（植物病理学专业论文）红海榄赤斑病病原菌鉴定及其生物学特性研究.pdf

红海榄赤斑病病原菌鉴定及其生物学特性研究 捅晏 本文对湛江市麻章区、东海区和霞山区3 个红树林保护区的红树叶斑病进行初步 调查，着重对分离自红海榄赤斑病同一病斑上的两株病原菌p i 1 和p i i 3 进行鉴定和生 物学特性研究，主要结果如下： ( 1 ) 病害发生情况调查结果表明，该地区红树叶斑病尚未造成严重危害，但病害 仍有发生，主要危害卤蕨( a c r o s t i c h u ma u r e u m ) 、秋茄( k a n d e l i ac a n d e l ) 和红海榄 ( r h i z o p h o r as t y l o s a ) 。病原菌分离鉴定结果表明，炭疽菌( c o l l e t o t r i c h u ms p ) 和拟 盘多毛孢菌( p e s t a l o t i o p s i ss p ) 是主要病原菌。致病性与寄主范围测定结果发现，这 些病原菌除了能对原寄主致病之外，还能对其他部分红树植物致病，但不能对非红树 植物致病。 ( 2 ) 红海榄赤斑病病原分离结果表明，同一病斑上分离到菌落形态特征存在较大 差异的两株病原菌( p i l 和p i i 一3 ) ，其中在p d a 平板培养基上菌株p i 一1 的菌落呈灰白 色，花瓣状，气生菌丝不多，菌落背面呈黑色轮纹状；菌株p i i 3 的菌落白色，气生菌 丝较多，呈绒毛状，菌落背面呈橘黄色轮纹状；同时，菌株p i 1 分生孢子的长度l i , p i i 3 的略短，中间色胞的颜色l i , p i i 3 略深。经k o c h 法则验证，p i i 3 致病性l p , p i 一1 稍强，两 菌株均具有一定的寄主专化性。两菌株i t s 序列分析表明，p i 1 菌株的i t s 序列长度为 5 6 5 b p ( g e n b a n k 登录号：e u 6 4 4 7 5 4 ) ，p i i 3 菌株的i t s 序列长度为5 7 6 b p ( g e n b a n k 登 录号：e u 6 4 4 7 5 5 ) ，经b l a s t 分析，与两菌株的i t s 序列同源性达9 8 1 0 0 的菌株均 为拟盘多毛孢，并由此进一步用n j 法构建系统发育树。根据韦继光( 2 0 0 5 ) 界定的标 准，基于形态特征与系统发育树，本文认为，p i 一1 和p i i 3 两菌株虽形态上存在差异， 但均同属于异色拟盘多毛孢( p e s t a l o t i o p s i sv e r s i c o l o r ) 。 ( 3 ) p i 一1 和p i i 3 两菌株生物学特性测定结果表明，温度对两菌株营养生长的影响 基本一致，生长温度范围均为1 0 3 2 ，最适均为2 5 。但温度对两菌株产孢的影响 存在差异，p i 1 产孢温度范围为15 3 2 ，最适2 8 ：而p i i 3 产孢温度范围为1 5 3 0 ， 最适2 0 。温度对两菌株孢子萌发的影响基本相同，萌发温度范围均为1 0 - 3 5 。c ；最 适均为2 5 2 8 ，1 2 小时后萌发率几乎为1 0 0 。 p h 值对两菌株营养生长的影响基本相似，生长的p h 值范围均为3 o 1 0 9 ，最适 均为p h 4 0 。p h 值对两菌株产孢的影响存在差异，两菌株产孢p h 值范围虽均为 3 0 1 0 0 ，但产孢的适宜p h 值差别较大，p i 1 产孢最适p h 为5 1 ，而p i i 3 为p h 9 0 。p h 值对两菌株孢子萌发的影响相似，孢子萌发范围均为p h 2 5 8 0 ，最适为p h 3 0 。 光照对p i 1 和p i i 一3 菌株的营养生长、产孢量及孢子萌发有不同的影响，其中p i 一1 菌株的营养生长和产孢特性对光照不敏感，但其孢子萌发对光照敏感，孢子萌发率在 2 4h d 黑暗条件下显著高于在2 4h d 光照条件下。对于p h 3 菌株，2 4h d 完全黑暗明显 有利于其营养生长，2 4h d 光照明显有利于其产孢，但不同光照处理对其孢子萌发的 影响不显著。 培养基及不同碳氮源对菌株p i - 1 和p i i 3 营养生长和产孢影响测定结果表明，两菌 株均能在供试的8 种培养基上生长，含有红树植物浸出液的培养基更有利于两菌株的 营养生长。除柠檬酸三钠之外，两菌株均能利用其余供试的碳氮源。其中，p i 1 菌株 营养生长的最佳碳源为甘露醇，最佳氮源为浓缩酵母浸出粉；产孢的最佳碳源为葡萄 糖或蔗糖，最佳氮源为硝酸铵或天门冬酰氨。而p i i 一3 菌株营养生长的最佳碳源为甘露 醇，最佳氮源为硝酸钠；产孢最佳碳源为麦芽糖，最佳氮源为硝酸铵。 