（有机化学专业论文）植物大黄中抗aids病毒有效成分研究.pdf

ab s t r a c t r h u b a r b b e l o n g s t o t h e f a m i l y o f p o l y g o n a c e a e . i t i s a w i d e l y u s e d t r a d i t i o n a l h e r b f o r i t s v a r i o u s p h a r m a c o l o g i c a l a c t i o n s s u c h a s p u r g a t io n , a n t i f u n g a l , a n t i t u m o r h o w e v e r ,t h e s t u d i e s o n i t s a c t i v i t y a g a i n s t h i v w e r e r e p o rt e d f e w .i n o r d e r t o f i n d c o m p o u n d s h a v i n g a c t i v i t y a g a i n s t h i v t h i s p a p e r d i s c r i b e s t h e i s o l a t i o n a n d s t r u c t u r e i d e n t i f i c a t i o n o f c h e m i c a l c o m p o n e n t s f r o m r o o t s o f r . p a l m a t u m l . t w e l v e p u r e c o m p o u n d s w e r e i s o l a t e d a n d e l e v e n w e r e i d e n t i f i e d . d r i e d a n d p o w d e r e d r o o t s w e r e e x t r a c t e d w i t h e t o h a n d t h e s o l v e n t w a s e v a p o r a t e d , t h e r e s i d u e w a s e x t r a c t e d w it h e t h y l a c e t a t e a n d w a t e r ,t h e n t h e p a r t o f w a t e r w a s p a r t e d i n n - b u t a n o l a n d w a t e r . t h e e t h y l a c e t a t e s o l u b l e fr a c t i o n s w e r e c o n d e n s e d a n d s u b j e c t e d t o c l a s s i c a l i s o l a t i o n p r o c e d u r e s t o g iv e t w e l v e c o m p o u n d s , a n d e l e v e n w e r e i d e n t i f i e d b y t h e m e a n s o f h - n m r , c - n m r , d e p t ,h m b c , h - h c o s y , f a b , e i m s . t h e e l e v e n c o m p o u n d s a r e: c h r y s o p h a n o l , p h y s i o n , e m o d i n , a l o e - e m o d i n , r h e i n , c i t r e o r o s e i n , e m o d i n - 8 - o - p - d - g l u c o p y r a n o s i d e , c i n n a m i c a c i d , s a l ic y l i c a c i d ,2 ,5 - d i m e t h y l - 7 - h y d r o x y c h r o m o n e a n d h e x a d e c y l g ly c e r i d e . a m o n g t h e s e c o m p o u n d s , 2 , 5 - d i m e t h y l - 7 - h y d r o x y c h r o m o n e a n d h e x a d e c y l g l y c e r i d e a r e t h e f i r s t r e p o r t e d k n o w n c o m p o u n d s f r o m r . p a l m a t u m l . a n d t h e c a r b o n s o f c n m r i n 2 , 