比例变化，并检测相应细胞因子i f n 丫、i l 4 、i l 1 7 、t g f b 及l l 1 0 的 浓度变化，探索c d 4 + t 细胞亚群比率失衡在i t p 发病机制中的作用。 方法3 0 例i t p 患者根据有无治疗及治疗效果分为治疗前组、治疗后组( 完 全反应组2 0 例、有效组6 例、无效组4 例) ，3 0 例健康体检者设为对照组。流式 细胞仪( f c m ) 检测i t p 患者及健康对照者外周血t h l 、t h 2 、t h l 7 、t r e g 细胞分 别占c d 4 + t 细胞的百分率；酶联免疫吸附试验( e l i s a ) 检测外周血浆中i f n 吖、 i l 4 、i l 1 7 及t g f p 、i l 1 0 细胞因子浓度。分析i t p 患者治疗前外周血c d 4 + t 细胞亚群及相关细胞因子与血小板计数之间的相关性。 结果1 i t p 患者治疗前组外周血c d 4 + t 细胞亚群百分率及细胞因子：治疗 前组t h l 、t h l 7 细胞百分率及l f n 吖、l l 1 7 水平较对照组升高( p 0 0 5 ) ；t r e g 细 胞百分率及t g f p 、i l 1 0 水平较对照组明显降低( 尸_ 0 0 1 ) ；l l _ 4 水平低于对照组 俨 0 0 5 ) ；t h l t h 2 及t h l 7 t r e g 细胞比率高于对照组c p 0 0 5 ) 。t h 2 细胞百分率与 对照组比较，差异无统计学意义。 2 i t p 患者外周血c d 4 + t 细胞亚群百分率及细胞因子浓度在治疗前、后的变 化：治疗后完全反应组t h l 、t h l 7 细胞百分率及i f n 吖、1 1 1 7 水平低于治疗前组 ( p ，0 0 5 ) ；t r e g 细胞百分率及t g f p 、i l 1 0 水平较治疗前组明显升高( | p 0 0 5 ) ；i l - 4 水平较治疗前组升高( p 0 0 5 ) 。有效组t h l 、t h l 7 细胞百分率及l f n 吖、i l 1 7 水 平与治疗前组比较，差异无统计学意义；t r e g 细胞百分率及t g f p 水平较治疗前 组升高俨 0 0 5 ) ；i l 1 0 水平与治疗前组比较，差异无统计学意义；l l _ 4 水平较治疗 3 徐州医学院硕士学位论文 前组升高( 尸 o 0 5 ) 。无效组t h l 、t h l 7 、t r e g 细胞百分率及相应细胞因子i f n 吖、 i l 4 、i l 1 7 、t g f 1 3 、i l 1 0 与治疗前组比较，差异无统计学意义。t h 2 细胞百分 率在上述各组件比较，差异均无统计学意义。 3 i t p 患者治疗后外周血c d 4 + t 细胞亚群百分率及细胞因子浓度：完全反应 组t h l 、t h l 7 、t r e g 细胞百分率及相应细胞因子l f n 吖、l l 一4 、i l 1 7 、t g f 一1 3 、i l - 1 0 与对照组比较，差异均无统计学意义。有效组t h l 、t h l 7 细胞百分率及l l 1 7 水 平高于对照组( 尸 o 0 5 ) ；t r e g 细胞百分率及l l 1 0 水平均低于对照组( 氏0 0 5 ) ；i l 4 水平低于对照组( 氏o 0 5 ) ；i f n - 7 、t g f 1 3 水平与对照组比较，差异无统计学意义。 无效组t l l l 、t h l 7 细胞百分率及相应细胞因子l f n 吖、l l 1 7 较对照组均升高 ( 尸如0 5 ) ；t r e g 细胞百分率及t g f - p 、i l 一1 0 水平低于对照组( 尸 o 0 5 ) ；l l 4 水平低 于对照组( 尸如0 5 ) 。t h 2 细胞百分率在上述各组间比较，差异均无统计学意义。 4 1 t p 患者治疗前组c d 4 + t 细胞亚群之间相关分析：l t p 患者治疗前组t h l 细胞与n 1 1 7 细胞之间成正相关性( r = 0 5 5 ，p = o 0 1 ) ，其余各组i t p 患者t h l 、t h 2 、 t h l 7 、t r e g 细胞之间两两分析均无相关性。i t p 患者治疗前组外周血浆i l 1 7 、 i f n 吖、i l _ 4 、t g f 1 3 、i l 1 0 水平之间均无相关性。治疗前组患者血小板计数与c i m + t 细胞亚群及相关细胞因子之间均无相关性。 