临床常用免疫学检查.ppt

临床常用免疫学检查,中山大学附属第三医院风湿内科潘云峰2019-12,本章节重点,临床参考值临床意义选用原则,临床常用免疫学检查,免疫免疫学免疫学检测：1.特异性免疫功能检查2.非特异性免疫功能检查,免疫学检测,特异性免疫功能检查：检测相应的抗原、抗体包括：肝炎病毒标志物检测感染免疫检测肿瘤标志物检测自身抗体检测,免疫学检测,非特异性功能检测：机体免疫状态实验室检测血清免疫球蛋白检测血清补体检测细胞免疫检测,第一节血清免疫球蛋白检测,免疫球蛋白概念（Immunglobulin，Ig）功能分类：IgG、IgA、IgM、IgE、IgD,免疫球蛋白G检测,特点：人体含量最多和最主要Ig，可通过胎盘方法：单向免疫扩散法参考值：7.616.6g/L临床意义：1.IgG增高（1）多克隆增高：感染、自身免疫病（2）单克隆增高：MM2.Ig降低：免疫缺陷、肾综、免疫抑制剂,免疫球蛋白A检测,特点：分血清型与分泌型IgA（SIgA）方法：单向免疫扩散法参考值：血清IgA：7103350mg/LSIgA：不一致临床意义1.IgA升高：IgA型MM、肾病、自身免疫病2.IgA降低：呼吸道感染、免疫缺陷病等,免疫球蛋白M检测,特点：分子量最大Ig方法：单向免疫扩散法参考值：0.482.12g/L临床意义1.IgM增高：肝炎肝硬化、自身免疫病2.IgM降低：免疫缺陷、免疫抑制剂、肾综,免疫球蛋白D检测,特点：功能不明，与一些抗体产生有关方法：Elisa法参考值：0.62.0mg/L临床意义1.IgD增高：MM、白血病2.IgD降低：无丙种球蛋白血症,免疫球蛋白E检测,特点：血清中最少，与变态反应有关方法：Elisa参考值：0.10.9mg/L临床意义1.增高：各种过敏性疾病、寄生虫感染、MM等2.降低：免疫抑制剂、丙球缺乏症,血清M蛋白检测,单克隆B细胞产生的免疫球蛋白及其分子片断方法：蛋白电泳参考值：阴性临床意义：多发骨髓瘤重、轻链病,第二节血清补体检测,补体成份：C1（C1q、C1r、C1s）C9、B、D、P、H、I等因子组成功能：1.参与免疫反应2.免疫损伤作用,总补体溶血活性检测,总补体溶血活性(CH50)：反应补体传统途径的活化程度方法：试管法参考值：50100u/ml临床意义1.减低：SLE、肾小球肾炎、肝病2.增高：组织损伤、急性炎症,补体C3检测,方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法参考值：1.140.27g/L临床意义1.减低：SLE、急性肾小球肾炎、链球菌感染后肾炎2.增高：急性炎症,补体C4检测,方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法参考值：0.550.11g/L临床意义：同C3,第三节细胞免疫检测,淋巴细胞淋巴细胞分类：T、B淋巴细胞，第三群淋巴细胞（NK、LAK）,T细胞表面标志,T细胞受体簇分化抗原组织相容性抗原致有丝分裂原受体病毒受体,T细胞免疫检测,T细胞花结形成试验EaRFc、EsRFC、EtRFC参考值：Ea为23.63.5%，Et为64.46.7%临床意义1.反映周围血中的T细胞数量2.间接反应细胞免疫功能：降低主要见于免疫缺陷性疾病如恶性肿瘤3.有利于免疫缺陷性疾病的诊断和疗效观察,T细胞免疫检测,T细胞转化试验：有丝分裂原（PHA）临床意义1.反映机体的细胞免疫水平，可作为免疫缺陷病的辅助诊断2.可用以估计疾病的疗效和预后3.可协助选择适宜的移植供体,T细胞免疫检测,白细胞分化抗原意义T细胞分化抗原测定：CD3、CD4、CD8临床意义1.CD3降低：自身免疫病2.CD4降低：恶性肿瘤、爱滋病、免疫抑制剂3.CD8减低：自身免疫病4.CD4/CD8比值变化意义,B细胞表面标志,表面免疫球蛋白（SIg）CD抗原MHc抗原Fc受体补体受体、丝裂原受体,B细胞免疫检测,B细胞膜表面免疫球蛋白（SmIg）临床意义：1.检测外周血B细胞的百分率2.SmIg降低：免疫缺陷病SmIg增高：慢性淋巴细胞白血病,B细胞免疫检测,红细胞抗体补体花结形成试验临床意义1.检测外周血B细胞数量及免疫功能2.