（农业昆虫与害虫防治专业论文）黄褐油葫芦teleogryllus+derelictus虫体营养价值的研究.pdf

黄褐油葫芦( t e l e o g r y l l u sd e r e l i c t u s ) 虫体营养价值的研究 摘要 本试验以黄褐油葫芦为研究对象，通过对其营养成分及其与发育阶段相关性 的研究，提出了黄褐油葫芦做为资源昆虫，其营养成分的含量及获取最佳营养的 虫态或发育阶段。为其有效开发和刺用提供了确凿的科学依据。试验根据黄褐 油葫芦的个体发育过程，选取卵、1 龄、3 龄、5 龄、7 龄、9 龄若虫、羽化3 日 的雌、雄威虫和羽化1 0 日的雌、雄成虫1 0 个发育阶段，分别测定其虫体所含的 营养成分和化学物质。试验结果如下：黄褐油葫芦不同发育阶段的虫体鲜重蛋白 含量平均为1 5 9 2 ，富含1 8 种氨基酸，必需氨基酸的含量达4 5 5 6 ，有2 种限 制性氨基酸；脂肪平均含量为5 4 0 ，属于高蛋白低脂肪的昆虫，合有7 种主要 的脂肪酸，不饱和脂肪酸达5 7 3 ，其中亚油酸的含量高达2 5 4 7 ；含糖量为 1 7 6 ；水分含量为7 0 3 4 ；灰分含量为2 5 9 ；含有c a 、p 、m g 、f e 、z n 、c u 、 c r 、m n8 种微量元素，其中c a 、f e 、z n 的含量较高，分剐为i i 6 4 u g g 、3 2 0 3 u g g 和1 0 7 9 u g g ；虫体富合维生素，其中v 含量为4 3 6 0 3 u g l o o g ，v 。为 0 3 4 m g 1 0 0 9 ，v c 为1 2 2 m g l o o g ：虫体含有抗氧化、清除自由基的酶，包 括过氧化物酶、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶，酶活力分另1 j 为1 6 9 4 u g 、 9 1 9 5 u g 和2 3 1 7 u g 。蛋白质含量在若虫和成虫期与发育阶段呈正相关，除胱 氨酸外1 7 种氨基酸含量在若虫期与发育阶段呈正相关，脂肪、脂肪酸、脂肪酸 中软脂酸和油酸、v 。v 。的含量及过氧化氢酶活力与发育阶段呈正相关。 关键词食用昆虫黄褐油葫芦营养成分发育阶段相关性分析 a b s t r a c t ： a s t u d yo nt h en u t r i t i o n a lv a l u eo f t e l e o g r y l l u sd e r e l i c t u s t h es t u d yh a sb e e nc o n d u c t e do nn u t r i e n to ft e l e o g r y l l u sd e r e l i c t u sg o r o c h o v a n dt h ec o r r e l a t i o nb e t w e e na n t r i e n ta n dg r o w t hs t a g eo ft e l e o g r y l l u sd e r e l i c t u s g o r o c h o vi no r d e tt op u tu pw i t he x a c ts c i e n c eb a s i s n u t r i e n ta n ds o m ec h e m i c a l s u b s t a n c eo ft e 拓o g r y l l u sd e r e l i c t u sg o r o c h o vh a v eb e e nm e a s u r e df r o m1i n s t a r s 3 i n s t a r s ，5i n s t a r s ，7i n s t a r s ，9i n s t a r s ，a d u l to f3d a y sa f t e re m e r g e n c ea n da d u l to f1 0 d a y sa f t e re m e r 卫e n c e t h er e s u l ta sf o l l o w s ：t h ea v e r a g ec o n t e n to fp r o t e i no ft h e d | f f e r e n tg r o w t hs t a g e so ft e l e o g r y i t u sd e r e l i c t u sg o r o c h o va m o u n t st o1 5 9 2 i t c o n t a i n s18k i n d so fa m i n oa c i d sw h i c hi n c l u d e8k i n d so fe s s e n t i a la m i n oa c i d so f w h i c ht h ec o n t e n ti s4 5 5 6 i th a st w ok i n d so fl i m i t i n ga m i n oa c i d s t h ef a tc o n t e n t i