结论本研究结果表明，c d 4 + t 细胞亚群失衡可能与1 1 1 p 的发病有关，i t p 患者治疗前t h l 和t h l 7 细胞之间存在正相关；治疗后c d 4 + t 细胞亚群的变化可 作为判断i t p 治疗效果的一个项指标。 关键词免疫性血小板减少症；t h l t h 2 ；调节性t 细胞；t h l 7 细胞 4 t 徐州医学院硕士学位论文 p r o f i l e so fd i f f e r e n ts u b s e t so fc d 4 + tc e l l si np e r i p h e r a lb l o o d o fi m m u n et h r o m b o c y t o p e n i a a b s t r a c t o b j e c t i v e t oi n v e s t i g a t et h ep r o f i l e so ft h l ，t h 2 ，t h l7 ，a n dr e g u l a t o r yt ( t r e g ) c e l l s i np e r i p h e r a lb l o o do fp a t i e n t sw i t hi m m u n et h r o m b o c y t o p e n i a ( i t p ) ，a n dt oc l a r i f yt h e ， r o l eo fc d 4 + t l y m p h o c y t es u b s e ti np a t h o g e n e s i so fi t p m e t h o d sp a t i e n t sw e r ed i v i d e di n t ot h ea c t i v es t a g eg r o u p ( n = 3 0 ) a n dp o s t - t r e a t m e n t g r o u pa c c o r d i n gt ot h ep l a t e l e tc o u n ta n dt h ee f f e c to ft r e a t m e n t p o s t - t r e a t m e n tg r o u p w a sf u r t h e rd i v i d e di n t or e m i s s i o ns t a g eg r o u p ( n = 2 0 ) ，p a r t - r e m i s s i o ns t a g eg r o u p ( n 2 6 ) ， a n dn o n - r e m i s s i o ns t a g eg r o u p ( n = 4 ) 3 0h e a l t h ys u b j e c t sw e r ei nc o n t r o lg r o u p f l o w c y t o m e t r yw a su s e dt om e a s u r et h ef r e q u e n c yo fi n t r a c e l l u l a rc y t o k i n e si f n - 7 ，i l - 4 ， l l 1 7t oi d e n t i f yt h et h l ，t h 2 ，t h l 7c e l l s t r e gc e l l sw e r ei d e n t i f i e d 诵t h c d 4 + c d 2 5 h i g l l c d l2 7 姗c e l l s t h ec o n c e n t r a t i o n so fi f n - 丫，l l 4 ，i l - 17 ，t g f - pi n p l a s m aw e r ed e t e c t e dw i t he l i s a w ea l s oa n a l y z et h ec o r r e l a t i o nb e t w e e np e r i p h e r a l p l a t e l e tc o u n t so fi t pp a t i e n t si na c t i v es t a g eg r o u pa n d c d 4 + tl y m p h o c y t es u b s e t so f i t pp a t i e n t si na c t i v eg r o u p r e s u l t st h ep e r c e n t a g e so ft h l ，t h l7c