（水生生物学专业论文）三种麻醉方法对鲟鱼类麻醉效应比较研究.pdf

上海海洋大学2 0 0 8 届硕士学位论文 三种麻醉方法对鲟鱼类麻醉效应比较研究 摘要 鲟鱼类是硬骨鱼类中的原始类群，属软骨硬鳞类，是淡水中出现的 最大鱼类，它在生物的进化史上有着重要的地位。施氏鲟似c 勿明s 盯 s c 办彻2 嘲f ) 属鲟形目( a c i p e n s e r i f o 眦e s ) 、鲟科( a c i p e n s e r i d a e ) 、鲟属 ( a c i p e n s e r ) ，主要分布在我国的黑龙江、乌苏里江、松花江，嫩江也 有分布，为国家二级保护动物。在对其生理研究等操作过程中，尤其 是在进行人工催产的时候，采卵所需时间很长，鲟鱼挣扎很剧烈，常 造成鲟鱼缺氧和细菌或霉菌的感染，而引起亲鱼的大量死亡，恰当的 麻醉可以减少亲鱼的死亡。化学麻醉和电麻醉对幼鲟影响的研究未见 报道。本实验进行了m s 2 2 2 、丁香油对施氏鲟幼鱼的毒性影响的研究， 不同直流电压、不同浓度的m s 2 2 2 和丁香油对施氏鲟幼鱼的麻醉效 果、三种麻醉方法对施氏鲟幼鱼血液生化指标的影响以及m s 2 2 2 、丁 香油对中华鲟仔鱼耗氧率的影响，希望得到适宜的麻醉电压和麻醉浓 度，并根据麻醉的目的要求选择合适的麻醉方法和强度，旨在丰富鱼 类麻醉生理生态学的内容，为施氏鲟幼鱼长途运输、长江口中华鲟幼 鱼运输与抢救等提供参考。 1 m s 2 2 2 及丁香油对施氏鲟幼鱼的毒性研究 通过化学麻醉剂丁香油、m s 2 2 2 对施氏鲟( 彳c 勿p 6 s e rs c 办m c 枷夕 幼鱼( 7 1 2 士8 9 9 ) 进行了急性毒性试验，毒性试验结果表明：丁香油 上海海洋大学2 0 0 8 届硕士学位论文 和m s 2 2 2 对施氏鲟幼鱼的2 4 h l o o 死亡质量浓度( 2 4 hl c l o o ) 、9 6 ho 死亡质量浓度( 9 6 hl c o ) 分别为4 0 m g l 、5 m g l 和7 9 4 3 m g l 、 5 0 1 2 m g l ；丁香油和m s 2 2 2 对施氏鲟幼鱼的2 4 、4 8 、7 2 、9 6 h 的l c 5 0 分别为2 6 3 7m g l 、2 2 1 7m g l 、1 8 o om g l 、1 6 2 2m g l 和6 1 6 7m g l 、 5 8 2 2m g l 、5 6 9 0m g l 、5 6 9 0 m g l 。m s - 2 2 2 的毒性明显小于丁香油， m s 2 2 2 的安全浓度为1 5 5 7m g l ，丁香油的安全浓度为4 7 0m g l 。 2 三种麻醉方法对施氏鲟幼鱼麻醉效果比较 麻醉试验结果显示：鱼体在3 分钟内失去平衡，7 分钟内完全麻醉， 并可在3 分钟内恢复的化学麻醉浓度最低为m s 一2 2 21 0 0 m g l ，丁香油 5 0 m g l 、直流电电压1 2 v 。麻醉时间与麻醉剂浓度和直流电电压均呈 幂函数相关，相关系数r 2 均大于o 9 。在适宜的直流电压( 2 4 v ) 下， 不同水温之间的麻醉效果无显著差异；在适宜的麻醉浓度( m s 2 2 2 为 l o o m g l ，丁香油为5 0 m g l ) 下，麻醉所需要的时间与水温呈直线负 相关，而恢复时间与水温呈直线正相关，相关系数r 2 均大于o 9 。以 上结果表明，三种方法均适用于麻醉鲟鱼，应根据不同目的选用适当 的麻醉方法。其中电麻醉具有麻醉时间和恢复时间极短的优点，值得 进一步探讨其生理麻醉机制。 3 三种麻醉方法对施氏鲟幼鱼血液生化指标的影响 比较了三种麻醉方法对施氏鲟幼鱼相关血液生理生化指标的影响。 血液生理生化指标结果表明，不同麻醉方法对施氏鲟幼鱼有不同程度 的影响。m s 2 2 2 组与对照组相比g l u 、t b i l 、b u n 、h c t 差异显著 i i 上海海洋- 大学2 0 0 8 届硕士学位论文 ( 氏o 0 5 ) ，丁香油组与对照组相比舢- 一t 、a s t 、b u n 差异显著 ( 氏0 0 5 ) ，电麻醉组与对照组相比g l u 、b u n 、r b c 差异显著 ( 尸 o 0 5 ) 。 4 m s 2 2 2 、丁香油对中华鲟仔鱼耗氧率的影响 研究了麻醉剂m s 2 2 2 、丁香油对中华鲟幼鱼呼吸和排泄的影响。研 究结果表明，两种麻醉剂对中华鲟幼鱼的耗氧率和排氨率都有显著影 响( 氏0 0 5 ) 。随着麻醉剂浓度的升高，中华鲟幼鱼的耗氧率和排氨 率均先升高后降低。m s 2 2 2 浓度为1 6m g l ，丁香油浓度为1 2m g l 时可以显著降低中华鲟幼鱼的耗氧量和氨氮的排放，随着两种麻醉剂 浓度的进一步升高，耗氧率和氨氮的排放没有显著的增加。温度实验 表明，在两种麻醉剂的作用下，中华鲟幼鱼的耗氧率、排氨率随温度 升高而增大，其回归关系可用指数函数表示，相关系数r 2 均大于o 9 。 方差分析表明，不同实验组四个温度梯度间的耗氧率和排氨率都有极 显著差异( 氏o 0 1 ) 。