抗体工程制药.ppt

1疫苗,1.1免疫的基本概念1.2疫苗的定义和分类1.3疫苗的发展史1.4疫苗的种类1.5疫苗的生产,1.1免疫的基本概念,免疫是指机体的一种生理性保护功能。它包括机体对异物(病原生物性或非病原生物性的)的识别、排除或消灭等一系列过程。这种过程可能引起自身组织损伤，也可能没有组织损伤。概括起来说，免疫系统的功能主要表现为三方面，即防御功能、稳定功能及免疫监视作用，这些功能一旦失调，即产生免疫病理反应。（以毒攻毒）。免疫的概念归纳为：免疫是机体的一种保护性生理反应，其作用是“识别”和排除抗原性异物(如病原微生物，衰老的自身细胞，突变产生的异常体细胞等)，以维持机体内环境的平衡和稳定。免疫反应在正常的情况下对机体是有利的，但在某些情况下也可能造成不利的后果。,机体的抗感染免疫:抗感染免疫系统分先天性免疫和获得性免疫两大类。人工免疫分为:人工自动免疫，人工被动免疫；人工自动免疫：输入抗原,使人体产生抗体；人工被动免疫:输入免疫血清(含有特异性抗体),使人体获得一定的免疫力,可立即发挥免疫作用。,1.2疫苗的定义和分类,疫苗定义：凡具有抗原性接种于机体可产生特异的自动免疫力，可抵御感染病的发生或流行，总称为疫苗。根据用途，可将疫苗分成预防类，治疗类和诊断类三大类。“菌苗”：以细菌制备的制剂；“疫苗”：病毒及立克次氏体制备的制剂；“类毒素”：以细菌代谢产物毒素制备的制剂。,疫苗分类,（1）减毒活疫苗：将病原微生物（细菌或病毒）在人工训育的条件下，促使产生定向变异，使其极大程度地丧失致病性，但仍保留一定的剩余毒力、免疫原性和繁衍能力。如麻风腮疫苗。（2）灭活疫苗：细菌、病毒或立克次氏体的培养物，经化学或物理方法灭活制成。使之完全丧失对原来靶器官的致病力，而仍保存相应抗原的免疫原性。如甲肝疫苗。类毒素：是细菌在液体培养条件下，产生外毒素，经脱毒提纯等工艺制成。（3）多糖疫苗：由长链糖分子构成，如细菌的多糖荚膜。,（4）组分疫苗（亚单位疫苗）：从细菌或病毒培养物中，以生物化学和物理方法提取纯化有效特异性抗原制成的疫苗。如流感疫苗。（5）基因工程疫苗：用基因工程方法或分子克隆技术，分离出病原的保护性抗原基因，将其转入原核或真核系统使表达出该病原的保护性抗原，制成疫苗，或者将病原的毒力相关基因删除掉，使成为不带毒力相关基因的基因缺失苗。细分为多肽或亚单位疫苗。颗粒载体疫苗。病毒活载体疫苗。细菌活载体疫苗。基因重配疫苗。基因缺失疫苗。如乙肝疫苗。,（6）合成肽疫苗：仿特异性抗原的某些肽链或蛋白人工合成的抗原，现今还没有实用于人群的疫苗。（7）抗独特型抗体疫苗：抗独特型抗体（AId）是针对抗体分子V区上的特异抗原表位群（称为独特型）的抗抗体。AId与原来抗原的决定簇分子互为“内影像”关系，可模拟抗原结构和功能的作用，而可以作为一种新型疫苗。,（8）基因疫苗：基因免疫或称核酸免疫，是指将含有编码特定抗原蛋白质的基因序列克隆到合适的质粒载体上，制备成核酸表达载体，通过肌肉注射等方法将其导入机体内，通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白质，从而激发机体免疫系统产生针对外源蛋白质的特异性免疫应答反应。基因免疫过程中所使用的核酸表达载体称为基因疫苗，又称核酸疫苗。