（微生物学专业论文）番荔枝内生真菌的分离、鉴定、活性筛选及次级代谢产物的初步研究.pdf

摘要 摘要 天然产物是药物的重要来源。从植物内生真菌的次级代谢产物中，可以分 离到许多结构新颖，生物活性多样的化合物。因此，药用植物内生真菌的研究， 是发现新药的有效的发展途径。 本论文于2 0 0 5 年至2 0 0 6 年不同的季节，从药用植物番荔枝的叶、枝条、 树皮和根部中共分离到1 3 1 株番荔枝内生真菌。 以抗菌模型，抗肿瘤模型，抗氧化活性模型，抗卤虫模型，胰蛋白酶抑制 模型和乙酰胆碱酯酶抑制模型对上述番荔枝内生真菌的发酵提取物进行活性筛 选。生物活性测定结果显示，供测菌株中有7 1 株具有一种或者几种生物学活性。 其中，5 6 株对5 种指示菌显示出一种或者几种的抗菌活性，占供测菌株的4 2 8 ； 3 3 株显示出对r a j i 、h e pg 2 细胞的抗肿瘤活性，占供测菌株的2 5 2 ；具有 抗氧化、抗卤虫、胰蛋白酶和乙酰胆碱酯酶抑制活性的菌株分别为2 0 株、2 5 株、 7 株和0 株，分别占供测菌株的1 5 3 、1 9 1 、5 3 和0 0 。 通过i t sr d n a 的分析，对6 3 株番荔枝内生真菌活性菌株进行了分子鉴定， 结果表明6 3 株活性菌株至少分布于1 9 个属中。其中镰刀菌，d i a p o r t h e ，拟茎 点霉和曲霉是番荔枝内生真菌活性菌株的优势属，分别占番荔枝内生真菌活性菌 株的2 3 8 ，1 5 9 ，1 2 7 和7 9 。系统发育树显示，除菌株a 1 0 、a 2 6 属于担子菌门( b a s i d i o m y c o t a ) ，其余的菌株分属于子囊菌门的9 个目中，包括 了b o t r y o s p h a e r i a i e s ，间座菌目( d i a p o r t h a l e s ) ，肉座菌目( h y p o c r e a l e s ) ，麦 角菌目( c l a v i c i p i t a l e s ) ，黑痣菌目( p h y l l a c h o r a l e s ) ，粪壳菌目( s o r d a r i a l e s ) ， 炭角菌目( x y l a r i a l e s ) ，散囊菌目( e u r o t i a l e s ) 和格孢腔菌目( p l e o s p o r a l e s ) ， 显示出了良好的分类地位多样性。 采用3 对引物l c l l c 2 c ，l c 3 l c 5 c 和k s 3 k s 4 c 来探讨番荔枝内生真菌 聚酮合酶基因多样性。扩增了6 3 株生物活性菌株的k s 结构域。结果1 1 株( 1 7 ) 能够被3 对引物扩增，产生大小约7 0 0b p 的扩增产物；1 3 株( 2 1 ) 仅能够被 2 对引物扩增：1 8 株( 2 9 ) 仅能够被1 对引物扩增；而2 1 株( 3 3 ) 没有扩 增产物。显示了内生真菌聚酮合酶基因的多样性。 对2 株番荔枝内生真菌活性菌株，b 2 7 ( 拟茎点霉) 和b 3 8 ( 炭团菌) 的次级 摘要 代谢产物进行了初步的研究。从菌株b 2 7 的次级代谢产物中分离并鉴定了5 个 化合物，包括了一个新化合物( l x 1 ) ，命名为p h o m o l i d ec ，为十元环的大环 内酯；4 个已知结构的化合物( l x 2 ，l x 1 7 。l x 与，l x - 1 3 ) ，分别为1 - 甲氧基- 8 一 羟基一9 10 葸醌，1 。8 二羟基蒽醌，c y t o s p o r o n ec ，a l t i l o x i na 。从菌株b 3 8 的 次级代谢产物中也分离5 个已知结构的化合物( b 3 8 3 ，b 3 8 - 4 b 3 8 - 1 。b 3 8 2 ， b 3 8 - 5 ) ，分别为l a c h n e l l i nc ，l a c h n e l l i n b ，l a c h n e l l i nd ，d i e n e t r i o l9 ， 1 。3 - b e n z o d i o x 0 1 5 y l m e t h a n o l 。对分离到的1 0 个化合物的抗菌活性及抗肿瘤活 性进行了研究。上述的1 0 个化合物在每片滤纸片含有5 0 p g 样品( 滤纸片法) 时 没有显示出抗菌( 5 种指示菌) 活性；抗肿瘤实验结果显示，浓度为5 0 p g m l 时， 仅化合物l x 1 ，b 3 8 4 对h e l a 细胞有微弱的抑制活性，i c s o 分别为4 2 p g m l 和4 9 p g m l 。 