（农药学专业论文）烯唑醇在梨和土壤中的残留动态研究.pdf

摘要 本文建立了烯唑醇在梨和土壤中的残留检测方法，研究了烯唑醇在梨和土壤中的 残留消解动态和最终残留量以及烯唑醇在土壤中的光化学降解规律。 梨样品经丙酮提取，土壤样品经乙腈提取，均采用硅胶净化，气相色谱( g c ) 测定， 烯唑醇最小检出量2 x1 0 d l g ，最低检出浓度0 0 1 m g k g 。添加浓度为o 0 1 0 5m g k g 时， 土壤中回收率为8 8 5 3 - 1 0 1 11 ，变异系数为2 1 1 3 7 6 1 梨中回收率为8 6 1 3 9 8 1 2 ，变异系数为1 3 6 6 8 8 ，符合农药残留分析要求。 采用上述方法，测定了烯唑醇在安徽、陕西、山东、天津四地梨和土壤中的消解 动态及最终残留量。结果表明，烯唑醇在梨和土壤中的消解速度较慢，在梨中，安徽 的消解半衰期为6 6 7d ，陕西的消解半衰期为6 3 7d ，山东的消解半衰期为6 7 8d ，天 津的消解半衰期为7 7 4d 。在土壤中，安徽的消解半衰期为9 9 7 d ；陕西的消解半衰期 为7 9 7 d ，山东的消解半衰期为9 0 5 d ，天津的消解半衰期为1 3 2 8 d 。当按推荐剂量施 药，梨收获时，在梨和土壤中，烯唑醇最终残留量分别为：安徽0 0 1 7m g k g 、o 0 6 9 m g k g ，陕西0 0 2 5m g k g 、0 0 2 4m g k g ，山东0 0 2 0m g k g 、0 0 4 5m g k g ，天津0 0 2 2 m g k g 、0 0 6 5m g k g 。根据最终残留试验结果和烯唑醇在梨中的m r l 值0 1m g , k g ，为 保证梨的食用安全，建议使用剂量不超过最高推荐剂量，施药次数不超过3 次，采收 间隔期大于2 8 天。 烯唑醇在土壤中的光化学降解符合一级动力学反应，土壤含水量对烯唑醇光解具 有重要影响，在氙灯下照光6 0h ，含水量为6 0 时，半衰期为4 3 8 7h ；含水量为4 0 时，半衰期为4 8 4 7h ；含水量为2 0 时，半衰期为5 2 9 1h 。添加浓度对烯唑醇光解 也具有重要影响，添加浓度为1 0 m g k g ，半衰期为3 6 6 7h ；添加浓度为5 0 m g k g ， 半衰期为4 8 4 7h ；添加浓度为1 0 0 m g k g ，半衰期为6 3 0 1h 。 关键词：烯唑醇，梨，土壤，残留动态，光降解 a b s t r a c t r e s i d u ea n a l y t i c a lm e t h o d so fd i n i c o n a z o l i np e a r sa n ds o i lw e r ee s t a b l i s h e d d i s s i p a t i o nd y n a m i c sa n dt h et e r m i n a lr e s i d u eo f d i n i c o n a z o li np e a r sa n ds o i la n d p h o t o c h e m i c a ld e g r a d a t i o no fd i n i c o n a z o l ei ns o i lh a d b e e ns t u d i e di nt h i sp a p e r r e s i d u e so fd i n i c o n a z o l ew e r ee x t r a c t e df r o mp e a ra n ds o i lw i t l la c e t o n e ，a c e t o n i t r i l e ， r e s p e c t i v e l y c l e a n e du pb yc o l u m nc h r o m a t o g r a p h yo fs i l i c ag e l ，a n dd e t e r m i n e db yg c t h e a v e r a g er e c o v e r i e sa n dc o e f f i c i e n to f v a r i a t i o n so f t h em e t h o dw e r e8 6 1 3 0 0 - 9 8 1 2 ， 1 3 6 0 o - 6 8 8 f o rp e a rs a m p l e s ，a n d8 8 5 3 - 1 0 1 1 1 ，2 1 1 0 , - 3 7 2 f o rs o i ls a m p l e ， r e s p e c t i v e l y t h el i m i to f d e t e c t i o n ( l o d ) o f d i n i c o n a z o l ew a s2 x 1 0 叫1 9a n dt h em e t h o d d e t e c t i o nl i m i t ( m d l ) o f d i n i c o n a z o l ei nt h es a m p l e so f