,1.3疫苗的发展史,18世纪，天花在英国流行；牛痘(是牛的天然轻性传染病，在牛的乳房及奶脐间会发生水泡和脓疱，人挤奶时，经伤痕传染给人的手指，历史经验：患过牛痘的人则不患天花。英国医生从挤奶工手上的痘疮中取出痘浆，接种于小儿的胳膊上，2个月后再接种人的天花脓疮浆，该小儿却未得天花。普及接种痘苗，1980年消灭了全世界的天花采用脊髓灰质炎疫苗，将实现消灭全球脊髓灰质炎的战略目标。,19世纪，德国人发明了细菌分离法；分此分离到致病菌1877年，法国人发现用减毒的鸡霍乱菌，炭疽菌注射动物后，这些动物能抵抗相应强毒菌的感染。人工减毒活疫菌的研究至今不衰。1886年，发现加热杀死的强毒猪霍乱杆菌，仍然具有良好的免疫原性。,白喉和破伤风等的致病因子不在菌体本身，而在于细菌毒素；这种毒素也可作为疫苗使用，但因毒性强，不能直接使用。1923年法国人用甲醛解毒，使这些毒素变成无毒而具有免疫原性的类毒素。,血清疗法：VonBehring发现，在已获得免疫的动物血清中含有免疫物质，把这种免疫血清移注给正常动物，使后者可获得对相应疾病的抵抗力。这是所谓的“血清疗法”。实际上这种免疫物质是“免疫球蛋白”。,1.4疫苗的种类,目前在我国应用的疫苗有几十种到上百种。最常用的有十种。新型的疫苗正在不断研制,(1)基础免疫用疫苗,世界卫生组织规定的全球儿童基础免疫用疫苗包括卡介苗、脊髓灰质炎疫苗、百白破三联疫苗和麻疹疫苗。卡介苗：采用无毒牛型结核杆菌制成，安全有效。婴儿出生后按计划接种，是预防结核病的一项可靠措施。脊髓灰质炎疫苗(简称脊灰糖丸)：脊灰糖丸是一种口服疫苗制剂，白色颗粒状糖丸，接种安全。婴儿出生后按计划服用糖丸，可有效地预防脊髓灰质炎(小儿麻痹症)。百白破制剂：是将百日咳菌苗，精制白喉类毒素及精制破伤风类毒素混合制成，可同时预防百日咳、白喉和破伤风。麻疹疫苗：麻疹疫苗是一种减毒活疫苗，接种反应较轻微，免疫持久性良好，婴儿出生后按期接种，可以预防麻疹。,(2)乙脑疫苗,用于预防流行性乙型脑炎(简称乙脑)。将流行性乙型脑炎病毒感染地鼠肾细胞，培育后收获病毒液冻干制成减毒活疫苗，用于预防流行性乙型脑炎。,(3)乙肝疫苗,用以预防乙型肝炎。目前我国使用的主要有乙型肝炎血源疫苗和乙肝基因工程疫苗两种，适用于所有可能感染乙肝者。乙型肝炎血源疫苗系由无症状乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者血浆提取的HBsAg经纯化灭活及加佐剂吸附后制成。基因工程乙肝疫苗是一种乙型肝炎亚单位疫苗，系采用现代生物技术将乙肝病毒中表达表面抗原的基因克隆进入酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来获取HBsAg亚单位，经纯化加佐剂吸附后制成。这种新一代乙肝疫苗具有安全、高效等优点。,(4)狂犬疫苗,用于狂犬病的预防。狂犬病是致死率达100的烈性传染病，及时、全程接种疫苗是预防此病的重要措施之一。目前我国应用的主要有国产普通浓缩疫苗、国产精制疫苗和法国进口“维尔博”疫苗三种，其中普通疫苗由于副反应过强、反应率较高而面临淘汰，而精制疫苗正逐步在我国得到推广，“维尔博”疫苗则是目前国内质量最好的一种，但价格略高。,(5)出血热疫苗,用于预防流行性出血热。分为单价疫苗和双价疫苗两种，前者可分别预防家鼠型出血热或野鼠型出血热，后者则对此两型出血热均有预防作用。