s5 4 0 ，o fw h i c hu n s a t u r a t e df a ta c i d su dt o5 7 3 a n dl i n o l e i ca c i d2 5 4 7 t e l e o g r y l l u sd e r e l i c t u sg o r o c h o va l s oc o n t a i n8k i n d so ft r a c ee l e m e n ta n dt h eh i g h e r c o n t e n to fc a ，f ea n dz na m o n gt h e mi s11 6 4 “e d g ，3 2 0 3ue g ga n d1 0 7 9ue g g r e s p e c t i v e l y t h r e ek i n d so fv i t a m i na r ed e t e c t e d t h ec o n t e n to fv aa m o u n st o4 3 6 0 3 l ag 1 0 0 9 ，v b 0 3 4u 1 0 0 9a n d v c l 2 2ug 1 0 0 9 t h e r ea r et h r e ek i n d so fa n t o x i d a n te n z y m ei nt e l e o g r y l l u sd e r e l i c t u sg o r o c h o v t h ea c t i v i t yo fp e r o x i d a s ei s1 6 9 4u g ，c a t a l a s e9 1 9 5u ga n ds u p e r o x i d ed i s m u t a a s e 2 31 7u 儋1 1 1 e r ea l ea c t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e np r o t e i nc o n t e n ta n dt h eg r o w t hs t a g e o ft e l e o g r y l l u sd e r e l i c t u sg o r o c h o vd u r i n gi t s1 a l v a ea n da d u l tp e i o d t h e r ea l ea c t i v e c o r r e l a t i o nb e t w e e nt h ec o n t e n to fa m i n oa c i d se x c e d tc y s t i n ed u r i n gl a l v a ep e r i o d t h e r ea l ea c t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e nt h ec o n t e n to ff a t t o t a lf a t t ya c i d p a l m i t o l e i c a c i d ，o l e i ca c i d ，v b 2 ，v ca n dt h ea c t i v i t yo fc a t a l a s ea n dt h et o t a ig r o w t hs t a g eo fi t k e yw o r d s ：e d i b l ei n s e c t t e l e o g r y l l u sd e r e l i c t u sg o r o c h o v ；n u t r i e n t ：g r o w t h s t a g e ；c o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n t i i 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进, 1 7 i 1 9 研究工作及1 1 ) ( 得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果也不包含为获得吉林农业大学或其他教育机 构的学位证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 貉 为签字闩肌加弓年j j ” 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解吉林农业大学有关保留、使用学位论文的规定，1 4 j 吉林农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允f - t ： 论文被查阅和借阅。本人授权吉林农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编 入柏关数掘库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位沦文作者签名：络拓 签字f 期： 加乡年月i 二| 学位论文作者毕业后去向： 工作单位：弓辛木；6 池犬d - 通i , i l , i c i i l 址： 锄嗽。