（内科学专业论文）strem1在社区获得性肺炎中的诊断价值.pdf

s t r e m 1 在社区获得性肺炎中的诊断价值 摘要 目的：社区获得性肺炎( c a p ) 发病率高，是一种威胁人群健康的感 染性疾病，早期国外研究显示可溶性髓系细胞表达的触发受体l ( s t r e m 1 ) 对于感染性疾病是一个高度特异、高度敏感的预测指标，但近年来研究显 示其诊断、鉴别价值存在较大争议。本实验通过检测c a p 患者血浆和肺泡 灌洗液( b a l f ) 中炎性介质s t r e m 1 、t n f 0 【、i l 1o 和超敏c 反应蛋白 ( h s c r p ) 的水平及重症c a p 患者血和b a l f 中s t r e m 1 的变化，探讨 s t r e m 1 水平在社区获得性肺炎中的诊断价值及其与病情严重程度的关 系，为指导c a p 的临床治疗提供理论依据。方法：将3 4 侈1 符合2 0 0 6 年社区 获得性肺炎诊断标准的患者分为两组：重症c a p 组1 2 例( 存活7 例，死亡5 例) ，普通c a p 组2 2 例。对照组3 4 例分成两组：对照组1 ( 肺癌不伴感染组) 14 例和对照组2 ( 健康对照组) 2 0 例。c a p 组和对照组均收集血浆和通过电 子支气管镜收集b a l f ，重症c a p 组收集治疗第l 天、第3 天及第7 天血浆和 b a l f 。用酶联免疫吸附法( e l i s a ) 检测血浆及b a l f 中s t r e m l 、t n f 0 t 和i l 1 0 的水平。记录c a p 患者外周血中的中性粒细胞数，所有受试者外周 血送本院检验科检测h s c r p 水平。各组数据均用均数4 - 标准差( x 土s ) 表示， s p s s17 0 软件统计处理数据，p o 0 5 表示差异具有统计学意义。结果：( 1 ) c a p 组患者血浆及b a l f 中s t r e m - 1 水平为( 6 8 4 1 + 2 2 9 1 ) n g l 和 ( 2 2 2 3 3 + 5 3 3 5 ) n g l ，对照组分别为( 4 8 1 4 + 7 9 5 ) n g l 和( 1 8 0 2 9 + 2 2 1 9 ) n g l ，c a p 组显著高于对照组( p 0 0 1 ) ；c a p 组血浆中t n f o 【水平 ( 8 9 5 3 + 1 0 3 5 ) n g l 高于对照组( 8 2 3 7 + 1 2 3 6 ) n g l ( p o 0 5 ) ；血浆中 h s c r p 水平，c a p 组( 7 7 6 4 - 5 4 1 ) m g l 显著高于对照组( 3 1 2 4 - 2 1 1 ) m g l ( 尸 0 0 1 ) 。( 2 ) 血浆s t r e m 1 水平，重症c a p ( 7 5 7 3 4 - 2 8 2 3 ) n g l 和普 通c a p 组( 6 4 4 2 + 18 9 6 ) n g l 高于健康对照组( 4 3 1 2 4 - 5 5 2 ) n g l ( p o 0 5 ) ；b a l f 中s t r e m 1 水平，重症c a p 患者( 2 5 2 5 4 4 - 4 4 9 2 ) n g l 显著高 于普通c a p 组( 2 0 7 4 0 4 - 5 1 6 0 ) n g l 、对照组1 ( 1 8 5 3 8 4 - 1 6 9 0 ) n g l ) 和健 康对照组( 17 6 7 3 4 - 2 5 0 5 ) n g l ( 尸 o 0 1 ) ，普通c a p 组高于健康对照组 ( p o 0 5 ) 。( 3 ) 血浆中t n f 仅水平，重症c a p 组显著高于普通c a p 组和健 康对照组( 尸 o 0 5 ) ；b a l f 中t n f 0 【水平，重症c a p 组显著高于普通c a p 组和健康对照组 ( p o 0 1 ) 。( 4 ) 血浆中i l 一1 0 水平，重症c a p 组高于普通c a p 组和健康对 照组( 尸 o 0 5 ) ；b a l f 中i l 1 0 水平，重症c a p 组和对照组1 高于健康对照 组( p o 0 5 ) 。 血浆中h s c r p 水平，重症c a p 组显著高于普通c a p 组、对照组1 和健康对 照组( 尸 o 0 1 ) 。( 5 ) 重症肺炎组存活组在经治疗后血浆和肺泡灌洗液中 s t r e m 1 呈下降趋势：血浆中s t r e m 1 水平，第7 天( 4 4 7 5 4 - 4 0 4 ) n g l l k i 于 第1 天( 7 6 5 9 + 2 7 8 9 ) n g l 和第3 天( 7 0 6 8 4 - 3 6 2 8 ) n g l ( 尸 0 0 5 ) ；b a l f os t r e m 1 水平，第7 天( 17 8 8 0 - a ：19 3 9 ) n g l 低于第1 天( 2 3 9 2 4 + 2 4 7 8 ) n g l 和第3 天( 2 31 0 6 + 5 2 0 1 ) n g l ( 尸 o 0 5 ) 。