5 - d i m e t h y l - 7 - h y d r o x y c h r o m o n e w e r e a s s i g n e d c o r r e c t l y b y t h e m e a n s o f h n mr , c n mr , d e p t , h mb c . t h i s d i s s e rt a t i o n a l s o d i s c r i b e d t h e s t u d y o n c h e m i c a l c o m p o n e n t s o f e r ig e o n b r e v i s c a p u s ( v a n t .) h a n d .- ma z z . .t h e n - b u t a n o l s o l u b l e fr a c t i o n s w e r e s t u d i e d a n d t w o c o m p o u n d s w e r e i s o l a t e d ,o n e o f w h i c h w a s i d e n t i f i e d a s a p i g e n i n . k e y w o r d s : r . p a l m a t u m l . , e t h y l a c e t a t e , 2 , 5 - d i m e t h y l - 7 - h y d r o x y c h r o m o n e , h e x a - d e c y l g l y c e r i d e ,b r e v i s c a p u s ( v a n t . ) h a n d . - ma z z . 苗 勿久 声 功茄 a i d s 厉 毒 方亥 成 分 研穷 笛 一 音 a l 尸 产. ，一t一口 声目vl j 1 . 1 中草药有效成分分离研究的意义 天然产物化学是研究动物、 植物、 昆虫、 海洋生物及微生物代谢产物化学成分的学科， 它甚至包括人与动物体内许多内源性成分的化学研究， 因此， 它是在分子水平上揭示自 然 奥秘的重要学科， 内容十分广泛。 化学家们早在十九世纪初就开始对鸦片中的镇痛成分吗 啡与金鸡纳树皮中的抗疟成分奎宁进行了研究， 这一工作吸引了上百名有机化学家先后经 历几十年艰苦卓绝的努力才得以阐明这些成分的化学性质、 结构、 功能， 并通过合成加以 证明。 以 后青霉菌、 链霉菌代谢产物青霉素、 链霉素等抗生素的发现， 蛇根草中 抗高血压 成分利血平与长春花植物中抗癌成分长春碱与长春新碱的研究成功， 进一步掀起了 天然r 改 物化学研究的热潮， 天然产物化学的研究使化学家创制了许多新的化学反应与方法， 从而 大大丰富了有机化学，促进了有机化学的发展。 中草药有效成分的研究是天然产物化学研究中的一个重要的分支， 而研究中草药有效 成分就必须以有效成分的分离为基础。 因此， 中草药有效成分的分离具有十分重要的意义: 1 .降低原植物毒性并提高疗效 寻找有效部位以 至有效成分，能够去除植物中无效而有毒性的成分， 从而降低毒性， 提高疗效。 例如目 前在我国己经生产并用于临床的长春碱和长春新碱这两个生物碱， 它们 在原植物中含量分别为十万分之四和百万分之一。 其中长春新碱用来治疗小儿白 血病， f op 周只注射一毫克的剂量 ( 即相当于1 公斤原植物) 。若将一公斤长春花原料作成粗制剂给 病人注射是很困难的，并且毒性大而疗效差，提出有效成分后降低了毒性， 提高了疗效 2 . 改进剂型，控制生产质量 必iv又声0h -t a i d s iv43 0l k i 4j j i 中草药有效成分的含量受产地、 采集季节及加工方法的影响而有所变化， 临床疗效f l 往随之而有所不同， 工业生产时质量较难稳定。 如果我们能分出有效成分并进行生产， 则 可进行熔点、 旋光度， 红外光谱和紫外光谱等物理常数的测定， 这样可有效地控制上 业11 毛 产质量，以保证临床应用的效果。 3 . 扩大药源 当从中草药中分离出一种有效成分后， 根据有效成分的化学结构和性质， 可用来检查 其他中草药是否也含有此成分。 如果含有此成分， 那就可以开辟药源。 例如， 抗菌消炎的 小粟碱， 最初是从毛莫科植物黄连中得到的， 后来发现在小粟属的三颗针、 防己 科的古1 i 龙、 芸香科的黄相学植物中也含有此成分。目 前三颗针、 古山龙已成为提取小孽碱的主要 原料。 又如抗癌药秋水仙生物碱系自 植物秋水仙的球茎及种子中提出， 但秋水仙产于欧洲 及非洲， 近年来已 找到了含有此类生物碱的植物资源， 我国出产的山 慈菇和嘉兰均含有多 量的秋水仙碱和类似的生物碱，亦可作为提取秋水仙碱的原料。 4 . 进行化合物合成或结构改造 有些中草药的资源比较缺乏， 或者资源虽然丰富但是用量十分巨大以致供不应求，寻 - 找有效成分并弄清其化学结构就可使我们通过人工合成方法来生产。 例如， 麻黄中的麻黄 碱、 洋金花中的阿托品、 茶叶中的咖啡因以及天麻中的天麻试等主要有效成分都已 用人i 合成的方法获得。 