（免疫学专业论文）新生及成所小鼠对肺炎病毒感染的炎症应答.pdf

目录 iiiiiiii口iiiullullljl7lllisllll 中文摘要1 英文摘要5 研究论文新生及成年小鼠对肺炎病毒感染的炎症应答 前言10 u 目i j 吾l 材料与方法一1 2 结果2 3 附图3 0 附表4 4 讨论4 5 结 仑4 6 参考文献2 6 综述t h er o l eo f c y t o k i n e sa n d c h e m o k i n e si ns e v e r er e s p i r a t o r y s y n c y t i a l v i r u si n f e c t i o na n dsu b s e q u e n ta s t h m a 4 9 致谢7 3 个人简历7 4 中文摘要 新生及成年小鼠对肺炎病毒感染的炎症应答 摘要 目的：呼吸道合胞病毒( r e s p i r a t o r ys y n c y t i a lv i r u s ，r s v ) 是婴幼儿 下呼吸道感染的最重要病原，也是造成老年人和免疫缺陷成人高患病率和 死亡率的重要原因。接种疫苗是预防传染性疾病的重要措施，接种者自然 感染r s v 后往往导致加重的t h 2 型优势应答和肺部炎症性病理损伤，这 是r s v 疫苗成功的主要障碍。几十年来，阐明r s v 的感染机制和疫苗增 强性肺部免疫病理的发病机制一直是r s v 研究领域的最前沿，是研制安 全有效的治疗措施和r s v 疫苗的重要理论基础。 发病机制的研究离不开理想的实验动物模型。小鼠肺炎病毒 ( p n e u m o n i av i r u so fm i c e ，p v m ) 与人r s v ( h r s v ) 同属副粘病毒科、 肺病毒亚科、和肺病毒属，小鼠是p v m 的天然宿主，极少量病毒即可导 致严重感染，p v m 感染小鼠可以复制r s v 严重感染婴幼儿的临床特征和 炎症病理。本研究用p v m 感染新生4 7 天和成年6 - 9 周的雌性b a l b c 小鼠，考察p v m 感染后在新生小鼠和成年小鼠模型中诱导的免疫应答、 炎症反应和肺部病理变化，是发展有效的治疗措施和研制安全有效的r s v 疫苗的重要理论基础。 方法： 1 制备p v m 并用b h k 2 1 细胞滴定。 2 动物实验 将新生4 7 天和成年6 - 9 周b a l b c 小鼠随机分为4 组，每组6 只， 分别为：( 1 ) 新生4 7 天b a l b c 小鼠感染组，( 2 ) 新生4 7 天b a l b c 小鼠对照组，( 3 ) 6 - 9 周b a l b c 小鼠感染组，( 4 ) 6 - 9 周b a l b c 小鼠对 照组。新生组用3 7 5t c i d 5 0p v m 感染，成年组用5 0 0t c i d 5 0p v m 感染。 2 1 每天称量小鼠体重，观察体重变化。 2 2 取新生感染组和新生对照组感染后l 、3 、5 、7 、9 、1 1 、1 4 和l8 天 的肺组织，提取总r n a ，用半定量p c r 扩增p v m 基因s h ，考察小鼠肺 组织中p v m 感染情况。 2 3 将肺冲洗液中的细胞经瑞士吉姆萨染色，计数各种有核细胞，观察感 中文摘要 染后肺部炎症细胞的变化。 2 4 留取感染后3 、7 、1 4 天小鼠的肺组织做病理切片，h e 染色，观察肺 组织中炎症浸润及组织损伤。 2 5 用实时定量p c r 检测感染后l 、3 、5 、9 、1 4 天肺组织的t h l 型细胞 因子i f n - 7 、i l 1 2 ，t h 2 型细胞因子i l 5 、i l 6 、i l 1 3 ，干扰素i f n 仅、 i f n b ，肿瘤坏死因子n 师q ，趋化因子m c p 1 、m i p 1 a 、c c l 5 、m c p 3 ， 黏液因子g o b 5 ，考察感染后t h l t h 2 应答情况，以及肺部炎症反应情况。 2 6 感染后1 4 天取血分离血清，用e l i s a 法测定血清i g g 抗体效价。 2 7 成年组的检测指标同新生组，不同的是成年组增加了感染后4 h 组。 结果： 1 制备了实验所需的p v m 病毒，滴度为t c i d 5 0 = 1 0 2 5 m l 2 体重变化情况 新生小鼠感染组与新生对照组相比，感染后4 天体重减轻，感染后7 天体重下降至最低，然后体重开始慢慢增加，到1 4 天与对照组无差异。 成年感染组与成年对照组相比，感染后3 天体重开始迅速下降，5 天 降至最低，7 天开始体重慢慢增加，8 天逐渐恢复正常。 3 半定量p c r 扩增p v m 基因s h 新生小鼠感染p v m 后1 天基因s h 条带亮度比较弱，感染后5 天条 带最亮，感染后7 天和9 天条带亮度较弱，至18 天消失。 成年小鼠感染p v m4 小时后基因s h 条带亮度较新生小鼠感染1 天 后亮，感染后3 天和5 天达高峰，7 天、9 天稍微减弱，1 4 天进一步减 弱，至18 天消失。 4 肺组织h e 染色 新生和成年对照组小鼠，肺泡壁结构完整，无水肿，周围仅有少量炎 性细胞；新生感染组与对照组相比，感染后3 天肺间质炎性细胞增多，肺 泡壁增厚；感染后7 天明显增多，肺泡壁增厚，水肿，其中大部分为淋巴 细胞，可见单核巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞，1 4 天炎症减弱； 成年感染组感染后3 天和7 天，均有大量炎性细胞浸润，肺泡壁严重充血、 水肿，有出血点，肺泡间隔融合，1 4 天炎症减弱。 5 支气管肺泡灌洗液中观察炎性细胞变化情况 中文摘要 成年小鼠感染p v m3 天和7 天后支气管肺泡灌洗液中细胞总数均大 于新生感染组，成年组感染后3 天中性粒细胞比例是5 3 2 5 ，7 天组中性 粒细胞比例是6 7 0 0 ，而新生小鼠感染后3 天中性粒细胞比例是0 0 0 ， 7 天组中性粒细胞比例是2 7 0 0 ，另外，成年组淋巴细胞比例也高于新生 小鼠，表明成年小鼠感染p v m 后比新生感染组炎性细胞浸润程度严重。 