重症c a p 死亡组血浆和肺泡 灌洗液中s t r e m 1 呈增加趋势，第7 天达最高：血浆s t r e m 1 水平，第7 天 ( 1 1 7 6 9 + 3 2 9 3 ) n g l 高于第l 天( 7 4 5 3 4 - 3 1 9 7 ) n g l ( 尸 o 0 5 ) ；b a l f 中 s t r e m 1 水平，第7 天( 4 19 7 3 4 - 5 2 2 6 ) n g l 高于第3 天( 3 4 2 8 0 4 - 5 0 71 ) n g l ( 尸 o 0 5 ) ，显著高于第1 天( 2 7 1 1 5 + 6 2 3 3 ) n g l ( 尸 0 0 1 ) 。( 6 ) b a l f 和血浆中s t r e m 1 的r o c 曲线下面积为 0 8 3 8 ( 9 5 c i ：o 7 2 0 9 5 ) 和 o 7 8 9 ( 9 5 c i ：o 6 6 0 9 2 ) ，高于本研究中的其他炎性指标。( 7 ) 血浆中 s t r e m 1 与外周血中性粒细胞数呈正相关( f o 8 1 8 ，p 2 11 8 8 n g l 为标 2 准，肺炎诊断的灵敏度为7 0 ，特异度为9 1 。( 3 ) b a l f 与外周血中 s t r e m 一1 的水平与肺炎严重程度呈正相关。( 4 ) 在c a p 中，中性粒细胞可 能是t r e m 1 的主要来源。 ：关键词：社区获得性肺炎；s t r e m 1 t h ev a l u eo fs o l u b l et r i g g e r i n gr e c e p t o re x p r e s s e d o nm y e l o i d c e l l s 1o nt h ed i a g n o s i so fc o m m u n i t ya c q u i r e dp n e u m o n i a a b s t r a c t ：o b j e c t i v e s ：c o m m u n i t y a c q u i r e dp n e u m o n i a ( c a p ) i s a ni n f e c t i o u s d i s e a s ew i t hh i g hm o r b i d i t y ，w h i c ht h r e a t e n sh u m a nh e a l t h e a r l y s t u d i e s a b r o a dh a dd i s p l a y e dt h a ts o l u b l et r i g g e r i n gr e c e p t o re x p r e s s e do nm y e l o i d c e l l s - 1 ( s t r e m 1 ) w a sah i g h l ys p e c i f i ca n dh i g h l ys e n s i t i v ep r e d i c t o rt o i n f e c t i o u sd i s e a s e s ，b u tr e c e n t l yr e s e a r c h e sh a v es h o w nt h a tt h e r ei s ag r e a t c o n t r o v e r s yo fi t s v a l u ei nd i s e a s ed i a g n o s i sa n dd i f f e r e n t i a ld i a g n o s i s t h e r e l a t i o n s h i pb e t w e e ns t r e m 1a n dc a p h a sn o tb e e nr e p o r t e di nd o m e s t i c t h i ss t u d yi n v e s t i g a t e dt h ev a l u eo fs t r e m 一1i nd i a g n o s i sa n d t h er e l a t i o n s h i p b e t w e e ns t r e m 1a n dt h es e v e r i t y o fc a p ，b yc o m p a r i n gt h el e v e l so f i n f l a m m a t o r ym e d i a t o r s s t r e m 一1 ，t n f - 仅，i l 一1 0a n dh i g h s e n s i t i v i t y c - r e a c t i v ep r o t e i n ( h s c r p ) a n dd y n a m i cm o n i t o r i n gc h a n g e so fs t r e m _ 1i n p l a s m aa n db a l f o fs e r i o u sc a p p a