（外科学专业论文）乙酰肝素酶在胆管癌组织中的表达及意义.pdf

目录 一、摘要 中文论著摘要l 英文论著摘要2 二、英文缩略语3 三、论文 盲f 言4 刖百 资料与方法4 结果5 讨论6 结论7 四、本研究创新性的自我评价8 五、参考文献。9 六、附录 综述1 0 致 射“1 6 个人简介17 中文论著摘要 乙酰肝素酶在胆管癌组织中的表达及意义 目的 探讨乙酰肝素酶h p a 在胆管癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系。 方法 免疫组织化学染色检狈j j 5 9 例胆管癌手术标本和2 6 例癌旁组织中h p a 的表达情 况，与临床病理因素进行相关性分析。 结果 h p a 在5 9 胆管癌组织中阳性表达4 8 例，阳性表达率为8 l - 3 ，t n m 分期i + i i 期、期+ 期阳性率分别为7 7 8 、8 7 o ，但差别无统计学意义( p 0 0 5 ) ， 癌旁组织中有3 例表达弱阳性，阳性率表达率为1 1 5 。胆管癌组织及癌旁组织阳 性表达率差异有统计学意义( p 0 0 5 ) 。 结论 h p a 在胆管癌组织中高表达，h p a 的表达与肿瘤的淋巴结转移有关。 关键词 乙酰肝素酶i - i p a 胆管癌淋巴结 英文论著摘要 e x p r e s s i o na n dc l i n i c a lv a l u eo fh e p a r a n a s eh p ai n -_ c h o l a n g i o c a r c i n o ma o b j e c t i v e t oi n v e s t i g a t et h e e x p r e s s i o n o fh e p a r a n a s eh p ai n c h o l a n g i o c a r c i n o m aa n d r e l a t i o n s h i pw i t hc l i n i c a lp a t h o l o g i c a lp a r a m e t e r s m e t h o d s t h ee x p r e s s i o no fh e p a r a n a s eh p aw a st e s t e db yi m m u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o di n 5 9c h o l a n g i o c a r c i n o m as p e c i m e n sa n d12n o r m a lb i l ed u c ts p e c i m e n s r e s u l t s h p ae x p r e s s i o nw a sp o s i t i v ei n 81 3 ( 4 8 5 9 ) o fc h o l a n g i o c a r c i n o m as p e c i m e n s ， a n di n ll 5 ( 3 2 6 ) o f n o r m a lb i l ed u c ts p e c i m e n s t h ed i f f e r e n c ea m o n gt h et w o g r o u p s w a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p 0 0 5 ) t h ee x p r e s s i o no fh p aw a sr e l e v a n tt o l y m p hn o d em e t a s t a s i s ( p = 0 0 0 2 ) ，b u tn o tt o a g e ，g e n d e r ，t u m o rs i z ea n d d i f f e r e n t i a t i o nd e g r e e ( 胗0 0 5 ) c o n c l u s i o n h p ae x p r e s s i o ni sh i g h l yp o s i t i v ei nc h o l a n g i o c a r c i n o m a , a n de x p r e s s i o no fh p ai s r e l e v a n tt ol y m p hn o d em e t a s t a s i s k e yw o r d s h p a 。