p e a ra n ds o i lw e r e0 o l m g k g t h e s er e s u l t ss h o w e dt h a tt h em e t h o da c c o r d sw i t hd e m a n d so fr e s i d u ea n a l y s i so f p e s t i c i d e w i t ht h em e n t i o n e dm e t h o d ，d i s s i p a t i o nd y n a m i c sa n dt h et e r m i n a lr e s i d u eo f d i n i c o n a z o lw e r ed e t e r m i n e di np e a r sa n ds o i li na n h u i ，s h a n x i ，s h a n d o n ga n dt i a n j i n t h er e s u l ts h o w e dt h a tt h ed i s s i p a t i o nr a t eo f d i n i c o n a z o li np e a ra n ds o i lw a ss l o w l y d e g r a d e d t h ed i s s i p a t i o nh a l f l i f eo f d i n i c o n a z o li np e a ri na n h u iw a s6 6 7d i ti ns h a n x i w a s6 3 7d i ti ns h a n d o n gw a s6 7 8d i ti nt i a n j i nw a s7 7 4d t h ed i s s i p a t i o nh a l f l i f eo f d i n i c o n a z o li ns o i li na n h u iw a s9 9 7 d i ti ns h a n x iw a s7 9 7 d i ti ns h a n d o n gw a s9 0 5 d i ti nt i a n j i nw a s13 2 8 d w h e nr e c o m m e n d e dd o s ew a su s e d ，a th a r v e s t ，t h et e r m i n a l r e s i d u eo fd i n i c o n a z o li np e a r sa n ds o i li na n h u iw a so 0 17m g k g ，0 0 6 9m g k g ，i ti n s h a n x iw a s0 0 2 5m g k g ，0 0 2 4m e g k g ，i ti ns h a n d o n gw a so 0 2 0m g k g ，0 0 4 5m g l ( g ，i t w a si nt i a n j i n0 0 2 2m g k g ，o 0 6 5m e g k g ，r e s p e c t i v e l y t h er e s u l ts u g g e s tt h a tt h e r e c o m m e n d e dd o s ei ss a f et ou s e ，l e s st h a nt h r e et i m ea n dl a s tt i m es h o u l db ee a r l i e r2 8 d t h a nh a r v e s t p h o t o c h e m i c a ld e g r a d a t i o no fd i n i c o n a z o li ns o i lf o l l o w e daf i r s to r d e rr e a c t i o n t h e p h o t o l y s i sh a l f - l i f eo fd i n i c o n a z o li ns o i lo fs o i lm o i s t u r e 2 0 ，s o i lm o i s t u r e 4 0 ，s o i l m o i s t u r e 6 0 w a s4 3 8 7 1 1 ，4 8 4 7 1 3 ，5 2 9 1 hr e s p e c t i v e l y t h ep h o t o l y s i sh a l f - l i f eo f d i n i c o n a z o li ns o io fi n i t i a lc o n c e n t r a t i o n s1 o m g k g ，i n i t i a lc o n c e n t r a t i o n s5 o m g k g , i n i t i a lc o n c e n t r a t i o n s10 0 m g k gw a s3 6 6 7 h ，4 8 4 7 1 1 ，6 3 olhr e s p e c t i v e