出血热疫区10-70岁的人都应接种此疫苗。疫区的林业工人、水利工地民工、野外宿营人员等人员则更应接种。,(6)肺炎疫苗,用于预防肺炎球菌性疾病如肺炎等。目前国内应用的均为进口疫苗，其效果十分肯定。法国生产的肺炎球菌多糖疫苗“优博23”是最新和高度纯化的多价疫苗，对肺炎球菌性感染的总保护率高达75以上。应当接种此类疫苗的人有老年人、2岁以上的儿童、慢性病患者、免疫缺陷者、艾滋病感染者以及酗酒和长期吸烟者等。,(7)流脑疫苗,国内目前应用的是用A群脑膜炎球菌荚膜多糖制成的疫苗，用于预防A群脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎，接种对象为6个月至15周岁的儿童和少年。,(8)甲肝疫苗,用于预防甲型肝炎。将对人无害，具有良好免疫原性的甲型肝炎病毒减毒株接种于人二倍体细胞，培养后经抽提和纯化溶于含氨基酸的盐平衡溶液，用于预防甲型病毒性肝炎。,(9)腮腺炎疫苗,用于预防由腮腺炎病毒引起的流行性腮腺炎，即“痄腮”。我国生产的腮腺炎疫苗是减毒活疫苗，可用于8个月以上的儿童。另外还有进口“麻风腮”三联疫苗，除可预防腮腺炎外，还可预防麻疹、风疹。,(10)流感疫苗,用于预防流行性感冒。目前国内应用的有国产及德国、意大利产流感疫苗、法国进口的“防感灵”疫苗。接种对象主要是2岁以上所有人群，慢性心、肺、支气管疾病患者，慢性肾功能不全者，糖尿病患者，免疫功能低下者，镰状细胞贫血症患者等。,（11）新型疫苗,预防SARS疫苗预防禽流感疫苗预防甲型H1N1流感疫苗预防艾滋病疫苗,甲型流感疫苗,目前还没有甲型流感疫苗，相关的疫苗研发正在进行之中。当某种流感病毒正在流行时，针对这一病毒的流感疫苗中通常都含有已被杀死（即灭活）或毒性减小的流感病毒，这样就能使人体内产生针对该病毒的抗体，从而让免疫系统做好准备应对真正的流感病毒来袭。要想让疫苗达到最好的预防保护效果，疫苗中包含的病毒就必须与正在流行的病毒尽可能地接近。目前流行的甲型流感病毒是一种新型病毒，研制一种全新的流感疫苗通常需耗时至个月。,（12）组合疫苗,疫苗作为抗原往往组合起来使用。最常用的组合是白喉-破伤风-百日咳（DTP）；白喉-破伤风-百日咳-乙型肝炎（DTP-HepB）；五价疫苗：白喉-破伤风-百日咳-乙型肝炎-b型流感嗜血杆菌；麻疹-腮腺炎-风疹（MMR）,1.5疫苗的生产,1.5.1菌毒种及管理1.5.2疫苗的一般制造方法1.5.3乙型肝炎表面抗原生产工艺,1.5.1生物制品的菌毒种及管理,菌毒种意义：菌毒种是疫苗生产的根本；生产用菌毒种是对生物制品质量的直接保证；,菌毒种在管理上的分类,根据疾病流行，对人类危害的程度来分类。分为四类：一类：实验室感染机会多，感染后易发病，症状严重，甚至危及生命，传染性强，或国内未发现，或无有效方法防止的烈性传染病菌毒种，鼠疫耶尔森氏菌，霍乱菌，艾滋病毒；二类：感染后症状较重并危及生命：如结核分枝杆菌，森林脑炎病毒，各型肝炎病毒；三类：一般实验室采用一般技术能控制感染或有效预防的菌毒种，如葡萄球菌，链球菌，破伤风梭菌，乙型脑炎病毒等。四类：各种减毒，弱毒的菌种。,筛选生产用菌毒种的原则,安全性：死疫苗的菌毒种毒力高，生产过程必须彻底灭活，注意安全实验。对于减毒活疫苗，则选用对易感人群无致病力的弱毒菌种，毒种，免疫效果也要好。