中草药有效成分的化学结构可作为设计新的 合成药的重要借鉴之一， 可以 通过对有效 成分进行结构修饰，以增强药效， 克服毒、 副反应， 探索创制高效低毒的新药物。 如香菇 中的香菇pp 吟具有降低胆固醇的生理活性，若将香菇嗓吟分子中的狡基转变为醋的结构， 其降 低胆固醇活性的能力可提高十倍。 又如吗啡镇痛作用的合成代替品 呱替1定( 度冷 丁) ， 保留了吗啡中镇静有效的结构部分， 而呱替睫的成瘾性比吗啡小的多。 5 . 探索中草药治病的原理 分离出中草药有效成分， 就可以 研究化学结构与疗效和毒性的关系， 从而能在药理 走 丝竺丛 _ 声i l l a l d s痛毒疗对成 或临床上探索中草药对机体的作用原理， 这对于发掘整理祖国医药并进一步提高其效川价 值有一定的意义。 6 . 发展自 然科学学科 中草药有效成分研究的不断发展必将推动植物化学和天然有机化学学科发展。 随着分 离和结构研究方法的进步， 很多植物化学家已 注意研究植物成分在植物体内形成和分布的 规律，从而将充实植物分类学和植物生理学的研究内容。 1 .2 中草药大黄有效成分研究进展 大黄为常用中药，具有泻下、抗菌、抗肿瘤、抗高脂血症、降低血压、健胃、利胆、 保肝、强心、 消炎、 延缓衰老、 调节免疫等作用。早在公元1 2世纪的 神农本草经 中就有关于大黄主治作用的记载，古代许多著名医学家都应用过大黄来治病。到了 近代， 人们对于大黄的研究越来越广泛， 也越来越深入。 1 .2 . 1 . 大黄的原植物分类 寥 科( p o l y g o n a c e a e ) 大黄 属 ( r h e u m ) 约有6 。 种 植物， 几乎 全部 分 布于 北半 球的is 洲部分，而以 我国为其分布中心，约占总数的2 / 3以上，多达4 0 种，集中分布于 西北至 西南一带。 北京医学院药学系高作经等根据过去几十年及全国有关单位在各地多次实地调 查 所得标本对中国 大黄属植物进行了 整理与总结， 包括3 7 种2 变种及1 变型， 其中 药川 的1 8 种2 变种:对大黄属植物的特征作了详细的描述，并列出了大黄属分钟分e l i 分分种 检索表和新种记 载。 嗣后， 北京医学院诚静容等又结合近期工作对大黄属植物进行了 整理 研究。 全属分为7 组: 波叶组， 包括波叶大 黄r h e u m u n d u l a t u m l . 等1 3 种; 掌叶组， 包括药用大黄 r .o ff i c i n a l e b a i l l ., 掌叶大黄 r . p a l m a t u m l . ， 唐古 特大黄 r . t a n g u t i c u m m a x im . e t b a l 等6 种; 新叶组， 包括云南大黄 r . y u n n a n e n s e g . s a m . 等6 种; 砂 1 : 组， 包括总序大黄r . r a c e m i f e r u m ma x i m .等8 种; 穗序组， 包括网脉大黄r . r e t i c u l a t u m 道9尤声q /fi t . l i d s厉奋疗妻成分砰穷 a l o s .等5 种; 头 序 组， 包括头 序 大 黄r . g l o b u l o s u m g a g e . 1 种; 塔黄组， 包 括塔黄 r . n o b i l e h o o k .f e t t h o r n s 等2 种。 1 .2 .2 大黄的化学成分研究进展 自 从1 8 2 4 年 德国 化学家g e ig e r 从大黄中 分离出 大黄 酚结晶以 来， 现已 从各 种 大 黄中 分离到葱醒、二葱酮、蔑试、苯丁酮、丹宁、蔡试、色酮等不同种类的1 5 0 多种化合物。 现将大黄中存在的主要化学成分分类列出如下: 一慈酮类 通 贾 r 3 h o c h 3 h oh h oh h h h o - g l u oh h h oh h o c h , oc h 3 h 氏 c h 3 c h , c h = oh c h 3 c ooh c h 2 0 h c ho c h 3 c h 3 c hj c h , c h 2 0 - 9 1 u oh c h 3 c ooh c h 3 c h , c o o - g l u 凡hhhhhhh 序号化合物名称 大 黄 酚( c h ry s o p h a n o l) 10 大 黄 素 甲 趁( p h y s io n ) i q 芦 荟 大 黄 紊( a lo e - e m o d in ) 1 1 大黄索 ( e m o d i n ) o l 大 黄 酸( r h e in ) 川 。 握基 大 黄 素( c it r e o r o s e in ) 12 1 大黄 醛( r h e in a l ) t; l 人 黄 酚 d c ( i - 9 - d - g lu c o - c h ry s o p h a n o l ) i l 大 黄 酚 贰( 8 - d - d - g lu c o - c h ry s o p h a n o l) i l 大 黄 索 贰( 6 - 9 - d - g lu c o - e m o d i n ) i 人 黄 素 试( 1 - s - d - g l u c o - e m o d i n ) i l 芦 荟 大 黄 素 贰( 3 - 。 