l y k e yw o r d s ：d i n i c o n a z o l ，p e a r ，s o i l ，r e s i d u ed y n a m i c s ，p h o t o c h e m i c a ld e g r a d a t i o n 英文缩略语 g k g m g p g n g m g k g l m l p l m e d m l l m g l m l m i n n m n l m m i i l h d t v 2 g c h p l c 术语与略语表 英文全称 g r a m k i l o g r a m m i l l i g r a m m i c r o g r a m n a n o g r a m m i l l i g r a m k i l o g r a m l i t r e m i l l i l i t r e ( s ) m i c r o l i t r e m i l l i g r a m m i l l i l i t e r g r a m l i t r e m i l l i g r a m l i t r e m i l l i l i t r e m i n u t e n a n o m e t e r m i l l i m e t e r m i n u t e h o u r ( s ) d a y s h a l f - l i f e g a sc h r o m a t o g r a p h y l l i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y v 中文 克 千克 毫克 微克 纳克 毫克每千克 升 毫升 微升 毫克每毫升 克每升 毫克每升 毫升每分钟 纳米 毫米 分 小时 天 半衰期 气相色谱 高效液相色谱 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明 确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 声灏涌 时间： 硼? 年 月形e l 关于论文使用授权的说明 本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，i l p 学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 研究生签名： 唐杂品 第一导师签名： 哗 时间： 嘲年譬月“日 时间：形甜年f 月j 日 1 文献综述 在当今的社会中，人口、粮食、能源及环境是世界范围内的四大突出问题。由于 耕地的不断减少和人口持续的增加，提高粮食产量是当前和今后全世界面临的首要问 题。农药是保证粮食增产的重要物资。有关资料调查说明，如不使用农药，因受病、 虫、草害的影响，世界人均粮食将减产3 0 t 1 1 。因此2 1 世纪的农业仍离不开农药。 现代化农业生产和科学技术的应用，使农业生产中使用化学农药的范围更加广泛，使 用数量也逐渐增大【2 引。特别是对于我国这样一个人口众多、耕地紧张的大国来说， 农药在解决人口与粮食的矛盾中发挥了极其重要的作用【4 1 。然而，农药的使用也带来 的众所周知的不良作用，其中最为突出的可归纳为如下三点：第一，农药的不合理使 用，造成病虫害对其产生抗药性，形成病虫害的再猖獗；其次，农药的非选择性易造 成对病虫害天敌的伤害，失去了田间生物因子对病虫害的控制作用，加重了危害；第 三，农药的使用还会对整个环境造成污染和危害，增加急性中毒，通过生物浓缩在食 物链中积累，造成生态失衡，引起一系列的不良反应【孓1 0 】。 科学实验表明，农药使用于作物田后，2 0 3 0 的农药附着在作物体上，其他 7 0 8 0 的农药散落到土壤、水中，飘移到大气中。作物还可以通过根、茎和叶的吸 收、传导等途径将环境中的一些农药再转移到体内 1 1 1 。农药对环境的污染及其产生的 社会问题已经引起了世界各国的高度重视，并在农药管理法规中要求生产企业在新农 药申请登记时提供详细的农药残留试验资料。 中国在1 9 8 2 年颁布并实施的农药登记规定中要求申请农药品种登记时，必 须提供日允许摄入量( a d i 值) 、最高残留限量( 眦值) 、残留动态、农药残留半 衰期、安全间隔期和在作物上的最终残留量等资料以及残留分析方法 1 2 1 5 1 。农药残留 量超过规定的限量标准会导致农药污染，人们长期食用含有超量农药的农产品，会影 响人们的身体健康，甚至会给后代带来潜在的危害。 1 1 烯唑醇的理化性质 英文名称d i n i c o n a z o l e ，商品名病除净，化学名称为( e ) 1 ( 2 ，4 二氯苯基) 4 ，4 二甲基2 ( 1 ，2 ，4 三唑1 基) 1 戊烯3 醇，其它名称速保利、特谱唑，是日本住 友化学公司于1 9 8 4 年研制出的三唑类杀菌剂【l6 1 ，是甾醇脱甲基化抑制剂，它具有极高 的杀菌活性，杀菌谱广、内吸性强、持效期长，兼有预防和治疗作用，对人畜、环境 均安全【1 7 j 。