免疫原性：用其生产的制品注射人体后，有促使机体产生高浓度的保护性抗体，并具有持久的免疫性。遗传学稳定性：天然和诱变的都应稳定。无致癌性：菌种及其代谢物质都不应有致癌物质，人工诱变育种时，也不能用有致癌性的药物来筛选菌种。生产适应性：易于培养和生产；有效成分含量应当高。,生产用菌种的质量控制,菌种：来源与历史应清楚，由中国药品生物制品检定所分发或审批同意；菌种全面检定：包括形态特征，培养特性，血清凝集实验，毒力实验，免疫力实验，毒性实验，抗原性实验。毒种：,1.5.2疫苗的一般制造方法,疫苗制造一般疫苗(病毒或立次克体)的制备工艺流程图。(1)病毒的选择和减毒用于疫苗的病毒，只是其中的某些组分有抗原性，有的成分是有毒的，尽量通过传达培养，减去其毒性。毒种必须有特定的抗原性，能使机体诱发特定的免疫力，足以阻止有关的病原体的入侵或防止机体发生相应的疾病。毒种应有典型的形态和感染特定组织的特性，在传代的过程中，能长期保持其生物学特性。毒种易在特定的组织中大量繁殖；毒种在人工繁殖的过程中，不应产生神经毒素或其它毒素。如制备活疫苗，毒种在人工繁殖过程中，应无恢复致病力的现象。毒种不被其它病毒所污染。,（2）病毒的繁殖：方法有:动物培养，鸡胚培养，组织培养，细胞培养；现常用细胞培养。细胞:原代细胞和传代细胞，常用的细胞有:猴肾细胞，地鼠肾细胞和鸡胚细胞，人胚肺细胞。有些细胞长期传代，可能失去某些特性，故要限制传代次数。培养液:成分非常复杂，含有氨基酸，维生素，辅酶，核酸衍生物，脂类，碳水化合物，无机盐等。,（3）疫苗的灭活灭活的目的:破坏疫苗的毒力，但同时要减少疫苗免疫力的损失。灭活方法:甲醛溶液，酚溶液，掌握好温度和时间。(4)疫苗的纯化：去除存在的动物组织，降低疫苗接种后可能引起的不良反应。(5)冻干：疫苗一般只能在2-8保存12个月。冻干:如冷冻干燥法等。,微生物培养法疫苗制备工艺流程,病原菌分离菌株蛋白胨，肉浸液等原料检定配制灭菌菌种培养基减毒过滤减毒菌种培养毒素脱毒菌液类毒素纯化菌苗原液精制类毒素稀释杀菌检定吸附精制类毒素活菌苗死菌原液,以动物细胞培养流行性乙型脑炎病毒死疫苗制备工艺,地鼠肾剪碎，胰酶消化地鼠肾细胞悬液37,3天细胞培养液，pH7.0pH7.2单层细胞洗涤细胞，去除牛血清10-410-5浓度病毒感染细胞3234培养23天,收获病毒液（收二次）按1:2000加入甲醛22，8天灭活病毒液合并，安全及效力试验原液加入亚硫酸氨钠半成品分装成品检定(包括理化性质，无菌试验、安全试验，防腐剂、试剂及残余牛血清含量等）合格成品,微载体悬浮培养细胞的病毒生产工艺选VSV病毒来接种经微载体培养的敏感细胞，,VSV在方瓶贴壁细胞中的增殖（100mL方瓶，10mL培养基）待BHK21、BHK13、CHO-K1细胞长满单层，弃上清加入10-2VSV病毒悬液0.2ml，37吸附1小时，加病毒维持液培养20小时，于-30冻存，待测效价。VSV在微载体悬液培养的细胞中增殖。培养过程见后。,微载体培养的BHK21或BHK13、或CHO-K1细胞；34天后细胞密度已达1106细胞/mL；静置30分钟，尽量吸去原培养基；37培养；将10-2VSV病毒按50mL培养体积加入1mL病毒液于微载体细胞中；3750r/min搅拌5分钟；静置吸附1小时（每20分钟搅拌2分钟）；加入病毒维持液至原体积；37继续搅拌培养20小时；于-30冻融后，2000r/min低温离心10分钟；收集上清，即为VSV增殖的病毒液，分装冻存，待测效价,1.5.3基因工程疫苗,基因工程疫苗：如基因工程乙型肝炎疫苗用于乙肝的预防。