关键词：番荔枝；植物内生真菌：生物活性；次级代谢产物 a b s t r a c t t h en a t u r ep r o d u c t sw e r et h ei m p o r t a n ts o u r s eo ft h em e d i c i n e f r o mt h e s e c o n d a r ym e t a b o l i t e so ft h ee n d o p h y t i cf u n g i ，al o to fc o m p o u n d sw i t hn e w s t r u c t u r e sa n dg r e a tb i o a c t i v ed i v e r s i t i e sc o u l db ef o u n d s ot h es t u d yo f e n d o p h y t i cf u n g if r o ms o m ep h a r m a c e u t i c a lp l a n tw a s t h ee f f e c t i v em e t h o do f t h ed e v e l o p m e n to fm e d i c i n ef i n d i n g f r o mt h el e a v e s t w i g s ，b a r k sa n dr o o t so ft h em e d i c i n a lp l a n ta n n o n a s q u a m o s a 。1 3 1e n d o p h y t i cf u n g iw e r ei s o l a t e di nd i f f e r e n ts e a s o n sf 怕m2 0 0 5 t o2 0 0 6 c r u d ef e r m e n t a t i o ne x t r a c t i o no fe a c hs t r a i nw a st e s t e db ys i xd i f f e r e n t b i o a c t i v e s c r e e n i n gp r o g r a m si n c l u d i n g a n t i m i c r o b i a la c t i v i t y , a n t i t u m o r a c t i v i t y , a n t i - o x i d a t i o na c t i v i t y , b r i n es h r i m pi n h i b i t o r ya c t i v i t y , t r y p s i ni n h i b i t o r y a c t i v i t ya n da c e t y l c h o l i n e s t e r a s ei n h i b i t o r ya c t i v i t y t h er e s u l to ft h eb i o a c t i v e t e s t ss h o w e dt h a t7 1s t r a i n so ft h ee n d o p h y t i cf u n g id i s p l a y e do n eo rm o r e t h a no n eb i o a c t i v i t i e s 5 6s t r a i n s ( 4 2 8 ) d i s p l a y e da n t i m i c r o b i a la c t i v i t i e so n o n eo rm o r et h a no n eo f5i n d i c a t o ro r g a n i s m s 3 3s t r a i n s ( 2 5 2 ) d i s p l a y e d a n t i t u m o ra c t i v i t yo nr a j i ，h e pg 2c e l l s t h es t r a i n sw i t ha n t i - o x i d a t i o na c t i v i t y , b n n e s h r i m pi n h i b i t o r ya c t i v i t y , t r y p s i ni n h i b i t o r ya c t i v i t y a n d a c e t y l c h o l i n e s t e r a s ei n h i b i t o r ya c t i v i t yw e r e2 0 ( 15 3 ) 2 5 ( 19 1 ) ，7 ( 5 3 ) a n d0 ( 0 0 ) ，r e s p e c t i v e l y t h ei d e n t i f i c a t i o n o f6 3b i o a c t i v ee n d o p h y t i cf u n g ib yi t sr d n aa s s a y i n di c a t e dt h a tt h es t r a i n sw e r ed i s t r i b u t e di na tl e a s t19g e n e r aa n dal o to ft h e s t r a i n sw e r ef u s a r i u ms p p ( 2 3 8 ) ，d i a p o r t h es p p ( 15 9 ) 。