b i l ed u c tn e o p l a s m s l y m p hn o d em e t a s t a s i s 2 英文缩略语 3 论文 乙酰肝素酶在胆管癌组织中的表达及意义 刖舌 胆管癌是只发生在肝外胆管，即左右肝管至胆总管下端的恶性肿瘤，多发生 于5 0 7 0 岁，男女比例约1 4 ：1 ，本病易出现局部复发和转移，很少发生远处转 移。相关研究表明高分化癌病人的中位生存期为5 8 个月，低分化癌病人的中位生 存期为9 个月【1 1 。实现对胆管癌的早期诊断及采取有效的综合治疗手段能够较好 的提高患者的生存率。近些年相关研究发现乙酰肝素酶在消化系统肿瘤预后中起 着重要的作用，乙酰肝素酶是一种葡萄糖醛酸酯酶，为内切苷酶，其能使细胞外基质 ( e c m ) 和基底膜稳定结构破坏，细胞间质屏障功能降低【8 】，促进肿瘤的生长及转 移，恢复凋亡细胞活性【2 捌。本研究采用免疫组织化学方法，探讨乙酰肝素酶与j 晦床 病理因素的关系。 资料与方法 一、一般资料 收集中国医科大学附属盛京医院2 0 0 4 釉0 0 9 年行胆管癌手术患者的石蜡 标本5 9 例，其中男3 6 例，女2 3 例，平均年龄5 9 8 岁。腺癌5 1 例，腺鳞癌8 例。 中高分化4 9 例，低分化1 0 例。有淋巴结转移者3 6 例，无转移者2 3 例。5 9 例患 者经病理组织学检查确诊为胆管癌。同时随机选取其中经h e 染色、病理组织检 查确定为癌旁组织的2 6 例作为对照组。所有病例术前均未进行任何抗肿瘤治疗。 二、主要试剂和方法 采用免疫组织化学染色s p 法，h p a ( h 8 0 ) 兔抗人多克隆抗体( 工作浓度l ： 7 5 ) 购自美国s a n t ac r u z 公司；即用型s p 9 0 0 0 检测试剂盒以及d a b 显色试剂盒 均购自北京中杉公司。严格按试剂盒操作步骤进行：h p a 抗体工作浓度1 ：7 5 。 d a b 显色、苏木精复染透明后中性树胶封片，光学显微镜下观察。用p b s 代替一 抗作为阴性对照。 4 三、结果判定 h p a 的阳性表达部位主要在细胞浆，偶见细胞核表达。按照a n d r e 等h 1 的方 法，根据免疫组织化学染色肿瘤细胞阳性比例和染色强度进行评分：无阳性细胞 为0 分， 5 0 为3 分；无着色为0 分，轻度 着色( 浅黄色) 为1 分，中度着色( 棕黄色) 为2 分，重度着色( 棕褐色) 为3 分。二者评分之和 3 分为阳性。 四、统计学处理 对所得数据行f 检验。以p 0 0 5 为差异有统计学意义。 结果 h p a 在胆管癌组织中的表达h p a 阳性表达于细胞的细胞质，偶见于细胞核中， 呈淡黄色至棕黄色( 图1 ) 。h p a 在5 9 胆管癌组织中阳性表达4 8 例，阳性表达率 为8 1 3 ，癌旁组织2 6 例中( 图2 ) 有3 例表达弱阳性，阳性率为1 1 5 。二者阳 性表达率差异有统计学意义( p 0 0 5 ) 。 7 本研究创新性的自我评价 本论文主题明确，具有科学性，论据充分，为首次阐述乙酰肝素酶与胆管癌 的临床病理因素之间的关系，因此具有创新性，本研究技术路线明确，论据合理。 进一步研究发现h p a 不仅有助于加强对肿瘤侵袭转移认识，而且在临床上通过对 h p a 表达的检查来预测淋巴结转移情况，有助于术中确定肿瘤切除范围、术后病 情分析、预后评估和制定术后综合治疗方案有着重要价值。 8 参考文献 lb r o o m eu ，l o f o e r gr , v e r e s sb ，e t a l p r i m a r y s c l e r o s i n gc h a o l a n g i t i s a n du l c e r a t i v e c o l i t i s ：e v i d e n c ef o ri n c r e a s e dn e o p l a s t i cp o t e n t i a l j 】h e p a t o l o g y1 9 9 5 ：2 2 ( 3 ) ：1 4 0 4 8 2m a r c h e t t id ，l ij ，s h e nr ，e t a a s t r o c y t e sc o n t r i b u t et ot h eb r a i nm e t a s t a t i cs p e c i f i c i t yo f m e l a n o m ac e l l sb yp r o d u c i n gh e p a r a n a s e j 】c a n c e rr e s ，2 0 0 0 ，6 0 ( 】7 ) ：4 7 6 7 - 4 7 7 0 3 d o n gj ，k u k u l