一 。 - g l u c o - a lo e - e m o d i n lb l ) 芦 荟 大 黄 米 试( 8 - 6 - d - g lu c o - a lo e -e m o d in ) ， 大 黄 素 贰( 8 - 9 - d - g l u c o - e m o d in ) . 人 黄 敌 贰( 8 - 9 一 。 一u c o - r h e i n ) is l 人 黄 素甲 醚 龙 胆 二 糖 贰 ( 8 - 6 - g e n t io b io s e - p h y s c i o n ) 人 d k * m % k ( 8 - 9 一 。 - g lu c o - p h y s io n ) i l 人 黄 敌 试( 1 1 - o - d 一 。 - q lu c o - r h e in ) i l 1，工f，j，气u，廿 u glhh ono产 gl u hhhhhhh rihhhhhhhhgluhhhglugluglugengluh 1011121314151617切 二. 葱酮类 橙 匆久 声 中贫 a i d s 厉 毒 有者成 分 砰穷 一 i t 1 3 c 一一 1 化合物名称 巴米亨二葱酮a ( p a lm i d i n a ) h o l 巴米亭二葱酮b ( p a lm id i n b ) 13 0 1 巴 米亭 一葱酮c ( p a l m id in c ) 130 1 人 黄 敌 二 慈 酮a ( r h e id in a ) 1 人黄敌二蕙酮b ( r h e i d in b ) i 川 大 黄 敌 二 慈 酮c ( r h e i d in c ) i i 秀泻试元 a ( s e n n o s i d i n a) 番泻试元 c ( s e n n o s i d i n c ) 番泻试a ( s e n n o s id e s a ) i i r , c h 2 0h r3oh 凡h c h , oh 风hh 0日 目c h 3 口j rhhh 内，山j山 4hhh rccc rhhh hhh日h oh h o ch h h h c h 3 c h 3 c h 3 cooh c h , o h cooh h c ooh h c ooh h c ooh h coo h h c oon h cooh hhhhh jq心曰6，夕ro子 1 0番泻贰b ( s e n n o s id e s b ) 1 2 l 侨泻试c ( s e n n o s i d e s c ) 1 x 1 coohh cooh c h 2 oh h c ool c h, oh h cooh hhhhhhhhhhhhh 1 2 1 3 哥 泻试d ( s e n n o s id e s d ) 1 7 1 番泻试e ( s e n n o s id e s e ) i 3 1 a - d - g l u 日 - d - g l u 日 - d - g lu 日 - d - g l u p - d - g l u 日 cooh 日 - d - g l u 旦 - d - g l u 日 - d - g l u 日 - d - g l u s - d - g l u 日 h cooh 1 4番泻试f ( s e n n o s i d e s f ) 1 1 3 1 coohh cooh 三.慈酮贰类大黄酸贰洲 目前已分离到四个葱酮贰类化合物，即大黄酸贰a ,b , c和d ，其中大黄酸贰a和 b及c和d仅为c -1 0 的空间异构体。 橙 匆大 一 声 中茄 a i ds 厉 幸存对 成 分 醉穷 日0 oli n c h 2 0h h o o日 v 口 h 2 0 h hoi .0 ho ohes气矛 户- -;, 0 0 0 h o oh 吕 oh 产、。 h o h 2 c , 。 i r i .4 i d s厉毒疗亥 h 5 r bl f i1h s c - 一 一 一 - - 一 - - - - - - - - - - r 3 - o -c h 2 o- r i r i h h g g i i co u m co u m c o u m co u m ci n n c i n n g g r , ci n n ci n n ci n n c o u m c o u m g h h h g h h g 即助助 .月，.、r、了1 rghgg日 序 9 ; 、.尹、刀j、.声、，、 旧r卜q0口b 尹ttl口、了.、j.、尹汀、 ghggoohh agaa 11，件嘴j泊q4戈 nu 乙n勺iong万 c- cw m - 5 . 酚性酸 没食子酸2 6 ) : 八.色原酮类衍生物1n a s i 己分离到这类化合物纯品8 个以上，结构如下 14 若 匆又 声 中茄 a i ds 病 毒 存方 成 分 砰 穷 o - ch 3 夕尸 ch a c h , 2 . 