在1 0 2 5 的温度范围内，中华鲟幼鱼的o ：n 为 1 2 3 7 2 3 2 1 ，说明在适宜的温度范围内，中华鲟幼鱼的代谢产物以蛋 白质为主，脂肪和碳水化合物次之。 关键词：施氏鲟；中华鲟；直流电；m s 一2 2 2 ；丁香油；麻醉 i i i 上海海洋大学2 0 0 8 届硕- 士学位论文 t h ec o m p a r a t i v es t u d yo na n a e s t h e t i ce f f e c t so ft h r e e a n e s t h e s i am e t h o d st os t u r g e o n s a b s t r a c t 彳c 勿e 夙s c 办陀疗c 肪fb e l o n g s t o a c i p e n s 舐f o m e s ，a c i p e n s e r i d a e ， a c i p e n s e r ，m a i n l yd i s t r i b u t i n go v e rt h eh e i l o n 舀i a n g 砌v e r ，w u s u l i 础v e r ， t h es o n g 撕砒v e r ，n e 巧i a n gr i v e r h a si no u rc o u n t 巧，a 1 1 dw e r en a t i o n a l s e c o n d - p r o t e c t i n g a n i m a l s w 1 1 e ns t u d y i n g p h y s i 0 1 0 9 yr e s e a r c h ， t h e o p e r a t i o np r o c e s s ，p a r t i c u l a 订ya r t i f i c i a lf e r t i l i z a t i o n ，t h es p a w nc o l l e c t i o n t i m ei s v e 巧1 0 n g ，t h es t u r g e o nn o u n d e r e dv i o l e n t l y ，r e s u l t i n g i nt h e s 劬驾e o na n o x i aa n dg e m o rm n g ii n f e c t ，c a u s i n ga 鲈e a td e a lo fd e a t l lo f t h ep a r e n tf i s h ，t h ef i t t i n ga n a e s t h e s i ac a l lr e d u c et h ed e a t ho ft h ep a r e n t f i s h t 1 1 ec h e m i c a la 1 1 e s t l l e s i a 狮de l e c t r o a n e s t h e s i at oj u v e n i l e s t u r g e o n w e r er e p o r r c e dl i t t l e t h i se x p e r i m e n tc a r r i e do nm et o x i c i 够o ft h em s 一2 2 2 ， c l o v eo i lt oj u v e n i l e 彳c 勿p 6 s 仃s c 办陀 c 舫f ， t h ec o m p a r a t i v es t u d yo n a n a e s t h e t i ce f f e c t so f 也ee l e c 臼o a i l e s t h e s i aa 1 1 dc h e m i c a la 1 1 e s m e s i at 0 j u v e n i l e 彳c 枷加盯s c 办聊c 舫f ， e f f e c t so fm s - 2 2 2 ，c l o v eo i lo no x y g e n c o n s u m p t i o nr a t ea n da n 蚰o n i a e x c r e t i o nr a t eo fj u v e n i l ea c i p e n s e r s i n e n s i s呻， a i m i n g t o g e t f e a s i b l ea n a e s t h e s i a v o l t a g e a n dt 1 1 e a j l a e s t h e s i ad e n s 埘，a n dc h o o s es u i t a b l ea n a e s t h e s i am e t h o da n dd e n s i t y a c c o r d i n gt ot h ea n a e g t h e s i ap u 印o s er e q u e s t e d ，a n de 耐c ht h ec o n t e n t so f f i s ha i l a e s t h e s i ap h y s i o l o g ye c o l o g ) r ，p r o v i d ear e f