（内科学专业论文）ima、hfabp检测在急性心肌梗死早期诊断中的应用研究.pdf

目录 中文摘要1 英文摘要4 研究论文i m a 、h f a b p 检测在急性心肌梗死早期诊断中的应用 研究 前言9 9日i j 吾 材料与方法9 结果14乡口木 附图1 7 附表1 9 讨论2 2 结论：2 9 参考文献2 9 综述i m a 、h f a b p 在急性心肌梗死早期诊断中的研究进展3 4 致谢4 2 个人简历4 3 1 冬 一 中文摘要 i m a 、h f a b p 检测在急性心肌梗死早期诊断中 的应用研究 摘要 背景：急性心肌梗死( a c u t em y o c a r d i a li n f a r c ti o n ，a m i ) 是严重威 胁人类健康的疾病之一，近年来，其发病率及死亡率逐年上升，且有越来 越年轻化的趋势。由于a m i 发病急、病情变化块、临床危险性大，越来越 引起临床的广泛关注。静脉溶栓药物的更新、冠状动脉介入技术的广泛应 用和介入器械及技术的进步，使得a m i 的治疗有了一个飞跃式的发展。但 是，不管是静脉溶栓还是经皮冠状动脉成形术( p e r c u t a n e o u sc o r o n a r y i n t e r v e n t i o n ，p c i ) ，在挽救缺血坏死心肌方面都有很强的时间依赖性， 因此，如何早期、快速、准确地诊断a m i ，缩短患者从发病到恢复冠脉血 流的时间成为临床普遍关注的重要课题。在临床实践中，许多a m i 患者临 床症状不典型，a m i 患者心电图的阳性检出率仅有2 3 左右，广泛应用于 a m i 诊断的生化标志物肌酸激酶同工酶( m y o c a r d i a 卜b o u n dc r e a t i n e k i n a s e ，c k m b ) 和心肌肌钙蛋白( c a r d i a ct r o p o n i n ，c t n ) 血清含量在发 病4 - - 6 小时后才升高，明显滞后于对心肌进行再灌注治疗时间窗的需求。 最近研究发现，血清缺血修饰白蛋白( is c h e m i am o d i f i e da l b u m i n ， i m a ) 和心肌型脂肪酸结合蛋白( h e a r t t y p ef a t t ya c i d b i n d i n g p r o t e i n ，h f a b p ) 是反映心肌缺血损伤的早期敏感标志物。二者对a m i 早期均具有非常重要的诊断和预测价值。 目的： 本研究试图通过探讨i m a 、h - f a b p 检测在急性心肌梗死早期诊断中的 意义，为指导临床早期快速识别a m i 提供简便可行的依据，达到早期诊断、 减少漏诊、改善预后、降低死亡率的目的。 方法： 随机选择发病6 小时以内以急性胸痛就诊的疑似a m i 患者8 3 例，对 所有纳入人群常规行1 2 导联心电图检查，用双抗夹心免疫荧光法定量检 测肌红蛋白( m y o g l o b i n ，m y o ) 、肌酸激酶同工酶( c k m b ) 、肌钙蛋白i ( c t n i ) 含量。i m a 含量检测利用白蛋白一钴结合试验( a l b u m i nc o b a l t b i n d i n gt e s t ，a c b ) 原理间接测定，血清h f a b p 的定量采用双抗体夹心 中文摘要 酶联免疫吸附一试验( e n z y m e1i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y ，e l i s a ) 原理 进行测量。设立健康对照组，探讨i m a 和h - f a b p 在急性心肌梗死早期( 发 病6 小时内) 的诊断效能。并与传统的心肌标志物m y o 、c k m b 、c t n i 进 行比较。 结果： i 入选的8 3 例研究对象按最终出院诊断分为a m i 组3 2 例，男女比 例1 8 1 4 ，年龄3 0 - - - 8 0 岁，平均年龄( 6 1 8 1 1 4 ) 岁。非a m i 组5 1 例， 其中不稳定型心绞痛( u a p ) 者3 3 例，男女比例1 7 1 6 ，年龄4 2 8 4 岁， 平均年龄( 6 3 2 1 1 2 ) 岁。非心源性胸痛1 8 例，男女比例1 0 8 ，年龄 4 3 8 1 岁，平均年龄( 6 4 9 l o 5 ) 岁。健康对照组4 0 例，男女比例2 3 1 7 ， 年龄4 1 - - 一7 9 岁，平均年龄( 6 1 0 l o 8 ) 岁； 2a m i 组平均a c b 值为5 4 9 1 3 3u m l ，健康对照组为7 1 4 4 5 u m l ，不稳定心绞痛( u a p ) 组为5 8 1 1 0 8u m l ，非心源性胸痛( n c c p ) 组为7 1 8 3 7u m l 。a m i 组与n c c p 组、a m i 组与健康对照组、u a p 组与 n c c p 组、u a p 组与健康对照组比较差异有统计学意义( 检验水准 c t = o 0 0 8 ，p o 0 5 ) ； 3 依据a m i 组与正常对照组所测a c b 值绘制的r o c 曲线，曲线下面积 ( a u c ) 为0 9 11 ( 9 5 c i ：0 8 3 9 0 9 8 3 ) ，分析所得i m a 诊断急性心肌 梗死的最佳截断值为6 7 0 8u m l ； 4i m a 诊断发病6 小时以内a m i 的敏感度、特异度、阴性预测值及 准确率分别为8 1 2 5 、4 7 0 6 、8 0 、6 0 2 4 。