p h o m o p s i ss p p ( 12 7 ) a n da s p e r g i l l u ss p p ( 7 9 ) p h y l o g e n e t i cr e l a t i o n s h i po fb i o a c t i v e f u n g i i s o l a t e df r o ma n n o n as q u a m o s ai n d i c a t e dt h a ta ioa n da 2 6w e r e d i s t r i b u t e di nb a s i d i o m y c o t aa n dt h eo t h e rs t r a i n sw e r ed i s t r i b u t e di n9o r d e r s o fa s c o m y c o t a ，i n c l u d i n gb o t q r o s p h a e r i a l e s ，d i a p o r t h a l e s , h y p o c r e a l e s ， c l a v i c i p i t a l e s ，p h y l l a c h o r a l e s ，s o r d a r i a l e s 。x y l a r i a l e s 。 e u r o t i a l e sa n d i ! i a b s t r a c t p l e o s p o r a l e s t h er e s u l to ft e s ts h o w e dg r e a td i v e r s i t yo ft a x a t h edi v e r s i t yo fp o l y k e t i d es y n t h a s e ( p k s ) g e n ew a si n v e s t i g a t e du s i n g t h r e ep a i r so fp r i m e r s ，l c l 一l c 2 c ，l c 3 - l c 5 c 。k s 3 - k s 4 c t h ek sd o m a i no f6 3 b i o a c t i v ef u n g iw a sa m p l i f i e d 11 s t r a i n s ( 17 ) o ft h e mc a nb ea m p l i f i e da n d a m p l i f i c a t i o np r o d u c t sd i s p l a y e d7 0 0 b pd n ab a n d sb y3p a i r so fp r i m e r s 13 s t r a i n s ( 21 ) b y2p a i r so fp r i m e r s ，18s t r a i n s ( 2 9 ) b yo n l y1p a i ro fp r i m e r s a n d2 1 s t r a i n s ( 3 3 ) h a dn o n ea m p l i f i e dp r o d u c t t h er e s u f fs h o w e dt h e d i v e r s i t yo ft h ep k sg e n eo ft h e s e6 3e n d o p h y t i cf u n g i t w ob i o a c t i v ee n d o p h y t i cf u n g ii s o l a t e df 内ma n n o n as q u a m o s a b 2 7 ( p h o m o p s i ss p ) a n db 3 8 ( h y p o x y l o ns p ) ，w e r es e l e c t e d t os t u d yt h e i r s e c o n d a r ym e t a b o l i t e s 5c o m p o u n d sw e r ei s o l a t e df r o mb 2 7 。i n c l u d i n go n e n e wc o m p o u n d ( l x - 1 ) w h i c hw a st e n - m e m b e r e dl a c t o n e ，n a m e l yp h o m o l i d e ca n df o u rk n o w nc o m p o u n d s ( l x - 2 ，l x - 1 7 l x - 6 ，l x 13 ) ，w h i c hw e r e 1 - m e t h o x y - 8 一h y d r o x y 9 ，10 - a n t h r a q u i n o n e ，1 8 一d i h y d r o x y - 9 ，10 a n t h r a q u i n o n e ， c y t o s p o r o n eca n da l t i l o x i na ，r e s p e c t i v e l y f i v ek n o w nc o m p o u n d s ( b 3 8 - 3 ， b 3 8 - 4 b 3 8 - 1 ，b 3 8 - 2 ，b 