e r e n c et o1 i n e h a u lo f 上海海洋大学2 0 0 8 届硕士学位论文 j u v e n i l e 么c 枷加仃s c 办陀胛c 舫tt r a n s p o n a t i o na n ds a l v a g e o fj u v e n i l e 4 啦9 p 瑚p rs 加p 瑚括g r a yi ne s t u a 巧o fy a n 舀z e 鼬v e r 1 a c u t et o x i c i 锣r e s u l to fm s - 2 2 2a n dc l o v eo nt oju v e n i l e 彳面伊p 易s 仃 s c h r e n c k i i e x p e r i m e n t sw e r ec o n d u c t e dt oi n v e s t i g a t et h ea c u t et o x i c i 够o f m s 一2 2 2a n dc l o v eo i l ，a n dt h ea n a e s t h e t i ce f i f e c to fm s 一2 2 2 ，c l o v eo i la n d d i r e c tc u r r e mo nj u v e n i l e 彳c 勿p 如p 广j c 办陀刀c 肪z ( 7 1 2 土8 9 9 ) ，b e s i d e s ，t h e v a l i d i 够o ft h et 1 1 r e ea n a e s t l l e t i cm e t h o d so ft h es t u r g e o no nt h eg r o u n do f b e h a v i o ro b s e a t i o nw a sd i s c u s s e d t h er e s u l to ft o x i c i t ) re x p e r i m e n t s s h o wm a tt l l e2 4hl c l o o ，9 6hl c oo fc l o v eo i la n dm s - 2 2 2t 0j u v e n i l e 彳c 勿p 夙p ，s c 办r 绷c 砌w e r e4 0 m g l ，5 m g la n d7 9 4 3 m g l ，5 0 12 m g l ， r e s p e c t i v e l y 1 1 1 e2 4 h ，4 8 h - ，7 2 h 一，a n d9 6 h l c 5 0o fc l o v eo i la i l dm s 一2 2 2 t oj u v e l l i l e 彳c 批如盯s c 办r p ，z c 舫fw e r e2 6 3 7m g l ，2 2 17m g l ，18 o om g l ， 1 6 2 2 m g l a i l d6 1 6 7 m g l ，5 8 2 2m g l ，5 6 9 0m g 几，5 6 9 0 m g l ， r e s p e c t i v e l y 1 1 1 et o x i c 时o fm s 一2 2 2w a so b v i o u s l yl o w e r t 1 1 a i lc l o v eo i l ， t h es a f ec o n c e n t r a t i o no fc l o v eo i la i l dm s 一2 2 2w e r e4 7 0 - a 1 1 d15 5 7 一m g l r e s p e c t i v e l y 2 t h ec o m p a r a t i v e s t u d yo na n a e s t h e t i ce f f e c t so ft h ee l e c t l o a n e s t h e s i a a n dc h e m i c a la n e s t h e s i at oju v e n i l e4 c 驷西s 盯s c 办，绷c 触 t h er e s u l to ft h ea n a e s t h e s i ae x p e r i m e n t ss h o w e dt h a t ：t h ef i s hl o s si t s e q u i l i b r i u mw i t h i n3m i n u t e s ， a n dw a s c o m p l e t e l ya tn a r c o s i sa n a e s t h e s i a v 上海海洋大学2 0 0 8 届硕士学位论文 i n7m i n u t e sw h e ne x p o s e di 1 1ah i 曲c o n c e n t r a t i o n ( m s - 2 2 2a b o v e 10 0 m g l ，c l o v eo i la b o v e5 0 m g l ，d i r e c tc u r r e n ta b o v e12 v ) ，a n d r e c