可防治由子囊菌、担子菌和半知菌引起的许多病害，对白粉病、黑星病、 锈病、褐斑病、黑穗病、条锈病、茎枯病、叶斑病等表现出卓越的防效，是一种高活 性的植物生长调节剂和杀菌剂【1 8 2 4 】。目前，国内外已将烯唑醇在水稻、小麦、果树、 花卉、玉米、大豆、花生、蔬菜等作物上试验推广应用 2 5 2 8 】。化学结构式如下： 原药为无色结晶固体，熔点1 3 4 - - - 1 5 6 c ，相对密度1 3 2 ，蒸气压4 9 m p 缸2 5 c ) 。 溶解性：2 5 。c 水4 1 m g l ，2 3 * ( 2 甲醇9 5 9 k g ，二甲苯1 4 9 k g ，丙酮9 5 9 k g ，己烷7 0 0 m g k g 。 通常贮存条件下稳定，对热、光和潮湿稳定。除碱性物质外，能与大多数农药混用， 正常状态下贮存两年稳定。 由于烯唑醇的化学结构中，双键上连接4 个不同的基团，出现了e 体和z 体产物。 在杀菌活性上，防治玉米黑粉菌的e d 5 0 值，e 体比z 体高出3 0 0 倍；在保护和治疗活性 上，e 体的活性比z 体高出了5 0 2 0 0 倍；在内吸性上，e 体用0 1m g 盆计量时能完全防 治白粉病的发生，而z 体要用很高的计量方能达同一结果。在烯唑醇的顺反异构体中， 烯唑醇( e 体) 的杀菌活性高出z 体的5 0 2 0 0 倍，但是烯唑醇( z 体) 它的植物激素的活性 高出e 体的1 0 0 倍以上【2 9 。3 1 】。 按我国农药毒性分级标准，烯唑醇属低等毒杀菌剂。纯品大鼠急性经o l d 5 0 为6 3 9 ( 雄) 和4 7 4 ( 雌) m g k g ，急性经皮l d s o ) 5 0 0 0m g k g ，急性吸入l c s o ) 2 7 7 0m g , k g 。 对家兔眼睛有轻微刺激作用。大鼠亚急性经口无作用剂量为1 0 m g l 。鲤鱼急性经口 l c 5 0 为4m g l ( 9 6 d 、时) ，翻车鱼l c s o 为6 8 4m g l 。蜜蜂l d s o ) 2 0 m g k g 。鸟l d s o 为 1 4 9 0 2 2 0 0 0m g k g ( 鹌鹑野鸭) 。 1 2 烯唑醇登记使用现状【3 2 1 烯唑醇杀菌剂，日本住友化学工业株式会社于1 9 9 2 年、1 9 9 3 年、1 9 9 6 年、1 9 9 9 年在我国正式登记速保利1 2 5 可湿性粉剂，防治玉米丝黑穗病、梨树黑星病；速保 利5 拌种剂，防治高果丝黑穗病；速保利2 可湿性粉剂，防治小麦黑穗病；速保利 原药。据对农药产品登记动态统计，1 9 9 2 年至2 0 0 6 年全国2 0 个省、区、市7 3 家企业登 记产品9 3 个厂次( 原药7 个厂次、单剂3 1 个厂次、复配制剂5 5 个厂次) 。其中2 0 0 1 年登 记产品1 9 个厂次( 原药2 个厂次、单剂4 个厂次、复配制剂1 3 个厂次) ，占全程产品登记 总量的2 0 4 ( 原药2 8 6 * 0 、单剂1 2 9 、复配制剂2 3 6 ) ，成为全程产品登记最高 年度。江苏省1 9 9 3 年至2 0 0 6 年有2 2 家企业登记产品3 4 个厂次( 原药6 个厂次、单剂1 1 个 厂次、复配制剂1 7 个厂次) 。参与企业、产品登记分别占全国总量的3 0 1 和3 6 6 ( 原 药8 5 7 、单剂3 5 5 、复配制剂3 0 9 ) 。山东省2 0 0 1 年至2 0 0 6 年有8 家企业登记复 2 洲一弋 一y_z 一1 卜q 配制剂8 个厂次，参与企业、产品登记分别占全国总量的1 1 和1 4 5 。河北省2 0 0 0 年至2 0 0 5 年有5 家企业登记产品7 个厂次( 单剂3 个厂次、复配制剂4 个厂次) 。参与企业、 产品登记分别占全国总量的6 8 和7 5 ( 单剂9 7 、复配制剂7 3 ) 。 原药登记7 个厂次，其中江苏省6 个厂次成为生产基地，辽宁省登记1 个厂次。单 剂登记产品3 1 个厂次，有效含量及防治对象分别为：1 2 5 可湿性粉剂登记2 3 个厂次 占7 4 2 ，单项登记防治梨树黑星病9 个厂次，小麦白粉病3 个厂次、小麦条锈病1 个 厂次。双项登记防治梨树黑星病、小麦白粉病5 个厂次，小麦白粉病、黑穗醋粟2 个厂 次，梨树黑星病、香蕉叶斑病1 个厂次。多项登记防治梨树黑星病，小麦白粉病、黑 穗醋粟2 个厂次。5 微乳剂、干粉种衣剂、可湿性粉剂4 个厂次，登记防治香蕉、花 生叶斑病，玉米丝黑穗病各1 个厂次，梨树黑星病2 个厂次。2 5 乳油2 个厂次，双项 登记防治梨树黑星病、香蕉叶斑病1 个厂次，单项登记防治香蕉叶斑病1 个厂次。1 0 乳油2 个厂次，登记防治梨树黑星病。复配制剂有1 0 个组合类型登记产品5 5 个厂次， 其中与代森锰锌复配登记2 2 个厂次占4 0 ，与多菌灵复配登记1 2 个厂次占2 1 8 ，与 福美双复配登记8 个厂次占1 4 5 ，与井岗霉素复配登记7 个厂次占1 2 7 。 烯唑醇与代森锰锌复配，1 9 9 9 年至2 0 0 6 年登记3 2 5 至5 0 6 种有效含量的制剂 2 2 个厂次。其中3 2 5 锰锌烯唑可湿性粉剂登记1 6 个厂次占7 2 7 。