关键词：红树；叶斑病；异色拟盘多毛孢；鉴定；生物学特性 i d e n t i f i c a t i o na n d b i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c sa n a l y s i so f t h e p a t h o g e no f l e a f s p o to fr h i z o p h o r as t y l o s a a b s t r a c t t h em a n g r o v e sl e a fs p o ti nz h a n j i a n gc i t y ，i n c l u d i n gm a z h a n g ，d o n g h a ia n dx i a s h a n d i s t r i c t s w e r ep r e l i m i n a r i l yi n v e s t i g a t e d a n dt h es t r a i n sp i 一1a n dp i i 3i s o l a t e df r o mt h e s a m el e a fs p o to fr h i z o p h o r as t y l o s aw e r ei d e n t i f i e da n dt h eb i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i e sw e r e s t u d i e di nt h i sp a p e r ( 1 ) t h er e s u l t so ft h ei n v e s t i g a t i o no fm a n g r o v e sd i s e a s e ss h o w e dt h a tt h e r ew e r e s o m el e a fs p o td i s e a s e si nt h ea r e aa l t h o u g ht h ec i r c u m s t a n c e sw e r en o ts e r i o u s a c r o s t i c h u ma u r e u m ，k a n d e l i ac a n d e la n dr h i z o p h o r as t y l o s aw e r et h em a i nm a n g r o v e t r e e sw h i c hw e r ei m p e r i l e db yl e a fs p o td i s e a s e s t h er e s u l t so ft h ep a t h o g e n s i s o l a t i o n a n di d e n t i f i e a t i o nr e v e a l e dt h a tc o i l e t o t r i c h u ms p a n dp e s t a l o t i o p s i ss p w e r et h em a i n p a t h o g e n s i nt h et e s to fp a t h o g e n i c i t ya n dh o s tr a n g e ，i tw a sf o u n dt h a ts o m es p e c i e so f m a n g r o v e sb e s i d e st h e i ro r i g i n a lh o s t sc o u l db e i n f e c t e d b yt h o s ep a t h o g e n s ，b u t n o n m a n g r o v e sc o u l dn o tb ei n f e c t e d ( 2 ) t h es t r a i n sp i 1a n dp i i 一3 w h i c hc o u l da l s ob ei s o l a t e df r o mt h es a m es p o to f r h i z o p h o r as t y l o s a ，w e r eg r e a t l yd i f f e r e n tb e t w e e nt h e i rc o l o n i e sc h a r a c t e r s t h ec o l o n yo f s t r a i np i 一1o np d aw a sp e t a l l i k e ，o f f - w h i t e ，l i t t l ea e r i a lh y p h a ，a n db l a c kr i n gi nt h er e a r a n dt h ec o l o n yo fs t r a i np i i 3o np d aw a sv i l l o u s ，w h i t e ，m u c ha e r i a lh y p h a e ，a n do r a n g e r i n gi nt h er e a r t h ec o n i d i ao fp i 一1w e r es l i g h t l ys h o r t e rt h a np i i 3 a n dt h ec o l o u ro ft h e c o n i d i a i n t e r m e d i a t ec e l l so fp i 1w e r ed a r k e rt h a np i i 3 a c c