其敏感度和阴性预测 值明显高于传统心肌标志物m y o 、c k - m b 和c t n i ，比较差异具有统计学 意义( p 0 0 5 ) ； 5 各组h f a b p 血清平均浓度分别为：a m i 组为2 3 5 6 7 n g m l 、u a p 组7 2 2 6 n g m l 、n c c p 组3 9 1 8n g m l 、健康对照组4 6 1 9n g m l 。 a m i 组与n c c p 组、a m i 组与健康对照组、a m i 组与u a p 组、u ap 组与n c c p 组、u a p 组与健康对照组比较差异有统计学意义( 检验水准q = o 0 0 8 ，p 0 0 5 ) ； 6 依据a m i 组与正常对照组所测h - f a b p 浓度定量值绘制的r o c 曲线， 2 中文摘要 曲线下面积( a u c ) 为0 9 5 4 ( 9 5 c i ：0 9 1 2 - 0 9 9 7 ) ，分析所得h f a b p 诊断急性心肌梗死的最佳截断值为6 6 5 n g m l ； 7h - f a b p 诊断发病6 小时以内a m i 的敏感度、特异度、阴性预测值 及准确率分别为9 0 2 6 、8 0 3 9 、9 3 1 8 、8 4 3 4 。与传统心肌标 志物m y o 、c k - m b 和c t n l 比较，敏感度、阴性预测值及准确率明显高于 传统心肌标志物，差异具有统计学意义( p 0 0 5 ) ； 8 若采用并联的方法i m a 与h - f a b p 联合应用，诊断发病6 小时以内 a m i 的敏感度可达到9 8 2 4 。 结论： 1 缺血修饰白蛋白( i m a ) 对发病早期的a m i 和非心源性胸痛病人有很 好的鉴别诊断价值，对a m i 病人的早期检出较传统的心肌标志物具有更高 的敏感度，是诊断心肌缺血的早期敏感标记物，但对a m i 和u a p 没有鉴别 诊断价值； 2 心肌脂肪酸结合蛋白( h f a b p ) 对发病早期的a m i 与a m i 疑似病人 ( 包括u a p 病人) 有很好的鉴别诊断价值，对a m i 的早期识别，较传统的 心肌损伤标志物具有更好的诊断预测价值，是诊断心肌坏死的早期敏感标 志物 3i m a + h - f a b p 联合可明显提高对a m i 的诊断和鉴别诊断价值。 关键词：急性心肌梗死；缺血修饰白蛋白；心型脂肪酸结合蛋白；肌 红蛋白；肌钙蛋白 英文摘要 t h es t u d y0 fi m aa n dh f a b pi nt h ed i a g n o s i so fa c u t e 一一 一一一一一 m y o c a r d i a li n f a r c t i o nw i t h i ne a r l ys t a g e a b s t r a c t b a c k g r o u n d ：a c u t em y o c a r d i a li n f a r c t i o n ( 伽沮) i so n e o ft h em o s t h a r m f u ld i s e a s e st h r e a t e n i n gh u m a nh e a l t h i nr e c e n ty e a r s ，t h ei n c i d e n c ea n d d e a t hr a t eo fa m ia r er i s i n gy e a ra f t e ry e a r m o r ea n dm o r ey o u n gp e o p l ea r e s u f f e r i n gf r o ma m i a sar e s u l t o ft h ef a s to n s e t ，r a p i dc h a n g ea n dm a j o r c l i n i c a lr i s k s ，a m ih a sd r a w nm o r ea n dm o r ea t t e n t i o no ft h ec l i n i c s w i t h u p d a t eo fi n t r a v e n o u st h r o m b o l y s i sd r u g ，w i d ed e v e l o p m e n to fi n t e r v e n e t e c h n i q u e s o fc l i n i c a l c o r o n a r ya r t e r y a n dt h ep r o g r e s so fi n t e r v e n e e q u i p m e n t s ，a m it h e r a p yh a sm a d eg r e a tp r o g r e s s b u t ，t h e i n t r a v e n o u s t h r o m b o l y s i s a n d p e r c u t a n e o u sc o r o n a r ya n g i o p l a s t y ( p c i ) a r e b o t h t i m e d e p e n d e n t i n r e s c u i n gp a t i e n t s f r o mi s c h e m i am y o c a r d i a ln e c r o s i s t h e r e f o r e ，h o wt om a k et h ed i a g n o s i so fa m ie a r l y , r a p i d l ya n da c c u r a t e l yi s a ni m p o r t a n ts u b je c tc o n c e m e db yc l i n i c i nc l i n i c a lp r a c t i c e ，t h es y m p t o m so f m a n ya m ip