t i e n t s ，t op r o v i d et h e o r e t i c a lb a s i sf o rc a p c l i n i c a lt r e a t m e n t m e t h o d s ：t h i r t y f o u rc a pp a t i e n t sw h o mw e r ec h o s e n b a s e do nt h ed i a g n o s t i cs t a n d a r d so fc a pi n2 0 0 6 ，a n dt h i r t y f o u r c o n t r o l s u b j e c t st o o kp a r ti nt h i ss t u d y t h ec a pp a t i e n t sw e r es e p a r a t e di n t ot w o g r o u p s ：t w e l v ea c q u i r e ds e r i o u sc a p ( s e v e n a r ea l i v e ，f i v eh a v eb e e nd e a d ) ， t w e n t y t w ow e r en o ts e r i o u s f o u r t e e nl u n gc a n c e rp a t i e n t sw i t h o u t i n f e c t i o n a n dt w e n t yn o r m a lc o n t r o l sm a d eu pt h ec o n t r o lg r o u p p l a s m aa n db a l f ( b y e l e c t r o n i cb r o n c h o s c o p e ) w e r ec o l l e c t e di np a t i e n t sa n dc o n t r o ls u b j e c t s s e v e r e p n e u m o n i ag r o u pw e r ec o l l e c t e dp l a s m aa n d b a l fo nt h ef i r s td a y ，t h et h i r d 4 a n dt h es e v e n t hd a y w ed e t e c t e dt h el e v e lo f s t r e m 1 ，t n f 一0 【，a n di l 10i n b a l fa n dp l a s m au s i n ge n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e n t a s s a y ( e l i s a ) t h e n e u t r o p h i lc o u n to fp e r i p h e r a lb l o o di nc a pp a t i e n t sw e r er e c o r d e d t h e p l a s m ao fa l ls u b je c t sw e r es e n tt ot h eh o s p i t a ll a b o r a t o r yt od e t e c tt h eh s c r p l e v e l s a l ld a t aw a s e x p r e s s e db ym e a n + s t a n d a r dd e v i a t i o n ( 叉士s ) ，a n dw a s s t a t i s t i c a l l ya n a l y z e db yu s i n gs t a t i s t i c a lp r o d u c ta n ds e r v i c es o l u t i o n s17 0 ( s p s s 17 o ) p o 0 5i n d i c a t e das t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n td i f f e r e n c e r e s u l t s ：t h e l e v e l so fs t r e m - 1i n p l a s m a ( 6 8 4 1 士2 2 9 1 ) n g l 】a n d i nb a l f ( 2 2 2 3 3 士5 3 3 5 ) n g l 】o ft h ec a pp a t i e n t sw e r em u c hh i g h e rt h a nt h o s e ( 4 8 14 士7 9 5 ) ，( 18 0 2 9 士2 2 19 ) n g l 】o ft h ec o n t r o lg r o u p ( p o 0 1 ) t h el e v e l o ft n f o ti n p l a s m a ( 8 9 5 3 士1 0 3 5 ) n g