6 e l i s a 法检测小鼠感染1 4 天后血清中特异性抗体i g g 与对照组相比，新生感染组和成年感染组均产生了i g g 抗体，且有显 著性差异( p o 0 5 ) ，成年感染组i g g 抗体效价( 1 4 0 0 ) 高于新生感染组 ( 1 2 0 0 ) 的效价。 7 肺组织中细胞因子的表达情况 新生小鼠感染p v m 后3 天肺组织的t h l 型细胞因子i f n 7 显著高于 对照组( 尸 o 0 5 ) 。 成年小鼠感染p v m 后肺组织t h l 型细胞因子i f n 7 和i l 1 2 表达量 均与对照组有显著差异( 尸 0 0 5 ) ，成年小鼠感染后i l 5 与对照组无差异( 尸 o 0 5 ) ，感染后5 天i l 1 3 表达量是对照组的4 倍( 尸 o o s ) 新生小鼠感染后3 天肺组织i l 6 表达量达高峰( 尸 o 0 5 ) ，是对照组 的17 倍，5 天恢复；成年组i l 6 表达量5 天达高峰，是对照组的18 倍。 在成年和新生鼠中，i f n a 均于感染早期迅速增加，之后急速下降； i f n p 在新生鼠中的表达动力学与i f n c 【一致，但在成年鼠中i f n p 在感 染早期开始表达，5 天才达高峰。 新生小鼠感染后9 天肿瘤坏死因子t n f q 是对照组的3 0 倍( p o 0 5 ) ，而成年小鼠感染后4 小时t n f 0 【肺部表达量是对照组的7 6 倍( p o 0 5 ) 新生小鼠感染后趋化因子m c p 1 、m c p 3 、m i p 1 a 和c c l 5 均与对 照组有显著差异( 尸 o 0 5 ) ，感染后3 天肺组织m c p 1 表达量是对照组 的4 1 倍，至1 4 天低于对照组( 尸 o 0 5 ) ，m i p l a 感染 后5 天是对照组的2 l 倍；感染后3 天c c l 5 是对照组的2 倍( p o 0 5 ) ； 成年小鼠感染p v m 后5 天m c p 1 是对照组的1 2 0 倍( 尸 o 0 5 ) ，至1 4 天是仍高于对照组，m c p 3 感染后5 天是对照组的1 9 5 倍( 尸 o 0 5 ) ，1 4 天仍高于对照组，m i p 1 仅感染后1 天是对照组的5 0 倍( 尸 0 0 5 ) ，至1 4 天时也仍高于对照组( 尸 o 0 5 ) ，感染后1 天c c l 5 是对照组的5 5 倍( 尸 o 0 5 ) 。 黏液因子g o b 5 的肺部表达量新生和成年感染组均与对照组有显著差 异( 尸 o 0 5 ) ，新生小鼠感染后9 天是对照组的6 倍，而成年小鼠感染后 5 天是对照组的1 6 倍，感染后9 天是对照组的1 l 倍，至1 4 天消失，说 明新生小鼠感染p v m 后粘液分泌的变化。 结论： p v m 感染新生和成年b a l b c 小鼠均可导致肺部的炎症病理反应， 成年小鼠的炎症反应比新生小鼠更强烈，类似于r s v 严重感染的婴幼儿。 关键词：呼吸道合胞病毒( r s v ) ；小鼠肺炎病毒( p v m ) ；免疫病 理；炎症应答；细胞因子 英文摘要 i n f l a m m a t o r yr e s p o n s e st op n e u m o v i r u si n f e c t i o ni nn e o n a t a l a n dg r o w nm i c e a b s t r a c t o b j e c t i v e ：r e s p i r a t o r ys y n c y t i a lv i r u s ( r s v ) ，a ni m p o r t a n tp a t h o g e no f t h el o w e rr e s p i r a t o r yt r a c ti n f e c t i o n ，i sr e s p o n s i b l ef o rs e v e r ei l l n e s sb o t hi n n e wb o r na n dy o u n gc h i l d r e na n di n e l d e r l yp e o p l e v a c c i n a t i o ni st h e i m p o r t a n tm e a s u r e t op r e v e n tv i r u si n f e c t i o n t h ev a c c i n a t e dh o s to f t e nl e dt o i n c r e a s e dt h 2 t y p er e s p o n s ea n dl u n gi m m u n ep a t h o l o g ya f t e rr s v i n f e c t i o n t h i si st h em a i n o b s t a c l ef o rs u c c e s s f u lr s vv a c c i n e a n dr s vi n f e c t i o n p a t h o g e n e s i si su n c l e a r f o rd e c a d e s ，c l a r i f y i n gp a t h o g e n e s i so fr s v i n f e c t i o n a n dv a c c i n ee n h a n c e dl u n gi m m u n ep a t h o l o g yi st h em o s ti m p o r t a n ti nt h e r s vr e s e a r c hf i e l d ，a n di st h ei m p o r t a n tb a s i so fd e v e l o p i n gc u t t i n g - e d g e t r e a t m e n tm e a s u r