a t i e n t sa r ea t y p i c a l t h ep o s i t i v er a t eo fe c g i so n l y2 3 t h e b i o c h e m i c a lm a r k e r ss u c ha sm y o c a r d i a l - b o u n dc r e a t i n ek i n a s e ( c k m b ) a n d c a r d i a ct r o p o n i n ( c t n ) a r eu s e dw i d e l yi na m id i a g n o s i s ，b u tt h e i rp l a s m a c o n c e n t r a t i o n sb e g i nt oi n c r e a s ej u s tf r o m4 - 6h o u r sa f t e ro n s e t i to b v i o u s l y l a g sb e h i n dt h en e e do fm y o c a r d i a lr e p e r f u s i o nt h e r a p yt i m e w i n d o w r e c e n tr e s e a r c h e ss h o w e dt h a ti s c h e m i am o d i f i e da l b u m i n ( i m a ) a n d h e a r t t y p ef a t t ya c i d b i n d i n gp r o t e i n ( h f a b p ) a r ee a r l ys e n s i t i v em a r k e r s r e f l e c t i n gt h em y o c a r d i a li n j u r y t h e ya r eb o t hv e r yi m p o r t a n t i nd i a g n o s i sa n d p r e d i c t i o no fa m i a te a r l ys t a g e o b j e c t i v e ：t h ep u r p o s eo ft h i ss t u d yi s t op r o v i d ec l i n i cs i m p l i f i e da n d f e a s i b l ee v i d e n c et od i s t i n g u i s ha m i p a t i e n t sf r o ms u s p e c t e da m ip a t i e n t si n t h ee a r l yp h a s et h r o u g hd i s c u s s i o no ft h er o l eo fi m aa n dh f a b pi na m i d i a g n o s i s t h i ss t u d yi st oa c h i e v et h ep u r p o s eo fe a r l yd i a g n o s i s ，d e c r e a s i n g m i s d i a g n o s i s ，i m p r o v i n gp r o g n o s i sa n dr e d u c i n gd e a t hr a t e m e t h o d s ：w es e l e c t e d8 3p a t i e n t sr a n d o m l y ( f i n a l l y3 2p a t i e n t sw e r e 4 英文摘要 d i a g n o s e d a c u t em y o c a r d i a li n f a r c t i o n ) w h ow e r es u s p e c t e da c u t em y o c a r d i a l i n f a r c t i o na ta d m i s s i o nw i t h i n6h o u r sa f t e ro n s e to fc h e s tp a i n a l lp a t i e n t s u n d e r w e n ts t a n d a r d12 1 e a de c gw eu s e di m m u no fl u o r e s c e n c e d o u b l e a n t i b o d ys a n d w i c hq u a n t i t a t i v et om e a s u r et h em y o g l o b i n ( m y o ) ， c r e a t i n ek i n a s e ( c k m b ) ，t r o p o n i ni ( c t n i ) c o n t e n t t h ep l a s m al e v e lo fi m a w a sm e a s u r e db ya l b u m i nc o b a l tb i n d i n gt e s t ( a c b ) i n d i r e c t l y t h ep l a s m a l e v e lo fh f a b pw a sm e a s u r e db ye n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y ( e l i s a ) ah e a l t h yc o n t r a s tg r o u pi s e s t a b l i s h e dt od i s c u s st h ed i