5 .二 9 1 f it - 7 - 7 4 从色原酬 2 - 1 f jx- 5 一 乙从 1, 1: - 7 - t ; , s 色除酮 o- ch 3 厂飞 2 - 甲基- 5 - 梭甲基- 7 - 轻基色原酬 2 - 甲 基- 5 - ( 4 - 径基戊酮- 2 - 基- 7 - 径 乱色ig ( 酮 g l u - o 2 - ( 2 - t i 丙lt) - 5甲荃- 7 - 3 4 荃色原酮2 - ( 2 - l 4 丙基) - 5 - 4 1 1- 7 - 葡萄翻俄a色原酮 ho o - s h e 厂飞 2 - ( 2 一 丙14 4) - 5 . 4 1 基 - 7 - 葡萄p俄基色原酮 2 . 4 1 笨- 5 - 梭甲基- 7 - 径基。二 氢色原酮 九、其它 除以上成分外， 大黄中还含有氨基酸129 1、 糖p ot 、 有机酸13 11、 蛋白 质、 晰醇p 2 1 、三 枯皂戒 ， ， ，、维生素， ， ， 、无机物， ， ，等成分。 is . j : 豁 肠 _碳 偏 梦9又ri ra i d s 04j i oi x, n f z 1 .3 选题依据 目 前， 国外应用于临床的抗艾滋病药物主要是人工合成的核昔衍生物， 如a c t , d 4 t , d d i 和d d c . 这些药物特点都是核酸的拮抗剂， 是通过h i v病毒中激活酶依次激活核首 底物， 最后转化成作为h i v病毒d n a聚合酶底物三磷酸核昔， 掺入d n a , 使d n a的 复制， 转录终止， 从而阻止d n a的合成。 这些药物虽然能够对h i v病毒的治疗起到一定 控制作用， 但尚且不能完全治愈艾滋病。 因此继续寻找新结构模板抗艾滋病药物依然是化 学家，药物学者肩负的重任。 天然产物化学的研究成果已广泛应用于医药业，为保障人类健康提供了许多天然药 物。 由 于天然药物所提供的活性物质结构新颖， 疗效高， 副作用小， 所以 它们始终是医 药 工业新药研究的主要源泉之一。 当今国际天然产物已转向生物活性物质的研究， 运用现代 技术结合本国资源情况开展研究工作已 成为各国天然产物主要研究方向。 从植物， 海洋, 几 物， 微生物代谢产物包括人和动物内许多内源性物质寻找抗艾滋病的化学物质， 继而合成 这些生物活性物质也是世界当前热门研究课题。 我国地域辽阔， 天然资源丰富， 仅仅植物 就有4 万余种， 另外我国 传统中医理论和医药学为植物药的应用积累了 极其宝贵的经验， 这在世界上是独一无二的。因此， 结合我国特有的天然资源， 解决资源的合理应用， 特别 是结合我国历史悠久的中医药传统， 在我国开展抗艾滋病植物药的研究有着国外无法相提 并论的得天独厚的基础。 我国在抗艾滋病植物药的研究尚 且很少， 南开大学生命科学院耿运琪教授与 in 际阱允 接轨， 率先在国内建立了筛选抗艾滋病的 模型， 广泛开展了 从中国中草药筛选抗艾 滋病植 物药物的研究工作， 取得了一些可喜的研究成果，并得到了美国p 3 实验室的验证。中药 大黄就是其中筛选的一种具有潜在应用前景的抗艾滋病植物药。 中药大黄是我国传统的中草药， 种属于寥科植物， 我国自 然资源丰富， 可以大量人1 一一一一一一 ia 9 二r t l l a i d s r 三- i 0 111 n jf ,9 栽培。 据中药药典记载大黄具有泻下作用， 抗菌作用， 抗肿瘤作用等药理作用。 近来我们 对采自 于甘肃的掌叶大黄的根茎进行了 研究， 发现了 其新的作用靶标。 我们通过对大黄的 粗提按照成分的极性不同，初步萃取分配成三个组分，通过筛选发现，其中两个组分对 b i v病毒有明显的抑制作用，且对正常细胞毒性较小。具体筛选实验数据如下: 一、 1 .样品编号1 # , 2 # , 3 # 2 .对照药物样品 a z t 3 . 细胞及病毒细胞: f b i 病 毒:b i v r 2 9 二、实验结果 细胞毒性试验 ( i c 5 0 ) 单位u g / m l 合胞体形成抑制试验及成活细胞计数: azt r 2 9 负对照 无 r 2 9 2 . 6 0? 4，1 0022 气乙，j.且 2014 第一次试验: 用 药 浓 度 ( u g / m l ) 合胞体形成数目 成 活 细 胞 数( x 1 0 5 ) 1 . 7 5 9 3 2 1 . 9 1 . 0 3022 洲一15 第二次试验: 用 药 浓 度 ( “ 创 m l ) 合胞体形成数目 成 活 细 胞 数( x 1 0 5 ) 2 0 4. 7 2 3 5 . 6 azt 2 . 6 9 5 . 2 7 r2 9 负对照 3 6 3 . 8 八曰勺 ，.且，产 试验结果表明:1 故 3 # 粗极性组分具有抗艾滋病有效成分，因而进一 无 r 2 9 f bl 0 1 0 . 6 步深入开 展对大 黄中抗艾滋病药物的研究不仅具有重要的学术价值，而且具有潜在的经济价值和社会效 益， 一方面可以 通过对活性粗组分进行优化分离提取工艺， 提高有效成分的 含量， 通过抗 艾滋病i 1 :. 