岁像 签字同期：鲫；年月刀r 电话：口9 - $ j 一77 l 75 7 邮编：，初，驴 前言 蟋蟀隶属于矗翅目( o r t h o p e r a ) 螽斯薅磊( e n s i f e r a ) ，蟋磐馨科 ( g r y l l o i d a e ) 蟋蟀科( g r y l l i d a e ) ，广泛分布予世界各地，全世界已知约1 2 0 0 种，我国有1 2 0 余种。蟋蟀为杂食性昆虫，蕊危密农作物，敬食摄、茎、叶、种 子、果实等。常见种类有大扁头蟋( l o x o b l e m m u sd o e n i t z is t e i n ) 、小扁头蟋( l e q u e s t r i s s a u s s a r e ) 、花臻大臻 t a r b i n s h i e l l u sp o r t e n t o s u s ( l i e h t e n s t e r n ) ) 、斗蟋 v e l a r i f i c t o r a sm i c a d o ( s a u s s u r e ) ) 、银川溜葫芦 t e l e o g r y l l u si n f e r n a l i s ( s a u s s u r e ) 、黄褐滴葫芦 l e q u e s t r i ss a u s s a r e ) 、 北京油葫芦t 。e 1 w w ao h n a c h i m a t s u u r a ) 等“1 。蟋蟀也是一类重要的资源昆虫， 其番较裔盼食用、蔫辩疑观赏价值。函其分布广，资源丰富，可人工大蛩饲养， 且食物转纯率高，共有广耀的帮发翡豢。 一国外研究状况 蟋蟀体为世界性瑟虫，对其在生理、海分泌鹈毒理学方面进行了广泛研究， 2 0 擞篼o 霉健开始辩蟋蟀终懑突骏潞耱橱糕秘人类食燕鬣囊震进行入工镧獒褒 究，8 0 年代开始规模饲养技术研究。b u s v i n e ”1f 1 9 5 5 ) 、g h o u r ia n dm c f a r l a n e ”“( 1 9 5 8 ， 9 5 9 等报道了实验室饲养蟋蟀的各种方法，r i c h o t ，e 积 m c f a r l a n e ”3 ( 1 9 6 1 ) 等报道了维生索，蛋自质等营养对其生长发育的影响。而 对予蟋螓鼗；炎食搦琵虫，其营养徐毽豹强究较少，主要集申鑫x 蟋蟀够合成入 体必需脂肪酸豫麻酸的研究。如b l o n q v i s t “| ( 1 9 9 1 ) 对一些昆虫体内的多聚不 饱和旨肪酸魏脂魏羧的研究，发璃蟋蟀以浊酝辅酶a 为底终合成亚麻酸，蕊其在 营养上不依赖予从植物上获得。b o r g e s o n ”( 1 9 9 1 ) 对家蟋薅鞫美国蟑螂细胞器 产垒亚麻黢酌研凳孛，褥翻了檑截结论，惩蟀可瑷魏月漓酸合成亚麻酸，获两揭 示了蟋蟀体内油酸和亚麻酸含量比较高的原因。b a s h a n ”1 ( 1 9 9 6 ) 对黑蟋蛑及其 三静饲料麓气相色谱进 魏舞肪酸缝分的礤究，报遂了黑蟋蟀与馁瓣脂肪酸熬组成 穗含量不同，不f 司性另u 蟋蟀的目旨肪酸含量不阀，在黑蟋蟀体内可以合成亚麻酸。 国外对其链食溺昆虫营养价餐进行了广泛深入她研究。翔g o u l e t ”，( 1 9 7 8 ) c a r o n ( 1 9 7 8 ) r a m o s ( 1 9 9 2 ) o k e o ( 1 9 9 2 ) y o o n ，j o n gh o ( 1 9 9 6 r a m o s - e l o r d a y “”1 9 9 7 ，1 9 9 8 ) g l e w ”( 1 9 9 9 等对i l 个释1 0 0 多耱食鲻昆 虫趵蛋白簇、脂胁、能量等营养成分进行分析，继果表明姥虫钵痰富含氨基酸、 蛋白厦、维生素及微量元素等营养成分，具有鼗自质含量离，营养丰富等特点， 足一种理想的蛋白营养源。s u l a n c i1 1 9 9 2 ) z e e n a t h “( 1 9 9 4 ) o r t e l ”“ ( 1 9 9 5 ) b e q u m ( 1 9 9 9 ) s a i r a b a n u ( 2 0 0 1 ) 等报道了不同寄主、不同饲料、 添加矿物质元素、无机盐、氨基酸和保幼激素等对昆虫营养价值的影响。s i m e k ” ( 1 9 9 0 ) n u r u l l a h o g l u ”“ 1 9 9 7 ) g e r e “”( 1 9 9 3 ，1 9 9 8 ) 研究了温度对昆虫营 养成分的影响，高温条件下昆虫蛋白质和脂肪的含量较低，低温影响不大，但长 时间低温会造成雌蛹和成虫脂肪酸组成发生明显变化。 二国内研究现状 蟋蟀作为食药两用昆虫，具有悠久的历史，有文字记载的就有三千多年的历 史。我国古代诗经中记有u 七月蟋蟀，蟋蟀入药“之辞，李时珍本草纲目 中记载蟋蟀具有利水消肿，解毒消疱的功能”“。在云南少数民族就有将蟋蟀配以 酱油、糖等调料红烧成为佳肴，而台北啤酒饮食店供应的油炸蟋蟀，常常供不应 求。