e sa n ds a f ea n de f f e c t i v er s vv a c c i n e t h ei d e a le x p e r i m e n t a la n i m a lm o d e li sr e q u i r e dt os t u d yp a t h o g e n e s i s p n e u m o n i av i r u so fm i c e ( p v m ) ，a l o n gw i t hh u m a nr s v , a r ev i r u s e so ft h e f a m i l yp a r a m y x o v i r i d a e ，s u b f a m i l yp n e u m o v i r i n a e ，i s an a t u r a lm o u s e p a t h o g e n r o b u s tr e p l i c a t i o no fp v m t a k e sp l a c ei nb r o n c h i a le p i t h e l i a lc e l l s i nr e s p o n s et oam i n i m a lv i r u si n o c u l u m p v mi f n e c t i o ni nm i c er e p r o d u c e s m a n yo ft h ec l i n i c a la n dp a t h o l o g i cf e a t u r e so ft h em o r es e v e r ef o r m so fr s v i f n e c t i o ni nh u m a ni n f a n t s i nt h i ss t u d y , n e w b o r n4 - 7d a y sa n d6 - 9w e e k so f a d u l tf e m a l eb a l b cm i c ew e r ei n f e c t e dw i t hp v m i m m u n er e s p o n s e ， i n f l a m m a t o r yr e s p o n s ea n dl u n gp a t h o l o g i c a lc h a n g e sa f t e rp v m i n f e c t i o ni n n e o n a t a lm o u s ea n dg r o w nm o u s em o d e lw e r e i n v e s t i g a t e d ，w h i c hm a y p r o v i d es o m e d a t af o rf u t u r er e s e a r c hu s i n gt h ep v mm o d e l m e t h o d s ： 1p r e p a r a t ea n dt i t e rp v mw i t hb h k 一21c e l l s 2a n i m a le x p e r i m e n t s 4 - 7d a y sn e o n a t a lb a l b cm o u s ea n d6 - 9w e e k sg r o w nb a l b cm o u s e w e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o4g r o u p s ( 6m i c e g r o u p ) ：( 1 ) n e o n a t a lm o u s e 英文摘要 i n f e c t e dg r o u p ，( 2 ) n e o n a t a lm o u s ec o n t r o lg r o u p ，( 3 ) g r o w nm o u s ei n f e c t e d g r o u p ，( 4 ) g r o w nm o u s ec o n t r o lg r o u p t h en e o n a t a lm i c ew e r ei n f e c t e dw i t h 37 5t c i d s 0p v m ，a n dg r o w nm i c ei n f e c t e dw i t h50 0t c i d s 0p v m 2 1w e i g h to ft h em i c ei n f e c t e dw e r eo b s e r v e de v e r y d a y 2 2t h et o t a lr n ao ft h el u n gt i s s u ei nn e o n a t a lm o u s ei n f e c t e da n dc o n t r o l g r o u p1 , 3 ，5 ，7 ，9 ，11 ，14a n d18d a y sa f t e ri n f e c t i o nw a s e x t r a c t e d p v ms hg e n e w a s a m p l i f i e db ys e m i q u a n t i t a t i v er t - p c r 2 3 3 , 7 ，14d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，t h el u n gl a v a g e c e l l sw e r es t a i n e dw i t h s w i t z e r l a n d g i e m s a ，a n da l ln u c l e a t e dc e l l sw e r ec o u n t e d 2 43 , 7 ，1 4d a y sa f t e rt h es p e c i m e n sf r o mi n f e c t e dl u n gt