单项登记防治梨 树黑星病1 3 个厂次，辣椒疫病1 个厂次。江苏省农药研究所1 9 9 9 年登记3 2 5 锰锌烯 唑可湿性粉剂( 商品名称丰收绳) ，防治梨树、苹果树斑点落叶病，辣椒疫病。山西省 运城奇星农药有限公司2 0 0 5 年登记3 2 5 锰锌烯唑可湿性粉剂，防治苹果树斑点落叶 病、梨树黑星病。3 3 登记2 个厂次，4 0 、4 5 各登记1 个厂次，防治梨树黑星病。 4 7 、5 0 各登记1 个厂次，分别登记防治黄瓜黑星病、香蕉叶斑病。烯唑醇与多菌 灵复配，1 9 9 9 年至2 0 0 5 年登记1 2 5 至3 2 6 种有效含量的制剂1 2 个厂次。其中3 0 多烯唑可湿性粉剂登记7 个厂次占5 8 3 ，防治梨树黑星病。1 7 5 、1 8 7 各登记1 个厂次，防治水稻稻粒黑粉病。1 2 5 、2 7 、3 2 各登记1 个厂次，分别登记防治 梨树黑星病、油菜菌核病、小麦赤霉病。烯唑醇与福美双复配2 0 0 0 年至2 0 0 5 年登记1 5 、3 0 、4 2 制剂8 个厂次。其中3 0 福烯唑可湿性粉剂4 个厂次占5 0 ，防治小 麦白粉病。1 5 福烯唑悬浮种衣剂3 个厂次，单项登记防治玉米丝黑穗病2 个厂次， 梨树黑星病1 个厂次。4 2 福烯唑可湿性粉剂1 个厂次，防治梨树黑星病。烯唑醇与 井岗霉素复配，2 0 0 1 年至2 0 0 4 年登记1 2 、1 4 、1 8 、2 0 井烯唑制剂7 个厂次， 单项登记防治水稻稻曲病6 个厂次，水稻纹枯病1 个厂次。 独家登记的6 个复配类型为：广东省东莞市瑞德丰化工有限公司2 0 0 0 年登记4 0 百烯唑悬浮剂( 商品名称布施得) ，防治梨树黑星病。河北威远生物化工股份有限 公司2 0 0 0 年登记1 5 酮烯唑乳油，防治小麦白粉病。河南省浚县绿宝农药厂2 0 0 1 年登记4 7 甲硫烯唑可湿性粉剂，防治梨树黑星病。贵州道远科技有限公司2 0 0 2 年登记1 3 丙多烯唑可湿性粉剂( 商品名称斑痕速去) ，防治梨树黑星病、香蕉叶斑 病。甘肃农科院植保所新农药开发中心2 0 0 3 年登记8 克烯唑悬浮种衣剂，防治玉 米地下害虫，丝黑穗病。江苏省通州正大农药化工有限公司2 0 0 4 年登记2 0 井三 环烯唑可湿性粉剂，防治水稻稻瘟病、稻曲病、纹枯病。 1 3 烯唑醇环境行为及残留分析技术进展 农药不论以何种剂型、何种方式施用，都是将外加化学物质撒布于环境之中，它 们不可避免的在环境的各组成要素中逐渐降解。农药通过降解既可以转化为其他无毒 或毒性更小的物质，也可以转化为毒性更大的有机物。因此伴随着化学农药的应用， 不可避免地产生了农药残留问题。存在于食品和水、土壤、空气等环境构成中的农药 残留，造成对食品和环境的污染，影响着人们的身体健康和生态环境的安全，受到世 界各国从政府到民众的普遍重视和关注【3 ”5 1 。 目前国内外测定烯唑醇残留的方法有高效液相色谱法( 唧l c ) 和气相色谱法 ( g c ) 。熊芳掣3 6 】采用丙酮提取，液一液分配、固相萃取( s p e ) d 、柱净化处理，r p i - i p i _ , c 分离测定葡萄中烯唑醇残留量，检出下限0 0 2 0 m g k g ，回收率 8 5 ，重复性c v 8 5 ，重复性r s d 5。夏杏运等【3 8 】用气相色谱碱热离子检n 器( g c f t d ) ， 检测烯唑醇在小麦中的残留量，该方法样品处理繁琐，使用大量试剂，耗时长。马志 荣掣3 9 枷】在o d s 柱和紫外检测器上对试样中的烯唑醇进行高压液相色谱分离和测定， 以邻苯二甲酸二乙酯为内标物，以乙腈和水为流动相。 根据有关资料，美国规定了烯唑醇在梨中的最高残留允许量( 删值为0 1 m g k g ：比利时和西班牙规定了烯唑醇在小麦中的最高残留允许量( m r l ) 值均为 0 0 5 m g k g ：法国规定了烯唑醇在小麦中的最高残留允许量( 删值为0 2 m g k g 。我 国农药合理使用准则 4 1 】中规定了烯唑醇最高残留限量，在玉米和小麦中的最高残 留允许量( m r l ) 值0 0 5 m g k g ；在梨中的最高残留允许量( 删值为0 1 m g k g 。 1 4 研究目的和意义 随着人们环境保护意识的不断增加，人类对环境和食品质量的要求也越来越高。 农药作为对环境和农产品的重要污染源之一，越来越受到公众的关注，因而对农药的 降解规律及农药环境行为的研究具有重要意义。近年来由于烯唑醇具有优良的杀菌和 植物生长调节活性，已在许多国家得到广泛应用。烯唑醇的开发应用，对我国农业生 产特别是提高农作物的产量、质量，改变我国农药品种结构，减少环境污染，均是十 分有益的。根据资料报道，“九五 期间我国农药发展重点为高效、安全、高效益 的农药品种，其中包括烯唑醇杀菌剂【4 2 】，而且药效结果表明，无论是在高度杀菌活性 4 方面还是在应用的广谱性方面，烯唑醇均明显超过已经研制的三唑酮和三唑醇等高效 杀菌剂【4 3 1 。 本文建立了烯唑醇在梨和土壤中的残留检测方法，并揭示其在梨与土壤中的残留 消解动态及最终残留量，为制定该药在梨园的安全使用准则提供科学依据。 