a g n o s i s e f f e c t i v e n e s so fi m aa n dh - f a b pi np a t i e n t sw h ow e r ea c u t em y o c a r d ia l i n f a r c t i o n ( o n s e tw i t h i n6 h ) ，a n dt oc o m p a r ew i t ht h et r a d i t i o n a lm a r k e r ss u c h a sm y o ，c k m ba n dc t n i r e s u l t s ： 1t h e8 3p a t i e n t sw e r ec l a s s i f i e db yd i s c h a r g ed i a g n o s e s ，3 2p a t i e n t s w e r ec l a s s i f i e di n t oa m i g r o u p ，t h er a t i oo f m a l ea n df e m a l ew a s18 14 ，r a n g e 3o 8 0y e a r so l d ，t h ea v e r a g ea g eo ft h es u b j e c t sw a s ( 61 8 + 11 4 ) y e a r so l d 51 p a t i e n t s w e r ec l a s s i f i e di n t on o n - a m ig r o u p ，3 3p a t i e n t so fw h i c hh a d u n s t a b l e a n g i n ap e c t o r i s ( u a pg r o u p ) ：t h er a t i o o fm a l ea n df e m a l ew a s 17 16 ，r a n g e4 2 8 4y e a r so l d ，t h ea v e r a g ea g eo ft h e s u b j e c t sw a s ( 6 3 2 4 - 11 2 ) y e a r so l d ，a n d18p a t i e n t sh a dn o n c a r d i a cc h e s tp a i n ( n c c p g r o u p ) ：t h er a t i oo fm a l ea n df e m a l ew a s10 8 ，r a n g e4 3 - - 。81y e a r so l d ，t h e a v e r a g ea g eo f t h es u b j e c t sw a s ( 6 4 9 4 - 10 5 ) y e a r so l d 4 0h e a l t h ya d u l t sw e r e r e c r u i t e da sc o n t r o lg r o u p ，t h er a t i oo fm a l ea n df e m a l ew a s2 3 17 ，r a n g e41 7 9y e a r so l d ，t h ea v e r a g ea g eo ft h es u b j e c t sw a s ( 61 0 4 - 10 8 ) y e a r so l d 2t h ea v e r a g eo fa c bi na m ig r o u pw a s5 4 94 - 13 3u m l ，h e a l t h y c o n t r o lg r o u pw a s71 44 - 4 5u m l ，u n s t a b l ea n g i n ap e c t o r i s ( u a p ) g r o u pw a s 5 8 14 - 1 0 8u m l ，n o n c a r d i a cc h e s tp a i n ( n c c p ) g r o u pw a s7 1 84 - 3 7u m 1 t h e r ea r ec o m p a r a t i v e d i f f e r e n c e sw i t has t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c eb e t w e e nt h e g r o u p so f a m ia n dn c c p , a m ia n d h e a l t h yp e r s o n s ，a m a n du a p , u a p a n d n c c p , u a pa n dh e a l t h yp e r s o n s ( t e s tl e v e lq - o 0 0 8 ，p 5 英文摘要 o 0 5 ) 3a c c o r d i n gt ot h er o cc u r v ed r a w n b ya c b v a l u e so fa m i g r o u pa n d c o n t r o lg r o u p ，t h ea r e au n d e rt h ec u r v e ( a u c ) w a so 9 1 1 ( 9 5 c i ：o 8 3 9 0 9 8 3 ) ，t h eo p t i m u mc u t o f fp o i n tf o ra m il e v e l si nt h i si m a d i a g n o s t i cw a sf o u n dt ob e6 7 0 8u m 1 4t h es e n s i t i v i t y , s p e c i f i c i t y , n e g a t i