e l l si na c t i v es t a g eg r o u pw f a es i g n i f i c a n t l y h i g h e rt h a nt h o s ei nc o n t r o lg r o u p ( p 0 0 5 ) ；t h ep e r c e n t a g e o ft r e gc e l l si na c t i v es t a g e g r o u pw a sl o w e rt h a nt h a ti nc o n t r o lg r o u p ( 尸 o 0 5 ) t h ep e r c e n t a g e so ft h l ，t h l 7 ， t r e gc e l l sw e r en os t a t i s t i c a l l yd i f f e r e n tb e t w e e nr e m i s s i o ns t a g eg r o u pa n dc o n t r o l g r o u p ；t h ep e r c e n t a g eo ft h lc e l l si nr e m i s s i o ns t a g eg r o u pw a sl o w e rt h a nt h a ti n a c t i v es t a g eg r o u p 妒如0 5 ) ；t h ep e r c e n t a g eo ft r e gc e l l si nr e m i s s i o ns t a g eg r o u pw a s 。higher t h a nt h a ti na c t i v es t a g eg r o u p ( 尸i o 0 5 ) t h ep e r c e n t a g e so ft h l ，t h l 7c e l l si n p a r t - r e m i s s i o ns t a g eg r o u pw e r eh i g h e rt h a nt h o s ei nc o n t r o lg r o u p 俨如0 5 ) ；t h e p e r c e n t a g eo ft r e gc e l l sw a sl o w e rt h a nt h a ti nc o n t r o lg r o u p 妒如0 5 ) t h e r ew e r en o s t a t i s t i c a l l yd i f f e r e n c e sb e t w e e nn o n - r e m i s s i o ns t a g eg r o u pa n dc o n t r o lg r o u pf o r p e r c e n t a g e so ft h l ，t h l 7c e l l s ；t h ep e r c e n t a g eo ft r c gc e l l si nn o n r e m i s s i o ns t a g e g r o u pw a sl o w e rt h a nt h a ti nc o n t r o lg r o u p 俨 o 0 5 ) t h ep e r c e n t a g e so f t h 2c e l l si n a c t i v es t a g eg r o u p ，r e m i s s i o ns t a g eg r o u p ，p a r t - r e m i s s i o ns t a g eg r o u p ，n o n r e m i s s i o n s t a g eg r o u pw e r ed e c r e a s e dc o m p a r e d 谢mt h o s ei nc o n t r o lg r o u p ，b u tt h e r ew e r en o 5 徐州医学院硕士学位论文 二_ 一一 s t a t i s t i c a l l yd i f f e r e n tb e t w e e na n yt w oo ft h et h r e eg r o u p s t h er a t i o so ft hl t h 2c e l l s 1 na c t i v es t a g eg r o u p , p a r t 。