o v e r e di i l3m i n u t e s i tw a sf o u n dt h a tt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h et i m e ， a n a e s t h e t i cc o n c e n t r a t i o na n dt h ed i r e c tc u l l r e n tf o l l o w e da ne x p o n e n t i a l 如n c t i o n ，t h er e l a t e dc o e m c i e n ti 乎w a sm o r et h a no 9 1 1 1 ed i f f e r e n c eo ft h e a n e s t h e t i cr e s u l t su n d e rd i f f e r e n tw a t e rt e m p e r a t u r ew i t ht h es u i t a b l ed i r e c t c u r r e n t ( 2 4 v ) w a sn o ts i g n i f i c a m l yd i f f e r e n t u n d e rs u i t a b l ea n e s t h e t i c s c o n c e n t r a t i o n( m s - 2 2 21o o m g l ， c l o v eo i l5o m g l ) ，t h e c o n l p l e t e a l l a e s t h e s i at i m ea n dw a t e rt e m p e r a t l l r ew e r en e g a t i v ec o r r e l a t i o n ，w h i l e r e c o v e r e dt i m ea i l dw a t e rt e m p e r a t l l r ew e r ep o s i t i v ec o r r e l a t i o n ，a n dt h e r e l a t e dc o e m c i e n tr 2w e r ea l lm o r et h a i l0 9 a 1 lt h er e s u l t si n d i c a t e dt h a t t 1 1 r e e d so fm e t h o d sw e r ea u 印p l i c a b l et oa n a e s t h e t i s es t u r g e o n ，b u tt h e p r o p e rm e t h o ds h o u l db ec h o s e na c c o r d i n gt om ed i f f e r e n tp u 叩o s e t h e a 1 1 a e s t l l e s i at i m ea n dr e c o v e 巧t i m ei i lt l l ee l e c t r i c i t ya n a e s t h e s i aw e r es o s h o r tt l l a ti t sp h y s i o l o g ym e c h a n i s md e s e e dt o 如r t h e rr e s e a r c h 3 e f f e c t so ft h r e ek i n d so fa n a e s t h e t i z em e t h o d so nb l o o dp h y s i o l o g y a n db i o - c h e m i c a lp a r a m e t e 瑙t oju v e n i l e4 面9 p 夙盯s 幽，绷c 脑 c o m p a r ee f l f e c t so f 缸e el ( i n d so fa 1 1 a e s t h e t i z em e t h o d so nb l o o d p h y s i o l o g ya n d b i o c h e m i c a lp 眦u 1 1 e t e r st oj u v e n i l e 彳c 勿p 撕盯s c 办r 阴c 舫 t h eb l o o dp h y s i o l o g yt 1 1 eb i o c h e m i c a lp a r a m e t e r sr e s u l t ss h o wt h a tm r e e a n a e s t h e s i am e t h o d sh a v ed i f f e r e n te x t e n te f f e c t so nj u v e n i l e 彳c 矽p 夙盯 v i 上海海洋犬学2 0 0 8 届硕士学位论文 s c 办陀胛c 幻g l u 、t b i l 、b u n 、h c th a v es