o r d i n gt ot h ek o c hr u l e i t t e s t e dt h a tt h ep a t h o g e n i c i t yo fp i i 3w a sab i ts t r o n g e rt h a np i 1 a n db c i t hh a dc e r t a i nh o s t s p e c i f i c i t y t h ea n a l y s i so fr i b o s o m a ld n a i t ss e q u e n c e ss h o w e dt h a tt h el e n g t ho fs t r a i n p i 1w a s5 6 5b p ，w h i c hg e n b a n ka c c e s s i o nn u m b e rw a se u 6 4 4 7 5 4 ，a n dt h es t r a i np h 3 w a s5 7 5b p g e n b a n ka c c e s s i o nn u m b e rb e i n ge u 6 4 4 7 5 5 t h er e s u l t so fb l a s ts h o w e d m a tt h et w os t r a i n s i t ss e q u e n c e sw e r eu pt o9 8 - 1 0 0 h o m o l o g yw i t ho t h e ri t s s e q u e n c e so fp e s t a l o t i o p s i s t h e nt h ep h y l o g e n e t i ct r e eo fp e s t a l o t i o p s i ss p p w a sm a d e w i t hn jm e t h o d a c c o r d i n gt ot h er e d e l i m i t e ds t a n d a r d sm a d eb yw e ij i g u a n g ( 2 0 0 5 ) t h e t w os t r a i n sp i 1a n dp i i 3w e r ea l li d e n t i f i e da sp e s t a l o t i o p s i sv e r s i c o l o rb a s e do n m o r p h o l o g i c a lc h a r a c t e r sa n dp h y l o g e n e t i ct r e e ，t h o u g ht h e r ew e r es i g n i f i c a n td i f f e r e n c e s b e t w e e nt h e i rc o l o n yc h a r a c t e r s ( 3 )t h et e s t so fb i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i e ss t u d ys h o w e dt h a tt h ee f f e c t so f t e m p e r a t u r eo nm y c e l i a lg r o w t ho ft h et w os t r a i n sp i 1a n dp i i 。3w e r ea l m o s tt h es a m e t h e yc o u l da l lg r o wb e t w e e n10a n d3 2 w i t ho p t i m u mo f2 5 b u tt h ee f f e c t so f t e m p e r a t u r eo nc o n i d i a lf o r m a t i o no ft h et w os t r a i n sw e r ed i f f e r e n t t h ec o n i d i ao fp i 1 c o u l db ef c i r m e db e t w e e n15a n d3 2 w i t ho p t i m u mo f2 8 w h i l ep i i 一3b e t w e e n15a n d 3 0 w i t ho p t i m u mo f2 0 t h ee f f e c t so ft e m p e r a t u r eo nc o n i d i a lg e r m i n a t i o no ft h et w o s t r a i n sw e r ea l m o s tt h es a m e t h e yc o u l da l lg e r m i n a t eb e t w e e n10a n d3 5 w i t h o p t i m u mo f2 5 - 2 8 t h ec o n i d i a lg e r m i n a t i o nr a t ec o u l d r e a c hlo o a f t