传染病的免疫学检测一、伤寒、副伤寒血清学诊断.ppt

第八部分传染病的免疫学检测一、伤寒、副伤寒血清学诊断（一）肥达（Widal）试验方法：试管法步骤：试管编号稀释病人血清+菌液混匀,放置16-20小时观察结果。结果判定:以出现+凝集的血清最高稀释倍数为该血清的凝集抗体的效价,1,感谢你的聆听,2019-11-12,2,感谢你的聆听,2019-11-12,正常值：O1:80；H1:160临床意义：1.“O”和“H”均高于正常值，可考虑为伤寒；恢复期较急性期增长4倍以上确定诊断。2.“O”抗体（IgM）出现较早，“H”抗体（IgG）出现较晚3.病程第2周以后，大多出现阳性反应，一般以第3、4周阳性率最高，病愈后，可持续数月。,3,感谢你的聆听,2019-11-12,（二）酶联免疫（ELISA）试验方法：抗原(伤寒杆菌脂多糖或Vi抗原)包被+待测血清+第二抗体（酶标记）底物显色参考值：1:20临床意义：1.早期诊断(发病1周后即可升高）2.检测抗Vi抗体，可以诊断伤寒带菌者,4,感谢你的聆听,2019-11-12,5,感谢你的聆听,2019-11-12,二、抗链球菌溶血素“O”测定溶血抑制法原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）存在于感染链球菌病人的血清中，可以和溶血素“O”特异性结合，使之失去溶血作用方法：病人血清倍比稀释溶血素+红细胞观察溶血现象结果判定：无溶血现象的血清最高稀释倍数定为ASO的单位数。参考值：ASO400U临床意义：1.链球菌感染1周，ASO，46周达高峰。2.风湿热：ASO。,6,感谢你的聆听,2019-11-12,三、肝炎的免疫学检测（一）甲型肝炎（HAV）的免疫学检查：1.粪便中HAV抗原的检测ELISA夹心法方法：标本处理：待测粪便+牛肉汤盐水冻融离心取上清(即待测抗原)；包被抗体；加待测标本；加酶标抗体(HRP-抗甲肝IgG)；加酶底物；测定OD492。结果判断：待测标本OD值2.1阳性阴性对照OD值,7,感谢你的聆听,2019-11-12,2抗HAV-IgM的检测抗体捕获ELISA法方法：抗人链包被+待检血清(含抗HAV-IgM)+HAAg+HRP-抗HAV-IgG+酶底物测定OD492。结果判断：待测标本吸光度值2.1阳性阴性对照吸光度值临床意义：发病4周后，几乎全部患者抗HAV-IgM为阳性，用于甲肝诊断。检测抗HAV-IgG可用于流行病学调查。,8,感谢你的聆听,2019-11-12,9,感谢你的聆听,2019-11-12,（二）乙型肝炎的免疫学检测1.HBsAg的检测反向间接血凝试验方法：致敏红细胞(抗HBsAgRBC)患者血清(含HBsAg)凝集,10,感谢你的聆听,2019-11-12,2.抗HBs检测ELISA抑制法方法：抗HBs包被+HBsAg(已知浓度)+待测标本+HRP-抗HBs+酶底物目测或测定OD492结果判定：目测：阳性孔无色或浅黄阴性孔桔黄色OD值测定：0.5,待测孔OD值,阴性对照OD值,11,感谢你的聆听,2019-11-12,12,感谢你的聆听,2019-11-12,血中HBV标志物检查法及其阳性意义标志物常用检测法阳性意义HBsAgELISA夹心法正在或曾经感染抗-HBsELISA抑制法曾感染或疫苗注射抗-HBc(IgM类)抗体捕获ELISA发病期，慢性恶化期抗-HBc(IgG类)ELISA抑制法曾感染，急性恢复期HBeAgELISA夹心法,RPHAHBV复制，感染性强抗-HBeELISA抑制法，PHA急性感染，趋向恢复HBV-DNAPCR法HBV复制前S2AgELISA夹心法HBV复制抗-前S2ELISA抑制法提示预后良好,13,感谢你的聆听,2019-11-12,四、梅毒血清学检查1.未灭活血清反应素试验(unheatedserumreagintest,USR)玻片凝集法方法：病人血清和脂质抗原(心磷脂、卵磷脂和胆固醇混合物）各一滴玻片上混合振动4min观察结果结果判断：（阴性）无凝集（弱阳性）小凝集块(阳性)中或大凝集块,14,感谢你的聆听,2019-11-12,2.快速血浆反应素试验(rapidplasmareagintest,RPR)方法：病人血清RPR抗原(活性炭结合类脂质Ag)观察凝集颗粒或絮片结果判断：阴性无黑色凝集阳性明显黑色凝集颗粒或絮片临床意义：1.梅毒患者USR阳性者，7090；RPR阳性者，8095。2.某些麻风、SLE、硬皮病、类风湿性关节炎等也可出现USR假阳性。,15,感谢你的聆听,2019-11-12,3.荧光密螺旋体抗体吸收实验(FAT-ABS)方法：病人血清(56,30min)加非致病螺旋体抗原吸收滴加于抗原(梅毒螺旋体)片+FITC-抗人IgG荧光显微镜检查。结果判定：+阳性+可疑-阴性,16,感谢你的聆听,2019-11-12,17,感谢你的聆听,2019-11-12,五、获得性免疫缺陷综合征(acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS)的相关检测技术1.抗HIV抗体的检测：酶联免疫吸附试验（ELISA）明胶颗粒凝集实验(PA)免疫荧光检测法（IFA）免疫印记法（westernblot）放射免疫沉淀法（RIP）应用：、和用于筛查；和用于确定诊断。,18,感谢你的聆听,2019-11-12,2.HIV病毒检测：细胞培养分离病毒检测HIV抗原。3.细胞免疫功能：检测T细胞功能a.CD4T淋巴细胞计数b.迟发变态反应皮试c.有丝分裂原刺激反应检测B细胞功能a.循环免疫复合物b.免疫球蛋白,19,感谢你的聆听,2019-11-12,1.血清中抗HIV抗体检测间接免疫荧光法方法：淋巴细胞(感染HIV)涂片待检血清(16稀释FITC-抗人IgG观察结果结果判定：阳性胞浆出现弥漫性荧光,20,感谢你的聆听,2019-11-12,2.血清中抗HIV抗体检测免疫印记法方法：HIV-1蛋白抗原裂解物SDS-PAGE电泳转移至硝酸纤维膜+待测血清+HRP-抗人IgG+酶低物观察结果。结果判定：阴性无可见显色条带阳性