国内对于蟋蟀的系统研究起步较晚，始于二十世纪八十年代，在生理学方面， 王慧玲( 2 0 0 2 ) 利用扫描电镜研究了黄脸油葫芦受精囊的超微结构，吴畏”“”1 ( 2 0 0 1 ，2 0 0 2 ) 对蟋蟀的生殖系统及精子和卵子的发生进行研究，指出蟋蟀在5 龄时可以产生精子和卵。在分类学上，早期主要是对一些蟋蟀种类和新种的报道， 如吴福桢”“( 1 9 8 6 ，1 9 9 2 ，) 康乐”“( 1 9 9 0 ) ，郑彦芬( 1 9 9 2 ) 的报道。9 0 年代以后，随着科学技术的发展，对于蟋蟀的分类研究也进入了一个高级阶段， 郑哲民”( 2 0 0 1 ) ，谢令德”。”i ( 2 0 0 1 ，2 0 0 2 ) 利用扫描电镜对蟋蟀的音锉和音 齿超微结构进行观察，结果表明音锉和音齿的形态结构在种内存在明显差异，可 作为蟋蟀分类的一项重要特征。芦荣胜”( 2 0 0 2 ) 、陈道海”( 2 0 0 2 ) 和康振民 等”“( 2 0 0 2 ) 利用电子计算机对不同种类的蟋蟀鸣声脉冲组的脉冲数、脉冲时问 的长短、时间间隔等进行研究，指出呜声的脉冲相关参数可作为种问鉴别因子。 田英芳“( 2 0 0 2 ) 李凯等“2 ( 2 0 0 3 ) 则从分子生物学角度，应用r a p d 技术对蟋 蟀的基因组进行扩增，筛选适于分类鉴定的引物，对多态性片段进行聚类分析， 聚类结果表明属内、种问关系与传统分类研究结果一致。王宪超“”( 2 0 0 2 ) 、李 娜等“( 2 0 0 3 ) 将蟋蟀作为资源昆虫，进行了人工饲养的研究，而刘于蟋蟀的食 用和药用价值的研究较少，芮和恺等( 1 9 8 1 ) 曾对几种药用昆虫进行脂肪酸的含 量分析“”，发现所试的6 种昆虫和6 种动物中，蟋蟀的亚油酸含量最高为2 4 2 0 ， 与鸡肉的含量相当。许士国等“6 1 ( 2 0 0 0 ) 对三种昆虫蛋白质、氨基酸和脂肪酸的 比较研究中，报道了野生斗蟋属( v e l a r i f i c t o r u s ) 和棺斗蟋属( l o x o b l e m m u s ) 混 合材料的于粉蛋白质含量为6 6 7 ，脂肪酸含量为1 1 2 富含1 8 种氨基酸，不饱 2 和脂肪酸与脂肪酸之比为2 7 4 ，必需脂防酸( 亚油酸和亚麻酸) 的含量为3 8 7 6 。 林育真等”( 2 0 0 0 ) 对济南地区蟋蟀进行调查和营养成分研究，测定了蟋蟀的水 分、粗灰分、总糖、粗脂肪和粗蛋白的含量，指出蟋蟀的蛋白含量占鲜重的2 0 1 8 ， 明显高于鸡蛋( 1 4 3 ) 和鸡肉( 1 7 o ) ，是高蛋白、低脂肪，富含不饱和脂肪酸和 人体必需脂肪酸。但对于蟋蟀不同发育阶段营养成分的变化及维生素等化学物质 含量的深人研究未见报道。 三目的和意义 昆虫个体发育过程中，由于各期昆虫生理结构和代谢存在差异，因此，生理 活动不同，反映在昆虫不同的发育阶段和不同性别的个体之问营养成份也存在差 异，如c a k h a r “”( 1 9 9 1 ) 对蓖麻黄枯叶蛾发育过程中表皮的分析研究指出游离氨 基酸、脂肪酸和蛋白质在雌性幼虫的表皮和茧中含量高于雄性个体，蛋氨酸、脯 氨酸、缬氨酸和氨基丁酸在雌虫表皮中的含量高于雄虫。o g g “”( 1 9 9 2 ) 对烟草 天蛾整个发育阶段，从卵到成虫的特定组织的脂肪酸进行分析，发现不同组织脂 肪酸的谱图不同，个别组织有其独特的脂肪酸构成，不同发育阶段脂肪酸的组成 和含量也存在差异。m u r a d y a n “”( 1 9 9 0 ) 在2 0 3 0 。c 对黄猩猩果蝇( d r o s o p h i 2 a m e l a n o g a s t e r z h ) 个体发育阶段脂类过氧化反应的研究中指出温度升高发育历 期缩短，不饱和脂肪酸，羟基过氧化物，双烯酮类成分增加，发育历期与脂肪酸 的过氧化反应产物相关性明显。 对于蟋蟀个体发育过程中，虫体营养成分变化的研究，国内外尚未见报道。 本试验以黄褐油葫芦为研究对象，通过对黄褐油葫芦从卵到成虫不同发育阶段的 个体进行蛋白质、氨基酸、脂肪、糖、维生素、微量元素、抗氧化酶的测试分析 和研究以期了解蟋蟀个体发育过程中虫体营养成分的变化归规律，为蟋蟀的开 发利用提供科学依据。 四前景与展望 2 0 世纪6 0 年代以后，随着人口的快速增长，环境的恶化，全世界将面临着 食品的危机，特别是蛋白食品匮乏。昆虫因其个体小，种类繁多，分布广，繁殖 速度快，人工饲养容易，食物转化率高，并且多数种类具有体内蛋白质含量高， 脂肪含量低，微量元素丰富等特点，倍受人们青睐。对大量的食用昆虫进行饲养， 研究其生物学特性，评价其营养价值，在此基础上形成了食品昆虫学：经过营养 分析，全世界已经确定出36 5 0 余种昆虫可供食用”。我国食用昆虫种类可能达 到8 0 0 余种，陈晓鸣”“等报道我国目前食用昆虫种类1 1 目5 4 科1 7 7 种，开发利 用的仅2 0 余种，且主要集中对直翅目蝗虫，鳞翅目松毛虫，双翅目蝇蛆和膜翅 目蚂蚁等的研究与开发”。蟋蟀作为高蛋白，低脂肪富含多种人体必需微量 元素的食用保健昆虫，在我国各地均有分布，繁殖速度较快，可大量人工饲养， 食物转化率高，富含人体必需的氨基酸、脂肪酸、微量元素、v b ，：、精氨酸等。 