i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( 尸 o 0 5 ) b e 似e e nm s - 2 2 2g r o u pa n dc o n l p a r i s o ng r o u p ，a l l 、a s t 、b u nh a v e s i g i l i f i c a n td i 仃e r e n c e ( 氏o 0 5 ) b e 俩e e nc l o v eo i lg r o u pa n dc o m p a r i s o n g r 0 1 j p ，g l u 、b u n 、r b ch a v es i g n i f i c a n td i 髓r e n c e ( 尸 o 0 5 ) b e t w e e n p 彪c 抛口聆鲫历船砌g r o u pa n dc o m p a r i s o n 伊o u p 4 e f f e c t so fm s - 2 2 2 ， c l o v eo i lo n o x y g e nc o n s u m p t i o n r a t ea n d a m m o n i ae x c r e t i o nr a t eo fju v e n i l e 彳c 驷p 刀s 仃s 跏册s 括g r a y e x p e r i m e n t sw e r ec o n d u c t e dt oi n v e s t i g a t et h ee 脏c t so f m s 一2 2 2a n d c 1 0 0 eo i lo no x y g e nc o n s u m p t i o n “l t ea n da m m o n i ae x c r e t i o nr ：l t eo f j u v e n i l e 彳c 勿p 玎s p ，s 砌p 瑚括g r a y t h er e s u l to fe x p e r i m e m ss h o wt 1 1 a t ，铆。 虹n d so fa n a e s t h e t i c sa l lh a ds i g n i f i c a me f f e c t so no x y g e nc o n s u m p t i o nr a t e a n da m m o n i ae x c r e t i o nr a t e ( p o 0 5 ) ，o x y g e nc o n s u m p t i o nr a t e 甜l d a m m o n i ae x c r e t i o nr a t eo f j u v e n i l e 么c 驴p ，塔p rs 伽p ，给括( j r a yi n c r e a s e df i r s t ， t h e nd e s c e n d e da st h ec o n c e n 缸a t i o no fa n a e s t h e t i cr o s e ，m e16 4 0m g l m s - 2 2 2 ，t l l e1 2 2 0m g s lc l o v eo i lc a nl o w e ro x y g e nc o n s 硼叩t i o nr a t e a n d 锄m o n i ae x c r e t i o nr a t eo fj u v e n i l e 彳c 勿明s p rs 伽p 琊西g r a y jt h e r e s u l t so ft e m p e r a t u r ee x p e r i m e n t ss h o w e dt h a tt h eo x y g e nc o n s u l p t i o n r a t ea 1 1 da m m o n i ae x c r e t i o nr a t eo fj u v e n i l e 彳c 矽g 珊盯s 加e 乃s 括g r a y i n c r e a s e da st e m p e r a t u r ei n c r e a s e d ，a l l dt h e i rr e l a t i o n s h i p sw i t ht e m p e r a t l l r e c o u l db er 印r e s e n t e db yp o w e re q u a t i o n s ，t h er e l a t e dc o e f j f i c i e n ti 也w a s m o r et h a no 9 t h ev a r i a l l c ea n a l y s i ss h o w e dt h a tt l l eo x y g e nc o n s u m p t i o n v i i 上海海洋大学2 0 0 8 届硕壬学位论文 r a t ea n da l l l m o n i ae x c r e t i o nr a t ea r ee 姗e m e l ys i 鲥f i c 酬p 1 0 0 v ) 能引起鱼生理受伤而且导致鱼的死亡【2 4 l ；直流电麻醉能够使鱼 麻醉不动，但通电结束后，鱼能迅速复苏，达不到深度麻醉的效果；并且由于海 水的导电能力大于鱼体，因而电麻醉对海水中的鱼无效【l l 】。