l o f t h ec a p p a t i e n t sw a sh i g h e r t h a nt h a t ( 8 2 3 7 + 1 2 3 6 ) n g l 】o ft h ec o n t r o lg r o u p ( p 0 0 5 ) t h el e v e lo f h s - c r pi np l a s m a ( 7 7 6 士5 41 ) m g l o ft h ec a p p a t i e n t sw a sm u c hh i g h e r t h a nt h a t ( 3 1 2 + 2 11 ) m g l 】o ft h ec o n t r o l g r o u p 畔o 0 1 ) t h el e v e l so f s t r e m _ 1i np l a s m a ( 7 5 7 3 士2 8 2 3 ) n g l o ft h es e v e r ep n e u m o n i a p a t i e n t s a n d ( 6 4 4 2 士1 8 9 6 ) n g l 】o ft h eo r d i n a r yp n e u m o n i ap a t i e n t sw e r eh i g h e r t h a nt h o s e ( 4 3 12 士5 5 2 ) n g l o ft h en o r m a lc o n t r o lg r o u p ( 氏o 0 5 ) t h el e v e l o fs t r e m 一1i nt h eb a l f ( 7 5 7 3 士2 8 2 3 ) n g l o ft h es e v e r ep n e u m o n i a p a t i e n t sw a sh i g h e rt h a nt h a to ft h el i g h t e rp n e u m o n i a p a t i e n t s ( 2 0 7 4 0 士51 6 0 ) n g l ，t h el u n gc a n c e rp a t i e n t sw i t h o u ti n f e c t i o ng r o u p ( 18 5 38 士16 9 0 ) n g la n dt h en o r m a lc o n t r o lg r o u p ( 1 7 6 7 3 士2 5 0 5 ) n g l ( 尸 o 01 ) t h a to ft h e l i g h t e rp n e u m o n i ap a t i e n t sg r o u pw a sh i g h e rt h a nt h en o r m a lc o n t r o lg r o u p 5 ( 尸 0 0 5 ) t h el e v e l so f t n f 一0 【i np l a s m ao ft h es e v e r ep n e u m o n i aw e r eh i g l l e r t h a nt h e o r d i n a r yp n e u m o n i ag r o u p a n dt h en o r m a lc o n t r o lg r o u p ( 尸 0 0 5 ) t h el e v e lo ft n f qi n b a l fo ft h es e v e r ep n e u m o n i aw a sh i g h e rt h a nt h el i g h t e rp n e u m o n i ag r o u p a n dt h en o r m a lc o n t r o lg r o u p ( p o 01 ) t h el e v e lo f l l - 10i np l a s m ao ft h e s e v e r ep n e u m o n i ag r o u pw a sh i g h e rt h a nt h eo r d i n a r yp n e u m o n i ag r o u pa n d t h e n o r m a lc o n t r o lg r o u p ( 尸 o 0 5 ) t h el e v e l so f l l 一10i nb a l fo ft h es e v e r e p n e u m o n i ag r o u pa n dt h el u n gc a n c e rp a t i e n t sw i t h o u t i n f e c t i o ng r o u pw e r e h i g h e rt h a nt h en o r m a lc o n t r o lg r o u p ( 尸 o 0 5 ) t h e r ew a sn od i f f e r e n c e b e t w e e nt h es e v e r ep n e u m o n i ag r o u