一节免疫学技术的范畴与应用.ppt

工欲善其事必先利其器,绪言,第一节免疫学技术的范畴与应用,一、免疫学技术的范畴二、免疫学技术的应用特点,免疫学技术的范畴,1、对具有免疫活性物质的定性、定量测定2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定,免疫学技术的应用特点,1、对象“包罗万象”2、方法“兼容并蓄”,第二节有关免疫学基本概念,一、抗原的概念与属性二、免疫细胞的概念与分类三、免疫应答的概念与过程,免疫原性可识别、可反应性（诱导机体产生免疫应答的特性）免疫反应性选择结合性（和免疫应答产物特异性结合的特性）,抗原的概念与属性,免疫细胞的概念与分类,免疫细胞（Immunecells）泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关的细胞。免疫活性细胞（Immunecompetentcell，ICC）能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效应产物的淋巴细胞。,免疫细胞的类型,红细胞血小板肥大细胞中性粒细胞巨噬细胞树突状细胞浆细胞T细胞NK细胞,免疫应答的概念与过程,免疫应答（immuneresponse）免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并使特异性淋巴细胞活化、增殖；表现出免疫效应的过程。免疫应答的阶段1、抗原识别阶段（antigen-recognizingphase）2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyte-activatingphase）3、抗原清除阶段（antigen-eliminatingphase）,第三节抗原抗体反应的基本原理,一、抗原抗体反应的原理二、抗原抗体反应的特点三、影响抗原抗体反应的因素,抗原抗体反应的原理,1、抗原抗体结合的作用力2、抗原抗体结合物析出原因,引起抗原抗体结合的作用力,1、电荷引力（库仑引力）2、电子云引力（VanderWaals力）3、氢键结合力4、疏水作用力,抗原抗体结合物析出的原因,析出,电解质,抗原抗体反应的特点,1、特异性2、可逆性3、适合比例性,特异性,抗原A,抗原C,抗原B,特异性反应,交叉反应,无反应,可逆性,K（亲和常数）=,Ag+Ab,AgAb,适合比例性,抗体含量,抗原含量,前带,后带,等价带,网格学说（latticetheory）,抗体过剩,抗原过剩,抗体抗体比例合适,抗原抗体反应的影响因素,1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度（37-42。C）,第四节免疫学检测技术的评价,一、评价标准二、特异性与敏感性的关系,评价标准,Specificity（特异）Sensitivity（敏感）Simplicity（简便）Safety（安全）Saving（节约）,特异性与敏感性的关系,特异性高、敏感性低敏感性高、特异性低,抗原的提取与制备,第一节抗原/免疫原制备的基本概念,一、抗原制备的目的二、抗原的“纯度”三、抗原制备的主要技术途径,抗原制备的目的,免疫原：激活T、B细胞半抗原：检测相应抗体,抗原的“纯度”,免疫原：保留足够的可被T、B细胞识别的抗原决定簇半抗原：尽可能减少影响反应特异性的抗原决定簇,抗原制备的主要技术途径,天然抗原分离、纯化半抗原人工合成、载体联接抗原肽合成、基因工程制备,第二节完全抗原/免疫原的制备方法,一、颗粒性抗原的制备二、可溶性抗原的制备,颗粒性抗原的制备,1、采集、分离抗原2、无害化处理,可溶性抗原的制备与纯化,1、处理与粉碎2、蛋白质分离3、单一组分提取4、抗原纯度鉴定,处理与粉碎,组织粉碎：机械、生物细胞破碎：物理、化学、生物,蛋白质分离,选择性沉淀：盐析有机溶剂沉淀水溶性非离子型聚合物沉淀透析技术：超滤技术：,单一组分提取,层析技术：凝胶过滤离子交换亲和层析离心技术：差速离心密度梯度离心电泳技术：电泳洗脱等电聚焦,凝胶层析（分子筛）,离子交换层析,亲和层析,抗原纯度鉴定,方法：层析性质测定电泳法免疫法指标：电泳纯免疫纯,第三节半抗原免疫原制备的方法,一、载体的选择二、半抗原与载体的联接,载体的选择,蛋白质载体：BSA、HAS、OVA、KLH聚合多肽载体：多聚赖氨酸高分子聚合物载体：PVP、羧甲基纤维素,半抗原与载体的联接,1、连接方式：物理法（吸附）化学法2、化学连接方法：直接联接法：间接联接法：,半抗原与载体直接联接,碳化二亚胺法蛋白质-COO+R-N+=CN-RH-N+-R蛋白质-COO-C-NH-R+半抗原-NH2O蛋白质-C-NH-半抗原+R-NH-CO-NHR,半抗原与载体直接联接,戊二醛法蛋白质-NH2+半抗原-NH2+COH-（CH2）3-COH蛋白质-N=CH-（CH2）3CH=N-半抗原,半抗原与载体直接联接,氯甲酸异丁酯法半抗原-COOH+Cl-COO-CH2CH（CH3）2OO半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2+蛋白质-NH2半抗原-CO-NH-蛋白质+HO-CH2CH（CH3）2,半抗原与载体间接联接,琥珀酸酐法OO半抗原-CH2OH+C-O-CCH3CH3O半抗原-CH2O-C-(CH2)2-COOH,半抗原与载体间接联接,O-（羟甲基）羟胺法半抗原-C=O+H2N-O-CH2-COOH半抗原-C=N-O-CH2-COOH,半抗原与载体间接联接,一氯醋酸钠法半抗原-OH+Cl-CH2-COONa半抗原-CH2-COOH,半抗原与载体间接联接,重氮化的对氨基苯甲酸法HOOC-NH2+NaNO2HOOC-N=N半抗原-OH+HOOC-N=N半抗原-N=N-COOHOH,本章小结,1、免疫学技术的应用范畴2、免疫学的