构建活疫苗：可将外源DNA插入载体，该载体能在宿主内复制，得到减毒疫苗。构建多价疫苗：用痘苗病毒为载体，插入甲型肝炎病毒，EB病毒等外源基因而制成多价疫苗。以脊髓灰质炎I型病毒为载体，同种重组插入其它两型病毒基因，已构建成能产生I，II，III型免疫力的脊髓灰质炎三价疫苗。,例：乙型肝炎表面抗原生产工艺,功能:乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎病毒表面包被的抗原（一种蛋白质），是乙肝疫苗的有效成分，预先注射可使人产生抗体，故可预防乙肝病毒的感染。,质粒重组，克隆及生产工艺流程：,不同来源DNA的制备(含YEp-13，pYPH-203，pADR-1)；限制酶切割限制性DNA片段T4-DNA连接酶连接重组质粒(pYPH-SE)转化(用酵母细胞作宿主)转化细胞的培养，单菌落分离产HBsAg菌株的筛选(用放射性免疫法或酶标免疫法检测重组基因工程菌扩培，发酵细胞破碎，产物初步提取HBsAg的纯化(亲和吸附或层析法),重组质粒pYPH-SE的构建(图见生物工程P57),目的基因：来自乙型肝炎表成抗原基因pADR重组质粒pYPH-SE：酵母启动基因p+复制起始区+乙型肝炎表成抗原基因pADR。复制起始区来自：质粒YEp-13；启动基因p：来自酵母（重组于pYPH-203质粒中）；这一重组质粒中含有启动子，复制起始区，目的基因。重组质粒构建示意图（生物工程P57）。,转化及基因工程菌的筛选,用酵母菌做为宿主细胞，一般采用缺陷型菌株，以便于筛选出含有重组质粒的细胞。先培养酵母细胞，制成感受态细胞，在感受态细胞中加入重组质粒pYPH-SE，保温培养一段时间。将转化后的菌体直接涂布于某种选择性培养基的平板上，在一定温度下培养数天。挑选单菌落，反复多次培养和筛选，并用放射性免疫法或酶标免疫法检测产生HBsAg的菌株。,发酵及细胞破碎及产物提取,发酵：接种量：3%，10LYPD培养液，30度，搅拌通风培养24-30h；3000r/min离心收集菌体，洗涤菌体，再离心。提取：酵母收集物+缓冲液，超声波细胞破碎，离心取上清液，纯化（免疫亲和层析法）：产品为乙肝抗原，故可用抗HBs的抗体作为亲和吸附的吸附剂。先制成亲和层析吸附柱，将上清液上柱于层析柱，抗原与抗体结合，杂质先流出柱外，用pH2.8的甘氨酸-HCl缓冲液将抗原洗脱。收集。超滤浓缩，冻干得产品。,1.5.4核酸疫苗的生产,核酸疫苗也称为基因疫苗。核酸疫苗指被用作疫苗的带有编码外源蛋白质抗原基因的真核表达质粒（一般是基因重组的质粒）。核酸疫苗导入到动物细胞内，是通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗分为：DNA疫苗RNA疫苗,1.5.4核酸疫苗的生产,核酸疫苗的制备工艺：核酸疫苗的构建（重组质粒的构建）；转化；重组基因工程菌的培养菌体收集，裂解；重组质粒的抽提，分离，纯化，浓缩质量检验（浓度测定，纯度测定，限制性内切酶图谱分析）,核酸疫苗的接种方法,直接注射法：裸质粒DNA或经脂质体包裹的裸质粒DNA直接从肌肉，皮肉，皮下，黏膜，静脉内注射。