3 8 - 5 ) w e r ej s o l a t e df r o mb 3 8 ，t o o w h i c hw e r e l a c h n e l l i n c ，l a c h n e l l i nb ，l a c h n e l l i nd d i e n e t r i o l 9a n d 1 ，3 - b e n z o d i o x o l - 5 - y l m e t h a n o l ，r e s p e c t i v e l y i nt h el a t e ri n v e s t i g a t i o no ft h e a n t i m i c r o b i a ia n da n t i t u m o rb i o a c t i v i t i e s ，t h e s et e nc o m p o u n d ss h o w e dn o a n t i m i c r o b i a lb i o a c t i v i t ya t5 0 f g d i s k o n l yc o m p o u n d sl x 一1 b 3 8 4s h o w e d a n t i t u m o rb i o a c t i v i t yo nh e l ac e l la n dt h e i ri c s ow e r e4 2 1 上g m la n d4 9 p g m l ， r e s p e c t i v e l y k e yw o r d s ：a n n o n as q u a m o s a ；e n d o p h y t i cf u n g i ；b i o a c t i v i t y ；s e c o n d a r y m e t a b o l i t e s w 堂里茎茎塑兰望 _ 一_ 一一。 常用英文缩写词 缩写式 全称 c o s y c o r r e l a t e ds p e c t r o s c o p y 6化学位移( c h e m i c a ls h i f t ) s单重峰( s i n g l e t ) d二重峰( d o u b l e t ) t三重峰( t r i p l e t ) q 四重峰( q u a r t e t ) d d d o u b l e to fd o u b l e t d e p t d i s t o r t i o n l e s se n h a n c e m e n tb yp o l a f l i z a t i o nt r a n s f e r h h o u r h m b c h e t e r o n u c l e a rm u l t i p l e b o n dc o r r e l a t i o n h p l c h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y i r i n f r a r e d m 多重峰( m u l t i p l e t ) m g m i l l i g r a m m m m i l l i m o l a r m s m a s ss p e c t r o m e t r y n m r n u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e p p m p a r tp e rm i l l i o n r f r e l a t i v em o b i l i t y r p 18r e v e r s e d p h a s eo c t a d e c y ls i l i c ag e l r ，m i n r e v o l u t i o n sp e rm i n u t e t l c t h i nl a y e rc h r o m a l o g r a p h y u vu l t r a v i o l e t g m i c r o g r a m m e d p p h 二苯代苦味酰自由基( 2 ，2 一d i p h e n y l 1 。4 p h t h a l a z i n e d i o n e ) i c 5 0半数抑制浓度( c o n c e n t r a t i o ng i v i n g5 0 o f m a x i m a li n h i b i t i o n ) 一一_ 一 常用英文缩写词 d t n b 5 , 5 二硫代双一( 2 - 硝基苯甲酸) ( 5 , 5 d i t h i o b i s - ( 2 n i t r o b e n z o i c e s i 1 诵s i t s m l c m t t p b s s d s d r o p m i n dr o p t u b e s t u b e a m c e a a c i d ) 电喷雾质谱( e l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o nm a s ss p e c t r o