物活性跟踪， 寻找出抗艾滋病药物有效成分， 为进一 步做抗艾滋病药理临床积:k , 基础工作， 最终将其开发成具有我国 特色的抗艾滋病毒中成药; 另一方面通过对药物有效 部位的分离， 应用现代光谱技术， 鉴定出 这些纯化合物的分子结构， 通过筛选，寻 找出具 有抗艾滋病毒药物的母体结构，为进一步合成提供结构模板， 通过分子设计和结构修饰， 寻找其结构与活性关系，研究成新颖的抗艾滋病毒药物。 岔 勿久 声 中茄 a i d s 厉 幸 方者 成 分 歼穷 第二章 实验部分 2 . 1 生物样品、仪器及试剂 生 物 样品: 大黄r h e u m p a l m a t u m l . 1 9 9 8 年购 于 药 店( 源于 甘肃) 。 灯盏 花. ( e r ig e r o n b r e v i s c a p u s ( v a n t .) h a n d .- m a z z ) 采于云 南。 试剂: 所用试剂均为分析纯， 所用溶剂均经重蒸处理。 薄层层析硅胶h , g f z 1 ， 及 柱 层析硅胶 ( 2 0 0 - 3 0 0目) 均为青岛 海洋化工厂所生产。 显色剂: 5 % 一 1 0 % 磷铝酸乙 醇溶液: 5 g 磷铝酸 溶于1 0 0 m 1 乙 醉中。 仪 器: 紫 外 灯 ( 3 6 6 n m ,2 5 4 n m ) ;核 磁 共 振 仪为 : b r u k e r a c - p 2 0 0 q , m e r c u r y - 3 0 0 .1 1 i n o v a - 5 0 0 型; 质谱仪为v g z a b - 2 f 和a u t o s p e c - u l t i m a e t o f 型; 熔点仪为: y a n a c o m p - 5 0 0 型 ( 温度计未矫正) 。 2 .2 提取与分离 2 . 2 . 1 中草药大黄有效成分的提取分离: 将大 黄 样品r h e u m p a lm a t u m l . ( i k g ) 用 剪刀 剪 碎， 用重 蒸的9 5 % 工 业乙 醇2 0 l 浸取 三次， 每次 浸 泡一周， 过滤、 合 并提 取液， 减 压过滤得 棕色 粘稠物 ( 浸膏) 1 5 0 g 。 将v l 先用乙 酸乙酷和水提取， 水相再用正丁醇和水分配。 丝丝述s 叁 少. ra i d s厉奋疗者/, 分 ) f 洲 乙 酸 乙 酉 旨/ 水 大黄提取示意图 我的研究工作主要是对乙酸乙a a 相的有效成分进行了分离。分离过程为:将乙酸乙 酷相浸膏拌上硅胶， 减压蒸去溶剂， 然后在红外灯下将其烤干，经v l c硅胶柱层析， 用 不同比 例的c h 2 c 1 2 / c h 3 0 h进行梯度洗脱， 得到8 组 粗分产物: 大黄脂相粗分示意图 粗分之后进一步细分，主要用加压快速柱层析进行分离，分离过程如下: ( 1 ) :将组分 i 用石油醚/ 乙酸乙醋= 1 9 / 1 进行洗脱，并经重结晶处理，得 碳 色i0 i 状晶体 l y m - 1 ( 1 0 0 m g ) 。 利用碳谱， 氢谱数据分析，并与文献对照， 确定其为大黄m 鱼鱼不 声ip ra i d s fp v- i ; l 0 0 h 17 li 0 ( c h ry s o p h a n o l ) a ( 2 ) :将组分1 1 先用石油醚/ 乙酸乙酷= 1 9 / 1 进行洗脱，然后加大级性，得a , b , ( 三部分。将b进行薄层制备层析，得到l y m- 1 和l y m- 2 o l y m- 2经碳谱、氢潜分析 与 文献 对照， 确定为 大黄素甲 醚( p h y s i o n ) ( 6 m g ) 。 将c 部 分 用c h z c l2 和c h 3 0 0 0 h 3 进 行梯度洗脱， 得一白 色片状晶 体， 经碳谱， 氢谱分析， 确定其为肉 桂酸 l y m - 7 ) ( 2 0 m g ) , ( 3 ) : 将组分i i i 先用c h 2 c 1 2 / c h 3 0 0 0 h 3 =1 9 / 1 进行洗脱， 然后加大级性。 这样进了 j ; 反复快速柱层析， 得到橙色针晶l y m - 3 和黄色针晶l y m- 4 ， 经碳谱、 氢谱分析及与文献 对照， 确定“m - 3 为大黄素 ( e m o d i n ) ( 2 0 0 m g ) , l y m - 4 为芦荟大 黄素 ( a l o e - e m o d i n ) ( 1 5 0 m g ) o ( 4 ) :将组分n先用粗硅胶 ( 2 0 0 -3 0 0目) 进行粗分，分成a - f组分，将其中的b 组分用磷铂酸试液显色， 发现有一个颜色比 较深的点， 跟踪此点进行细分， 得到一 粘稠f. i 体， 用 石 油 醚 / 甲 醇 分 配 处 理 后 得到 一白 色固 体( l y m - 1 0 ) ( 5 m g ) 。 经h - n m r , c - n m r , h - h c o s y , e i m s 确定其为i 一 六酸甘油酷。 