aa k , t o y o s h i m am ，e t a g e n o m i co r g a n i z a t i o na n dc h r o m o s o m el o c a l i z a t i o n o f t h en e w l yi d e n t i f i e dh u m a nh e p a r a n a s eg e n e j 】g e n e ，2 0 0 0 ，2 5 3 ( 2 ) ：1 7 1 1 7 8 4a n d r ef ，c a b i o g l un ，a s s ih ，e t a l e x p r e s s i o no fc h e m o k i n er e c e p t o r sp r e d i c t st h es i t eo f m e t a s t a t i cr e l a p s ei np a t i e n t sw i t ha x i l l a r yn o d ep o s i t i v ep r i m a r yb r e a s tc a n c e r j a n no n c o l ， 2 0 0 6 1 7 ( 6 ) ：9 4 5 - 9 5 1 5 黄志强肝门部胆管癌外科治疗的现状与我见 j 】- 中国实用外科杂志，2 0 0 7 ，2 7 ( 5 ) ：3 4 1 3 4 7 6e l - a s s a lo n ，y a m a n o ia ，o n ot ，e t a l t h ec l i n i c o p a t h o l o g i c a ls i g n i f i c a n c eo fh e p a r a n a s e a n db a s i cf i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o re x p r e s s i o n si nh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a c l i nc a n c e r r e s , 2 0 0 1 ，7 ( 2 ) ：1 2 9 9 1 3 0 5 7 y a m a g u c h i n a g i n om ，o d ak e t a l p e f i n e u m li n v a s i o nh a san e g a t i v ei m p a c to ns u r v i v a lo f p a t i e n t sw i t hg a l l b l a d d e nc a r c i n o m a j b r js u r g , 2 0 0 2 8 9 ( 9 ) ：11 3 0 11 3 6 8 v l o d a v s k yi ，f r i e m a r my ，e l k i nm ，e t a m a m m a l i a nh e p a r a n a s e ：g e n ec l o n i n g ，e x p r e s s i o n a n df u n c t i o ni nt u m o rp r o g r e s s i o na n dm e t a s t a s i s j 】n a tm e d ，19 9 9 ，5 ( 7 ) ：7 9 3 - 8 0 2 9 p a r i s hc r ，f r e e m a nc ，b r o w nk j ，ea i d e n t i f i c a t i o no fs u l f a t e do l i g o s a c c h a r i d e 2 b a s e d i r t h i b i t o r so ft u m o rg r o w t ha n dm e t a s t a s i su s i n gn o v e li nv i t r of o ra n g i o g e n s i sa n dh e p a r a n a s e a c t i v i t y j 】c a n c e rr e s ，1 9 9 9 ，5 9 ( 1 4 ) ：3 4 3 3 3 4 4 1 10 s i n g ha ，s a t c h e l lsc ，n e a lc r ，e t a l g l o m e r u l a re n d o t h e l i a lg l y c o c a l y xc o n s t i t u t e sab a r r i e