r e m i s s i o ns t a g eg r o u pw a s h i g h e rt h a nt h a ti nc o n t r o lg r o u p ( 氏0 0 5 ) t h er a t i oo ft h l t h 2c e l l sw a sn os t a t i s t i c a l l yd i f f e r e n tb e t w e e nr e m i s s i o n s t a g eg r o u pa n dc o n t r o lg r o u p t h er a t i oo fp e r i p h e r a lb l o o dt h17 t r e gc e l l si na c t i v e s t a g eg r o u p ，r e m i s s i o ns t a g eg r o u p ，p a r t - r e m i s s i o ns t a g eg r o u pw a s h i g h e r 弱c o m p a r e d t ot h a ti nc o n t r o lg r o u p ( p o 0 5 ) t h er a t i oo fp e r i p h e r a lb l o o dt h l7 t r e gc e l l si n n o n 。r e m i s s i o ns t a g eg r o u pw a sh i g h e rt h a nt h a ti nc o n t r o lg r o u p b u tt h e r ew e r en o s t a t i s t i c a l l yd i f f e r e n c e t h ep l a s m a i f n 吖l e v e l si na c t i v es t a g eg r o u p ，p a r t r e m i s s i o n s t a g eg r o u p ， n o n 。r e m i s s i o ns t a g eg r o u pw e r eh i g h e rt h a nt h a ti nc o n t r o lg r o u p ( p o 0 5 ) ；t h e r ew a s n os i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nr e m i s s i o ns t a g eg r o u pa n dc o n t r o l si n t h ep l a s m a e x p r e s s i o no fi f n - 1 , t h ep l a s m ai l - 4l e v e l si na c t i v es t a g eg r o u p ，n o n r e m i s s i o ns t a g e g r o u p ，p a r t 。r e m i s s i o ns t a g eg r o u pw e r el o w e rt h a nt h o s ei nc o n t r o l s t h ep l a s m ai l - 4 l e v e li nr e m i s s i o ns t a g eg r o u pw a sl o w e rt h a nt h a ti nc o n t r o l s ，b u tt h e r ew e f en o s t a t i s t i c d i f f e r e n c e t h e r ew a sn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e ni t p p a t i e n t sa n dc o n t r o l si nt h e p l a s m ae x p r e s s i o no fi l 17 t h ep l a s m at g f - bl e v e l si na c t i v e ，n o n r e m i s s i o ns t a g e g r o u p sw e r el o w e rt h a nt h o s ei nc o n t r o lg r o u p 妒 3 0 1 0 9 l ，并且至少比基础血小板数增加2 倍，且没有出 血表现) 、无效组4 例( 治疗后血小板计数 3 0 x1 0 9 l 或者血小板数增加不到基础值 的2 倍或者有出血表现) 。