随着对其营养物质及医疗保健功能的研究，将成为我国另一类具有广阔开发前景 的食、药两用昆虫。 1 材料和方法 1 1 试验材料 1 1 1 供试虫源 虫源为吉林农业大学昆虫资源研究室提供的黄褐油葫芦( t e l e o q z y l i u s d e r e l i c t u sg o r o c h o v ) 实验种群。 1 1 2 取样 试验前1 5 天取样，按发育历期，取卵，1 龄，3 龄，5 龄，7 龄，9 龄若 虫，羽化后3 目的雌虫、雄虫，羽化后1 0 日的雌虫和雄虫，数量根据测试项目 而定，取样后清洗、擦净虫体表面水分，称重后速冻，保存于冰箱中，温度为 一2 0 。 1 2 试验方法 1 2 1 黄褐油葫芦蛋白质及氨基酸的测定 1 2 1 1 蛋白质含量的测定 仪器和试剂 试剂：硫酸铜，硫酸钾，硫酸，4 0 9 l 硼酸溶液， 混合指示剂( 1 9 l l 甲基红乙醇溶液与l g l 甲基蓝乙醇溶液2 ：1 ) 4 0 0 9 l ；氢氧 化钠0 i m o l l 盐酸标准溶液。 仪器：电热恒温箱，5 0 0 m l 凯氏烧瓶，定氮蒸馏装置。 试验方法1 样品消化：按黄褐油葫芦发育阶段，准确称取于6 0 电热恒温箱内干燥好 的虫样0 。5 o 8 9 ，移人凯氏烧瓶中，加人l g 硫酸铜，1 0 9 硫酸钾及2 5 m l 浓硫 酸，置于电炉上加热消化，待内容物完全炭化，溶液透明呈蓝绿色，取下漏斗， 4 继续加热0 5 h ，冷却至室温。 蒸馏、吸收：按好蒸馏装置，接收瓶加入5 0 m l4 0 9 b 硼酸溶液及混合指 示剂5 6 滴，凯氏烧瓶内加入1 0 0 m l 蒸馏水和7 0 m l4 0 0 9 b 氢氧化钠，直火加 热蒸馏3 0 m i n 。 计算公式： w= ( 堡：望2 丕q ! q 1 4 丕! q q 丕! m w ：蛋白质的质量分数 c ：盐酸标准液的浓度m o l b v 。：空白滴定消耗标准液量m l v ：试样滴定消耗标准液量m l m ：样品质量g 0 0 1 4 ：氮的毫摩尔质量g m m o l f ：蛋白质系数 1 2 1 2 氨基酸的测定 试剂与仪器 试剂：1 巯基乙酸，6 nh c l 。 仪器：日立8 3 5 5 0 型氨基酸自动分析仪，电热恒温箱，索氏提取器，恒温 水浴锅，真空泵，1 8 8 0 m m 试管，2 5 m i 烧杯。 试验方法“”】 烘干抽脂：按黄褐油葫芦发育阶段，取冻鲜样6 0 。c 烘干，研磨。索氏抽提 1 6 h ，脱去脂肪。 抽真空：取1 8 1 8 0 m m 试管，加入1 5 m g 左右脱脂虫粉、6 nh c l l 5 m l 和1 巯基乙酸i m l ，抽真空，封管后，放置在电热恒温箱中2 4 h ，温度设置为i i 0 。 蒸发： 将试管中溶液过滤，以双蒸水定容于5 0 m l 容量瓶中，从中吸取i m l 样液于2 5 m i 烧杯中，5 0o c 水浴蒸干，再加入i m l 双蒸水蒸干，重复加入双蒸水 和蒸干过程，直至h c l 被彻底蒸发出去为止。 上9 l ：将处理好的虫样上氨基酸分析仪进行检测。 1 2 2 脂肪和脂肪酸的测定 1 2 2 1 脂肪含量的测定 试剂与仪器 试剂：无水乙醚 仪器：索氏提取器，恒温水浴锅，干燥器，恒温箱。 试验方法”i 样品干燥：按黄褐油葫芦发育阶段取冻鲜样，每样重4 6 9 ，记录样重w 并 于1 0 5 。c 干燥至恒重，研磨后称重w 。 索氏抽提：按装好索氏提取器，用滤纸将研磨好的虫粉样包好放人抽提筒中， 倒人乙醚，抽提1 2 1 6 h ，待滤纸包至恒重抽提结束，虫粉称重w 。 计算公式： 鲜虫中粗脂肪含量=i 塑；= 堕! 丕! q q ! w 1 2 2 2 脂肪酸的测定 试剂与仪器 试剂： 石油醚( 沸程3 0 一6 0 ) ，苯，无水乙醇，0 4 m o l l 氢氧化钾一甲 醇溶液。 仪器： 1 0 m l 量瓶，日本岛津g c r i a 型气象色谱仪，氢火焰。 试验方法“ 称取5 0 m g 黄褐油葫芦脂肪，置于1 0 m l 量瓶内，加人1 2 m l 石油醚和苯的 混合剂( 1 ：1 ) ，使油脂溶解。加入l 2 m l0 4 m o l l 氢氧化钾一甲醇溶液，混 匀，静置1 0 m i n ，加人蒸馏水至瓶颈上部，放置待澄清，吸取上清液，室温下吹 人氮使其浓缩，浓缩液进行上机检测。 1 2 3 总糖的测定 试剂和仪器 试剂：蒽酮试剂( 2 9 蒽酮溶于i l9 5 h 2 s o 。中，现用现配) ，浓硫酸( 分析 纯) ，葡萄糖，过氯酸，蒸馏水。 仪器：具塞试管，离心机，容量瓶，移液管，紫外分光光度计。 试验方法“1 葡萄糖标准曲线的制作：取6 支试管配制一系列梯度浓度葡萄糖溶液，每支 试管中加入蒽酮试剂5 m ，摇匀，冰水冷却5 m i n ，然后沸水浴1 0 m i n ，冷却，在 6 2 0 n m 波长下测o d 值，做出标准曲线。 总糖测定：按黄褐油葫芦的发育阶段取冻鲜样，每样0 8 1 9 ，加入0 6 n 过氯酸溶液使蛋白质沉淀，研磨后，定容至1 0 m l ，4 0 0 0 r p m 离心5 m i n 。