另外操作者操作时要 小心，以防电击。 2 2 2 低温麻醉 低温麻醉【2 5 】指将鱼体温度降低1 0 到2 5 ，或直接降到0 左右( 冰水混合物) 【2 6 1 ，分一次逐步降温和多次降温麻醉。一般通过加冰和制冷水进行降温，每小时 3 上海海洋大学2 0 0 8 届硕士学位论文 降温速度不能超过4 。 优点：低温能够增加水体的携氧能力，减少鱼的活动和降低溶氧消耗，增加麻 醉时间【1 n 。 缺点：低温麻醉时，如果降温太大太快，会导致鱼体死亡【1 1 】；低温麻醉对1 0 以上的鱼是有效的，如果鱼原来的温度比这低，则没有麻醉效果，在第二种情况 下，为了使鱼进入深度麻醉还要需要进行化学麻醉【2 7 】。低温麻醉会使鱼进入比较 浅的麻醉状态，鱼的运动会减少，神经系统受到抑制【3 】，这对长途运输是有用的， 但是它还不适于对鱼进行外科手术，一般与麻醉剂合用，减少麻醉剂的使用量。 这种麻醉方法并不普及，但是当化学麻醉不能满足我们的需要时候，低温麻醉不 失为一种选择。 3 麻醉的影响因子 3 1 鱼体自身因素 3 1 1 鱼的种类 鱼的种类很多，其生理机能不一，对药物的感受性差异亦很大，生活在高溶 氧水域之鱼种对麻醉药感受性较高，所需浓度较低，如鲑、鳟类；反之低溶氧水 域之鱼种所需浓度较高，如鳗、鲤等。 3 1 2 鱼的体型大小 由于不同规格的鱼的代谢和消除的状况不同，不同规格的鱼对不同的麻醉 剂，甚至对同一麻醉剂不同含量的反应没有明显的规律性【2 8 捌。例如，在m s 2 2 2 和苯坐卡因作用下，大规格美洲锵的入麻时间和复苏时间短，但在丁香酚作用下， 入麻时间和复苏时间均比较长。w 0 0 d y 等的实验结果显示，在低含量丁香酚作用 下，大规格红大马哈鱼达成麻醉时间短，但在高含量下不同规格的红大马哈鱼达 成麻醉的时间一致【l 引。 一般情况下，体重越大，所需麻醉剂含量越高。o i k a w a 等【3 伽用m s 2 2 2 麻醉 不同体重的真鲷，测得真鲷体重与m s 2 2 2 的有效浓度( c e ) 的关系式为c e = 7 9 w o 0 5 4 9 ( n = 3 0 ，f 0 9 3 6 ) 。 3 1 3 鱼的成熟度 o 等【3 0 】认为，在仔鱼期，皮肤呼吸占很大的比重，造成其对麻醉剂的 敏感性较强；随着鱼体的生长，皮肤呼吸的相对重要性逐渐下降，而鳃呼吸却越 来越重要。麻醉剂大多通过鳃丝吸收，但用鳃呼吸极易导致窒息，因而随着鱼龄 的增加，所需麻醉剂含量增加且复苏率偏低。 4 上海海洋大学2 0 0 8 届硕士学位论文 2 5 1 0 0 2 5 0 4 8 0 m s 2 2 21 5 0 7 5 丁香酚及其 衍生物 2 苯氧乙醇 c 0 2 8 0 1 0 0 4 0 4 0 6 0 1 0 0 l o o 2 0 ( a q h l s ) 2 0 0 5 0 0m l ，l 1 0 0 5 0 0m l l 2 9 0 4 6 0m l m i n 1 0 0 2 5 0m m h g 3 5 3 迅速麻醉 2 6 6 8 2 5 4 o 3 4 l 2 1 1 s 5 3 3 2 0 3 0 大马哈鱼，鲤 鳙鲽 条纹石脂 鳕鱼 罗非鱼 虹鳟 虹鳟 褐篮子鱼 雀鲷科 大鳞大马哈鱼 鲑科 大部分种类 鲤 鲤 3 2 环境因素 3 2 1 水温 在高水温时，鱼体代谢旺盛，心跳和呼吸频率加快，麻醉药液经鳃丝渗透的 速率亦加快。故随着温度的升高，在相同的麻醉剂含量下鱼体达到各麻醉阶段的 时间均缩短。在低水温时，鱼体对麻醉药物的吸收率降低，麻醉所需剂量高或浸 泡时间长【1 1 1 。但也有研究表明，温度较高时麻醉剂的麻醉效果降低，甚至异戊巴 比妥钠在1 0 以上时失效【4 】。 3 2 2 溶氧 溶氧的高低直接影响到鱼类的呼吸，溶氧越高，鱼类的呼吸频率越低，单位 时间内摄入的麻醉剂减少；因而在高溶氧条件下，鱼体入麻时间延长，复苏时间 缩短，成活率较高【2 引。 3 2 3p h p h 值的改变对鱼体的影响因药剂不同而异，一般对淡水鱼影响小，对海水 鱼影响大。m s 2 2 2 、c 0 2 等溶液具有酸性，在使用这些麻醉剂时需要加入其它 药品进行缓解，例如在使用高剂量m s 2 2 2 时，应加入一定量的n a h c 0 3 进行缓 冲，使p h 值在7 o 7 5 ，以减少对鱼体的刺激。 3 2 4 盐度 在较高盐度下，鱼体为调节自身渗透压的平衡，要消耗较多的能量，其呼吸 频率加快，耗氧量增加；因而在高盐度下，鱼体摄入的麻醉剂较多，导致进入麻 5 啪砌啪h3川川2q鳓啪砌啪3一2一q鳓 上海海洋大学2 0 0 8 届硕士学位论文 醉时间缩短，复苏时间延长，死亡率增大【2 8 ，2 9 1 。 4 鱼类麻醉和，恢复阶段的分期及其行为特征 由于不同鱼类在不同麻醉剂中的行为表现有差异，学者们对麻醉和恢复过程 的分期标准不尽相同【1 5 ，3 1 ，3 2 1 ，归纳起来，可将麻醉程度分为6 个时期( 表) ，恢 复阶段分为3 个时期( 表1 2 ) 。 