（药剂学专业论文）苦参碱微乳的制备及其药代动力学、药效学研究.pdf

一 山东大学硕士学位论文 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立 进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出 重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责 任由本人承担。 论文作者签名：三跹 日期：垄堕：互型 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留 或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅 和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有 关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇 编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：缒导师签名多兰堡垦日 期：丝f 彳 一 套 ，_ 山东大学硕士学位论文 目录 中文摘要l 英文摘要3 符号说明6 、j 一 日u 百8 1 增生性瘢痕8 1 1 增生性瘢痕的形成机制8 1 2 增生性瘢痕的治疗学基础9 2 苦参碱。9 3 经皮给药系统l o 4 透皮作用机理一1 1 5 微乳1 1 5 1 微乳的形成理论一1 2 5 2 微乳形成的基本条件1 3 5 3 微乳的制备工艺：1 3 5 4 微乳经皮给药1 3 6 本文的研究目的1 4 第一章微乳的制备1 5 l 材料与仪器1 5 1 1 材料1 5 1 2 仪器15 2 实验方法与结果。1 6 2 1 微乳成分的筛选1 6 2 2 伪三元相图的绘制1 8 2 3单纯型网格优化处方2 0 2 4 制备工艺研究2 1 2 5 苦参碱载药微乳的制备2 2 2 6 苦参碱微乳理化性质参数测定2 3 2 7 形态与粒径分布测定2 3 3 讨论：1 4 4 本章小结2 5 第二章苦参碱微乳的体外透皮实验2 6 1 材料与仪器2 6 1 1 材料_ 。2 6 1 2 仪器2 6 2 试验方法。2 6 2 1 色谱条件2 6 2 2 溶液的配制2 7 2 3 透皮试验2 7 2 4 线性关系和方法学验证2 7 2 5 色谱峰定性2 7 2 6 微乳中苦参碱经皮渗透量的测定2 8 山东大学硕士学位论文 3 讨 念2 8 4 本章小结2 9 第三章g c m s 法测定苦参碱微乳中苦参碱的含量3 0 1 仪器与试药3 0 2 方法与结果3 0 2 1 色谱条件3 0 2 2 质谱条件3 0 2 3 溶液制备31 2 4 线性关系考察3 1 2 5 精密度实验3 2 2 6 稳定性试验：3 3 2 7 重现性实验3 3 2 8 加样回收率实验3 3 2 9 样品测定3 3 3 讨论3 3 4 本章小结3 4 第四章苦参碱微乳制剂的刺激性考察3 5 1 动物3 5 2 方法3 5 3 评分标准3 7 4 结果3 8 4 1 一次给药的皮肤刺激试验3 8 4 2 多次给药的皮肤刺激试验3 8 5 讨论3 9 6 本章小结：3 9 第五章小鼠、兔药代动力学研究及小鼠组织分布研究4 0 1 实验材料4 0 2 实验仪器4 0 3 方法与结果4 0 3 1 色谱条件4 0 3 2 质谱条件4 1 3 3 样品制备4 1 3 4 方法可行性考察4 1 3 5 实验分组4 3 4 结果4 4 4 1 小鼠血浆中苦参碱浓度的测定“4 4 4 2 小鼠组织中苦参碱浓度的测定：4 5 4 3 小鼠药代动力学参数的统计4 6 4 4 兔经皮给药后血浆中苦参碱浓度测定l 4 8 4 5 兔耳缘静脉注射苦参碱注射液后血浆中苦参碱的浓度测定4 9 4 6 兔药代动力学参数统计4 9 5 讨论51 6 本章小结5 1 第六章苦参碱微乳对兔耳瘢痕的药效学研究“5 2 _ ， 山东大学硕士学位论文 1 材料j 5 2 1 1 动物5 2 1 2 器材5 2 2 方法5 2 2 1 瘢痕模型的建立5 2 2 2 给药5 3 2 3 标本制作_ 5 3 3 疗效观察及结果。5 3 4 讨论5 5 5 本章小结5 6 全文总结5 7 参考文献5 9 致 射。6 7 攻读学位期间发表的学术论文目录6 8 山东大学硕士学位论文 con tents a b s t r a c ti nc h i n e s e 一“1 a b s t r a c t ”3 a b r r e v i a t i o n 6 i n t r o d u c t i o n 一；8 lh y p e r t r o p h i cs c a r ”8 1 1f o r m a t i o nm e c h a n i s m 8 1 2f o u n d a t i o no f h y p e r t r o p h i cs c a rt r e a t m e n t “9 2m a t r i n e 9 3t r a n s d e r m a ld r u gd e l i v e r ys y s t e m s 1 0 4m e c h a n i s mo f t r a n s d e r m a l 1l 5m i c r o e m u l s i o n “ll 5 1f o r m a t i o nt h e o r y ”12 5 2b a s i cc o n d i t i o n sf o r t h ef o r m a t i o n ”l3 5 3p r e p a r a t i o n 13 5 4t r a n s d e r m a ld e l i v e r y “l3 6o b j e c t i v e ”1 4 c h a p t e rlp r e p a r t i o no fm i c r o e m u l s i o n l5 lm a t e r i a l sa n de q u i p m e n t s 一l5 1 1m a t e r i a l s 15 1 2 e q u i p m e m s l5 2m e t h o d sa n dr e s u l t s 1 6 2 1s c r e e n i n go f m i c r o e m u l s i o nc o m p o n e n t s 1 6 2 2d r a w i n gp s e u d o t e r n a r yp h a s ed i a g r a m s 18 2 3 0 p t i m i z a t i o np r e s c r i p t i o nb ys i m p l eg r i dm e t h o d 2 0 。 