取上清 夜i m l 加入蒽酮试剂，混匀，冰水冷却5 m i n ，然后沸水浴1 0 m i n ，冷却后测o d 。 值。 计算公式： 1 克样品中的含糖量( r a g ) = 拯选曲线查徨的董垫鳖鎏廑丕! q ：丕q 样品重( g ) 1 2 4 含水量的测定 仪器：称量瓶，电热恒温箱，电子天平，干燥器。 试验方法”“ 按黄褐油葫芦的发育取冻鲜样，每样重( w ) 2 3 9 。取干净的称量瓶于电热 恒温箱中1 0 5 。c 干燥2 h ，在于燥器内冷却3 0 m i n ，称重。再次干燥使之达到恒重， 放入虫样，称重w ，干燥2 h ，冷却3 0 m i n 称重，继续干燥，使之达到恒重w 。 计算公式： 含水量( ) = ( w 2 - w ，) 1 0 0 w 1 2 5 灰分含量的测定 仪器：坩埚，电子天平，高温炉。 试验方法”) 干燥：按黄褐油葫芦的发育历期取冻鲜样，每样2 3 9 予1 0 5 干燥至恒重 w 。 灰化：把坩埚放在预先调至5 5 0 的高温炉中灼烧，移人干燥器中冷却至室 温称重，然后继续高温灼烧至恒重w 。，加入干燥好的虫样，5 5 0 。c 高温灼烧4 h ， 于干燥器中冷却，称重，然后继续高温灼烧至恒重w ：。 计算公式： 干粉中粗灰分( ) = f 丛= 垃! 丕! q q w 1 2 6 敢元录的测定 试剂与仪器 试剂： 去离子水，h n o ，h c l ，h c l o 。，5 0 h 。o 。各种元素的标准液。 仪器： 大试管1 5 1 8 m m ，电热板，p e 5 0 0 0 型原子吸收分光光度计。 试验方法“i 消化：取烘干好的黄褐油葫芦虫样0 5 9 于大试管中，加入2 m l 水和1 0 m lh n o 混匀，在电热板中5 0 加热过夜。然后加入5 0 h 2 0 。i m l ，升温至7 0 继续消 化，2 h 后再加入h 2 0 。i m l ，升温至1 0 0 。c ，每隔1 2 h 加h ：o ：一次，直至液体清 亮为止。 上机检测：将消化液过滤定容于1 0 m 刻度试管中，稀释2 0 倍，于原子吸收 分光光度计上定量测量。 1 2 7 维生素含量测定 1 2 7 1 维生素a 含量测定 试剂与仪器 试剂：维生素a 标准油剂，三氯化锑氯仿溶液2 0 ，无水硫酸钠，氯仿， 无水乙醚，醋酸酐。 仪器：紫外分光光度计，离心机，具塞锥形瓶。 试验方法” 维生索a 标准曲线的制作：取8 支试管配制一系列梯度标准维生素a 溶液， 每支试管中加入i m l 氯仿，1 滴醋酸酐，3 m l 三氯化锑于6 2 0 n m 处测吸光度，绘 制标准曲线。 维生素a 的提取与测定： 按黄褐油葫芦发育阶段取冻鲜样，每样4 5 9 ， 加入足量无水硫酸钠研磨，至水分完全被吸收，移入带塞的锥形瓶中，加入5 0 m l 乙醚，用力摇动2 m i n ，冰水浴2 h 至乙醚液澄清。吸取乙醚提取液2 m l 于比色皿 一h i 7 06 0 水浴蒸干，加人i m 氯仿，1 滴醋酸酐和3 m l 三氯化锑于波长6 2 0 处测 吸光度。 纠算公式： 维生素a ( i u 1 0 0 9 ) = 乜丕y ；基! q q v 2 r n p ：从标准曲线上查得维生素a 的浓度，i u m l v 。：提取维生素a 加入乙醚的量，m l v 。：吸取乙醚提取液的量，m 1 m ： 样品质量，g 1 2 7 2 维生素b ：含量的测定 试剂与仪器 试剂：3 k m n o t ，0 5g l m l 核黄素标准液，荧光红钠0 0 5g l m l 保险粉， 冰醋酸，3 h 2 0 ：，0 i m o l lh c l ，i m o l lh c l ，4 0 n a o h 。 仪器：r f 一5 1 0 型数字式荧光分光光度计，锥形瓶，具塞试管。 试验方法“” t = 曼羔坠 v 2 c ：标准抗坏血酸的浓度， m g m l v 。：抗坏血酸的量，m l v ：消耗染料溶液的量，m l 1 2 8 抗氧化酶活力的测定 1 2 8 1 氧化物酶活力测定 试剂与仪器 试剂：0 2 m o lp h = 6 0 磷酸缓冲溶液，0 1 愈创木酚溶液，0 0 8 过氧化 氢溶液。 仪器：离心机，水浴锅，紫外分光光度计，秒表。 试验方法“”1 酶液提取：按黄褐汕葫芦发育阶段取冻鲜虫样，每样1 9 左右，加入少量蒸 馏水研磨，定容至5 0 m l ，4 0 0 0 r p m 离心1 5 m i n ，上清液即为过氧化物酶的粗提液 酶活力测定：取1 0 m 刻度试管加人l m lp h = 6 0 磷酸缓冲溶液，l m l1 的愈 创木酚，i m l 含酶上清夜，摇匀，立即用秒表记时，测定6 0 s 时，在4 7 0 n m 波长 的光密度值( 以蒸馏水代替酶液进行机器调零) 。 计算公式： 过氧化物酶活力( u g ) = 0 d 。v 。 v 2 m t v ，：酶液总体积，m l v 2 ： 测定酶液体积，m 1 m ： 样品质量，g t ： 反映时间，m i n 1 2 8 2 过氧化氢酶活力测定 试剂与仪器 试剂：1 0 h 2 s o 。，0 2 vm o l m lp h = 7 8 磷酸缓冲液，0 i m o l m lk m n 0 。