i s s u e so fm o u s ep i e c e o f p a t h o l o g y , h es t a i n i n go fi n f l a m m a t o r yi n f i l t r a t e si nl u n gt i s s u ea n dt i s s u e i n j u r y 2 5l u n gt h l - t y p ec y t o k i n e si f n 一丫，i l 一1 2 ，t h 2t y p ec y t o k i n e si l 一5 ，i l - 6 ， i l 13 ，i n t e r f e r o ni f n 一0 【，i f n p ，t u m o rn e c r o s i sf a c t o rt n f 一仅，c h e m o k i n e m c p 1 ，m i p 1a ，c c l 5 ，m c p 一3 ，a n dm u c u sf a c t o rg o b 5w e r ed e c t e c t e da t 1 , 3 ，5 ，9 ，1 4d a y s a f t e rp v m i n f e c t i o nw i t hr e a l t i m eq u a n t i t a t i v ep c r 2 6s e r u mi g ga n t i b o d y14d a y sa f t e ri n f e c t i o nw a sm e a s u r e db ye l i s a m e t h o d 2 7t h eg r o w ng r o u p sw e r et r e a t e da sn e o n a t a lg r o u p s r e s u l t ： 1p r e p a r a t i o no ft h ee x p e r i m e n tr e q u i r e dp v mv i r u s p v mv i r u st i t e r sw e r e d e t e r m i n e dt c i d 5 0 = 10 7 5 m l 2w e i g h t c o m p a r e dw i t ht h en e o n a t a lm o u s ec o n t r o lg r o u p ，t h ew e i g h to ft h e n e o n a t a lm o u s ei n f e c t e dg r o u ph a sr e d u c e d4d a y sa f t e ri n f e c t i o n ；7d a y sa f t e r i n f e c t i o n ，t h ew e i g h tr e d u c e dt ot h em i n i m u m ，a n dt h e ns l o w l yi n c r e a s e d 14 d a y sa f t e ri n f e c t i o n t h e r ei sn od i f f e r e n c eb e t w e e n t h en e o n a t a lm o u s ei n f e c t e d g r o u pa n dt h en e o n a t a lm o u s e c o n t r o lg r o u p c o m p a r e dw i t ht h eg r o w nm o u s e c o n t r o lg r o u p ，3d a y sa f t e ri n f e c t i o n ， t h ew e i g h to ft h eg r o w nm o u s ei n f e c t e dg r o u pr a p i d l yr e d u c e d ，5d a y sa f t e r i n f e c t i o n ，w e i g h tr e d u c e dt ot h em i n i m u m 7d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，t h ew e i g h t 6 英文摘要 s l o w l yi n c r e a s e d 8d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，t h ew e i g h tt u r n e d t on o r m a l 3p v ms h g e n ew a sa m p l i f i e db ys e m i - q u a n t i t a t i v er t - p c r t h ee x p r e s s i o no fs hg e n eo ft h en e o n a t a lm o u s ei n f e c t e dg r o u p a p p e a r e do nt h e1d a ya f t e ri n f e c t i o na n dd i s a p p e a r e do nt h e18d a y sa f t e r i n f e c t i o n 5d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，t h ee x p r e s s i o no fs hw a su pt ot h eh i g h e s t l e v e l 7d a y sa n d9d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，t h ee x p r e s s i o no fs hi sl o w e r , a n d d i s a p p e a r e do nt h e18d a y s l i k et h en e