pa n dt h el u n gc a n c e rp a t i e n t sw i t h o u t i n f e c t i o ng r o u p ( 胗0 0 5 ) t h el e v e lo fh s - c r pi np l a s m ao ft h e s e v e r e p n e u m o n i aw a sh i g h e rt h a nt h eo r d i n a r yp n e u m o n i a g r o u pa n dt h el u n gc a n c e r p a t i e n t sw i t h o u ti n f e c t i o ng r o u pa n d t h en o r m a lc o n t r o lg r o u p ( p 0 01 ) t h e l e v e l so fs t r e m 1i np l a s m aa n db a l fo fs u r v i v a lg r o u pi ns e v e r ep n e u m o n i a g r o u ps h o w e dat r e n dt o d e c r e a s e ：t h es t r e m - 1l e v e l si ns u r v i v a lg r o u p s p l a s m aw e r e ( 7 6 5 9 + 2 7 8 9 ) n g lo nt h ef i r s td a y ，( 7 0 6 8 + 3 6 2 8 ) n g l o nt h e t h i r dd a y ，r e s p e c t i v e l ya n d ( 4 4 7 5 + 4 0 4 ) n g lo nt h e s e v e n t hd a y t h e s t r e m 1l e v e l si ns u r v i v a lg r o u p sb a l fw e r e ( 2 3 9 2 4 + 2 4 7 8 ) n g lo n t h e f i r s td a y ，( 2 3 1 0 6 + 5 2 0 1 ) n g lo nt h et h i r dd a y ，a n d ( 1 7 8 8 + 1 9 3 9 ) n g l o nt h es e v e n t hd a y t h es t r e m 一1l e v e l si ns u r v i v a lg r o u p sp l a s m aa n d b a l f o ft h es e v e n t hd a yw e r el o w e rt h a nt h ef i r s td a ya n d t h et h i r dd a y ( 氏o 0 5 ) t h e 6 l e v e l so fs t r e m _ 1i n p l a s m aa n db a l fo ft h ed e a t hg r o u pi ns e v e r e p n e u m o n i ag r o u pi n c r e a s e dt ot h eh i g h e s tl e v e lo nt h es e v e n t hd a y t h e s t r e m - 1l e v e l si nt h ed e a t h s p l a s m aw e r e ( 1 17 6 9 士3 2 9 3 ) n g lo nt h e s e v e n t hd a y ，h i g h e rt h a nt h a t ( 3 4 2 8 0 士5 0 7 1 ) n g l 】o nt h ef i r s td a y ( p 0 0 5 ) t h es t r e m _ 1l e v e l si nt h ed e a t h sb a l f w e r e ( 2 7 1 1 5 + 6 2 3 3 ) n g lo nt h e f i r s td a y ，( 3 4 2 8 0 土5 0 71 ) n g lo nt h e3 r dd a ya n d ( 4 19 7 3 + 5 2 2 6 ) n g l o nt h es e v e n t hd a y t h el e v e lo ft h es e v e n t hd a y w a sh i g h e rt h a nt h e1s t d a y ( p 0 01 ) a n dt h e3 r dd a y ( p 0 0 5 ) t h ea r e a su n d e rt h er o cc u r v eo f s t r e m - 1i nb a l fa n dp l a s m aw e r e0 8 3 8 ( 9 5 c i ：0 7 2 0 9 5 ) a n d0 7 8 9 ( 9 5 c i ：0 6 6 0 9 2 ) ，g r e a t e