， 0 1 m o m lh 2 0 2 。 仪器：三角瓶，微量滴定管，水浴锅。 试验方法“” 酶液体取：取冻鲜样2 5 3 9 ，加入p h = 7 8 的磷酸缓冲溶液研磨，以缓冲 溶液定容至2 5 m i ，4 0 0 0 r p m 离心1 0 m i n ，上清夜即为过氧化氢酶的粗提液。 酶活力测定：取4 个5 0 m l 三角瓶( 两个测定，两个比照) ，测定加入酶液 2 5 m l ，对照加入煮死酶液2 5 m l ，以上4 瓶各加入2 5 m l ，0 i m o l m lh 2 0 ：，同 时计时，于3 0 恒温水浴中保温1 0 m i n ，立即加入1 0 h ：s o 。2 5 m l ，用0 i m o l m l k m n o 。滴定h 2 0 ：至出现粉红色为终点。 计算公式： 过氧化氢酶活力( u g )= l 垒二12 丕迅 v 1 w 1 7 a ： k m n o 。滴定对照消耗的体积，m 1 b ： k m n o 。滴定测定消耗的体积，m 1 v 。：酶液总体积，m l v ，： 反映酶体积， m 1 w ：样品鲜重，g 1 2 8 3 超氧化物歧化酶( s o d ) 酶活力的测定 试剂和仪器 试剂：0 0 5 m o l m lp h = 7 8 磷酸缓冲液，1 3 0 m m o l m l 甲硫氨酸溶液 7 5 0m o l m ln b t ，1 0 0m o l m le d t a n a ：溶液，2 0 m o l m l 核黄素。 仪器：离心机，紫外分光光度计，微量进样器，荧光灯( 4 0 0 0 l x ) ，指形 管。 试验方法“1 酶液提取： 取冻鲜样1 o 1 5 9 ，加入2 5 m i ，0 0 5 m o l m lp h ：7 8 的磷 酸缓冲液研磨成匀浆，用磷酸缓冲液定容至1 0 m l ，1 0 0 0 r p m 离心2 0 m i n ，上清夜 即为s o d 粗提液 酶活力测定：取4 支指形管，2 支为测定管，另2 支为对照管，每管中加入 0 0 5 m o l m l 磷酸缓冲液1 5 m l ，1 3 0m m o l m lm e t 溶液0 3 m l ，7 5 0m o l m ln b t 溶液0 3 m l ，i 0 0m o l m le d t a n a i 液0 3 m l ，2 0m o l m l 核黄素0 3 m l ，蒸馏水 0 ，2 5 m i 。2 支测定管各加入5 0l 酶液，2 支对照管各加入5 0l 磷酸缓冲液，混 匀后，将1 支对照管置于暗处，其它各管于4 0 0 0 x 日光灯下反应2 0 m i n ，反应结 束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管在5 6 0 n m 处的光吸收值。 计算公式： s o d 酶活力( u g ) = 21 l 二垒2 丕y a c k w v 。 a “照光对照管的光吸收值 a 。：样品管的光吸收值 v ：样液总体积，m 1 v 。：测定时样品用量，m l w ： 样重，g 2 结果分析 2 1 黄褐油葫芦虫体蛋白质含量与质量 2 1 1 全蛋白含量及其与发育阶段的相关性分析 黄褐油葫芦体内蛋白质占鲜重含量达1 4 5 5 以上，不同发育阶段，含量无 显著差异( 1 4 5 5 9 6 1 7 8 0 ) ( 表1 ) ，卵的蛋白质含量最高为1 7 8 0 ，9 龄若虫 次之，为1 7 6 6 ，而1 龄若虫含量最低为1 4 4 6 ，雌虫与雄虫蛋白质含量差异 不大，3e l 雌、雄成虫含量分别为1 4 5 9 和1 4 5 3 ，1 0e t 雌、雄成虫含量分 别为1 6 0 2 和1 5 8 1 。在若虫期，蛋白质含量与发育阶段呈显著正相关( 表 2 ) ，随着龄期的增加，蛋白含量增加( 图1 1 ) 。 图1 - 1 黄褐油葫芦不同发育阶段蛋白质含量变化柱形图 f i g 1 - 1 v a r i a t i o no f c o n t e n t o f p r o t e i n i n d i f f e r e n ts t a g e o f t e l e o q z y u u s d e r e l i c t u s g o r o c h o v 表1 黄褐演葫芦举弱发臀除段营莠成分显麓挂比较 t a b l e1 。c o m p a r i s o n o fs i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e o f n u t r i e n t i n d i f f e r e n ts t a g e o f t e l e o q z y l l u s 妇，v f 衍冰? g o r o c h o v ! ! 堕趔!艘婴! 塑艟! 强! 望i 艘! ! 塑! 