o n a t a lm o u s ei n f e c t e dg r o u p ，t h ee x p r e s s i o no fs hg e n eo ft h e g r o w nm o u s ei n f e c t e dg r o u pa l s oa p p e a r e do nt h e1d a ya f t e ri n f e c t i o n ，a n d d i s a p p e a r e do nt h e 18d a y sa f t e ri n f e c t i o n 5a n d7 d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，t h e l e v e lo fs hw a ss i g n i g i c a n t l yh i g h e rt h a no t h e rt i m ep o i n t 4h e s t a i n i n go fl u n gt i s s u e c o m p a r e dw i t ht h en e o n a t a lm o u s ea n dg r o w nm o u s ec o n t r o lg r o u p si n w h i c ht h es t r u c t u r eo ft h ea l v e o l a rw a l l sw a si n t a c t e dw i t h o u to e d e m a ，o n l y w i t haf e wi n f l a m m a t o r yc e l l s i nt h el u n g so fn e o n a t a lm o u s ea n dg r o w n m o u s ei n f e c t e dg r o u p s ，3d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，t h en u m b e ro fi n f l a m m a t o r y c e l l si n c r e a s e d a n da l v e o l a rw a l l sb e c a m et h i c k 7d a y sa f t e ri n f e c t i o n ， i n f l a m m a t o r yc e l l s ，i n c l u d i n gl y m p h o c y t e s ，v i s i b l em o n o n u c l e a r - m a c r o p h a g e s ， n e u t r o p h i l s ，e o s i n o p h i l s ，w e r em o r e ，a n dt h ea l v e o l a rw a l lw a st h i c k e rw i t h s e v e re d e m a 14d a y sa f t e ri n f e c t i o ni n f l a m m a t i o nd i m i n i s h e d ，3d a y sa n d7 d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，g r o w nm i c ei n f e c t e da p p e a r e ds i g n i f i c a n ti n f l a m m a t o r y c e l l si n f i l t r a t i n g ，s e v e r ea l v e o l a rw a l l sc o n g e s t i o n ，o e d e m a ，a l v e o l a ri n t e r v a l f u s i o n 14d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，i n f l a m m a t i o na a e n u a t e d 5t h ei n f l a m m a t o r yc e l l si nl u n gl a v a g ef u i d i nt h eg r o w nm o u s ei n f e c t e dg r o u p3d a y sa n d7d a y sa f t e ri n f e c t i o n ，t h e t o t a ln u m b e ro fc e l l si nl u n gl a v a g ef l u i dw a sh i g h e rt h a nt h en e o n a t a lm o u s e i n f e c t e dg r o u p t h ep r o p o r t i o no fn e u t r o p h i l sw a s5 3 2 5 a n d6 7 0 0 ， r e s p e c t i v e l y t h ep r o p o r t i o no fn e u t r o p h i l si nn e o n a t a lm o u s e i n f e c t e dg r o u p w a so n l y0 0 0 a n d2 7 0 0 ，r e s p e c t i v e l y t h e s ed a t as u g g e s tt h a tp v m i n f e c t i o no fg r o w nm o u s ei sm o r es e v e r et h a nn e o n a t a lm o u s e 6s e r u mi g ga n t i b o d yw a sm e a s u r e db ye l i s am e t h o d 7 英文摘要 p v mi n f