rt h a nt h eo t h e ri n f l a m m a t o r ym a r k e r so ft h i ss t u d y t h e l e v e lo fs t r e m - 1i np l a s m ao fc a p w a sc o r r e l a t e dp o s i t i v e l yt ot h en u m b e r o f n e u t r o p h i l si nb l o o d ( r = 0 818 ，p 2 1 1 8 8 n g la st h es t a n d a r d ， t h es e n s i t i v i t yo fd i a g n o s i so fp n e u m o n i aw a s7 0 ，s p e c i f i c i t yw a s91 t h e s t r e m - 1l e v e l si nt h eb a l fa n dp l a s m aa r er e l a t i v et ot h e s e v e r i t yo f p n e u m o n i a t h en e u t r o p h i l sm a y b ei st h em a i ns o u r c eo ft r e m 1c a p p a t i e n t s k e yw o r d s ：c o m m u n i t ya c q u i r e dp n e u m o n i a ，s o l u b l et r i g g e r i n g r e c e p t o r e x p r e s s e do nm y e l o i dc e l l s 一1 7 - j - 刖吾 呼吸系统疾病约占内科疾病的1 4 ，根据2 0 1 0 年全国部分城市及农村 居民死亡原因的统计数据，呼吸系统疾病( 不包括肺癌) 在城市和农村的 死亡病因中均占第三位，分别占9 9 7 及1 4 9 6 。由于大气污染、工业经 济发展、吸烟等导致理化因子、生物因子的吸入以及人口老龄化、免疫损 害宿主增加等原因，导致国内外呼吸系统疾病慢性阻塞性肺疾病、肺癌、 支气管哮喘、弥漫性间质性肺疾病以及性肺部感染等疾病的发病率日渐增 多，病死率有增无减。呼吸系统疾病对我国人民的健康危害日趋严重，其 防治任务任重道远。 我们生活的自然界，细菌无所不在，人体更是某些细菌的理想生存环 境。部分细菌有较强的致病性，致病性细菌感染人体后，分泌大量的毒素， 严重危害身体健康。从古至今，人类和感染性疾病的斗争，从来就没停息 过。肺炎在全球社区发病率是1 6 0 11 o ，住院病人中发病率高达 4 0 6 0 ，是导致死亡的第三大原因。社区获得性肺炎( c o m m u n i t y a c q u i r e d p n e u m o n i a ，c a p ) 是指在医院外罹患的感染性肺实质( 含肺泡壁，即广义上 的肺间质) 炎症，包括具有明确潜伏期的病原体感染而在入院后潜伏期内发 病的肺炎1 1 1 。c a p 发病率高，占感染性肺炎9 0 以上，c a p 病死率仍较高， 各国报道差异较大，为5 7 2 4 ，我国约为1 0 - 1 5 。据文献报道【2 】： 美国每年有4 0 0 多万人发生c a p ，其中需要住院治疗的患者超过1 0 0 万人， 在所有死亡原因中占第6 位。近年来，非感染因素所致的发热和新的肺部 浸润病灶增多、发病率增加、病原体变迁、痰检标本的可靠性、痰培养的 实验室条件因素的影响、体外与体内的吻合程度差异以及不合理使用抗菌 素导致细菌耐药性增加等，使得c a p 的病原学诊断困难，c a p 治疗面临 许多新的问题。探讨c a p 发病过程中的炎性损伤机制，寻求更加敏感和可 靠的诊断指标，有利于更早期积极治疗。 r 过去认为肺炎是发生1 - 肺部组织的局限性炎症【3 】，机制是上呼吸道的 病原菌逃过呼吸道屏障进入肺泡，激活中性粒细胞、肺巨噬细胞等，产生 和释放大量的炎症介质，导致组织损伤【4 1 。s t r i e t e rr m 5 1 等发现n 盯仅， i l 1 0 ， i l 6 ，i l 。p 、i l 1 r a 等炎性介质在肺炎患者肺泡灌洗液中较正常对 照组明显增加，且与肺部炎症的严重程度相关。同时有研究发现【6 ，7 1 c a p 患 者外周血中t n f 0 【，i l 1 0i l 1 3 、i l 6 等因子也是升高的。近1 0 年的研究表 明，髓系细胞表达的触发受体1 ( t r i g g e r i n gr e c e p t o re x p r e s s e do nm y e l o i d c e l l s 一1 ，t r e m 1 ) 是免疫反应的泛化器，在炎症反应的发生发展和级联放大 过程中起着重要作用。目前t r e m 1 的相关研究主要集中在重症感染领域， 如脓毒症感染、呼吸机相关性肺炎( v a p ) 以及重症胰腺炎等，对于普通 肺炎，与肺部非感染性疾病的相关研究相对较少，针对t r e m 1 的靶向治 疗仅限于动物实验，t r e m 1 的配体参与免疫应答的信号转导途径等尚未 完全明确。