e r12h o u r sa tt h e o p t i m u mt e m p e r a t u r e t h ee f f e c t so fp ho nm y c e l i a lg r o w t ho ft h et w os t r a i n sp i 1a n dp i i 一3w e r ea l m o s t s i m i l a r t h e yc o u l da 1 1g r o wb e t w e e np h 3 0 - 10 9w i t ho p t i m u mo fp h4 0 t h ee f f e c t so f i i i p ho nc o n i d i a lf o r m a t i o no ft h et w os t r a i n sw e r ed i f f e r e n t a l t h o u g ht h e i rc o n i d i ac o u l da l l b ef o r m e db e t w e e np h 3 o 1 0 0 ，t h eo p t i m u mw a sp h 5 0f o r p i 1w h i l ei t sp h 9 0f o rp i i 3 t h ee f f e c t so fp ho nc o n i d i a lg e r m i n a t i o no ft h et w os t r a i n sw e r es i m i l a r t h e yc o u l da l l g e r m i n a t eb e t w e e np h 2 5 - 8 0w i t ho p t i m u mo f p h 3 0 t h ee f f e c t so fl i g h to nm y c e l i a lg r o w t h c o n i d i a lf o r m a t i o na n dc o n i d i a lg e r m i n a t i o no f t h et w os t r a i n sp - 1a n dp i i 3w e r ed i f f e r e n t t h ec o n i d i a lg e r m i n a t i o nb u tn o tt h em y c e l i a l g r o w t ha n dc o n i d i a lf o r m a t i o no fs t r a i np i 1w a ss e n s i r i v et ot h el i g h t i t se o n i d i a l g e r m i n a t i o nr a t ew a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e ri n2 4h dd a r k n e s st h a nt h a ti n2 4h d1 i g h t t h e s i t u a t i o no f2 4h dd a r k n e s sw a sm u c hb e t t e rf o rm y c e l i a lg r o w t ho fs t r a i np i i 3 a n dt h e2 4 h dl i g h tw a so b v i o u s l yb e t t e rf o ri t sc o n i d i a lf o r m a t i o n b u tt h ee f f e c t so f1 i g h to ni t s c o n i d i a lg e r m i n a t i o nw a sn o ts i g n i f i c a n t t h ee f f e c t so fc u l t u r em e d i a , c a r b o na n dn i t r o g e ns o u r c e so nm y c e l i a lg r o w t ha n d c o n i d i a lf o r m a t i o no ft h et w os t r a i n sp i 一1a n dp i i 一3w e r ea l s os t u d i e d i tw a sf o u n dt h a tt h e e i g h te x p e r i m e n t a lc u l t u r em e d i ac o u l da 1 1b eu t i l i z e db vp i 一1a n dp i i - 3 t h ec u l t u r e m e d i u l t lw h i c hc o n t a i n e dm a n g r o v e s l e a c h a t ew a sb e t t e rf o rt h et w os t r a i n s m y c e l i a l g r o w t h a 1 1t h eo t h e re x p e r i m e n t