2 梨和土壤中烯唑醇残留分析方法研究 2 1 试剂与仪器 2 1 1 供试农药与试剂 烯唑醇，纯度9 7 3 ，由国家农业部农药检定所提供； 乙腈，分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 丙酮，分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 正己烷，分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 二氯甲烷，分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 石油醚，分析纯，国药集团化学试剂有限公司： 乙酸乙酯，分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 甲醇，分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 无水硫酸钠，分析纯，广东汕头市西陇化工厂； 氯化钠，分析纯，上海试四赫维化工有限公司； 实验用水为重蒸水； 硅胶1 3 0 1 2 下烘5 h 置于干燥器内备用。 2 1 2 主要仪器设备 s p 2 0 0 0 a 型气相色谱仪( 具e c d 检测器) ； s b 3 2 0 0 超声波清洗机，上海必能信超声有限公司； r e 5 2 a a 旋转真空蒸发仪，上海青浦泸西仪器厂； n e v a p t m l12 氮吹仪，o r g a n o m a t i o na s s o c i a t e s ，j n e ； f a l1 0 4 电子天平，上海天平仪器厂； s h a - c 恒温振荡器，荣华仪器制造厂； t d z 5 w s 离心机，长沙维尔康湘鹰离心机有限公司； 艾科浦超纯水机，重庆颐洋公司。 2 2 样品的前处理 2 2 1 样品的制备 土壤：在实验室风干，粉碎，过4 0 目筛，保存于磨口广口瓶中备用。 梨：洗净后去除果核，将果肉切成小块后，于食品加工机中搅碎备用。 2 2 2 提取 梨：称取2 0 o g 经处理过的梨- y 2 5 0m l 具塞三角瓶中，加入6 0 m l 丙酮，超声波提 取2 0m i n ，抽滤，将滤液转移至2 5 0m l 的分液漏斗中，向分液漏斗中加入7 0 m l - - 氯甲 烷液液分配，待静止分层后取下层有机相过无水硫酸钠漏斗于1 5 0 m l 浓缩瓶中，3 8 1 2 6 下浓缩近干，待柱层析净化。 土壤：称取1 0 o g 经处理过的土壤于5 0 m l 离心管中，加入5 m l 蒸馏水，摇匀后 加入2 0 m l 乙腈，振荡提取3 0 r a i n 。向离心管中加入5 0 9 n a c ，剧烈振荡5 m i n 后， 在离心机上以3 5 0 0 r m i n 离心5m i n ，上清液过无水硫酸钠后收集于浓缩瓶中，再向 离心管加入2 0 m l 乙腈，振荡提取3 0 m i n ，离心机上以3 5 0 0 r m i n 离心5m i n ，合并上 清液，4 0 下浓缩至近干，待净化。 2 2 3 净化 梨：层析柱中装入脱活的硅胶6 0 9 ，上下各加入约2 c m 高的无水硫酸钠，轻轻 敲打使填充致密，用1 5m l 淋洗液( 石油醚乙酸乙酯= 1 2 ) 预洗，3 0m l 淋洗；收 集淋洗液于1 5 0 m l 浓缩瓶中，用旋转蒸发仪浓缩至干，用正己烷定容5 m l ，待测。 土壤：层析柱中装入脱活的硅胶3 o g ，上下各加入约2 c m 高的无水硫酸钠，轻 轻敲打使填充致密，用1 5m l 淋洗液( 石油醚乙酸乙酯= 1 2 ) 预洗，3 0m l 淋洗； 收集淋洗液于1 5 0 m l 浓缩瓶中，用旋转蒸发仪浓缩至干，用正己烷定容5 m l ，待测。 2 3 测定方法 2 3 1 检测条件4 4 5 3 i 色谱柱o v - 1 7 0 1 ，l p x n x 0 5 3 m m x 3 0 m ，柱温：2 1 0 c ，检测器温度：2 9 0 c ，进样 口温度：2 4 0 c ，氮气流速：3 m l m i n ，进样量为2 9 l 。 此测定条件下烯唑醇的保留时间约1 3 m i n 。烯唑醇标样见图1 2 3 2 烯唑醇标准溶液的配制 在万分之一天平上准确称取0 0 0 5 9 烯唑醇标准品，用甲醇溶解并定容至5m l ，得 到lx 1 0 一g m l 的贮备标准溶液，贮存于4 。c 冰箱中备用。使用时用逐级稀释法用正己 烷配成不同浓度的工作标准溶液，用气谱测定。 2 3 3 梨、土壤的烯唑醇添加实验 称取一定量的空白对照梨、土壤样品，分别添加不同浓度的烯唑醇标准溶液，按 以上的方法检测烯唑醇的残留量，每个添加浓度重复三次。 2 3 4 结果计算 2 3 4 1 回收率的计算 ， 回收率= 1 0 0 c o 式中：c 1 为加标样品测定浓度( m g k g ) ， c o 为加标浓度( m g k g ) 。 2 3 4 2 相对标准偏差( r s d ) 7 标准偏差s = 相对标准偏差( r s d ) ：号1 0 0 式中：s 为标准偏差，x i 为样本值，工为样本平均值：n 为样本数。 