本研究通过检测c a p 患者和对照组血液及肺泡灌洗液中的 s t r e m 1 以及炎症介质t n f 一0 【、i l 1 0 和h s c r p 水平，分析s t r e m 1 对 于炎症性疾病的诊断价值，研究它与病情严重程度及预后的关系，为肺部 感染性性疾病的诊断和治疗提供帮助。 对象与方法 1 研究对象与仪器 1 1 研究对象分组 1 1 1 研究组( c a p 组) 3 4 例研究对象均来自泸州医学院附属医院呼吸内科2 0 1 0 年2 月至2 0 1 1 年1 月的住院患者，包括r i c u 室1 2 例。男16 例，女18 n ；年龄16 8 3 岁， 平均年龄( 4 8 6 + 1 9 o ) 岁。分为重症c a p 组1 2 例，普通c a p 组2 2 例，均收集 血浆和肺泡灌洗液；其中重症c a p 组均来自呼吸内科r i c u 室，所有病人均 是使用有创呼吸机辅助通气病人，通过静脉采血和床旁纤维支气管镜分别 收集第一天，第三天和第七天血浆和b a l f 。纳入标准：所有患者均经临床、 血常规、x 线胸片或胸部c t 检查，符合2 0 0 6 年中华医学会呼吸病学分会修 定社区获得性肺炎诊断和治疗指南的诊断标准1 ，排除标准：合并c o p d 、 肺纤维化、支气管哮喘、支气管扩张症、肿瘤、高血压、糖尿病、冠心病、 肝肾疾病及吸烟史。重症肺炎纳入标准：( 1 ) 肺炎诊断成立，( 2 ) 出现下 列征象中1 项或以上者意识障碍；呼吸频率之3 0 次m i n i ( 亘) p a 0 2 6 0 m m h g ，p a 0 2 f i 0 2 3 0 0 ，需行机械通气治疗；动脉收缩压 9 0m m h g ；并发脓毒性休克；x 线胸片显示双侧或多肺叶受累，或人院4 8h 内病变扩大之5 0 ；少尿：尿量 2 0m l h ，或 8 0m l 4h ，或并发急 性肾功能衰竭需要透析治疗1 1 1 。 1 1 2 对照组：共3 4 例 1 1 2 1 对照组1 ( 肺癌不伴感染组) ，共1 4 例。 体检发现肺部包块而无明显呼吸道症状，且符合以下纳入标准的患者 1 6 例( 呼吸内科住院患者1 0 例，呼吸科门诊病例4 例) 。男8 例，女6 例， 年龄3 9 - - 7 1 岁，平均年龄( 5 6 1 + 11 o ) 岁。均收集血浆并行支气管镜镜检查 收集肺泡灌洗液。以下为纳入标准：( 1 ) 影像学发现肺部包快，但无明显 阻塞性肺炎表现者。( 2 ) 外周血常规检查白细胞总数及中性粒细胞百分比 l n 数在正常范围。( 3 ) 患者无咳痰，发热等临床症状。( 4 ) 病理活检确诊 为肺癌。( 5 ) 无c o p d 、支气管哮喘、肺纤维化、高血压、柳i 尿病、冠心 病、肝肾疾病史。 1 1 3 对照组2 ( 健康对照组) ，共2 0 例 2 0 1 0 年2 月至2 0 1 1 年1 月以胸部不适( 胸闷、胸痛、呼吸困难等) 为自 觉症状在我院呼吸内科门诊就诊，经体检、x 线胸片及心电图检查证实为 健康者，无c o p d 、支气管哮喘、肺纤维化、肿瘤、糖尿病、冠心病、高 血压、肝肾疾病史，愿意进行电子支气管镜检查的患者2 0 例。其中男1l t 歹, j ， 女9 侈s j ；年龄2 9 7 0 岁，平均年龄( 4 3 3 4 - 14 6 ) 岁，收集血浆和b a l f 。 2 主要实验试剂 2 1 实验试剂 o 9 生理盐水 蒸馏水 s t r e m 1 e l i s a 试剂盒：( 美国r d 公司，由泸州克隆生化试剂经营 部提供) 试剂组成： 标准品( 4 8 0 n g l ) o 5 m l 标准品稀释液3 m 1 酶标包被板9 6 孔2 酶标试剂6 m l 2 0 倍浓缩洗涤液 2 0 m l 样品稀释液6 m l 显色剂a 液6 m l 显色剂b 液6 m l 终止液 6 m l i l 1 0e l i s a 试剂盒：( 美国r d 公司，由泸州克隆生化试剂经营部提 供) 试剂组成： 标准品( 4 8 0 n g l ) 0 5 m 1 标准品稀释液 3 m 1 酶标包被板9 6 孔，4 8 孔 酶标试剂6 m l 2 0 倍浓缩洗涤液 2 0 m l 样品稀释液 6 m l 显色剂a 液6 m l 显色剂b 液6 m l 终止液 6 m l n 师ae l i s a 试剂盒( 美国r d 公司，由泸州克隆生化试剂经营部提 供) 试剂组成： 标准品( 4 8 0 n g l ) o 5 m l 标准品稀释液3 m l 酶标包被板9 6 孔，4 8 孔 酶标试剂6 m l 2 0 倍浓缩洗涤液2 0 m l 样品稀释液6 m l 显色剂a 液6 m l 显色剂b 液6 m l 终止液 6 m l 2 2 洗涤液的配n - 试剂盒中浓缩洗涤液 2 0m l l 蒸馏水 10 0 0m l 在实验前半小时将浓缩洗涤液加入蒸馏水混均，即可使用。 