所有标本均无菌条件下抽取外周静脉血2m l ，肝素抗凝， 2 4 , 时内进行处理。 2 2f c m 检测c d 4 + t 细胞亚群百分率 2 2 1 细胞培养 取一个e p 管加入1 0 0i l l 新鲜肝素抗凝血，8 6 0g lr p m l l 6 4 0 培养基，1 0 肛lp m a 工作液，1 0v t li o n o m y c i n 工作液，2 0 lb f a 工作液，混匀，体系中p m a 、l o n o m y c i n 、 b f a 终质量浓度分别为5 0n g m l 、7 5 0n g m l 、1 0 9 l m l 。在3 7 c 水浴箱中培养3 小 时。 2 2 2c d 4 + t 细胞亚群胞内染色 将上述培养的细胞悬液轻轻混匀，分为三管( 流式管) ，每管6 0 0 i t l ，离心2 0 0 0 转分，2 分钟； 震荡混匀，加入f i t ca n t i - h u m a nc d 4 单克隆抗体2 l ，避光孵育15 分钟； 加1 0 0 9 l 固定液，避光孵育1 5 分钟： 加入2 m ll x p b s 洗涤，混匀，离心2 0 0 0 转分，2 分钟； 弃上清震荡混匀，加入1 0 0 p 1 破膜剂，轻轻混匀，避光孵育5 分钟； 在三管中分别加入a f 6 4 7a n t i - h u m a ni l 1 7 a 、a p ca n t i - h u m a ni f n - 丫、p e a n t i h u m a ni l _ 4 单克隆抗体各2 p l ，轻轻混匀，避光孵育1 5 分钟； 三管中分别加入2i i l l1x p b s 洗涤，混匀，离心1 5 0 0 转分，5 分钟，弃上清，加 入1 0 0 i _ dp b s 缓冲液，上机检测。 1 4 徐州医学院硕士学位论文 2 2 3f c m 检测t r e g 细胞百分率 取一个流式试管，加入f i t ca n t i h u m a nc d 4 p ea n t i h u m a nc d 2 5 a f 6 4 7 a n t i h u m a nc d l 2 7 单克隆抗体各2 山，再加1 0 0g l 新鲜肝素抗凝血，混匀，避光 孵育2 0 分钟，然后加入ll i l l 溶血素溶血，避光放置5 分钟，2l l l l1x p b s 洗涤2 次，上机检测。 。 2 3e l i s a 法检测外周血血浆中i l 一1 7 、i f n - y 、i l - 4 、t g f 一1 3 、i l 1 0 含量 2 3 1e l i s a 标本准备：肝素抗凝外周静脉血，静置1 5 分钟，离心1 0 0 0 转分，2 0 分钟，小心收集血浆于e p 管中，每管1 0 0 1 d ，于9 0 c 冰箱冻存备用。 2 3 2 操作步骤 取出试剂盒，于室温( 2 0 2 5 c ) 放置1 5 3 0 分钟。实验过程应在室温( 2 0 2 5 ) 内进行； 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入1 0 0 山的标准品溶液于空白微孔中； 空白微孔中加入1 0 0p l 的样品，空白对照加入1 0 0p l 的蒸馏水； 在各孔中加入5 0 9 l 的酶标记溶液；( 不含空白对照孔) ； 将酶标板用封口胶密封后，3 7 c 孵育反应1 小时；( 在孵育箱中保持稳定的温度 与湿度) ： 充分清洗酶标板3 5 次，保持各孔有充足的水压；( 浓缩洗涤液以1 t1 0 0 的比 例与蒸馏水稀释) ； 酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干； 各孔加入显色剂a 、b 液各5 0p l ；( 不含空白对照孔) ； 2 0 2 5 下避光反应1 5 分钟； 各孔加入5 0 9 l 终止液，终止反应。 2 3 3 结果判定 每个标准品和标本的o d 值应减去空白孔的o d 值； 绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，o d 值作纵坐标，以平滑线连接各标准 品的坐标点。通过标本的o d 值可在标准曲线上查出其浓度。 _ i 。i ， 徐州医学院硕士学位论文 3 统计学处理 运用s p s s i6 0 统计软件对数据进行统计描述和分析。计量资料的数据以均数 标准差( x s ) 表示，两组间的比较采用f 检验，多组间的比较采用方差分析。 相关分析应用s p e a r m a n s 检验。p o 0 5 具有统计学意义。 