e c t i o ni nn e o n a t a lo rg r o w nm o u s ei n d u c e di g ga n t i b o d y i n f e c t e d g r o u p ，i g ga n t i b o d yt i t e ri ng r o w nm o u s ei n f e c t e d ( 1 4 0 0 ) i w a s s 1 4 0 0 ，h i g h e rt h a nt h a ti nt h en e o n a t a lm o u s ei n f e c t e dg r o u p ，i g ga n t i b o d y t i t e ri s ( 1 2 0 0 ) 7c y t o k i n e sw e r ed e c t e c t e dw i t hr e a l - t i m eq u a n t i t a t i v ep c r a f t e r3d a y si n f e c t i o n ，t h ee x p r e s s i o nl e v e l so ft hl t y p ec y t o k i n ei f n y i nl u n gt i s s u ef r o mn e o n a t a lm o u s ei n f e c t e ds i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e dc o m p a r e d w i t hc o n t r o l s ( p 0 0 5 ) t h ee x p r e s s i o nl e v e l so fi f n - 1 ，a n di l - 12i n l u n gt i s s u ef r o mg r o w n m o u s ei n f e c t e db yp v mw a ss i g n i f i c a n ti n c r e a s e da f t e r1d a y , 133 - f o l dh i g h e r t h a nc o n t r o l s5d a y s ，a n ds t a r t e dt od e c r e a s e9d a y s t h ee x p r e s s i o nl e v e l so f i l 一12w a s2 一f o l dh i g h e rt h a nc o n t r o l si n5d a y s ；a f t e rt h a tn od i f f e r e n c ew a s b e t w e e nt w og r o u p s ( p 0 0 5 ) ；t h ei l - 5 e x p r e s s i o nl e v e l sf r o mg r o w nm o u s eh a sn od i f f e r e n c ew i t hc o n t r o l ( 胗o 0 5 ) ； t h ee x p r e s s i o nl e v e l so fi l 一13f r o mg r o w nm o u s ew a s4 - f o l dh i g h e rt h a n c o n t r o la f t e r5d a y s ( 尸 0 0 5 ) i f n 一0 【w a se x p r e s s e ds i g n i f i c a n t l yi ne a r l yt i m ea f t e ri n f e c t i o ni nn e o n 划 a n dg r o w nm i c e ，t h e nd e c r e a s e d s h a r p l y i nn e o n a t a lm i c ei n f e c t e d ，t h e e x p r e s s i o nk i n e t i c so fi f n - 3w a ss a m ea si f n 一0 【i ng r o w nm i c ei n f e c t e d ， i f n pb e g a nt ob ee x p r e s s e da f t e ri n f e c t i o n ，a n dw a sr e a c ht op e a ka f t e r5 d a y s t h ee x p r e s s i o nl e v e l so fi l - 6f r o mn e o n a t a lm o u s ew a s 17 一f o l dh i g h e r t h a nc o n t r o l sa f t e r3d a y s ，w h i c hr e a c h e dt op e a k ( 尸 0 0 5 ) ；t h ee x p r e s s i o n l e v e l so fi l 一6f r o mg r o w nm o u s ew a s18 一f o l dh i g h e rt h a nc o n t r o l sa f t e r5d a y s ， w h i c hr e a c h e dt op e a k ( 尸 0 0 5 ) t h ee x p r e s s i o nl e v e l so ft n f qf r o mn e o n a t a lm o u s ew a s30 f o l dh i g h e r 8 英文摘要 t h a nc o n t r o l s9d a y sa f t e ri n f e c t i o n 俨 o 0 5 ) t h e e x p r e s s i o n l e v e l so fm c p l ，m c p - 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