2 4p r e p a r a t i o np r o c e s s 2 1 2 5p r e p a r a t i o no fd r u g l o a d i n gm i c r o e m u l s i o no fm a t r i n e 一2 2 2 6d e t e r m i n a t i o no fp a r a m e t e r so fp h y s i c a la n dc h e m i c a lp r o p e r t i e so f m a t r i n em i c r o e m u l s i o n 一2 3 2 7m e a s u r e m e n to fm o r p h o l o g ya n dp a r t i c l es i z ed i s t r i b u t i o n 2 3 3d i s c u s s i o n 2 4 4s u m m a r y ”2 5 c h a p t e r2t r a n s d e r ls t u d y i nv i t r oo f m a t r i n em i c r o e m u l s i o n 2 6 1m a t e r i a l sa n de q u i p m e n t s “2 6 1 1m a t e r i a l s 2 6 1 2e q u i p m e n t s 2 6 2m e t h o d s 2 6 2 1h p l cc o n d i t i o n s ”2 6 2 2p r e p a r a t i o no fs o l u t i o n 2 7 i v 山东大学硕士学位论文 2 3t r a n s d e r m a ls t u d y 2 7 2 4l i n e a rr e l a t i o n s h i pa n dm e t h o d o l o g i c a le v a l u a t i o n ：2 7 2 5q u a l i t a t i v eo fc h r o m a t o g r a p h i cp e a k s 2 7 2 6d e t e r m i n a t i o no f t h ea m o u n to f m a t r i n eo f m i c r o e m u l s i o n “2 8 3d i s c u s s i o n 2 8 4s u m m a r y ：2 9 c h a p e r3d e t e r m i n a t i o no f m a t r i n ei nm a t r i n em i c r o e m u l s i o nb vg c m s ”3 0 le q u i p m e n t sa n dr e a g e n t s 3 0 2m e t h o d sa n dr e s u i t s ”3 0 2 1g cc o n d i t i o n s 3 0 2 2m a s sc o n d i t i o n s 3 0 2 3p r e p a r a t i o no fs o l u t i o n 3 l 2 4l i n e a rl 沁l a t i o n s h i p ”：31 2 5p r e c i s i o n “3 2 2 6s t a b i l i t y 3 3 2 7r e p r o d u c i b i l i t y 3 3 2 8r e c o v e r i e s ”3 3 2 9a s s a y i n go fs a m p l e s - 3 3 3d i s c u s s i o n 3 3 4s u m m a r y ”3 4 c h a p t e r4i r r i t a t i o ns t u d yo f m a t r i n em i c r o e m u l s i o n 3 5 1a n i m a l s 3 5 2m e 也o d s 3 5 。3s c o r es t a n d a r d 3 7 4r e s u l t s 3 8 4 1i r r i t a t i o nt l e s to fs i n g l e d o s e 一? 3 8 4 2i r r i t a t i o nt e s to fm u l t i d o s e s 3 8 5d i s c u s s i o n 3 9 6s u m m a r y ”3 9 c h a p t e r5p h a r m a c o k i n e t i c ss t u d yo fm i c ea n dr a b b i t sa n dt i s s u ed i s t r i b u t i o no f m i c e 4 0 1m a t e r i a l s ：4 0 2e q u i p m e n t s 4 0 3m e t h o d sa n dr e s u l t s 4 0 3 1g cc o n d i t i o n s 4 0 3 2m a s sc o n d i t i o n s 4 1 3 3p r e t r e a t m e n to fs a m p l e s 4 1 3 4m e t h o d o l o g i c a le v a l u a t i o n 4 1 3 5t e s tg r o u p s 4 3 4r e s u l t s 4 4 4 1d e t e r m i n a t i o no f m a t r i n eo f p l a s m ao f m i c e ”“4 4 4 2d e t e r m i n a t i o no f m a t r i n eo f t i s s u eo f m i c e 4 5 4 3p h a r m a c o k i n e t i c sp a r a m e t e r so f m i c e 。