r t op r o t e i np e r m e a b i l i t y j ja ms o cn e p h r o l ，2 0 0 7 ，18 ( 11 ) ：2 8 8 5 - - 2 8 9 3 1 1n a s s e r n j h e p a r a n a s ei n v o l v e m e n ti np h y s i o l o g ya n dd i s e a s e j c e l lm o ll i f es c i ，2 0 0 8 ， 6 5 ( 1 1 ) ：1 7 0 6 1 7 1 5 9 综述 乙酰肝素酶与恶性肿瘤预后的关系 摘要本文对乙酰肝素酶与肿瘤患者年龄、性别、分期、分化程度、浸润深度、 淋巴结转移的关系进行详细综述，旨在探讨其表达与胆管癌转移及其预后的关系。 恶性肿瘤的侵袭和转移是导致患者死亡的主要原因。目前研究认为肿瘤细胞 实现侵袭转移，必须首先穿越由细胞外基质( e x tr a c e l l u l a rm a tf i x ，e c m ) 和基底膜 ( b a s e m e n tm a m b r a n c e ，b m ) 组成的屏障和新生的血管。硫酸乙酰肝素蛋白多糖 ( h e p a r i ns u l f a t ep r o t o g l y c a n ，h s p g ) 作为b m 、e c m 和血管壁的主要成分之一，其降 解对于肿瘤的转移具有重要的促进作用。经研究发现肝素酶( h e p a r a n a s e ) 不仅能 直接降解h s p g ，还可以协同碱性纤维细胞生长因子( b f g f ) 等生物因子，促进肿瘤 细胞生长、血管生成和肿瘤转移【1 捌，相关研究报道于胆管癌中也存在类似现象渊， 本文重点综述肝素酶与肿瘤转移及其预后的关系。 一、乙酰肝素酶的结构和功能 乙酰肝素酶是一种葡萄糖醛酸酯酶，为内切苷酶，由17 5 6 个单核苷酸编码的 5 4 3 个氨基酸组成【4 ，5 一，能催化硫酸乙酰肝素侧链的n 2 硫酸葡萄胺末端硫酸酯，切 断细胞表面和细胞外基质中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖上的侧链，产生如下生物效应： 乙酰肝素糖蛋白分解，e c m 和基底膜稳定结构破坏，细胞间质屏障功能降低【41 ； 释放结合在乙酰肝素上的b f g f ，通过使细胞分裂、趋化，微血管形成，胶原纤维降 解等多方面的作用，加快创面愈合及促进肿瘤的生长及转移，恢复凋亡细胞活【7 ，研； 释放结合在乙酰肝素上的尿激酶型纤溶酶原激活物( u r o k i n a s ep l a s m i n o g e n a c t i v a t o r ，u p a ) 和组织纤溶酶原激活物( t i s s u ep l a s m i n o g e na c t i 2 v a t o r ，t p a ) ，溶解基 质网状结构； t p a 和u p a 还可通过活化表皮生长因子( e g f ) ，激活细胞外基质中的 蛋白质酶联反应，使膜的功能降低，屏障功能减退【9 1 ；诱发t 细胞介导的迟发性超 敏反应和自身免疫反应，促进以白细胞渗出、粘附和趋化作用为主的炎症反应；激 活脂酶增强脂质代谢。该酶广泛存在于细胞膜和e c m 中，并保持稳定水平，以调节 乙酰肝素生成和降解平衡，维持机体细胞和组织正常的增生、分化、粘附及迁移。 1 0 二、乙酰肝素酶在肿瘤组织及转移癌组织中的表达 作为一种与增生、分化、粘附和渗出密切相关的物质，乙酰肝素酶的这些作用 在很多研究中得到证实。h u l e t t 等【6 】发现胎盘中有大量乙酰肝素酶的表达，胎儿肝 脏中也有明显升高。t a n g c 茔- 茔- 搴 1 0 】在增生性肾小球肾炎动物模型中发现，正常大鼠血 清中乙酰肝素酶含量较少，膜性增生性肾小球肾炎小鼠发病后第4 天体内水平开 始增加，到2 1 天时肾小球毛细血管壁上乙酰肝素沉积物呈进行性增加。v a d a y 1 1 j 观察发现在炎症和免疫反应中，记忆t 细胞和c d 4 + t 细胞在接受刺激后可立即释 放乙酰肝素酶，其粘附能力也明显增加。免疫系统中脾、淋巴结、外周白细胞、骨 髓和胎儿肝该酶均有表达。而在成熟组织中如心、脑、肺、肝、骨骼肌、肾和胰 腺明显无表达【4 】。由于所有的这些乙酰肝素酶在增生性病变、炎症和免疫反应以 及血管生成等病理变化中表现出的特性，均可在肿瘤的生长和转移中发现。因此， 该酶对肿瘤组织的影响受到人们的重视。g r a h a m 等【l2 】研究鼠的黑色素瘤细胞，发现 乙酰肝素酶含量明显增高。