表卜2 麻醉分期及鱼类行为表现b 1 1 a b 1 2a n a e s t h e s i ap e r i o d sa n df i s hb e h a v i o rp e r f 0 r r n a n c e 注：+ ：正常，+ 一：略失，一：丧失 5 鱼类麻醉的应用 在研究鱼类的生理或疾病时，常需要捕捞鱼类，使其离开所生活的水域，进 行检查、采卵采精或手术，常因捕捞的伤害或因挣扎，造成缺氧和细菌或霉菌的 感染，而引起死亡为减少这些伤害必须对鱼进行麻醉。麻醉剂的使用使很多鱼类 研究工作更加方便，例如生理研究的手术准备工作，这时需要使鱼保持长时间的 静止状态。麻醉剂的镇静作用，同样作用在运输、接种疫苗等方面i l j 。麻醉剂最 初是用于取样时保持鱼体静止不动；麻醉剂同样可以降低对鱼类操作带来的应 激；而过量的麻醉剂则可以被用来作为对鱼有效的仁慈的安乐死的药物。 6 上海海洋大学2 0 0 8 届硕士学位论文 6 麻醉监测 麻醉监测是应用人的感官、电子、声、光学等技术及时发现动物机体各种生 理指标的变化，将感官监测与仪器检测相结合，更好的判断麻醉深度，是保障麻 醉安全和提高麻醉质量的诊断手段。麻醉深度过浅，会使动物感到疼痛，在手术 中产生未预料到的活动对手术不利；麻醉过深则会对动物生命安全造成威胁。通 过麻醉监测才能了解动物麻醉的深浅程度，保证手术的正常进行，保证动物的安 全及康复痊愈。 在发达国家，兽医麻醉监测几乎是与医学麻醉监测平行发展的。而国内兽医 界存在相当大的差距，多数单位还沿用原始的监测方法，能够应用仪器检测的也 仅限于高校的麻醉试验【3 3 1 。任晓明瞰】等曾用血气分析仪监测驴麻醉前后血气变 化。张柯卿1 3 5 】等用热稀释导管法测定静松灵对驴血液动力学的影响。王洪斌【3 6 】 应用血气分析仪与多道生理仪对马三种麻醉方法进行心、脑功能及血气变化的监 测。对于鱼类麻醉监测的研究更少。 麻醉监测全程可包括麻醉前、中、后三个阶段的监测。麻醉前监测的记录参 数是估计和决定动物经过麻醉和手术安全与危险的根据，并可与麻醉中、后做参 照比较之用，不可忽略。麻醉中监测则需按麻醉需要和处理选择监测项目，忌盲 目乱用。麻醉后监测是复苏过程的主要保障，也是评价麻醉药物的主要依据之一。 6 1 生物反射行为的监测 麻醉深度可通过动物的临床体征表现出来。通过临床与非仪器方法观察和监 测反射，例如眼睑反射、角膜反射、肛门反射等的迟钝、眼球位置消失一直作为 麻醉深度评定的主要手段之一。对鱼类麻醉常见的反射行为有视觉、触觉、重压、 肌肉张力、平衡感、鳃盖振动频率等。因个体差异和不同药物对各种反射的影响 不尽相同，且生物反射的评价通常为定性的，多数为“全”或“无”，但仍是常规的 监测项目之一，尤其在临床上有实际应用意义。 6 2 循环系统的监测 循环系统为动物正常生命活动的基础，在评价药物安全的安全性能时，其功 能监测是必备的项目p 7 1 。主要有心电图、血氧饱和度、心率、体温、脉搏、血压 等内容。随着连续无创血氧饱和度监测仪的发明和应用，使血氧饱和度这一评价 机体氧合状态的重要指标得以无创性的连续和精确的测量，能够及早发现各种原 因引起的低氧血症，也可间接反映循环功能【3 8 1 。血氧饱和度是一个综合性的指标， 7 圭塑望堂奎堂! ! 塑旦堡主堂笪笙茎 其变化与机体的呼吸功能、循环功能、中枢神经系统的抑制功能、体温下降的幅 度等多种因素相关，血氧饱和度的监测可以综合体现麻醉对机体的影响程度【3 9 1 ， 具有正确、安全、无创、有效、操作简单等优点，得到临床普遍欢迎和广泛应用， 已是麻醉监测最常用和最主要的手段之一，也用于临床研究、评价和诊断等领域。 6 3 对呼吸系统的监测 呼吸是一项重要的生命活动，受麻醉技术与麻醉药品的影响，呼吸监测成为 麻醉监测中最基本的项目【删。对动物的监测以前局限于呼吸频率、潮气量观察， 随着新仪器的问世，监测内容也逐步扩大到呼吸动力学和气体交换的监测。而对 于鱼类，对呼吸系统的监测则主要集中于呼吸频率以及耗氧率的变化。 6 4 对肝、肾功能的监测 麻醉与肝脏的功能密切相关，许多麻醉药物都要经过肝脏代谢，而麻醉过程 中，又可以有很多因素对肝功能造成损伤，所以通过对肝功能的检测来评价药物 的毒性，以评价药物的安全性。目前，肝功能的监测主要借助于对有关酶类活力 的测定而实现。赵生财【4 l 】、刘焕奇【4 2 j 等分别通过对谷丙转氨酶、谷草转氨酶及 碱性磷酸酶的测定评价m p 合剂对山羊的安全性能、q f m 合剂对犬的安全性能。 肾脏是动物体内代谢产物排泄的主要器官，麻醉药物及代谢产物从肾脏排泄 过程中，可能对肾脏功能造成影响，所以在评价一种麻醉药物时，有必要对肾脏 进行监测。肾功能监测通常根据血浆中肌酐、尿素氮测赳4 3 1 。刘焕奇等【删通过 血清中肌酐、尿素氮测定评价q f m 合剂对犬肾脏的影响。 7 存在问题及前景展望 对于鱼类麻醉的研究，国内外学者多侧重于对麻醉效果和对血液成分影响的 研究，对麻醉作用机制，代谢途径，麻醉剂的安全范围，反复麻醉对鱼类、人体 的危害等研究的很少，对很多问题，诸如诱导期、麻醉时间、肌肉内药物残留量、 安全范围、毒性、对人体的危害还没有可信的评判依据。