4 6 4 4d e t e r m i n a t i o no fm a t r i n eo fp l a s m ao fr a b b i t sw i t ht r a n s d e r m a ld r u g v 山东大学硕士学位论文 d e l i v e r y 4 8 4 5d e t e r m i n a t i o no fm a t r i n eo fp l a s m ao fr a b b i t sw i t hi n j e c t i o n 4 9 4 6p h a r m a c o k i n e t i c sp a r a m e t e r so fr a b b i t s ”4 9 5d i s c u s s i o n 5 l 6s u m m a r y ”5 1 c h a p t e r6p h a r m a c o d y n a m i cs t u d yo fm a t r i n em i c r o e m u l s i o nw i t ht h es c a r so f r a b b i te a r s 5 2 1m a t e r i a l s ”5 2 1 1a n i m a l s 5 2 1 2e q u i p m e n t s 5 2 2m e t h o d s ：! 5 2 2 1e s t a b l i s h m e n to fs c a rm o d e l 5 2 2 2a d m i n i s t r a t i o n 5 3 2 3p r e p a r a t i o no fs a m p l e s 5 3 3o b s e r v a t i o na n dr e s u i t s 5 3 4d i s c u s s i o n 5 5 5s u m m a r y ”5 6 s u m m a r y 5 7 r e f e r e n c e s 5 9 v i ， 山东大学硕士学位论文 苦参碱微乳的制备及其药代动力学、药效学研究 硕士研究生：张振 导师：郭瑞臣教授 中文摘要 苦参碱( m a t r i n e ，m a t ) ，豆科植物苦参( s o p h o r af l a v e s c e n sa i t ) 、苦豆子( & a l o p e c u r o i d e sl ) 、广豆根( s u b p r o s tr a t ac h u ne t t c h e n ) 等的活性成分，与氧化苦 参碱( o x y m a t r i n e ) 、槐果碱( s o p h o c a r p i n e ) 、槐定碱( s o p h o r i d i n e ) 、槐醇碱 ( s p h o r a n 0 1 ) 、槐胺碱( s o p h o r a m i n e ) 、氧化槐果碱( o x y s o p h o c a r p i n e ) 等同属四环的 喹诺罩西啶( q u i n o l i z i d i n e ) 生物碱。苦参碱是具有生物调节作用的生物碱，其分子 结构含正性肌力作用基团，具有抗肿瘤、抗心律失常、抗炎及抗病毒等多种药理 作用，临床常用其注射制剂。近年研究发现，苦参碱具有良好的抗细胞纤维化作 用，可用于增生性瘢痕的预防。目前，尚无苦参碱的透皮吸收制剂上市销售。 微乳作为经皮给药系统之一，具有很多不可替代的优点：1 对难溶性药物 的溶解能力强，可形成较高的浓度梯度；2 微乳中药物的热力学活性增强，可 增加药物对皮肤的亲和力；3 微乳中的成分可降低角质层的屏障作用，促进药 物对皮肤的渗透。 本课题研究目的为：1 开发苦参碱微乳制剂，并考察其理化性质；2 考察 苦参碱微乳制剂的体外经皮渗透情况，为确定处方提供依据；3 测定苦参碱微 乳制剂中苦参碱的含量，建立该制剂的质控方法；4 考察苦参碱微乳制剂的皮 肤刺激性，为临床应用提供支持；5 测定苦参碱微乳制剂经皮吸收后，在小鼠 各组织中的分布情况和兔药代动力学参数，探明其体内过程；6 考察苦参碱微 乳制剂经皮给药对增生性瘢痕的预防效果。 根据苦参碱在不同介质中的饱和溶解度，以及不同表面活性剂和助表面活性 剂的配伍情况，确定微乳的基本处方组成；通过绘制微乳伪三元相图，确定可形 山东大学硕士学位论文 成微乳的区域：采用单纯形网格法对苦参碱处方进行优化并经离体透皮实验筛 选，确定苦参碱微乳处方( 以重量计) ，为油相( 油酸) 5 ，水4 5 ，表面活性 剂( 聚氧乙烯蓖麻油) 2 0 ，助表面活性剂( 无水乙醇) 3 0 。考察微乳的物理 性质，结果微乳组方合理，符合微乳制剂的相关要求。 以昆明种小鼠皮肤为体外透皮研究材料，通过考察比较四处方的各时间点单 位面积累积透皮量，确定最终处方。结果表明，所制备苦参碱微乳制剂的经皮渗 透效率可满足后续实验的要求。 建立g c m s 法测定苦参碱微乳制剂中苦参碱的含量，其标示量与测定量误 差较小，符合要求。该方法具有分析效率高，准确性、稳定性好等优点，可作为 苦参碱制剂质控的常规方法。 采用同体自身左右对照方法，以兔为试验对象，考察微乳对皮肤的刺激性。 实验表明苦参碱微乳经单次或多次给药对皮肤无刺激性，用药后能保证皮肤组织 的完整性和生理状态的正常，符合经皮给药制剂的要求。 