2 4 结果分析 2 4 1 标准曲线的建立 采用外标法对烯唑醇进行定量计算，定量标准曲线见图2 。在o 0 1 1 m g l 浓度范 围内色谱峰高与浓度呈良好的线性关系。根据不同进样量( n 曲与相应的峰高绘出标准 曲线图2 2 6 0 2 4 0 ，、2 2 0 童2 0 0 髻：器 1 4 0 1 2 0 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 0246 81 01 21 4 时间如i n ) 图1 烯唑醇标样色谱图 f i g lg cc h r o m a t o g r a mo f d i n i c o n a z o l es t a n d a r d 图2 烯唑醇标准曲线 f i 9 2c a l i b r a t i o nl a l r v co f d i n i c o n a z o l c 2 4 2 提取和净化条件的选择 2 4 2 1 提取溶剂的确立 比较了丙酮、乙腈和甲醇三种提取溶剂，结果表明丙酮和乙腈提取效果较好，均 可达到9 8 以上，而甲醇只有8 0 左右，考虑到乙腈毒性高，价格高等缺点，因此选 用丙酮做提取溶剂。 表1 不同提取溶剂对梨中烯唑醇添加回收结果的影响 t a b l e1r e c o v e r i e sa n dc o e f i c i e n t so f v a r i a b i l i t yo f d i n i c o n a z o l ei np e a rb ys e l e c t e de x t r a c ts o l v e n t s 2 4 2 2 提取方法的选择 比较了机械振荡和超声波振荡两种提取方法，发现提取效率两种方法都可达到 9 8 以上，但是机械振荡提取需要的时间长，而超声波振荡提取需要的时间短，可以 节省提取时间，且重复性好，因此本实验采用超声波振荡提取法。 表2 不同提取方法对梨中烯唑醇添加回收结果的影响 t a b l e 2r e c o v e r i e sa n dc o e f i c i e n t so f v a r i a b i l i t yo f d i n i c o n a z o l ei np e a rb ys e l e c t e de x t r a c tm e t h o d s 2 4 2 3 净化方法的确立 柱层析是常用的净化方法，它的基本原理是将提取液中的农药与杂质一起通过一 支适宜的吸附柱，使它们吸附在柱中表面活性的吸附剂上，然后用适当极性的溶剂来 淋洗，农药一般先被淋洗出来，而杂质留在吸附柱上，达到分离净化的目的。常用的 吸附剂有活性炭、硅胶、弗罗里硅土、氧化铝等。吸附剂的用量、洗脱液的极性和用 量对待测样的回收率、净化程度均有较大的影响，应注意选择。本实验采用的吸附剂 是硅胶，以乙酸乙酯、石油醚混合液作为洗脱液。 经过筛选，实验选用淋洗剂乙酸乙酯石油醚= 2 1 ( v v ) ，在添加浓度为0 5 m g k g 的梨样品中加入6 0 r n l 丙酮，超声波振荡2 0 m i n ，7 0 m l _ 二氯甲烷萃取，采用6 o g 硅胶净 9 化，用6 5 m l 的乙酸乙酯石油醚- - 2 1 分成l o m l 、l o m l 、l o m l 、l o m l 、l o m l 、l o m l 收集，获得6 个淋洗液馏分，回收率分别为5 0 2 0 、2 9 0 4 、9 2 1 、3 9 6 、0 0 2 、 0 0 1 ，前3 个馏分之和已达8 5 以上，因此，淋洗液的用量确定为3 0 m l 。 l2 3 45 6 馏分 f r a c t i o n 图3 烯唑醇淋洗曲线 f i g u r e3e l u t eo t l r v co f d i n i c o n a z o l ci nc o l u m nc h r o m a t o g r a p h yo fs i l i c ag e l 2 4 3 方法的灵敏度、回收率、精密度 最低检出量为2 xl o 。1 9 ，最低检测浓度为0 0 1 m g k g 。 由表3 可见，土壤中添加烯唑醇浓度在0 0 1 0 5m g k g 范围时，回收率可达 8 8 5 3 1 0 1 11 ，变异系数为2 11 3 7 6 ；梨子中添加烯唑醇浓度在0 0 1 0 5m g k g 范围时，回收率可达8 6 1 3 9 8 1 2 ，变异系数为1 3 6 6 8 8 ，符合农药残留分析 要求。 