c组分用c h z c l2 / c h 3 0 0 0 h 3 = 5 0 / 1 进l 7 细 分，得到一淡黄色针晶，经碳谱、氢谱、f a b ms , h mb c分析及与文献对照， 确定其为 2 , 5 一 二甲 基一 7 - 轻基 色原 酮( 4 5 m g ) ( l y m - 9 ) o d组 分 用c h z c l 2 / c h 3 0 0 0 h 3 = 5 0 / 1 进 行 细 分 ， 得 到 一白 色 固 体 ， 经h - n m r , 13 c -n m r 分 析 ， 它 是 水 杨 酸( l y m - 8 ) ( 3 8 m g ) ( 5 ) : 将组分v 用c h z c l 2 / c h 3 0 0 0 h 3 =1 9 / 1 , 1 6 / 1 , 9 / 1 . . . . . . 梯度洗脱， 反复硅胶柱 层析， 得一淡 黄色固 体l y m - 5( 不太纯) ， 和一 黄色针晶l y m - 6 ( 8 m g ) 。 将组分vi进行 反 复 硅 胶柱 层析， 得l y m - 5 ， 将分离 两 组 分所 得l y m - 5 继续纯 化， 得 纯品l y m - 5 ( 6 m g ) l y m- 5经碳谱、氢谱分析及与文献对照，确定为大黄酸 ( r h e i n ) o l y m- 6经碳谱、氢潜 分 析 及 与 文 献 对 照， 确 定 为。 一 轻 基 大 黄 素 ( c i t r e o r o s e in ) o ( 6 ) : 将组分v i 经 v l c处理， 然后反复进行加压快速柱层析，得 l y m - 1 1 ( 5 m g ) i i l y m - 1 2 ( 3 m g ) o l y m - 1 1 经 碳谱、 氢谱 分 析 及与 文 献对照， 推断 其结 构为 大 黄素8 - 0 - 0 - d 毗喃葡萄糖贰。l y m- 1 2 的结构还没有确证。 20 丝塑丛 声 #i i a i d s厉毋 i x ! y c i f z 2 . 2 . 2 中草药灯盏花有效成分的分离: 灯盏花总黄酮依次用乙酸乙酷，丙酮，无水乙醇通过索氏提取器提取，得乙酸乙ji t 提取物，丙酮提取物，乙醇提取物及提剩物几部分。 将乙 酸乙 酷提取物用开始时c h 2 c i z : c h 3 0 h = 9 5 : 5 的溶剂进行梯度洗脱， 得到 无色针状晶体 d z h - 1 ， 分析其碳谱， 氢谱， 得知这是一个皂贰类化合物，山于得到的尽 太少，没能鉴定出结构。 用2 0 0 -3 0 0目 硅胶粗分乙醇提取物，以c h 2 c l z , c h z c iz : c h 3 0 h = 2 0 : 1 , 1 8 : 1 5 : 1 的 顺序进行梯度洗脱， 得到一淡黄色( 紫外灯下呈明显荧光) 物质， 将其进一 步 过村纯 化， 得d z h - 2 。 经h - n m r , 3 c - n m r 分 析 基黄酮( 芹菜素 ) 。 对照文献数据， 确定d z h - 2 为5 , 7 .4 一 释 第三章化合物的性质及其结构鉴定 3 . 1 蕙酿类化合物 基本骨架: o 支8 a l 1 a 火 7 产不， 丫、2 6 l,a 10 4 66 4-55 0 谱图 特征: h - n m r : 葱 酿 母 核共 有8 个芳 氢， 可 分为 两 类即。 一 与0 一 芳 氢， 即戊b , 系 统 . 卜 芳 氢处于c = 。 负 屏蔽区 ， 受c = o 影响 大，处于 较 低 磁场 ( 峰中 心 在8 8 .0 7 p p m左右 )， 而0 - 芳 氢受c = o 影响 较小 ， 共 振发生 在 较高 磁场， 峰中 心在6 6 .6 7 p p m左右; 在 取代 葱醒中，如 有相邻芳氢，则出现相互邻偶的两个重峰 ( j ,. = 6 - 9 .4 h z ) ，如有间位二芳氢，则为远程偶 合j , ,= 0 .83 . 1 h z 的 双 重 峰 ; 蕙 醒 母 核 上一 c h 3 质 子的 化 学 位 移 约 为8 2 . 1 - 2 .9 p p m ,单 峰: 一一一一一m 9 i ( -a0 ra i d s 4 -j jx ll w 4 一一一一一 一 。 c h , 质 子 的 化 学 位 移 约 在6 4 .0 - 4 .5 p p m左 右 ， 单 峰: 与 苯 环 相 连的一 c h = o h 其 - c h , 一质 子 的6 值 约 为4 .6 p p m 左 右 ， 2 h ，双 峰 ， 其一 。 h 质 子 的5 值 约 在5 .6 p p m 左 右: 。 一 酚 轻基受c = 0 影响 大， 质子 共振发生 在很低 磁 场区，6 值约为 1 1 - 1 2 p p m , 单 峰.。 - m t v 基6 值 多 小 于l l p p m . c -n m r : ;酮 母 核 上 共 有1 4 个 碳 原 子 ， 可 分 为4 类 :。 一 碳 ， 0 - 碳， 拨 基 碳 和 季 碳。 葱 酿 本身 在3 c - n m r 中 只 有4 个峰 : 5 1 2 6 .5 6 ( c - 1 ) , 6 1 3 4 .3 2 ( c - 2 ) , 5 1 8 2 . 