彝 1 7 7 9aa 蛋自鹱 p r o t e i n 滕黪 f 乱 糖 c a r b o h y d r a t e 承分 l t l o i s t u r e 获分 a s h e g g 高龄若虫 1 7 3 0 o l dl a r v a e 成虫 a d u l t 低龄若盛 y o u n gl a r v a e 成虫 a d u t t 高龄若虫 o l dl a r v a e 卵 虫 y o u n gl n s 抬 低龄若虫 y o u n gl a r v a e 成虫 a d u l t 卵 e g g 禽龄若虫 。挝l a r v a e 低龄若虫 y o u n gl a r v a e 成虫 a d u l t 离龄若虫 。磁i a r v a e 卵 e g g 成虫 a d u l t 卵 q 结 高龄若虫 o l dl a l v a e 甄羚若虫 1 5 9 2 1 5 。2 7 。4 2 4 1 4 4 3 3 3 5 1 。9 3 1 8 9 l 。7 8 1 5 2 7 5 9 6 9 0 7 辱8 2 6 6 5 ，6 2 3 3 e 2 。8 莹 2 1 2 i 。9 eeb 3 a a a a 转 b b a 船 勰 8 a a a a 盎 a b a a a a b b c a a a b a b b b a b c 潞低 表2 黄褪油葫芦发耷除段与营养成分的相关性分毫睡 t a b l e2t h ec o r r e l a t i o nb e t w e e nn u t r i e n ta n dg r o w t hs t a g eo ft e f e o q r y l l u s d e r e l i c t u s g o r o e h o v 蘩莽戒努 n 1 2 t r i e | t t 蛋自质 p r o t e i n l 馨骆 f a t 糖 c a r b o h y d r a t e 象分 m o i s t u r e 灰分 g ! ! 婪! ! ! ! ! 鳇! 辩一戚虫藉虫期藩虫藏盔 e g g a d u l t l a r v a el a r v a e - a d u l t 籀关系数( 6 ) 相美系数 v = 3 鞠关系数v = s c o r r e l a t i o nc o e f f j c i e n tc o r r e l a t i o ne , o e 衔c i e n tc o r r e l “o nc o c 踊c i e n t 一0 1 1 3 20 9 2 s o 。2 9 9 8 0 。7 9 2 4 o 0 。9 8 3 2 o 0 。9 8 5 5 * o 一0 2 6 6 00 ，8 6 2 70 2 8 0 5 一o 2 6 2 20 。9 7 2 8 t 一0 。8 7 0 6 0 4 5 2 s0 ，7 4 4 30 8 i 7 i a s h _ 。_ - 。1 。- 。_ - _ - 。_ - _ _ _ _ _ - _ 。- _ - - - _ 。_ _ _ _ _ _ 。_ _ _ _ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - _ _ _ _ _ _ - _ _ - - - - _ _ _ _ _ _ - 。_ 。_ - _ _ _ _ - _ _ _ _ - - _ _ 一 交3 黄嚣i 鞋l 磷芦不溺发霄除段鬣藻黢麴含量( ) t a b l e3c o n t e n to fa m i n oa c i d si nd i f f e r e n ts t a g eo ft e l e o q y l l u sd e r e l i c t u sg o r o c h o v 发商骑瑾 堑坚塑垡垫蹬i_一 韩l 龄3 龄豁7 翡9 龄3 鞍蛾斑3 娃雄盘j oh 雌虫1 0 赫箍囊平王 ； 氟箍教 # * i # oa c i d s 炎门冬勰艘 莽甄黻 t h r o o f i n e 熊馘簸 豁氮融 是l u 蛳n 玳e 甘裁陂 g l y e i a 援薤醴 姗n i n e 麟戴被 e 辨t i n e 蠕懿虢 撼抵簸 m e 出i 舢i n e 辕兜懿骥 毙羲羧 l e u e i n e 酶甄艘 q 悯s i n e 笨瓣垒盂醴 p h e a y l a k 敞i n e 犊懿豫 l 嫡n 对 媳氮教 t r y p l o p h a n e 辙氮敬 m s “凼n 斌 耩簸敞 a r g 鞴i n e 雠懿靛 p r o l i n e 鲺抟麟总蛾 e o n l e n o f d i f f e t ”d a a m i n o e g g l i t a r 3 i n , t a r5 i n s t a r 铘m 9 j t t n rf e m a l e o f 3m a l e o f| e n a a t e 幽1 0 柏垮3 d a y 8 , 硪e 姆sd a y s 3 84 9 7 5 ，们 67 6 6 2 9 2 s 0 9 j 8 。“ 3 ，7 8 7 。2 3 0 。2 9 3 。8 e 4 7 1 3 0 5 5 ， 3 栅 2 曲 3 l ，4 # 1 8 4 i 8 3 3 7 6 7 。7 2 。8 0 4 。1 9 ，7