另一些研究发现脑转移瘤组织中乙酰肝素酶表达也明 显增强。采用乙酰肝素酶m r n a 探针检测到肝癌、卵巢腺癌、宫颈鳞癌和结肠腺 癌等组织标本中均有强阳性染色【4 】。培养被转染全长乙酰肝素酶基因的肿瘤细胞 后，m r n a 和蛋白质的表达增强。人恶性黑色素细胞瘤、结肠腺癌早期均出现这种 酶的高表达【1 3 】。v l o d a s k y t 4 】用半定量r t 2 p c r 方法对不同转移程度的人乳腺癌细胞 进行检测，在非转移m g f 2 7 细胞没有观察到扩增的产物，在中度转移m d a 2 3 1 细胞 中有表达，而高度转移m d a 4 3 5 细胞表达明显升高。表达的强度与酶的活性密切相 关。通过对正常乳腺组织和浸润的乳腺癌组织原位杂交检测，发现浸润性乳腺导管 癌细胞质中出现大面积乙酰肝素酶阳性染色。免疫组化采用单克隆抗体检测石蜡 包埋结肠腺癌组织以及同一患者肝转移标本，发现细胞质和细胞表面均有阳性染 色物。2 0 世纪8 0 年代中、后期，对乙酰肝素酶在转移癌中的作用进行了大量的研究。 m a k a j i r a a 等发现有明显转移倾向的乳腺癌细胞乙酰肝素酶表达明显增加。m i a o 等【1 4 】也发现有转移癌的动物和恶性黑色素瘤脑转移病人血清中乙酰肝素酶含量和 活性增加。i k u t a 1 5 】对几种口腔癌细胞系和人口腔粘膜上皮癌组织的研究发现乙酰 肝素酶活性和m r n a 水平升高，两者有很好相关性。随着分子生物学技术的发展， 乙酰肝素酶基因全长序列明确后，通过基因转染的手段，将乙酰肝素酶全长基因导 入非浸润的淋巴瘤细胞系e b t 后形成的稳定克隆能产生基因高表达，乙酰肝素酶活 性明显增高，接种到裸鼠肝脏后转移及致死能力明显提高，实验组同期死亡率达9 0 ，对照组仅6 0 0 4 。肝组织大体及镜下检查发现，e bt 细胞主要分布在肝窦区和门 静脉区围绕血管或在血管内，对照组并无此改变。在乙酰肝素酶基因瞬时转染低 转移潜能黑色素瘤细胞后该细胞肺转移率增) j i j - j 4 0 0 - - - 5 0 0 嘣4 1 。这些研究均表 明乙酰肝素酶与肿瘤组织的转移有极为密切的相关性。由此可见，无论从生理状态， 还是从损伤、炎症、免疫反应、增生性疾病和肿瘤生长与转移等多种病理改变中， 乙酰肝素酶均具有重要作用，根本原因在于它改变了乙酰肝素的结构状态，引发连 锁反应，使活性物质的作用得到体现。由于乙酰肝素酶在多种病理变化中的转折性 作用，因而越来越成为人们关注的新靶点。 三、乙酰肝素酶参与转移的机制 一些研究表明正常组织、非转移瘤和转移性肿瘤中乙酰肝素酶含量有明显不 同，它随肿瘤组织转移能力增加而明显提高，同时伴有组织中的乙酰肝素降解产物 的明显升高【4 1 。p a r i s h 1 6 1 对肿瘤组织采用抑制乙酰肝素酶活性药物，发现浸润和转 移能力都明显降低。这些都表明肿瘤组织的转移可能是由于乙酰肝素酶的增加，大 量降解血管外周和e c m 中的乙酰肝素糖蛋白，使e c m 和基底膜结构破坏，细胞间 质屏障功能降低【4 】，并可释放结合在乙酰肝素酶_ l z 的u p a 和t p a ，溶解基质网状结构， 使膜的功能降低，促进肿瘤的浸润和转移。此外，通过释放结合在乙酰肝素上的 b f g f ，促进细胞分裂、趋化，微血管形成。乙酰肝素不仅是b f g f 结合受体或者信 号转导的媒介，而且是e c m 中的b f g f 储库，大量降解后通过释放肿瘤微环境和 e c m 中储存的高活性的h s 2 b f g f 复合物来诱发直接的血管反应1 4 1 , 为肿瘤发展 提供物质基础。另一些研究表明乙酰肝素酶在肿瘤转移中的作用与其参与细胞粘 附、分化、增生密切相关。总之，乙酰肝素酶通过降解细胞和e c m 中的乙酰肝素， 释放活性物质，产生链式反应，加快血管生成，促进肿瘤生长和转移，这已成为肿瘤发 生发展的机制之一。 四、乙酰肝素酶与肿瘤转移与预后的关系的研究进展 乙酰肝素酶在细胞内以相对分子质量为6 50 0 0 的酶前体形式合成，经专一性 水解酶修饰其n 端序列后，转化为具有高度生物学活性的相对分子质量为5 0 0 0 0 的 1 2 成熟酶。正常情况下，肝素酶的表达主要限于胎盘、免疫器官( 如脾脏、淋巴结) 和 免疫细胞( 如中性粒细胞、单核巨噬细胞、淋巴细胞、血小板) 、平滑肌细胞和 内皮细胞中，在心脏、脑、肺脏、肝脏、骨骼肌、肾脏及胰腺组织中均不表达。 炎性反应中，淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等能分泌肝素酶，溶解b m 和e c m ， 协助细胞迁移至炎症部位发挥作用。