m e t r y ) ( 核糖体) 基因转录间隔区( i n t e r n a lt r a n s c r i b e ds p a c e s ) 最小抑制浓度( m i n i m u mi n h i b i t o r yc o n c e n t r a t i o n s ) 甲基四唑蓝( m e t h y lt h i a z o l y t e t r a z o l i u m ) 磷酸缓冲液( p h o s p h a t e b u f f e r e ds a l i n e ) 十二烷基磺酸钠( s o d i u md o d e c y ls u l f o n a t e ) d r o pp e r m i n u t e d r o pp e rt u b e s e c o n dp e rt u b e 丙酮( a c e t o n e ) 甲醇( m e t h a n 0 1 ) 氯仿( c h l o r o f o r m ) 乙酸乙酯( e t h y la c e t a t e ) p e 石油醚( p e t r o l e u me t h e r ) 厦门大学学位论文原创性声明 兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立完成的研究成 果。本人在论文写作中参考的其他个人或集体的研究成果，均在 文中以明确方式标明。本人依法享有和承担由此论文产生的权利 和责任。 声明人( 签名) ：砩椒 阳2 年 7 月ii e l 厦门大学学位论文著作权使用声明 本人完全了解厦门大学有关保留、使用学位论文的规定。厦门大 学有权保留并向国家主管部门或其指定机构送交论文的纸质版和电 子版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学 校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索， 有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适 用本规定。 本学位论文属于 1 、保密( 痧) ，在苏年解密后适用本授权书。 2 、不保密( ) ( 请在以上相应括号内打“4 ) 作者签名： 前j 按 日期：d 一8 年7 月ie l 导师签名：丝步万哩日期：溯年 月1 日 前言 前言 一、植物内生真菌及其次级代谢产物 1 植物内生真菌 内生菌( e n d o p h y t e ) 的概念最早由d eb a r yi ”于1 8 8 6 年提出的，是指生活 在植物组织内的微生物，用以区分那些生活在植物表面的表生菌( e p i p h y t e ) 。现 在普遍接受内生菌的定义是指生活在植物组织内或生活史中的某一段生活在植 物组织内，对植物组织没有引起明显病害症状的菌，包括那些生活史中某一阶段 营表面生的腐生菌，对宿主暂时没有伤害的潜伏性病原菌( l a t e n tp a t h o g e n s ) 和菌根菌【z 】。 植物内生真菌则是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植 物的各种组织和器官内部的真菌，不仅包括了互惠共利的和中性的内共生真菌， 也包括了那些潜伏在宿主体内的病原菌，可通过组织学方法或从经严格表面消毒 的植物组织中分离出，也可从植物组织内直接扩增出微生物d n a 来证明其内 生【3 】。植物内生真菌研究始于19 世纪末，g u e r i n 4 1 ，h a n a u s e k 副，n e s t l e r 8 1 和 v o g l f 7 】等人先后在几种黑麦草( l o l i u ma r v e r s ，l o l i u m i n i c o u m 。l o l i u m r e m o t u m 和l o l i u mt e m u l e n t u ) 中发现了内生真菌。 内生真菌普遍存在于各种陆生和水生植物中，具有分布广、种类多的特点i s 。 h y d e 掣9 】对澳大利亚热带地区棕榈树( t r a c h y c a r p u ss p ) 内生真菌进行了全 面研究，指出从每种棕榈树内平均能分离到约1 0 0 种内生真菌。p e t r i n i ( 1 9 8 6 ) 在对热带、温带和阿尔卑斯山地区的2 0 0 多种植物调查之后发现，几乎所有生活 的植物体内均有内生真菌的存在【1 0 1 。植物内生真菌主要分布于植物的叶鞘、种 子、花、茎、叶片和根等细胞间，多数情况下，在叶鞘和种子中分布量最多，而叶 片和根含量极微【1 1 l ，主要通过菌丝生长进入子房和胚珠，经寄主植物种子传播， 或产生孢子，通过风、降水等途径传捌1 0 1 。 现今发现的内生真菌主要属于子囊菌( a s c o m y c e t e s ) 和半知菌 ( d e u t e r o m y c e t e s ) ，少数为担子菌( b a s i d i o m y c e t e s ) ，包括核菌纲 ( 户) ，馆n o m e t e s ) ，盘菌纲( d i s c o m y c e t e s ) 和腔菌纲( l o c u l o a s c o m y c e t e s ) ， 前言 也有报道【1 2 j ：从植物体内分离到了接合菌( z y g o m y c e t e s ) 。