1 6 徐州医学院硕士学位论文 结果 1 i t p 患者治疗前外周血c d 4 + t 细胞亚群及相应细胞因子，t h l t h 2 、t h l 7 f r r e g 细胞比率 i t p 患者治疗前组c d 4 + t 细胞亚群百分率及比率分别为： r h l ( 8 0 24 - 5 5 3 1 、 1 h 2 ( 1 0 44 - o 5 4 ) 、t h l 7 ( 2 5 7 士0 7 3 ) 、t r e g ( 2 4 74 - 1 2 6 ) 、t h l t h 2 ( 1 9 2 14 - 4 5 2 ) 、t h l 7 t r e g ( 1 2 1 士0 5 7 ) ，对照组分别为：t h l ( 1 2 7 64 - 2 2 7 ) 、t h 2 ( 1 2 8 士o 4 9 ) 、t h l 7 ( 2 o l4 - o 5 4 ) 、t r e g ( 6 0 24 - 1 4 5 ) 、t h l t h 2 ( 1 0 7 84 - 1 5 1 ) 、 t h l 7 t r e g ( 0 4 3 士0 1 0 ) ；i t p 患者治疗前组c d 4 + t 细胞亚群相应细胞因子水平分 别为： f n - t ( 1 8 1 34 - 4 5 8 ) n e , t t , 、i l 一4 ( 3 5 94 - 1 8 1 ) n g l 、i l 1 7 ( 1 7 3 34 - 2 7 3 ) n g l 、 t g f 一1 3 0 0 0 8 7 04 - 1 3 7 2 4 ) n g t , 、i l - 1 0 ( 7 3 0 士1 5 1 ) n g l ，对照组分别为：i v n - 1 , ( 1 4 5 3 4 - 4 0 9 ) n e , l 、i l - 4 ( 5 2 44 - 2 2 5 ) n g 皿、i l l7 04 5 64 - 2 3 6 ) n g l 、t g f - 1 3 ( 12 5 7 0 0 4 - 1 7 0 9 1 ) n g l 、i l 1o ( 1 0 8 44 - 1 1 0 ) n e , l 。两组相比t h l 、t h l 7 细胞百分率及t h l t r h 2 、 t h l 7 f r r e g 比率升高，t r e g 细胞百分率降低( 尸 o 0 5 ) ；i f n 吖、i l 1 7 水平高于对 照组，i l - 4 、t g f - 1 3 、i l 一1 0 水平低于对照组( 尸 0 0 5 ) 。具体见表l 、2 ，图l 。 2 i t p 患者外周血c i ) 4 + 1 - 细胞亚群及细胞因子在治疗前、后的变化 i t p 患者完全反应组治疗后t h l ( 1 2 5 44 - 2 8 3 彤、t h l 7 ( 2 0 7 - 1 - 0 8 8 ) 、 i f n 叫( 1 3 8 84 - 2 8 6 ) n 9 1 l 、i l 1 7 ( 1 4 0 14 - 2 2 3 ) n g l 高于治疗前组t h ( 1 7 4 7 士 5 7 9 ) 、t h l7 ( 2 6 8 士0 7 0 ) 、i f n 吖( 8 5 94 - 5 18 ) n g l 、i l 一1 7 0 7 2 3 士3 0 9 ) n g l ( 氏0 0 5 ) ；t r e g ( 5 1 74 - 1 0 7 ) 、t g f 1 3 ( 1 1 3 9 4 04 - 1 6 4 1 3 ) r i g t , 、i l 一1 0 ( 1 0 8 0 士 3 4 2 ) n e , l 高于治疗前组t r e e , ( 2 9 84 - 1 2 5 ) 、t g f 一1 3 ( 9 9 2 7 4 士1 5 0 4 7 ) n g l 、 i l 一1 0 ( 7 4 8 士1 5 3 ) n g l ( p 0 0 5 ) ；i l - 4 ( 5 0 54 - 1 6 6 ) n g l 高于治疗前组( 3 9 1 4 - 1 9 8 ) n g l ( p o 0 5 ) 。