花结形成细胞降低：免疫缺陷性疾病增高：淋巴增殖性疾病,B细胞免疫检测,B细胞分化抗原测定：CD19、CD20为B细胞特有标志CD19、CD20升高：淋巴细胞白血病CD19、CD20降低：使用化疗或免疫抑制剂后,第四节病毒性肝炎血清标志物检测,乙型肝炎病毒标志丙型肝炎病毒标志,乙型肝炎病毒标志物检测,乙肝传染途径：垂直传播占3045%水平传播占5060%,乙肝病毒表面抗原（HBsAg）测定,方法：Elisa、RIA参考值：阴性临床意义：急性乙肝的潜伏期持续阳性易发展慢性乙肝或肝硬化乙肝病毒携带本身不具有传染性,乙肝病毒表面抗体（HBsAb）测定,参考值：阴性临床意义：保护性抗体感染后36个月出现，数年消失注射乙肝疫苗后呈阳性，持续时间不等,乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）测定,参考值：阴性临床意义：乙型肝炎活动期较强的传染性垂直传播持续阳性易转为慢性肝炎、肝硬化,乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）测定,参考值：阴性临床意义：HBV复制减少，传染性降低非保持性抗体,乙肝病毒C抗体（HBcAb）测定,参考值：阴性临床意义：IgM型HBcAb为近期感染HBV标志，传染性强持续不降及高滴度，慢性肝炎判断HBsAg阴性急性乙肝有意义非保护性抗体,乙肝两对半,HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb大三阳：HBsAgHBeAgHBcAb小三阳：HBsAgHBeAbHBcAb,现症HBV感染,HBsAg（+）或HBeAg（+）HBV-DNA（+）HBcAbIgM（+）肝内HBcAg（+）或HBsAg（+）或HBV-DNA（+）,慢性乙型肝炎诊断,临床符合慢性肝炎+现症HBV感染之一,慢性HBsAg携带,无临床症状及体征肝功能正常HBsAg血症持续6个月以上,丙型肝炎（HCV）,传染途径：血液或血制品诊断：血清抗-HCV阳性（IgM、IgG）HCV-RNA,甲、丁、戊、庚型肝炎见传染病学,自学有关部分,第五节感染免疫检测,抗体检测抗原检测,抗链球菌溶血素“O”测定,用已知抗原（溶血素“O”）检测抗体（ASO）方法：免疫比浊法、胶乳凝集法参考值：0300IU/ml或阴性临床意义1.辅助诊断A族溶血性链球菌感染所致疾病2.有利于鉴别诊断,抗链球菌溶血素“O”测定,溶血性链球菌感染一周后，ASO升高，4-6周达高峰，可维持数周到数年临床应动态观察，ASO逐渐升高或维持高水平，疾病活动，ASO逐渐下降，疾病缓解,伤寒、副伤寒免疫测定,致病原：伤寒杆菌、副伤寒杆菌甲、乙、丙型检测方法：肥达反应酶联免疫吸附试验胶原凝集试验,伤寒、副伤寒免疫测定,肥达反应定义：已知抗原检测抗体，属直接凝集反应伤寒杆菌抗原：（1）菌体抗原（O）（2）鞭毛抗原（H）（3）伤寒杆菌包膜抗原（vi）,伤寒、副伤寒免疫测定,肥达反应临床意义O凝集效价1：80，H凝集效价1：160，或甲、乙、丙H凝集效价1：80有临床意义O抗体IgM，H抗体为IgG，因抗体性质不同，影响肥达反应结果（1）O效价上升，H效价不高，疾病早期（2）H效价高，O效价不高，曾患伤寒或有接种史O抗体不能区分伤寒、副伤寒，H可以早期使用抗菌素或免疫抑制剂，肥达反应可为阴性,伤寒、副伤寒免疫测定,酶联免疫吸附试验（Elisa）目的检测物（O抗原）IgM抗体临床意义1.利于早期诊断2.滴度1：20对诊断伤寒携带有帮助3.敏感性、特异性优于肥达反应,伤寒、副伤寒免疫测定,胶乳凝集法目的检测物：伤寒、副伤寒沙门菌可溶性抗原临床意义1.早期诊断2.