a lc a r b o na n dn i t r o g e ns o u r c e sc o u l db eu t i l i z e db vp i 一1 a n dp i i 一3 e x c e p tt r i s o d i u mc i t r a t e m a n n i t o lw a st h eb e s tc a r b o ns o u r c ea n dy e a s t e x t r a c t i o nw a st h eb e s tn i t r o g e ns o u r c ef o rm y c e l i a lg r o w t ho fp i 1 a n dd g l u c o s eo r s u c r o s ew a st h eb e s tc a r b o ns o u r c ea n da m m o n i u r nn i t r a t eo rd l a s p a r a g i n ew a st h eb e s t n i t r o g e ns o u r c ef o rc o n i d i a lf o r m a t i o no fp i 一1 w h i l eg l y c e r o lw a st h eb e s tc a r b o na n d s o d i u mn i t r a t ew a st h eb e s tn i t r o g e nf o rm y c e l i a lg r o w t ho fp l 一3 a n dm a l t o s ew a st h eb e s t c a r b o na n da m m o n i u mn i t r a t ew a st h eb e s tn i t r o g e nf o rc o n i d i a lf o r m a t i o no fp i i 一3 k e yw o r d s ：m a n g r o v e s ，l e a fs p o t ，p e s t a l o t i o p s i sv e r s i c o l o r ，i d e n t i f i c a t i o n ，b i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s - i v 广东海洋大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得 的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个 人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承 担。 作者签名：犹。j 玖2 0 。年6 月、1 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于l 、保密口，在年解密后适用本授权书。 2 、不保密d 。 ( 请在以上相应方框内打“”) 作者签名：诒f l 咳 导师签名：( 1 巧( ，7 2 0 7 年 2 0 口7 年 6 月v - q q b 月2 二日 广东海洋大学硕士学位论文 1 文献综述 1 1 红树植物及其病害研究概况 1 1 1 红树植物的作用 红树林是生长在热带、亚热带海岸潮间带的一种可海陆两栖的特殊木本植物群 落，由红树科、海桑科、紫金牛科、使君子科等植物共同组成( 林鹏，1 9 9 7 ) 。据报 道，全球真红树植物有2 0 科2 7 属7 0 种，其中我国1 2 科1 6 属2 7 种和1 个变种( 林 鹏，2 0 0 1 ) 。s p a l d i n g ( 1 9 9 7 ) 估计，全球红树林面积约1 8 0 0 万公顷，其中有4 1 4 分布在东南亚地区，2 3 5 分布在印度尼西亚地区。我国红树林面积约1 5 万公顷( 张 忠华等，2 0 0 6 ) ，主要分布在海南、广西、广东、福建、香港、台湾等沿海地区。广 东省红树林是中国红树林分布广、面积大、种类最丰富的地区之一，包括真红树9 科1 2 属1 4 种( 林鹏，2 0 0 1 ) ，红树林面积达到o 3 8 万公顷( 张忠华等，2 0 0 6 ) ，其 中湛江市红树林保护区面积约占全省的7 9 ( 林康英等，2 0 0 6 ) ，是广东省最大的红 树林保护区，包括有广东省所有真红树品种( 陈粤超，2 0 0 6 ) 。 红树林是世界珍稀植物群落，由于红树林生长于陆地和海洋交界，具有两大生 态系统的特性，具有特殊的意义：在宏观方面，红树林具有重要的生态功能，在微观 方面，红树植物及其共附生微生物具有潜在的药用价值。 ( 1 ) 生态功能：红树林具有防风御浪、造陆护堤、净化水质、保护生物多样性 等生态功能( 谢瑞红等，2 0 0 5 ；林益明等，2 0 0 1 ) 。红树林茂密的林冠和其发达的支 柱根可以抗风消浪；交错密集的根系可截留沿海碎屑，有利于悬浮颗粒的沉降，促进 土壤形成，保护堤岸；同时还可以阻止沿海生活垃圾的排放，过滤陆地河流带出的污 染物质，起到净化水质的作用。