其中在多种植物中 广泛分布的几个属是：半壳霉属( l e p t o s t r o m a ) ，c r y p t o c l i n e 属，拟隐孢霉属 ( c t y p t o s p o f i p s i s ) ，拟茎点霉属( p h o m o p s i s ) 和叶点霉属( p h y l l o s t i c t a ) ，其宿 主范围涉及藻类、针叶树、灌木和草本等多个植物类群，但禾本科植物尤为常见 【12 】 o 2 植物内生真菌的次级代谢产物 内生真菌能增强宿主的抗逆性，主要就是通过内生真菌产生各种不同的生 物活性物质来实现的，这些活性物质对于药物开发来说，具有巨大的应用价值 1 3 - 1 6 0 2 1 抗菌活性物质 6 - 1 s o p r e n y l i n d o l e 一3 - c a r b o x y l i ca c i d ( 图1 ) 是一种吲哚类生物碱，其对革 兰氏阳性细菌枯草芽孢杆菌( b a c i l l u ss u b t i l i s ) 、金黄色葡萄球( s t a p h y l o c o c c u s a u r e u s ) 、藤黄八叠球菌( s a r c i n al u t e a ) 和革兰氏阴性细菌假单胞菌 ( p s e u d o m o n a ss p ) 均具有抑制作用。此外，该化合物对一些植物病原真菌， 如辣椒疫霉( p h y t o p h t h o r ac a p s i c l ) 、禾谷丝核菌( r h i z o c t o n i ac e r e a l i s ) 和禾顶 囊壳小麦变种( g a e u m a n n o m y c e sg r a m i n i sv a r t r i t i c i ) 有抑制活性【1 7 1 。 o o h 图1 化合物6 - i s o p r e n y l i n d o l e - 3 - c a r b o x y l i ca c i d 的化学结构 f i g 1t h ec h e m i c a ls t r u c t u r eo f6 - 1 s o p r e n y l i n d o l e 3 - c a r b o x y l i ca c i d 资料来源：曹晓冬周立刚李端徐利剑植物内生真菌产生生物活性物质的研究进展明西北农林科 技大学学报2 0 0 5 3 3 ：2 0 1 2 化合物e n f u m a f u n g i n 是一种三萜糖苷( 图2 ) ，来自刺柏j u n i p e r u s f o r m o s a n ah a y a t a 的内生真菌h o r m o n e m as p 。该化合物对念珠菌属和曲霉 属的真菌具有强的抑制活性，体内实验显示对播散性念珠菌病模型小鼠有效。此 2 前言 外，该化合物的抗菌谱以及对烟曲霉形态的影响与正在进行临床研究的糖原合 成酶抑制剂mk - 0 9 9 1 类似【1 踟。 图2 化合物e n f u m a f u n g i n l 拘化学结构 f i g 2t h ec h e m i c a ls t r u c t u r eo fe n f u m a f u n g i n 资料来源：s c h w a r l zre s m i t hsk o n i s h ijc e ta 1 i s o l a t i o na n ds t r u c t u r a ld e t e r m i n a t i o no f e n f u m a f u n g n at r i t e r p e n eg l y c o s i d ea n t i f u n g a la g e n tt h a ti sas p e c i r 忙i n h i b i t o ro fg l u c a n s y n t h e s i s j ja m c h e m s o c 2 0 0 0 12 2 ：4 8 8 2 - 4 8 8 6 内生真菌c y t o s p o r as p 和d i a p o r t h es p 是分别来自植物c o n o c a r p u s e r e c t al 和f o r s t e m n i as p i c a t a ，它们的提取物。具有抗菌活性。通过活性追踪 分离得到了5 个新的芳香族化合物c y t o s p o r o n e sa - e ( m 3 ) 。其中c y t o s p o r o n e s c 、d 属于苯乙酸衍生的内酯，此类结构十分少见。c y t o s p o r o n e sd 、e 具有 抗茵活性，c y t o s p o r o n ed 对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠杆菌和白色念珠 菌的m i c 值分别是8 、8 、6 4 和4 1 - l g m l ，而结构与之十分类似的c y t o s p o r o n e c 则没有活性【倒。 