包裹DNA的脂质体能与组织细胞发生膜融合，而将DNA摄入。减少核酸酶对DNA的破坏。基因枪轰击法：将质粒DNA包被在金微粒子表面，用基因枪将包被DNA的金微粒子高速穿入组织细胞。细菌或病毒携带法：选择一种容易进入某组织器官的细菌或病毒，去除其繁殖基因，形成繁殖缺陷菌株，将质粒DNA转化到该细菌或病毒中，将重组的细菌或病毒转入到组织器官中。由于细菌或病毒不能繁殖，细菌或病毒在体内裂解释放出DNA。,1.5.4核酸疫苗的生产,2抗体,抗体（antibody,Ab)是B细胞识别抗原后增殖分化为桨细胞所产生的一种蛋白质，主要存在于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合，具有免疫功能。免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。抗体和免疫球蛋白的关系:抗体都是免疫球蛋白，并非所有免疫球蛋白都具有抗体活性。,2.1免疫球蛋白的基本结构,四肽链结构；重链区和轻链区；所有抗体都具有两条长链（重链，H）和两条短链（轻链，L）；四条链通过二硫键构成Y形。氨基端和羧基端。,免疫球蛋白的分子结构,(1)根据重链分类：根据重链靠近羧基末端氨基酸组成及排列顺序不同，将重链分为：、根据重链组成不同，将Ig分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE(2)根据轻链分型：、型天然Ig分子中，重链同类，轻链同型,重链与轻链,根据氨基酸排列顺序的不同分为：可变区（V区）：氨基酸组成、排列顺序变化较大恒定区（C区）：氨基酸数量、种类、排列顺序及含糖量都比较稳定重链和轻链都有可变区和恒定区（VL,VH,CL,CH)可变区（V）：对于不同的抗体，其重链氨基端和四分之一或五分之一与轻链氨基端的二分之一的氨基酸的序列会发生大的变化，称为可变区；V区用于只别并结合抗原；恒定区（C）：除可变区外的其余部分。C区构成抗体的框架，并介导次级反应，同时决定抗体的抗原性。,可变区与恒定区,超变区（HVR）轻链：24-34、50-56、89-97重链：31-35、50-65、95-102框架区（FR）,VH和VL:识别和结合抗原CH和CL:同种异型的遗传标志CH2:补体C1q结合位点，IgG可通过胎盘CH3/CH4:与多种细胞表面的FcR结合(免疫调理,I型超敏反应),各功能区的作用,2.2抗体的分类,根据生产方法和组成：多克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体根据存在的位置：分泌型Ig(sIg)膜型Ig(mIg),抗体分类(4)免疫血清与抗毒素：用细菌，病毒，类毒素，毒素等免疫注射动物或人体，即经特定的抗原对动物免疫后，采其血浆分离血浆或血清后制成的抗细菌，抗病毒，抗毒素的超免疫血清，经精制而成。(5)血液制剂：由人的血液分离提取的各种血液蛋白成分而制成；(6)免疫调节剂：包括各种细胞因子(干扰素，白细胞介素，集落刺激因子，红细胞生成素，肿瘤坏死因子)及转移因子，胸腺肽及免疫核糖核酸。诊断制品：(7)诊断试剂：包括用于体外免疫实验诊断的各种诊断抗原，诊断血清和体内诊断的制品等。