v ep r e d i c t i v ev a l u ea n da c c u r a c yo f a m id i a g n o s e db yi m aw i t h i n6h o u r sw e r e8 1 2 5 ，4 7 0 6 ，8 0 a n d 6 0 2 4 r e s p e c t i v e l y t h es e n s i t i v i t y a n dn e g a t i v ep r e d i c t i v ev a l u ew a s o b v i o u s l yh i g h e rt h a nt h et r a d i t i o n a lc a r d i a cm a r k e r sm y o ，c k m ba n dc t n i ， t h ed i f f e r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p 6 4 7 u m l 2 3 2h f a b p 实验操作 2 3 2 1 检测前一天，把检测血清从一8 6 低温冰箱中取出，放入4 冰箱中 自然解冻。检测当天，把检测血清、试剂盒从4 c 冰箱中取出，放室温平 衡3 0 分钟。把解冻的血清放入离心机中2 0 0 0 转分钟离心5 分钟，备查。 2 3 2 2 稀释标准品：将l m l 样品稀释液加到u 型标准品试管内，充分混 匀，以此标准管为基准管，浓度为2 0 n g m l ，在此基础上进一步作倍比稀 释，操作步骤见下表，稀释完成后，基准、# l 、# 2 、# 3 、# 4 、# 5 号 管对应的浓度依次为2 0n g m l 、1 0n g m l 、5n g m l 、2 5n g m l 、1 2 5n g m l 、 0 6 2 5n g m l 、0 3 1 2 5 n g m l 。 步骤稀释液 浓度n g m l 基准管 l m l2 0 # l基准管吸2 5 0 u l2 5 0 u l1 0 # 2从# 1 吸2 5 0 u l 2 5 0 u l 5 # 3从# 2 吸2 5 0 u l2 5 0 u l2 5 # 4从# 3 吸2 5 0 u l 2 5 0 u l1 2 5 # 5从# 4 吸2 5 0 u l2 5 0 u l0 6 2 5 # 6从# 5 吸2 5 0 u l 2 5 0 u lo 3 1 2 5 2 3 2 3 将1 1 8 8 m l 的稀释液加入1 2 0 u l 的h - f a b p 抗体中，充分混匀待用。 研究论文 将11 9 4 m l 的稀释液加入6 0 u lh r p 酶中，充分混匀待用。加8 0 u l 血清到 2 4 0 u l 样品稀释液中，检测血清做l ：4 稀释，充分混匀待用。5 0 u l 浓缩 沈液加4 5 0 u l 蒸馏水稀释，配成标准洗涤液待用。 2 3 2 4 在9 6 孔微量反应板中，加入试剂对照标准品，以及检测标本，在 a 1 、a 2 孔加入样品稀释液l o o u l ，作为样品稀释液对照， 2 3 2 5 用塑料贴膜封板，把微量反应板在振荡器上8 0 0 分钟2 小时，于 室温匀混。 2 3 2 6 洗板：首先吸干微量反应孔中的液体，在每孔中，分别加入3 5 0 u l 洗涤液充分混匀，吸干，重复5 次。洗涤完成后，微量反应孔中没有液体 残留。加入相应抗体，每孔均加入稀释完成的h f a b p 抗体l o o u l ，用塑料 贴膜封板，把微量反应板在振荡器上8 0 0 分钟2 小时，于室温匀混。 2 3 2 7 加入相应酶，每孔均加入稀释完成的h r p 酶l o o u l ，用塑料贴膜封 板，把微量反应板在振荡器上8 0 0 分钟l 小时，于室温匀混。 2 3 2 8 加入相应底物，每孔加入t m b 底物l o o u l ，用塑料贴膜封板，把微 量反应板在振荡器上8 0 0 分钟匀混2 0 分钟。 2 3 2 9 加入终止液，每孔加入0 2m m o l l 的h 2 s o 。l o o u l ，选择4 5 0 n m 的 滤光片，6 2 0 n m 为干扰滤光片，3 0 分钟内读取吸光度值。 2 3 2 1 0 以标准品的吸光度值绘标准曲线。按照“4 5 0 n m 处吸光度浓度： 线性对数 的原则建立标准曲线，如图1 所示。样本浓度通过相应的吸 光度经标准曲线换算得来。 2 4 统计学处理 定量资料用均数标准差中位数表示，多组间均数的多重比较采用 k r u s k a l w a l l i s 秩和检验。调整后的显著性水准q = o 0 0 8 ，p 1 0 7 n g m l 为阳性。c k m b 4 3 n g m l 为阳性。c t n i 1 o n g m l 为阳性。各标志物检测阳性及阴性例数见表6 。采用诊断实验四 格表法分别计算i m a 、h f a b p 、m y o 、c k 一船和c t n l 的敏感性、特异性、 阳性预测值、阴性预测值及准确性，具体见附表7 。 敏感性( s e n s i t i v i t y ，s e ) = 真阳性( 真阳性+ 假阴性) 1 0 0 ，理想的敏感性为 1 0 0 ，敏感度越高的诊断性实验，漏诊率越低。 特异性( s p e c i f i c ，s p ) - - - - 真阴性( 真阴性+ 假阳性) 1 0 0 ，理想的特异度为 1 0 0 ，特异度越高的诊断性实验，误诊率越低。 研究论文 阳性预测值( p o s i t i v ep r e d i c t i v ev a l u e ，+ p v ) = 真阳性( 真阳性+ 假阳性) 1 0 0 ，指所有阳性结果中真阳性的百分比。 阴性预测值( n e g t i v ep r e d i c t i v ev a l u e ，一p v ) = 真阴性( 真