c y t o s p o r o n e sa 前言 c h 3 c y t o s p o r o n e sc h c y t o s p o r o n e sd 图3 化合物c y t o s p o r o n e sa - e 的化学结构 f i g 3t h ec h e m i c a ls t r u c t u r eo fc y t o s p o r o n e sa e 资料来源：b r a d ysf ，w a g e n a a rmm ，s i n g hmp ，e ta 1 t h ec y t o s p o r o n e s ，n e wo c t a k e t i d ea n t i b i o t i c s i s o l a t e df r o ma ne n d o p h y t i cf u n g u sm o r gl e t t , 2 0 0 0 2 ( 2 5 ) ：4 0 4 3 - 4 0 4 6 2 2 抗肿瘤活性物质 紫杉醇是近年来发现的重要抗癌药物之一，需求量正在日益增大，但能生 产紫杉醇的红豆杉是一种濒临灭种的珍稀植物，这造就了从红豆杉等植物内生 真菌中去寻找能产生紫杉醇的内生真菌。1 9 9 3 年s t r o b e l 等【捌从短叶红豆杉的 树皮中分离到内生真菌安德氏紫杉霉( t a x o m y c e sa n d r e a n a e ) ，并从其 发酵产物中分离出紫杉醇，从而使抗癌药物生产领域出现了令人兴奋的结果，这 也为微生物发酵法生产紫杉醇以解决紫杉醇药源危机提供了一种新的途径，于是 人们开始了从红豆杉植物中寻找产紫杉醇及其类似物的内生真菌的研究现已发 现红豆杉属植物中的许多种，如短叶红豆杉( t a x u sb r e v i f o l i a ) 、云南红豆杉、 西藏红豆杉、南方红豆杉等植物内生真菌都能产生紫杉醇。菌种经选育后，已能 达到工业化生产的要求( 1m g l 发酵液) 。除了红豆杉植物外，还从裸柏、香榧 4 前言 等树皮分离到能产生紫杉醇的内生真菌【2 ”。 长春碱( v i n b l a s t i n e ) 、长春新碱( v i n c r i s t i n e ) 是五十年代末，从长春花 ( c a t h a r a n t h u s r o s e u s ( l ) d o n ) 中发现的具有抗肿瘤活性，尤其对白血病具显著 疗效。此后，从长春花不同部位分离出1 0 0 多种生物碱，但这些生物碱在植物体 内含量低，且植物生长缓慢，资源短缺，限制了抗癌药物的进一步开发【2 2 乏3 l 。而从 长春花的内生真菌中分离提取出长春新碱将解决这一难题。 鬼臼毒素是存在于足叶草( p o d o p n y l l u mp e l t a t u m ) 等植物中的一类天然 木质素，有显著的抗肿瘤活性，以鬼臼毒素为母体改造所得的一些衍生物，如依托 泊甙和替尼泊甙等已应用于临床治疗。 李海燕等【2 4 】从桃儿七( s 仃印。幽p 协，朋 h e x a n d r u m ) 植株中分离得j ；u 2 8 株真菌，其中，有两株产鬼臼毒素类似物，它们分 属于青霉属( p e n i c i l l i u m ) 和链格孢属似f e m a 庙) 。2 0 0 3 年杨显志等【2 5 1 从四 j l l j l 角莲( d y s o s m av e i t c h i l ) 、南方山荷叶( d i p h y l l e i as i n e n s i s ) 等产鬼臼毒素 的植物中都分离到产鬼臼毒素的内生真菌。 2 3 抗虫活性物质 在苇状羊茅( f e s t u c aa r u n d i n a c e a ) 的内生真菌mc o e n o p h i a l u m 中发现 黑麦草碱( l o l i n e ) 2 研，其属于吡咯烷生物碱类化合物，是一种广谱的杀虫剂。 从高羊矛、黑麦草和其他禾本科植物的茎叶中分离到的内生真菌 n e o t y p h o d i u mc o e n o p h i a l u m ，n i o i l i , e p i c h l o ef e s t u c a e 和et y p h i n a ，对其 进行发酵培养，从发酵液中分离到p e r a m i n e ( 图4 ) ，其具有杀虫活性，但对哺 乳动物无毒性【2 6 l 。 图4 化合物p e r a m i n e 的化学结构 f i g 4t h ec h e m i c a ls t r u c t u r eo fp e r a m i n e 资料来源：曹晓冬周立刚李端徐利剑植物内生真菌产生生物活性物质的研究进展m 西北农林科 技大学学报2 0 0 5 3 3 ：2 0 1 2 0 8 hn m = n l h 前言 n o d u l i s p o r i ca c i d s p 7 】是一种吲哚二萜类化合物，是从植物b o n t j a d a p h n o j d e s 的内生真菌中发现的，它具有杀灭大苍蝇幼虫的活性。 