红树林还是许多鸟类、鱼虾蟹贝类等生物栖息和觅食 的地方，对沿海生物的多样性起到了保护作用。除此之外，红树林还具有社会教育和 旅游景观价值。 ( 2 ) 药用价值：红树林是海洋药物开发利用的丰富资源。红树林生态系统处于 海洋与陆地的交界面，周期性地遭受海水的浸淹，这种特殊的生境使红树植物具有特 殊的生理代谢功能，许多研究表明，红树植物及其共附物微生物具有产生多种生物活 性物质的能力，这些结构新颖、作用稳定的化合物为海洋药物的开发提供了丰富多样 的分子模型( b a n d a r a n a y a k e ，2 0 0 2 ；赵亚等，2 0 0 4 ；林鹏等，2 0 0 5 ；w e n e ta 1 ，2 0 0 8 ) 。 红树植物作为民间用药己有较长的历史，在我国几乎一半的红树品种具有民间药 用价值，许多来自于红树林植物的天然成分具有止血、抗癌、抗菌等生物活性( 林鹏 红海榄赤斑病病原菌鉴定及其生物学特性研究 等，2 0 0 5 ) 。早在1 8 7 4 年，中国药材中就有红树植物及其药用价值的记载，其中 老鼠筋因含有生物碱、黄酮、三萜及三萜皂苷、木脂素、苯乙醇苷类等丰富的生物活 性物质而成为一种非常重要的药用红树植物( 彭兴，2 0 0 4 & 2 0 0 5 ) 。印度、泰国等从 上世纪8 0 年代就已经开始对老鼠筋的化学成分进行较系统的研究( a g s h i k a re ta 1 ， 1 9 7 9 ；k o k p o l ，1 9 8 5 ) 。印度学者b b a u 等( 2 0 0 1 ) 研究认为该植物叶7 0 乙醇提取 物具有抗氧化活性，可保护大鼠的肝免受损害。秋茄( k a n d e l i ac a n d e l ) 也在民间长 期作为药物，具有收敛、抗菌的效果。李保才等( 2 0 0 2 ) 从秋茄叶片中提取出了黄酮 类化合物一芦丁，可用于高血压以及动脉硬化的辅助治疗( 姚新生，2 0 0 1 ) 。秋茄树 皮中含有大量的鞣质，是一类分子较大的多酚化合物，在医药上可作为收敛、止泻、 止痢剂，还可作为重金属和生物碱的解毒剂，同时还能使微生物原生质凝固而具有抗 菌作用( 唐得时，1 9 8 6 ) 。 红树林微生物资源的研究是红树林海洋药物研究不可缺少的部分，红树林特殊 的生境培养了大量具有特殊代谢产物的微生物，微生物活性物质的开发具有产业化优 势，因此红树植物共附生微生物特别是内生菌的研究成为国内外研究的热点( 林鹏等， 2 0 0 5 ；林爱玉等，2 0 0 6 ；周颖等，2 0 0 8 ) 。p o e h 等曾于1 9 8 9 - 1 9 9 1 年问对夏威夷红树 林内生真菌进行研究，从中分离到具有显著抗菌活性的物质a u r a n t i c i n s a ，其可抑制 枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌生长( p o c he ta 1 ，1 9 8 9 & 1 9 9 1 ) 。我国中山大学林永 成、周世宁等领导的研究组也开展了有关红树林共附生微生物代谢产物的研究( 林永 成，2 0 0 3 ) ，他们筛选了一批能产生活性物质的红树内生真菌，如菌株n o 1 4 0 3 是产 灰黄霉素的新型菌株，其发酵液粗提物有明显的抗菌活性，对酵母菌和霉菌均有抑制 作用( 姜广策等，2 0 0 0 ) ；菌株7 3 2 # 可产生具有抗癌活性的新化合物e n n i a t i ng ( 游 剑岚等，2 0 0 6 ) ；菌株k 3 8 号培养液对癌细胞h e p g 2 具有一定的抑制率，并能从培 养液中分离到首次从自然界中发现的( 。) - b y s s o c h l a m i ea c i d ( 李春远等，2 0 0 7 ) 。放线 菌和内生细菌也是红树林共附生微生物研究的热点，闰莉萍等( 2 0 0 5 ) 从海南省文昌 市红树林1 0 m 深的海泥中分离到放线菌0 6 1 6 1 6 7 ，研究表明其发酵菌丝体的丙酮浸提 液表现出较强的细胞毒活性。廖文彬等( 2 0 0 4 ) 也从红树林放线菌中获得两个具有抑 菌活性的组分，并初步确定为核苷类抗生素。关于红树内生细菌，陈振明( 2 0 0 6 ) 等 对不同红树根茎叶等组织内生细菌进行了研究，分离结果表明，红树体内含有大量内 生细菌，其中约有4 0 以上的菌株对多种重要植物病原菌，如青枯病菌( r s o l a n a c e a r u m ) 、疫霉病菌( p h y t o p h t h o r as p ) 及枯萎病菌( f u s a r i u mo x y s p o r u m ) 等， 具有较强拮抗作用，有的内生细菌可以在辣椒、番茄等陆生植物体内及其根际土壤中 长期定殖，并对植物具有良好的促进生长和防病作用( 张兴锋等，2 0 0 7 ) 。 综上所述，红树植物及其共附生微生物是活性物质的一个潜在的、丰富的资源库， 具有十分诱人的研究和应用价值，值得深入探讨。与此同时也应该关注到，对于世界 珍稀的红树林，保护工作是其进一步被研究和开发的前提和保证。 2 广东海洋大学硕士学位论文 1 1 2 红树林病害研究现状 随着人们对红树林生态、社会和经济效益的深入研究，红树林的保护工作也日益 受到了国内外的广泛关注。