5 1 ( c - 9 ) , 6 1 3 2 .9 6 ( c - 8 a ) , 如 苯坏 上 有两 个以 上 取代m y t i 基， 则 一 般出 现1 4 个 碳信号 ， 拨基迫位有两个酚轻基取代基时 ， 其化学位移比 较大 ( 5 1 8 0 ) . 3 . 1 . 1 大黄酚 ( c h r y s o p h a n o l ) : ( l y m一1 ) ( 1 ) 物理性质:黄色针晶 ( 丙酮) ， 能溶于石油醚，易溶于二氯甲 烷，乙 酸乙酚，丙 酮。 m p : 1 9 9 -2 0 0 1c. ( 2 )结构式: ( 3 ) 结 构 鉴 定 : c - n m r ( 图1 ) 显 示l y m - 1 含1 5 个 碳原 子， 其中 包 括2 个 碳 基 碳 6 c =1 9 2 .4 和6 c =1 8 1 . 7 ) , 1 2 个双键碳 ( 6 c 1 0 0 ) ， 及一个甲 基碳 ( 6 c = 2 2 .2 ) ,因而 初 步 推断 这是 一 个 蕙 酮 化 合 物。 h -n m r( 图2 ) 显 示 该 化 合 物 含 一 个甲 基( 6 f i= 2 .4 2 ) , 5 个苯环氢( 7 . 7 8 , 1 h , d ,j = 7 .2 h z ; 7 .6 2 , 1 h , t , j = 8 .2 h z , 6 .2 h z ; 7 . 6 0 , 1 h , s ; 7 .2 5 , 1 h , d .j = 5 . 8 h z : 7 . 0 5 , 1 h , s ) ， 及两个酚轻基( 8 h =1 1 .9 6 及s h =1 2 . 0 8 ) ， 进一步确定l y m - 1 是 i a w .,化合 物， 而 且 综 合3 c - n m r 及h - n m r 推 断 其为 含 有 两 个 酚 轻 基 及一 个 侧 链甲 基 的 葱 醒 戒 元。 5 个苯环氢中3 个有裂分， 偶合常数分别为7 .2 h z ; 8 .2 h z . 6 .2 h z ; 5 . 8 h z , 说 明3 个有裂分 的 氢在同一个苯环上， 且为相邻关系; 另两个氢为单峰 ， 说 此二氢在另一 苯环上，且 为孤y 氢 或间 位 氢; 13 c - n m r 中 一 个 拨 基 碳的 化 学 位 移 为1 9 2 .4 说 明 此 拨 基 碳的 迫 位均 为 轻 基 22 澄 匆大声 功茄 a i d s 厉 幸方者成 分 好穷 取代基。这样，可推断l y m- 1 的结构只能为 1 , 8 一 二轻基一 3 一 甲基葱n ( 大黄酚) 。 叻 勺 2 足 1 笼 日 .c d c l 3 % 8 / 1 2 1 . 口 2 0 0 1 8 0 1 6 0 1 4 0 1 2 0 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 图1 参 照己 有 文 献， 1 h - n m r , i3 c - n m r 13 4 .3 5 1数 据与 文 献中 的 大 黄 酚一 致， 因 而 确 定其 为 .二 知 物 大 黄 酚。 其h - n m r , i3 c -n m r 信 号 归 属为 : 1 h - n m r ( 2 0 0 m ,c d c 13 ) 8 p p m : 1 2 .0 7 ( 1 14 , s , 8 - o h o r 1 - o h) ， 1 1 . 9 6 ( 1 h , s , 8 - o h o r l - o h ) , 7 . 7 8 ( 1 h , d ,j = 7 . 2 h z ,h - 5 ) , 7 .6 2 ( 1 h , t , j = 8 .2 h z 6 .2 h z ,h - 6 ) , 7 .6 0 ( 1 h , s , h - 4 ) , 7 .2 5 ( 1 h ,d ,j = 5 . 8 h z ,h - 7 ) , 7 .0 5 ( i h , s , h - 2 ) , 2 .3 8 ( 3 h , s ,a r - c l l 3 ) 13 c - n m r : ( 2 0 0 m h z , c d c 13 ) : 5 p p m : 1 6 2 .4 ( c - 1 ) , 1 2 4 .5 ( c - 2 ) , 1 4 9 .3 ( c - 3 ) , 1 2 1 .3 ( c - 4 ) , 1 1 9 .9 ( c - 5 ) , 1 3 6 . 9 ( c - 6 ) , 1 2 4 .3 ( c - 7 ) , 1 6 2 . 7 ( c - 8 ) , 1 9 2 .4 ( c - 9 ) , 1 8 1 . 7 ( c - l 0 ) , 1 3 3 . 2 ( c - 4 a ) 1 1 5 . 8 ( c - 8 a ) , 1 1 3 . 7 ( c - l a ) , 1 3 3 . 6 ( c - 5 a ) , 2 2 . 2 ( c - c h 3 ) - 若 匆义 声 功茄 a i d s 厉 母 有对成 分 研穷 一 ， ， ， ， ， ， ， ， ， 、 ， . ， ， ， ， ， ， ， ，