2 4 其他活性物质 2 4 1 抗疟疾物质 o s t e r h o g ec 【2 8 】从绿藻类石莼( u l v a l a c t n c a l ) 植物内生真菌中分离出一种 新的结构异常的四聚体酸( a s c o s a l i p y r r o l i d i n o n e sa ) 对疟原虫f a l c i p a r u m s t r a i n k 1 和n f 5 4 有抗性。 从内生真菌g e o t r i c h u ms p 的发酵液中分离出三种新的二氢异香豆素衍 生物和从内生真菌p h o m o p s i ss p b c c l 3 2 3 中分离出的两种新的二聚体( 图5 ) ， 都具抗疟疾作用【捌，同时这两种物质还有抗结核的作用。 h 3 c h 3 p h o m o x a n t h o n e sa p h o m o x a n t h o n e $ b 图5 化合物p h o m o x a n t h o n e sa 和b 的化学结构 f i g 5t h e c h e m i c a ls t r u c t u r eo fp h o m o x a n t h o n e saa n db 资料来源：i s a k am j a t u r a p a ta r u k s e r e ek e ta 1 p h o m o x a n t h o n e saa n db n o v e lx a n t h o n ed i m e r s f r o mt h ee r ：k 洲cf u n g u sp h o m o p s i ss p e c i e sm jn a tp r o d 2 0 0 1 6 4 ( 8 ) ：1 0 1 5 - 1 0 1 8 2 4 2 抗氧化物质 来自巴布亚新几内亚热带雨林的榄仁树t e r m i n a l i am o r o b e n s i s 的内生真 菌微孢拟盘多毛孢p e s t a l o t i o p s i sm i c r o s p o r as p e g a z z i n ib a t i s t a & p e r e s 具有 抗植物病原菌德氏腐霉的活性，通过追踪分离从中得到了2 个具有抗氧化和抗 真菌活性的苯并呋喃类化合物p e s t a c i n 和i s o p e s t a c i n ( 图6 ) 。i s o p e s t a c i n 是目 前发现的唯一1 种在呋哺内酯环的3 位有取代苯环的苯并呋喃类化合物， 6 前言 i s o p e s t a c i n 具有抗氧化活性，其清除超氧自由基的能力是维生素c 酏j 1 4 ，但 是清除氢氧自由基( o h ) 的能力与维生素c 相当。p e s t a c i n 以外消旋体的形 式存在，同样具有强的抗氧化活性m 3 ”。 h 3 c h h 3 c p e s t a c i n i s o p e s t a c i n 图6 化合物p e s t a c i n 和i s o p e s t a c i n 的化学结构 f i g 6t h ec h e m i c a ls t r u c t u r eo fp e s t a c i na n di s o p e s t a c i n 资料来源：h a r p e rjk a d fam f o r dej e fa p e s t a c i n ：a1 3 - d i h y d r oi s o b e n z o f u r a nf r o m p e s t a i o t i o p s i sm i c r o s p o r ap o s s e s s i n ga n t i o x i d a n ta n da n t i m y c ot i ca c t i v i t i e s 【j 】t e t r a h e d r o n ， 2 0 0 3 5 9 ( 1 4 ) ：2 4 7 1 - 2 4 7 6 s t r o b e lg f o r de w o r a p o n gj ，e ta 1 i s o p e s t a c i n a ni s o b e n z o f u r a n o n ef r o mp e s t a l o t j o p s i s m i c r o s p o r a p o s s e s s i n ga n t i f u n g a la n da n t i o x i d a n ta c t i v i t i e s 明p h y t o c h e m i s t r y 2 0 0 2 。6 0 ( 2 ) ： 1 7 垂1 够 2 4 3 非肽类胰岛素功能类似物 p s e u d o m a s s a r i as p 是从非洲雨林一种未鉴定植物的叶片中分离得到的内 生真菌，从其发酵物中提取分离了一种生物碱成分l 7 8 3 ，2 8 1 ( 图7 ) 。l