3 主要实验仪器 b 3 2 0 型医用低速离心机白洋离心机厂 恒温培箱中国上海科析试验仪器厂 微量移液器e p p e n d o r f 公司 电子支气管镜日本o l y m p u s 公司 注射器( 5 毫升，2 0 毫升)杭州龙德医用器械有限公司 超低温冷冻冰箱( m o d e l8 5 7 1s n8 9 4 5 8 6 3f o r m as c i e n t i ci nu s a ) 洗板机( b i o r a dm o d e l15 7 5m a d ei nj a p a n ) 酶标仪( b i o r a dm o d e l6 8 0m a d ei nj a p a n ) 分析软件： a s c e n ts o , w a r ef o rm u l t i s k a n 4 实验方法 4 1 实验标本的收集 4 1 1 血液标本的收集 重症c a p 患者收集入院第一天、第三天和第七天( 其中1 例患者在第 6 天死亡，标本采集为死亡当天) 血浆。其余受试者均在电子支气管镜检 查前3 0 分钟抽取肘静脉血5m l ，1 0 e d t a 抗凝，3 0 分钟内离心( 2 0 0 0 转分钟，1 0 分钟) 分离血浆，用移液枪将离心后的上清液移入已经消毒 的1 0 0 0 微升e p 管中，贴好标签并盖紧，放置于一7 0 冰箱冻存，待一次 性检测。所有受试者第一次抽血时留取血标本，送本院检验科查血常规和 血浆h s c r p ，并及时记录好数据。 4 1 2 肺泡灌洗液的收集 纤维支气管镜检查的准备工作和操作按规程进行隅1 。重症c a p 组入院 后纤维支气管镜插管时收集第一次b a l f ，此后通过床旁纤维支气管镜收 集第三天和第七天( 1 例患者为死亡当天) b a l f ，其他住院的受试者均在 1 3 入院3 天内行电子支气管镜检查，门诊受试者在就诊当天或第二天安排电 子支气管镜检查。将纤维支气管镜前端尽可能嵌入病变部位段或亚段支气 管开口，经纤维支气管镜工作管道将3 7 。c 灭菌生理盐水注入病变部位段或 亚段支气管，每次2 5m l ，保留1 5 - - 3 0 秒钟，然后用一1 3 3 一1 9 9 5k p a 负压吸引至灭菌标本瓶中，共3 次，标本用单层纱布过滤( 除去粘液) ，放 人4 c 冰箱保存，3 小时内离心( 3 0 0 0 转分钟，1 0 分钟) ，上清液移入消 毒后的1 0 0 0 微升e p 管中盖紧并贴好记签置于一7 0 冰箱冻存，待一次 性检测。合格的b a l f 标准：达到适当的回收比例，中叶及舌叶肺泡灌 洗回收量应达到4 0 以上，下叶或其他肺叶应该达到3 0 以上；避免混 有血液，红细胞数比例小于1 0 ；上皮细胞一般应在3 以下1 9 1 。 4 2检测指标和检测步骤 4 2 1 可溶性髓系细胞触发受体1 ( s t r e m 1 ) 含量测定 采用e l i s a 方法检测，检测前3 0 分钟将待测标本从低温冰箱取出， 试剂盒内试剂从冰箱取出后室温中放置3 0 分钟以上。具体操作步骤如下： ( 1 ) 标准品的稀释：使用规格为l m l 的e p 管5 个，按以下方法操作 并编号。见表1 表1s t r e m 1 标准品稀释表 7 r a h l els t re m 1s t a n d a r dd i l u t i o n 2 0 0 n g l( 5 号标准品)1 2 0 p l 的原倍标准品加入1 2 0 p l 的标准品稀释液 1 0 0 n g l ( 4 号标准品)1 2 0 p l 的5 号标准品加入1 2 0 p l 的标准品稀释液 5 0 n g l( 3 号标准品)1 2 0 p l 的4 号标准品加入1 2 0 p l 的标准品稀释液 2 5 n g l ( 2 号标准品) 1 2 0 p l 的3 号标准品加入1 2 0 p l 的标准品稀释液 1 2 5 n l( 1 号标准品)1 2 0 p l 的2 号标准品加入1 2 0 p l 的标准品稀释液 ( 2 ) 分别设空白孔、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品 孔中加入稀释好的标准品5 0 p l ；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀 释液4 0 p l ，然后再加待测样品1 0 p l 。轻轻晃动混匀，3 7 温育6 0 分钟。 ( 3 ) 弃去液体，甩干，每孑l j n 满稀释后洗涤液，振荡3 0 秒，甩去洗 涤液，用吸水纸拍干。如此重复5 次，拍干。 1 4 ( 4 ) 每孔加入酶标试剂5 0 p l ，空白孔除外。轻轻晃动混匀，3 7 c 温育 3 0 分钟。 ( 5 ) 弃去液体，甩干，每孔加满稀释后的洗涤液，振荡3 0 秒，甩去 洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5 次，拍干。 ( 6 ) 每孔先加入显色剂a5 0 p l ，再加入显色剂b 5 0 p l ，轻轻震荡混匀， 3 7 避光显色1 0 分钟 ( 7 ) 取出酶标板，每孔加终止液5 0 9