以昆明种小鼠为试验对象，采用g c m s 测定苦参碱经皮吸收后血浓度变化 及其在心、肝、脾、肾、肺、皮中的分布情况。与腹腔注射相比，经皮给药可维 持更长作用时间，可减少给药次数，有助于增加依从性：苦参碱微乳经皮吸收后， 于肺和皮肤组织浓度较高，提示可用于肺纤维化类疾病的预防和治疗，对增生性 瘢痕的预防有开发潜力。 以兔为试验对象，随机分为两组，分别于耳缘静脉注射和背部经皮给予含相 等量苦参碱的注射液和微乳，一定时间点耳切口取血，测定苦参碱血浓度，计算 其药动学参数，结果显示，半衰期分别为( 3 2 5 + 0 7 4 ) h 和( 1 7 3 8 1 + 1 8 9 1 2 ) h ， a u c ( o t ) 分别为( 5 5 7 5 7 2 8 士6 8 3 0 5 3 ) ug l i h 和( 2 1 9 4 8 2 3 士2 0 4 5 8 9 ) i tg l - i h ， 苦参碱微乳经皮吸收的绝对生物利用度可达3 9 3 6 。 兔耳全皮层至软骨膜损伤建立瘢痕模型，以不等量苦参碱微乳、空白微乳连 续作用七天。瘢痕形成后将兔处死，切取瘢痕组织标本。瘢痕组织可见漩涡状结 构和胶原结节，其间有少量炎性细胞，不同组瘢痕组织真皮层厚度有明显差异， 提示苦参碱在一定程度上可抑制纤维细胞的增殖，预防瘢痕发展发生。 关键词：苦参碱；微乳；透皮吸收；增生性瘢痕 一 山东文学硕士学位论文 s t u d yo np r e p a r a t i o n ，p h a r m a c o k i n e t i c sa n d p h a r m a c o d y n a m i c so fm a t r i n em i c r o e m u l s i o n p o s t g r a d u a t e ：z h a n gz h e n t u t o r ：p r o f e s s o r ：g u or u i c h e n a b s t r a c t m a t r i n e ( m a t ) ，t h ea c t i v ei n g r e d i e n t so fs o m el e g u m i n o up l a n t ss u c ha ss o p h o r a f l a v e s c e n sa i t ，s o p h o r aa l o p e c u r o i d e sl ，& s u b p r o s tr a t ac h u ne t t c h e n ，t o g e t h e r w i t h o x y m a t r i n e ，s o p h o c a r p i n e ， s o p h o r i d i n e ，s p h o r a n o l ，s o p h o r a m i n e ， o x y s o p h o c a r p i n e ，a l lb e l o n gt ot h es a m ef o u r - r i n go fq u i n o l i z i d i n ea l k a l o i d s m a t c o n t a i n sp o s i t i v ei n o t r o p i ce f f e c tg r o u pi ni t sm o l e c u l a rs t r u c t u r e ，h a sa n t i t u m o r , a n t i a r r h y t h m i a ，a n t i i n f l a m m a t o r ya n da n t i - v i r u sa n do t h e rp h a r m a c o l o g i c a le f f e c t s ， a n di sc o m m o n l yu s e di nt h ec l i n i c a l p r a c t i c ea si n j e c t i o n i nr e c e n ty e a r s ，i tw a s f o u n dt h a tm a tc o u l da l s or e s i s tf i b r o s i so fc e l l s ，a n dc o u l db eu s e df o rt h ep r e v e n t i o n o fh y p e r p l a s t i cs c a r a tp r e s e n t ，t h e r ei sn ot r a n s d e r m a lp r e p a r a t i o no fm a t r i n eo ns a l e a so n eo ft h e 仃a n s d e n i l a ld r u gd e l i v e r ys y s t e m s ，m i c r o e m u l s i o nh a s m a n y i r r e p l a c e a b l ea d v a n t a g e s f i r s t ，i tc a ni n c r e a s es o l u b i l i t yo fd r u gt of o r mh i g h c o n c e n t r a t i o ng r a d i e n t s e c o n d ，i tc a ne n h a n c et h e r m o d y n a m i c so fad r u ga n di t s a f f i n i t yt os k i n t h i r d ，i tc a nr e d u c et h ea c t i o no ft h es t r a t u mc x ) m e u l l lb a r r i e rs oa st o p r o m o t et h ep e n e t r a t i o no fd r u g so nt h es k i n t h ep u r p o s e so