近年来，由于围海养殖、生活污水排放等人为因素和台风、 温室效应等自然环境条件的影响，有些地区的红树林受到了不同程度的破坏，虽然红 树具有一定的抗病能力，但红树林病害仍有发生，病害是危害红树健康的自然灾害之 一，国内外也有较多报道。 全球范围内的红树林病害发生与危害报道主要集中在澳大利亚、美国、德国、日 本、泰国、印度尼西亚、新加坡和香港等国家和地区( 丁班，2 0 0 7 ) ，国外对红树林 病害的研究已有较长的历史，早在1 9 2 0 年波多黎各岛就已经有了红树叶斑病的报道 ( s t e v e n s ，1 9 2 0 ) 。不同国家地区其红树林病害发生的严重程度不同，k a t h i r e s a n ( 2 0 0 0 ) 报道印度西南部p i c h a v a r a m 红树林区约有1 2 的红树发生叶部病害；a n d r e w 等 ( 2 0 0 0 ) 通过对波多黎各西南部红树林8 个观测区的病害调查发现，该地区红树发生 了严重的顶梢枯死，病原菌的致病性测定结果表明，其林间致病率达到3 3 。t e a s 等( 1 9 8 2 ) 报道在非洲冈比亚河区的红树林因发生流行性顶梢枯死而导致5 0 - 7 0 红 树在3 5 年间死亡。 我国红树林病害的报道，相对较晚，较早发现于上世纪八十年代林鹏对福建和浙 江地区秋茄茎腐病的报道( 林鹏，1 9 9 0 ) ，随后海南、广东、广西等地区均有红树林 病害的报道。据李云( 1 9 9 6 & 1 9 9 7 ) 调查，海南、广东红树林有8 种真菌病害，其中 海桑( s o n n e r a t i ac a s e o l a r i s ) 幼苗的灰霉病发生严重，发病株率有时达到8 0 ，病苗 感病后2 3 天开始落叶，一周后死亡。庞林( 1 9 9 9 ) 报道广西英罗湾有7 0 的红树 林幼苗感染了锈病，灾情严重；黄泽余和周志权等( 1 9 9 7 a & 2 0 0 1 ) 于1 9 9 6 - 1 9 9 8 年 通过对广西沿海主要红树林的病害调查，发现该地区红树受到1 4 属2 6 种病原真菌的 危害，不同红树的受害程度不同，其中受害最严重的是海漆( e x c o e c a r i aa g a l l o c h a ) ， 平均病株率为2 8 3 ，受害较轻的是秋茄( k a u d e l l ec a n d e l ) ，平均病株率为3 1 ； 炭疽病菌是主要危害病原菌之一( 黄泽余等，1 9 9 7 b ) ；这些红树病害的危害特点是： 在高潮地带分布的病害种类多于低潮地带的，以河口最多；寄主受侵染的部位主要集 中在树冠上部。 红树林病害按其发病部位来分，包括有叶部病害、枝梢病害和根茎病害。其中， 叶部病害是红树林的最常见病害，以真菌病害为主；枝梢病害次之，有真菌病害也有 细菌病害；根茎病害很少见。 ( 1 ) 叶部病害：包括有炭疽病、灰斑病、褐斑病、赤斑病、煤污病、煤烟病等， 主要是真菌病害，病原菌种类主要有拟盘多毛孢菌( p e s t a l o t i o p s i ss p ) 、炭疽菌 ( c o l l e t o t r i c h u ms p ) 、交链孢菌( a l t e r n a r i as p ) 、小煤炱菌( m e l i o l as p ) 、叶点霉菌 ( m y l l o s t i c t as p ) 等( 周志权等，2 0 0 1 ：g r e g o r ye ta 1 ，2 0 0 2 ；蒋学建等，2 0 0 6 ) 。红 红海榄赤斑病病原菌鉴定及其生物学特性研究 树叶部病害种类多，表现复杂，同一类病原菌能危害不同植物引起不同病害，如拟盘 多毛孢菌( p e s t a l o t i o p s i ss p ) 危害木榄( b r u g u i e r ag y m n o r r h i z a ) 引起赤斑病，危害 秋茄( k a n d e l i ac a n d e l ) 引起褐斑病，危害白骨壤( a v i c e n n i am a r i a n a ) 引起灰斑病 ( 黄泽余等，1 9 9 7 a ) ；另外，同一病害在不同植物上其病原菌可能不同，如褐斑病， 在桐花树( a e g i c e r a sc o r n i c u l a t u m ) 其病原菌为拟盘多毛孢( p e s t a l o t i o p s i ss p ) ，但在 木榄( b r u g u i e r a g y m n o r r h i z a ) 其病原菌为交链孢( a l t e r n a r i as p ) ( 黄泽余等，1 9 9 7 a ) ； 甚至，同一病害在同一植物的发病部位上，其病原菌也可能是多样的，如桐花煤污病 的同一叶斑上常常包括有番荔枝煤炱菌( c a p n o d i u ma n o n a ) 、杜茎山星盾炱( a s t e r i n a m a e s a e ) 、撒播烟霉( f u m a g ov a g a n s ) 、盾壳霉( c o n i o t h y r i u ms p ) 等4 种病原菌( 黄 泽余等，1 9 9 8 ) 。 ( 2 ) 枝梢病害：症状主要表现为顶梢枯死，其病原菌包括有病原真菌壳囊孢菌 ( c y t o s p o r as p ) 、灰葡萄孢( b o t r y t i sc i n e r e a ) 以及病原细菌烟草节杆菌( a r t h r o b a c t e r n i c o t i a n a e ) 、假单胞菌( p s e u d o m o n a ss p ) 等。其中红树壳囊孢菌( c y t o s p o r a r h i z o p h o r a e ) 经常引起波多黎各岛大红树( r h i z o p h o r am a n g l e ) 的顶梢枯死病，发病 枝梢的症状表现为溃疡和顶枯( a n d r e we ta 1 ，2 0 0 0 ) ；灰葡萄孢( b o t r y t i sc i n e r e a ) 主要引起海桑( s o n n e r a t i ac a s e o l a r i s ) 幼苗灰霉病，病苗在感病一周后顶梢萎蔫、溃 烂，立枯型死亡( 李云等，1 9 9 6 ) 。烟草节杆菌( a r t h r o b a c t e rn i c o t i a n a e ) 和假单胞 菌( p s e u d o m o n a ss p ) 是孟加拉国银叶树( h e r i t i e r a f o m e s ) 的顶枯病病原细菌( h a r t u n g p f 口正，1 9 9 8 ) 。 ( 3 ) 根茎病害：红树林的根茎病害不常见，偶有发生。目前报道有壳囊孢菌 ( c y t o s p o r as p ) 引起大红树( r h i z o p h o r am a n g l e ) 的幼苗根尖枯死病( k o h l m e y e r ， 1 9 6 9 ) 、立枯丝核菌( 尺s o l a n i ) 引起榄李( l u m n i t z e r ar a c e m o s a ) 根枯病( 周志权等， 2 0 0 1 ) ，由柱孢菌( c y l i n d r o c a r p o ns p ) 引起的红树茎癌病( s t e mg a l ld i s e a s e ) ( o l e x ae t a 1 ，1 9 7 6 ) 、由镰孢菌( f u s a r i u ms p ) 或根霉菌( r h i z o p u ss p ) 引起的红树茎腐病以 及由腐霉菌( p y t h i u ms p ) 引起的海桑猝倒病等( 蒋学建等，2 0 0 6 ) 。 目前红树林病害的研究，主要是关于病害发生情况的调查、病原菌种类的确定等， 很少发现对病害综合防治的研究。而且由于经济意义的原因，红树林病害还没有引起 人们足够的重视，有关红树病害的报道比较零散。 尽管红树本身含有丹宁、多酚类抗菌物质等，具有一定的抗病能力，但是红树 林病害仍有发生。一直以来由于沿海养殖业的快速发展以及气象灾害等因素的影响， 致使红树林群落生物多样性减少，极大地影响红树生长，植株一旦生长衰弱，将可能 受到多种有害生物的严重危害。同时，红树林作为一个特殊的河口海岸生态系统，其 植物分布存在种群密度高、种类多样性低的特点( t o m l i n s o n ，1 9 8 6 ) ，红树病害一 旦发生，这种特点会使病害随着其他有害生物一起大面积迅速蔓延，带来严重的后果， 如2 0 0 4 年5 月广西山口国家级红树林自然保护区发生了4 0 年来最严重的病虫害，一周 4 广东海洋大学硕士学位论文 之内4 0 公顷白骨壤受灾面积迅速扩大至1 0 6 公顷，受灾的白骨壤由叶片变黄发展到枯 萎，灾情严重( 许显倩，2 0 0 4 ) 。因此，为保障红树林湿地资源的可持续利用，应建 立红树林有效的病害监测系统，对于常见病害的发生和流行特点以及病原菌的种类和 生物特性等进行较为深入的研究，为红树林病害的预防保护工作提供参考依据。 1 2 植物病原真菌检测鉴定方法 在植物病害中，由真菌引起的植物病害大约占所有植物病害8 0 以上( 向梅梅， 2 0 0 1 ) ，植物真菌病害的病原诊断在农业生产上具有举足轻重的作用。传统的分类鉴 定方法是植物病原真菌检测鉴定的常用方法，其涉及到真菌的形态学、生理生化特性、 抗原构造等特征。近年来随着分子生物学技术的迅速发展，核酸技术尤其是i t s 技术 已经发展为真菌检测鉴定的主要方法之一。 1 2 1 传统的检测鉴定方法 植物病原真菌的鉴定大多还是采用传统的研究方法，即分离培养、形态观察以及 简单的生理生化性状测定等( 文景芝，2 0 0 1 ) 。由于资料详实和研究技术相对成熟， 传统的鉴定方法在病原真菌的检测工作中占居了主导的位置。 在传统分类和鉴定中，分生孢子及其发育时的形态特征是重要的指标( h a z e n ， 1 9 9 6 ；h e n n e b e r t ，1 9 9 4 ) ，对于一些子实体比较难人工获取的病原真菌，需采用一些 特殊培养基或方法。大豆茎褐腐病是大豆生产上的一种重要的病害，病原菌为大豆茎 褐腐病菌( p h i a l o p h o r ag r e g a t a ) ，是我国植