目前鱼用麻醉剂有近 3 0 种，但现在的麻醉剂各有优缺点，有些存在效果不理想，有些对鱼体或人体 安全性不可靠，或价格昂贵，因而研制一种麻醉效果好、药物残留少、安全范围 大、易于急救、反复使用危害小、廉价的新型麻醉剂是科研的方向【4 5 】。 8 第二章m s 一2 2 2 及丁香油对施氏鲟幼鱼的毒性研究 1 材料与方法 1 1 实验材料 实验鱼为2 0 0 6 年9 月于湖北荆州购买的7 0 0 尾施氏鲟幼鱼，选择体格健康， 体长为( 2 8 7 士4 3 ) c m 、体重为( 7 1 2 士8 9 ) g 的个体，暂养1 4 d 后用于实验。麻 醉实验均采取单尾试验法，每尾鱼仅试验一次。饲养用水为经颗粒活性炭及l f ( 鼬n e t i cd e g r a d a t i o nf l l l x i o n ) 方法过滤后曝气的自来水。循环水养殖，保持水 中溶解氧7 0 士o 3 m g l ，水温2 0 士1 ( 不同温度下试验除外) ，p h 为7 6 士0 1 。 1 2 实验装置及麻醉剂的处理 毒性实验容器为矩形蓝色塑料箱( 规格7 8 c i i l 5 8 c m ，保持水深3 5 c m ) ；本实 验中化学麻醉剂采用m s 一2 2 2 ( 由杭州动物药品厂提供) 和丁香油( 由国药集团 化学试剂有限公司提供) 。 m s 2 2 2 为白色粉末，易溶于水，水溶液略呈酸性，为减少麻醉时产生的应 激反应，使用时与碳酸氢钠按质量1 ：1 混合溶于水；丁香油为淡黄色的油状液 体，不易溶于水，使用时按质量1 ：5 比例溶于酒精，然后再溶于水【4 6 j 。 1 3 实验设计 进行预实验，观察施氏鲟幼鱼的行为及存活状况，得到2 4 h1 0 0 死亡质量 浓度( 2 4 hl c l ) 和9 6 h0 死亡质量浓度( 9 6 hl c o ) ，确定麻醉剂的浓度区间。 在此基础上按公式f ( b a ) 等对数间距设立m s 2 2 2 的浓度为：5 0 1 2 m g l 、 5 4 9 5m g l 、6 0 2 6m g l 、6 6 0 7m g l 、7 2 4 4m g l 、7 9 4 3 m g l ，丁香油的浓度为： l om g l 、1 3 2m g l 、1 7 4m g l 、2 3 0m g l 、3 0 3m g l 、4 0m g l 。每组8 尾施 氏鲟幼鱼，设三个平行组，一个对照组( 无任何处理) 。实验前2 4 小时停止喂 食。 实验采用静态方式水生生物急性毒性实验法。前8 h 连续观察，接着在2 4 h ， 4 8 h ，7 2 h ，9 6 h 观察，记录死亡数据。 1 4 数据统计分析与计算公式 实验数据用平均值士标准差( m e a n 士s d ) 表示，在单因子方差分析( a n o v a ) 9 上海海洋大学2 0 0 8 届硕士学位论文 的基础上采用d u n c a i l 多重比较法检验组间差异( p = 0 0 5 ) 。所有数据均采用 s p s s l 3 0 软件进行分析。 采用寇式法( k m e r ) 计算半致死浓度( l c 5 0 ) 、安全浓度( s c ) 和半致死 浓度的9 5 置信区间计算公式如下： l o 吐c 5 0 = x m d ( p 一0 5 ) s c ；4 8 hl c 5 0 o 3 ( 2 4 hl c 5 0 4 8 hl c 5 0 ) z l o g l c 5 0 的9 5 置信限= l o g l c 5 0 士1 9 6 d 【( p g n ) 】o 5 式中x m 为最大剂量的对数，d 为相邻剂量组比值的对数，p 为死亡率，p 为各组死亡率之和，g 为存活率，n 为每组受试鱼数。 2 结果与分析 2 1 丁香油对施氏鲟幼鱼毒性实验结果 丁香油对施氏鲟幼鱼的2 4 h1 0 0 死亡质量浓度( 2 4 hl c l 0 0 ) 和9 6 h0 死亡 质量浓度( 9 6 hl c o ) 分别为4 0 m g l 和5 m g l 。 在试验过程中试验鱼投入药液后都出现急速游动，头部朝外，出现呼吸频率 加快的现象，5 m i n 后1 0 0m g l 、1 3 2m g l 、1 7 4m g l 3 个组的鱼基本适应环境， 并能正常游动，而2 3 0m g l 、3 0 3m g l 、4 0m g l3 个组的鱼除上述症状外，并 逐渐失去平衡，丧失游泳能力，侧卧于水面，并伴随试液中丁香油浓度的增大， 出现上述症状的鱼数量增多。丁香油对施氏鲟幼鱼的急性毒性结果见图2 1 ，半 致死浓度( l c 5 0 ) 及其9 5 置信区间、安全浓度见表2 - 1 。 2 2m s 一2 2 2 对施氏鲟幼鱼毒性实验结果 m s 2 2 对施氏鲟幼鱼的2 4 h 10 0 死亡质量浓度( 2 4 hl c l o o ) 和9 6 h0 死亡 质量浓度( 9 6 hl c o ) 分别为7 9 4 3 m g l 和5 0 1 2 m g l 。 在试验过程中试验鱼投入药液后与丁香油相似，也都出现急速游动，头部朝 外，呼吸频率加快的现象，5 m i i l 后5 0 1 2m g l 、5 4 9 5m g l2 个组