表3 梨和壤中烯唑醇添加回收试验结果 t a b l e 3r e c o v e r i e so f d i n i c o n a z o l cf r o mf o r t i f i e dp e a ra n ds o i ls a m p l e s 添加浓度( m g k g ) 回收率平均回收率变异系数瞄 a v e r a g e r e g o v e r i c sc o e f f i c i e n to f v a r i a b i l i t y 土壤s o i l 0 5 o 1 o 0 5 9 0 4 7 8 8 3 68 6 7 5 9 5 9 29 1 1 29 7 5 2 1 0 1 0 l9 5 6 79 8 4 9 8 8 5 3 9 4 8 5 9 8 3 9 2 1 l 3 5 1 2 7 2 0 0 19 6 8 61 0 2 4 61 0 4 0 2 1 0 1 11 3 7 6 蚰 加 m o 酋o星鼍掣匣 2 8 0 2 6 0 2 4 0 2 2 0 2 0 0 1 8 0 1 6 0 1 4 0 1 2 0 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 2 8 0 2 6 0 2 4 0 2 2 0 2 0 0 1 8 0 1 6 0 1 4 0 1 2 0 1 0 0 b 0 6 0 4 0 2 0 0 024681 0 1 21 4 时间钿i n ) 梨空白图( a ) 2 8 0 2 6 0 2 4 0 2 2 0 2 0 0 1 8 0 1 6 0 1 4 0 1 2 0 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 2 8 0 2 8 0 2 4 0 ，、2 2 0 喜2 0 0 幽侣0 删1 6 0 1 4 0 1 2 0 1 0 0 8 0 印 4 0 2 0 0 024681 01 2 1 4 时问钿i n ) 梨添加图( b ) 024681 0 1 214024681 0 1 21 4 时间6 i i i n )时间如i n ) 土壤空白图( c )土壤添加图( d ) 图4 f i g u r e4g cc h r o m a t o g r a m so f ( a ) u n s p i k e dp e a r ( c ) u n s p i k e ds o i l ，( b ) p e a ra n d ( d ) s o i ls p i mw i t hd i n i c o n a z o l e l l 一卜占幽智 ( a 占幽埘 ( 占幽埘 3 烯唑醇在梨中的消解动态与最终残留试验 3 1 试剂与仪器 3 1 1 试剂 乙腈，分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 丙酮，分析纯，国药集团化学试剂有限公司： 正己烷，分析纯，国药集团化学试剂有限公司： 二氯甲烷，分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 石油醚分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 乙酸乙酯，分析纯，国药集团化学试剂有限公司； 无水硫酸钠，分析纯，广东汕头市西陇化工厂； 氯化钠，分析纯，上海试四赫维化工有限公司； 实验用水为重蒸水； 硅胶1 3 0 下烘5 h 置于干燥器内备用。 3 1 2 主要仪器设备 s p 2 0 0 0 a 型气相色谱仪( j 耍e c d 检测器) ； s b 3 2 0 0 超声波清洗机，上海必能信超声有限公司； r e 5 2 a a 旋转真空蒸发仪，上海青浦泸西仪器厂； f a l l 0 4 电子天平，上海天平仪器厂； s h a - c 恒温振荡器，荣华仪器制造厂； t d z 5 w s 离心机，长沙维尔康湘鹰离心机有限公司； 艾科浦超纯水机，重庆颐洋公司。 3 2 田间试验设计 3 2 1 试验材料 试验时间：2 0 0 7 年 试验地点：安徽、山东、天津、陕西 试验农药：1 0 烯唑醇乳油( 黄骅市绿园农药化工有限公司) 试验作物：梨树 3 2 2 试验方法 3 2 2 1 小区设计【州 设计试验小区，每小区3 株树，重复三次，同时设空白小区，小区之间设保护行。 ( 田间试验设计见表4 ) 。 3 2 2 2 耕作措施 1 2 按当地常规方法管理。 3 2 2 3 气候条件和土壤类型 天津属于暖温带半湿润大陆性气候，其土壤类型为潮土；安徽为亚热带湿润季风 气候区，其土壤类型为黄褐土：山东省属于暖温带半湿润季风气候，受海洋季风影响 较大，其土壤类型为褐土；陕西省属于大陆性气候，关中地区属于暖温带半湿润地区， 其土壤类型为壤土。 3 2 2 41 0 烯唑醇乳油在梨中的残留动态试验 施药剂量：稀释1 0 0 0 倍( 最高推荐剂量2 倍) 施药次数：1 次 施药时间：在梨的果实生长中期进行全株均匀喷雾一次 施药方法：手动喷雾，喷水量为1 2 l 株 样品采集：施药后2 h 、1 d 、3 d 、7 d 、1 4 d 、2 1 d 、2 8 d 、3 5 d 随机采集梨2 0 k g ，将 按四分法留样0 5 k g ，装入塑料袋，贴好标签，放入2 0 。c 低温保存待测。 3 2 2 51 0 烯唑醇乳油在梨中的最终残留量 低剂量：稀释2 0 0 0 倍( 最高推荐剂量) 高剂量：稀释1 0 0 0 倍( 最高推荐剂量2 倍) 施药次数：2 次、3 次 施药时间：在梨的果实生长中期进行全株均匀喷雾，以后间隔7 d 施药。 样品采集：施药后间隔7 d 、1 4 d 、2 1 d 、2 8 d 每小区随机采集梨和土壤各2 0 k g ，装 入塑料袋，贴好