其它抗体检查结果阴性时有意义,结核分支杆菌抗体和DNA测定,Elisa法、金标法测抗体PCR法：检测结核分枝杆菌DNA参考值：阴性临床意义：可能结核分枝杆菌感染PCR、血清学检测优缺点,病毒感染免疫检测,人巨细胞病毒抗体和DNA测定,巨细胞病毒抗体和DNA测定,病毒属性：疱疹病毒，可引起受染细胞变大感染途径：先天、后天性检测方法：间接免疫荧光、Elisa法、PCR-DNA参考值：阴性临床意义：IgM抗体阳性IgG抗体阳性，4倍以上效价升高PCR-DNA阳性优生优育,性传播疾病免疫检测,梅毒螺旋体抗体测定人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定,梅毒螺旋体抗体测定,梅毒：苍白螺旋体引起的一种性传播疾病，人是唯一传染源人体受染后产生特异性抗体及非特异性抗体（反应素）,梅毒螺旋体抗体检查,非特异性的类脂质抗原试验（筛选试验）特异性的密螺旋体抗原试验（确证实验）,梅毒螺旋体抗体试验,筛选试验（1）性病研究实验室试验（VDRL）（2）不加热血清反应素实验（USR）（3）快速血浆反应素实验（RPR）原理：以类脂质检测非特异性抗体临床意义：梅毒的筛选非特异，假阳性率高,梅毒螺旋体抗体试验,确诊试验（1）荧光螺旋体抗体吸收试验（2）梅毒螺旋体血凝试验临床意义：肯定梅毒的诊断,人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定,AIDS（Acquiredimmunodeficiencysyndrom）获得免疫缺陷综合症病原体：HIV-1、HIV-2，属逆转录病毒抗体出现时间：感染HIV4-8周,AIDS的实验室诊断,病毒检测：细胞培养分离病毒抗原（P24）和逆转录酶检测核酸检测(PCR)抗体检测：筛选试验确诊试验,AIDS实验室诊断,筛选试验：Elisa快速蛋白印迹法确诊试验：蛋白印迹试验RT-PCR法（免疫印迹不能确诊时用）,第六节肿瘤标志物检测,甲种胎儿球蛋白测定（AFP）癌胚抗原测定（CEA）,甲种胎儿球蛋白测定（AFP）,方法：放射免疫测定法参考值：20ug/L临床意义（1）孕妇，多300ug/L（2）原发性肝癌，80%300ug/L，10%阴性（3）生殖腺胚胎癌，AFP含量升高（4）肝炎、肝硬化，大多20200ug/L，随病情变化,癌胚抗原测定,方法：放射免疫测定法参考值：15ug/L临床意义（1）结肠、胃、胰腺、肺及妇科肿瘤，CEA常升高（2）缺乏特异性，无早期诊断价值（3）CEA浓度随病情变化，可作为结肠癌术后复发的指标,第七节自身抗体的检测,一类风湿因子的测定(rheumatoidfactor,RF)二抗核抗体的测定(antinuclearantibodies,ANA),类风湿因子,一种抗人变性IgG的抗体，可与IgG的Fc段结合方法：胶乳凝集实验、ELISA、免疫比浊法参考值：阴性临床意义：1.在类风湿关节炎患者中检出率很高，与RA病情活动性及预后有一定关联2.其它风湿病及疾病也可出现低滴度RF3.5%的正常人可出现低滴度阳性4.特异性不高，不作RA的筛选试验,抗核抗体测定,抗核抗体（Antinuclearantibodies,ANA）泛指抗各种核成分的抗体，无器官特异性和种属特异性，可与不同来源的细胞核反应。,抗核抗体测定,ANA的类型抗DNA抗体：可分为两大类(1)抗天然DNA抗体，或抗双链DNA抗体(2)抗变性DNA抗体，或单链DNA抗体抗组蛋白抗体抗非组蛋白抗体，包括ENA抗体抗核仁抗体抗其它细胞成份抗体,抗核抗体测定,方法：免疫荧光法：检测总ANA抗体a.周边型b.均质型c.斑点型d.核仁型ELISA,抗核抗体测定,临床意义：ANA阳性可见于多种疾病。最常见于SLE、SD、MCTD等风湿病，也可见于其它疾病如肝炎ANA阳性应分清为哪一类ANA，如抗ENA、抗dsDNA抗体不同底物，不同检测方法，ANA检测结果不同,抗核抗体测定,抗ENA抗体有如下几种：抗核糖核蛋白（RNP）抗体：抗RNP抗体多见于混合性结缔组织病抗Sm抗体：SLE的特异性标志抗体，但阳性率较低抗SS-A抗体，主要见于SLE和SS抗SS-B抗体，见于SS抗ScL-70抗体，见于硬皮病,抗双股DNA抗体测定,方法：间接免疫荧光试验参考值：阴性临床意义：1.对确诊SLE和判断狼疮活动性参考价值大2.对SLE有较高特异性（95%），敏感性仅70%3.本抗体滴度高者常有肾损害,第八节其他免疫检测,免疫复合物测定C-反应蛋白（CRP）测定,免疫复合物测定,免疫复合物是抗原抗体产物，存在于血液循环中为CIC，也可沉积于组织和器官，被单核吞噬细胞清除。检测方法:（1）聚乙二醇沉淀法（2）微量抗补体法（3）C1q结合法,免疫复合物测定,CIC可能升高的病变原因与内源性抗原有关(1)变性IgG抗原，如：RA(2)核抗原，如：SLE(3)特异的细胞抗原，如：肿瘤与外源性抗原有关(