有效组治疗后t h l ( 2 0 7 8 士4 4 2 ) 、t h l 7 ( 2 6 44 - o 6 1 ) 、 i f r , l - r ( 1 6 2 44 - 1 2 1 ) n g l 、i l 一17 ( 1 8 0 8 士1 3 5 ) n g l 、i l 1 0 ( 5 9 34 - o 3 3 ) n g l 与治疗 前组比较t i l l ( 2 0 17 + 6 5 8 ) 、t h l 7 ( 2 5 6 + 0 7 6 ) 、i f n - q , ( 17 5 04 - 1 3 8 ) n g l 、 1 7 徐州医学院硕士学位论文 i l - 1 7 ( 1 8 1 24 - 1 2 1 ) 、i l 一1 0 ( 8 7 14 - 1 s 8 ) n g l ，差异无统计学意义；t r e g ( 2 6 04 - 0 7 9 ) 、t g f f f ( 1 2 6 3 7 04 - l1 0 0 2 ) n g l 较治疗前升高t r e 叭1 7 64 - o 9 1 ) 、 t g f - 1 3 ( 1 0 8 6 5 04 - 9 4 8 9 ) n g l ( p 0 0 5 ) ；i l - 4 ( 3 5 5q - 0 4 4 ) n g l 高于治疗前组( 2 9 14 - 0 4 1 ) n g l ( 氏0 0 5 ) 。无效组t h l ( 1 6 4 84 - 1 0 9 ) 、t h l 7 ( 2 9 34 - 0 1 2 ) 、t r e g ( 1 3 7 4 - o 4 2 ) 及i f n v ( 1 7 9 74 - 0 7 9 ) n g l 、i l - 1 7 ( 1 7 1 84 - 0 9 1 ) n g l 、t g f - 1 3 ( 9 2 4 3 8 4 - 4 9 6 7 ) n g l 、i l 一10 ( 5 8 04 - 0 2 7 ) n g l 与治疗前组比较t h l ( 1 6 5 74 - 2 0 7 ) 、 t h l 7 ( 2 1 94 - 0 8 4 ) 、t r e g ( 1 7 7 士0 5 4 ) i f n - v ( 1 6 1 84 - 1 2 3 ) n g l 、i l 一1 7 ( 1 6 8 74 - 0 1 0 3 ) 、t g f 0 ( 9 6 7 7 5 士9 4 7 9 ) n g l 、i l 一10 ( 5 9 3 士0 3 3 ) n g l ，差异无统计学意义； t h 2 细胞百分率在上述各组之间比较，差异均无统计学意义。具体见表3 、5 ，图2 、 3 。 3i t p 患者治疗后外周血c 0 4 + t 细胞亚群及相应细胞因子的浓度 l t p 治疗后完全反应组t h l 、t h l 7 、t r e g 细胞百分率及相应细胞因子i f n - q , 、 i l 4 、i l 1 7 、t g f d 、i l 1 0 水平与对照组比较，差异无统计学意义。有效组t h l 、 t h l 7 细胞百分率及i l 1 7 水平高于对照组俨 o 0 5 ) ；t r e g 细胞百分率及i l 1 0 水平 均低于对照组( p 0 0 5 ) ；i l 4 水平低于对照组c p 0 0 5 ) ；i f n - 丫、t g f - p 水平与对 照组比较，差异无统计学意义。无效组t h l 、t h l 7 细胞百分率及相应细胞因子 i f n 吖、l l - 1 7 较对照组均升高c p 0 0 5 ) ；t r e g 细胞百分率及t g f - p 、i l 1 0 水平低 于对照组( p o 0 5 ) ；l l _ 4 水平低于对照组( p o 0 5 ) 。t h 2 细胞百分率在上述各组问 比较均无统计学差异。具体见表4 、6 ，图4 、5 。 4i t p 患者治疗前组t h l 、t h 2 、t h l 7 、t r e g 细胞亚群及细胞因子的相关分析 1 1 1 p 患者治疗前组t h l 、t h 2 、t h l7 、t r e g 细胞百分率两两分析，发现只有治 疗前组t h l 、t h l 7 细胞之间有正相关性( f o 5 5 ，p = - 0 0 1 ) 。i t p 患者治疗前组外周 血浆i f n q 、i l 4 、i l 1 7 、t g f p 、i l 1 0 水平两两分析，均无统计学意义的相关 性。同时对t h l 、t h 2 、t h l 7 、t r e g 细胞和相应细胞因子i f n 吖、i l - 4 、i l 一1 7 、t g f p 、 i l 1 0 相关分析，未发现有统计学意义的相关性。具体见表7 、8 ，图1 l 。 5l t p 患者治疗前组外周血c d 4 + t 细胞亚群与血小板计数相关分析 1 8 徐州医学院硕士学位论文 i t p 患者治疗前组t h l 、t h 2 、t h l 7 、t r e g 细胞及相应的外周血细胞因子水平 与血小板计数之间进行相关分析，未发现有统计学意义的相关性。