ft h i ss t u d yw e r e ，1 t op r e p a r et h em a t r i n em i c r o e m u l s i o na n dt o e v a l u a t ei t sp h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s ；2 t oo b s e r v ei nv i t r ot h ep e r c u t a n e o u s p e n e t r a t i o no fm a t r i n em i e r o e m u l s i o n ；3 t od e t e r m i n et h ec o n t e n to fm a t r i n ei n m a t r i n em i e r o e m u l s i o na n dt oc o n t r o li t sq u a l i t i e s ；4 t oo b s e r v et h es k i ni r r i t a t i o no f m a t r i n em i e r o e m u l s i o n ；5 t od e t e r m i n et h em a t r i n ec o n c e n t r a t i o n si nm i c et i s s u e sa n d 3 山东大学硕士学位论文 r a b b i tb l o o da n dt oe v a l u a t et h ep h a r m a c o k i n e t i cc h a r i c t e r i s t i c so fm a t r i n ea f t e r p e r c u t a n e o u sa p p l i c a t i o n so fm a t r i n em i c r o e m u l s i o n ；a n d6 t os t u d yt h ep r e v e n t i v e a n dt h e r a p e u t i ce f f e c t so fm a t r i n em i c r o e m u l s i o no nh y p e r t r o p h i cs c a rm o d e l s t h ef o r m u l a t i o no fm a t r i n em i c r o e m u l s i o nw a ss t u d i e da c c o r d i n gt om a t r i n e s a t u r a t i o ns o l u b i l i t yi nd i f f e r e n tm e d i aa sw e l la si t sc o m p a t i b i l i t yw i t hd i f f e r e n t s u r f a c t a n t sa n dc o s u r f a c t a n t t h em a t r i n em i c r o e m u l s i o nw a sp r o d u c e da n dt h e p r e p a r a t i o np r o c e s sw a se v a l u a t e d t h ep s e u d o - t e r n a r yp h a s ed i a g r a mw a sd r a w n a n d t h es i m p l e x 一面dm e t h o da n dt h ep e r c u t a n e o u sp e n e t r a t i o ne x p e r i m e n tw e r ea p p l i e dt o o p t i m i z e a n ds c r e e nt h ef o r m u l a t i o no fm a t r i n em i c r o e m u l s i o n t h em a t r i n e m i c r o e m u l s i o nw a sc o m p o s e da sf o l l o w s ，5 o i lp h a s e ( o l e i ca c i d ) ，4 5 w a t e rp h a s e ， 2 0 s u r f a c t a n t ( c r c m o p h o r ) ，a n d3 0 c o s u r f a c t a n t ( e t h a n 0 1 ) t h ep h y s i c a lp r o p e r t i e s o fm i e r o e m u l s i o nw e r ep r o v e dt ob eq u a l i f i e da f t e rt h ep h y s i c a lp r o p e r t i e s w e r e e x a m i n e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ep e r c u t a n e o u sp e n e t r a t i o ne f f i c i e n c yo f p r e p a r e dm a t r i n em i c r o e m u l s i o nc o u l dm e e t t h er e q u i r e m e n t so ft h ef o l l o w - u p e x p e r i m e n t g c m sm e t h o dw a se s t a b l i s h e dt od e t e r m i n et h ec o n t e n to fm a t r i n ei nm a t r i n e m i c r o e m u l s i o n ，i nm i c et i s s u e