,单克隆抗体（monoclonalantibody,mAb）：由一个B细胞克隆产生的、针对某一特定抗原决定簇的高度特异性抗体；多克隆抗体：多个抗原决定基机体多种抗体的混合物基因工程抗体:,2.3人工制备的抗体,2.3.1单克隆抗体,针对某一抗原的一个抗原决定簇的抗体；单克隆来源，特异性高，化学上纯的同源抗体。正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌抗体的能力，但不能在体外长期培养，瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术。,杂交细胞,骨髓瘤细胞和脾细胞融合后，可产生三类融合杂交的细胞：骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞脾细胞-脾细胞骨髓瘤细胞-脾细胞（即可增殖，又能分泌抗体）,单抗制备步骤,抗原的制备；动物的选择；免疫：如脾内一次免疫（在脾内注入抗原，一定时间后，取脾细胞，单细胞）骨髓瘤细胞培养：融合；培养可分泌特异性抗体杂交瘤细胞的筛选：,人单克隆抗体制备难题,人-人杂交瘤技术：由于伦理学的问题，难于获得人的B淋巴细胞的获得是不允许的，且人的骨髓瘤细胞性能不好，技术上仍未突破；人-鼠杂交瘤技术：小鼠的骨髓瘤细胞和人的B淋巴细胞融合所获得的杂交瘤，可产生人的单克隆抗体。并可在体外长期产生。关键问题是这种杂交瘤在体外传代8周至6个月后，停止分泌人的单克隆抗体。,2.3.2多克隆抗体,用抗原免疫动物后所获得的免疫动物的血清均为多克隆抗体。通常一个抗原分子具有多个抗原决定簇，不同的抗原决定簇能刺激不同的B淋巴细胞而产生针对不同决定簇的抗体。这种由不同的B淋巴细胞克隆所产生的抗体称为多克隆抗体。抗原决定簇：与抗体或淋巴细胞上受体特异结合的抗原部分（分顺序决定簇，即多肽链上相邻的氨基酸构成；构象决定簇，肽链上相距较远的一些氨基酸残基通过分子折叠而成的特定结构）。,单克隆和多克隆抗体的比较和用途,特异性,敏感性,均一性,McAb,PcAb,低,差,无,高,强,有,1、用于免疫学检测，辅助临床诊断,2、McAb用于亲和层析，分离微量可溶性抗原,3、标记的McAb用于基础研究，了解细胞分化等,4、制备生物导弹用于肿瘤、移植等的临床治疗。,应用：临床检测、抑制器官移植排斥、治疗自身免疫疾病、生物导弹等,2.3.3基因工程抗体和抗体工程,将制备单克隆抗体的细胞工程技术与生产重组分子的基因工程技术和蛋白质工程技术相结合；对编码蛋白质基因加工改造，重新组装，转染适当的受体细胞后表达出抗体分子。这种经基因重组的抗体称为基因工程抗体，或重组抗体（recombinantantibody)抗体研究进展3个阶段：1890年白喉抗毒素，多克隆抗体；1975年杂交瘤技术单克隆抗体；1994年基因工程抗体；,基因工程抗体种类,2.3.3.1噬菌体抗体库技术的基本方法,1）获取目的基因2）抗体库技术的载体3）淘筛4）表达与鉴定,噬菌体抗体库技术的特点,1）模拟天然全套抗体库2）避开了人工免疫和杂交瘤技术3）可获得高亲和力的人源化抗体,2.3.3.2基因工程抗体表达,1）原核细胞表达2）真核细胞表达3）转基因植物表达4）转基因动物表达,2.3.3.3基因工程抗体的生产技术,从杂交瘤细胞或