具体见表9 、1 0 。 1 9 徐州医学院硕士学位论文 讨论 l t p 是一获得性自身免疫性疾病，因血小板遭免疫性破坏，导致外周血中血小 板减少，表现为广泛的皮肤黏膜及内脏出血。i t p 是临床常见的出血性疾病，约占 出血性疾病的3 0 ，其死亡率约1 ，主要死于颅内出血。i t p 的年发病率在儿童 约为4 6 1 0 0 万人口，成人约为3 8 1 0 0 万人口1 3 4 】。该病可发生于任何年龄阶段，男 女各半，但育龄期女性略多于同年龄段男性，6 5 岁以上老年发病率呈上升趋势， 严重影响人类健康。一直以来i t p 的诊断是一个排除性诊断，目前尚无根治方法。 因此，很多学者对i t p 的发病机制进行了深入的研究，但是，目前关于i t p 发病 机制仍未完全明了。传统观念认为机体体液免疫异常，产生了抗血小板抗体介导 血小板在单核吞噬细胞系统破坏，导致外周血小板数目明显减少。但是这并不能 解释所有的i t p 发病情况，比如并非所有i t p 患者血浆都能破坏正常人血小板， 也并非全部i t p 患者都能检测到抗血小板抗体。目前越来越多的研究证据表明细 胞免疫异常在i t p 的发病过程中发挥着重要的作用。 初始c d 4 + t 细胞在体内不同的微环境下，被抗原激活、增殖，分化为t h l 、 t h 2 、t r e g 、t h l 7 细胞等亚群。c d 4 + t 细胞亚群通过释放不同的细胞因子来实现 免疫应答。t h l 、t h 2 细胞是传统观念的c d 4 + t 细胞亚群，二者在免疫应答过程 中相互调节和制约。t h l 细胞分泌i f n 吖，i l 2 、t n f p 等，促进t 淋巴细胞分化、 增殖，激活细胞毒t 细胞、巨噬细胞而介导细胞免疫效应。t h 2 细胞分泌i l _ 4 、i l 5 、 i l 6 等，主要辅助b 淋巴细胞产生抗体，介导体液免疫效应。t h l t h 2 细胞之间 的平衡是维持免疫稳定的重要环节。p a n i t s a s 等【9 】用荧光定量r t - p c r 法检测细胞 因子基因表达，发现i t p 患者t h l 细胞因子i l - 2 、i f n - y 表达水平较健康者升高， 而t h 2 细胞因子i l - 4 、i l 1 0 表达水平下降。w a n g 等【3 5 l 用f c m 、实时定量聚合酶 连反应法测得i t p 患者存在t h l t h 2 细胞比例失调，呈t h l 细胞极化状态。 r o b e r t 0 1 3 6 1 用f c m 测得i t p 患者t h 2 细胞百分率明显降低，而t h l 细胞百分率无 徐州医学院硕士学位论文 明显变化。本实验用f c m 检测i t p 患者外周血t h l 、t h 2 细胞百分率，同时用e l i s a 法检测i t p 患者外周血浆l f n 吖、i l - 4 水平。我们发现i t p 患者治疗前组t h l 细胞 百分率、i f n - t 水平明显高于对照组，虽然t h 2 细胞百分率与对照组比较，差异无 统计学意义，但i l 4 水平低于对照组，且t h i t h 2 细胞比率高于对照组。我们考 虑t h 2 细胞可能通过i l - 4 介导i t p 的发病。因此，t h l 、t h 2 细胞失衡可能参与 i t p 的发病过程。治疗后完全反应组t h l 细胞百分率、i f n y 水平较治疗前组降低， l l 4 水平升高，而对治疗反应差的无效组t h l 、t h 2 细胞百分率及i f n y 及l l 4 水平与治疗前组无差别。提示n l l 细胞及i f n y 、i l 一4 可作为判断疗效的指标之 一o t h l 7 细胞是2 0 0 5 年p a r k l 2 5 1 在e a e 和c i a 典型的自身免疫性动物模型研究中发 现的不同于t h l 、t h 2 细胞的c d 4 + t 细胞亚群。t h l 7 细胞通过分泌i l 1 7 发挥促炎反 应，i l 1 7 可以诱导局部细胞分泌吸引中性粒细胞的细胞因子和趋化因子。k o h n o 等人1 2 6 1 用r t p c r 法检测r a 患者外周血l l 1 7 的基因表达较健康者明显升高。f u j i n o 等人【2 y l 用e l i s a 检钡j j l l 1 7 水平，r t p c r 检测l l 1 7 基因表达，发现i b d 患者肠黏膜 和外周血中i l 1 7 水平和i l 1 7 基因表达高于健康者。关于t h l 7 细胞与i t