f r i e d m a n n 等团用地高辛标记的肝素酶反义 r n a 和抗人肝素酶单克隆抗体，分别研究人类正常、分化不良和肿瘤性结肠黏膜 肝素酶基因和蛋白的表达水平，结果发现在肿瘤的早期和腺瘤形成阶段即有表达， 而邻近的正常结肠黏膜上皮却不能检测出其表达。到目前为止，已发现肝素酶在 肺癌 3 1 、乳腺癌【1 7 1 、胃癌【1 9 1 、胰腺癌【2 0 1 、膀胱癌2 、1 ：3 腔鳞癌【2 2 1 、卵巢癌【2 3 1 等多 种肿瘤组织中高度表达。 文献【3 1 7 - 2 3 1 同时报道肝素酶的高表达与肺癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、口 腔鳞癌、卵巢癌等肿瘤的侵袭和转移呈明显正相关，但对于肝素酶的高表达与胆管 癌的临床病理因素的关系国内文献报道较少。本研究试从影响胆管癌预后的主要 临床病理因素( 胆管癌患者的年龄、性别及肿瘤分期、分型、分化程度、浸润深度、 淋巴结转移、血管浸润) 方面入手，详细探讨了上述临床病理因素与肝素酶的高表 达的关系。 1 3 参考文献 1p a r i s hc r ，f r e e m a nc ，h u l e t tm d h e p a r a n a s e ：ak e ye n z y m ei n v o l v e di nc e l l i n v a s i o n j b i o c h i mb i o p h y sa c t a ，2 0 0 1 ，1 4 7 1 ( 3 ) ：9 9 - 1 0 8 2f r i e d m a n ny ，v l o d a v s k yia i n g o mh ，e t a l e x p r e s s i o no fh e p a r a n a s ei nn o r m a l j p a t h o l ，2 0 0 0 ，1 5 7 ( 4 ) ：11 6 7 - 11 7 5 3s a s a k im ，i t ot ，k a s h i m am ，e t a l e r y t h r o m y c i na n dc l a r 2i t h r o m y c i nm o d u l a t i o no fg r o w t h f a c t o ri n d u c e de x p r e s s i o no fh e p a r a n a s em r n ao nh u m a nl u n gc a n c e rc e l l s j 】m e d i a t o s i n f l a m m 2 0 01 ，10 ( 5 ) ：2 5 9 - 2 6 7 4 v l o d a v s k yi ，f f i e m a n ny ，e l k i nm ，e t a l m a m m a l i a nh e p a r a n a s e ：g e n ec l o n i n g ，e x p r e s s i o n a n df u n c t i o ni nt u m o r p r o g r e s s i o na n dm e t a s t a s i s j 】n a tm e d ，19 9 9 ，5 ( 7 ) ：7 9 3 - 8 0 2 5 t o y o s h i m am ，n a k a j i m am h u m a nh e p a r a n a s e 阴b i o ic h e m ，19 9 9 ，2 7 4 ( 3 4 ) ： 2 4 1 5 3 2 2 4 1 6 6h u l e t tm d ，f r e e m a nc ，h a m d o r fb j ，e t a l c l o n i n go fm a r n m a l i a nh e p a r a n a s e ，a ni m p o r t a n t e n z y m ei nt u m o ri n v a s i o na n dm e t a s t a s i s j n a tm e d ，19 9 9 ，5 ( 7 ) ：8 0 3 8 0 9 7m a r c h e t t id ，l ij ，s h e nr ，ea 1 a s t r o c y t e sc o n t r i b u t et ot h eb r a i nm e t a s t a t i cs p e c i f i c i t yo f m e l a n o m ac e l l sb yp r o d u c i n gh e p a r a n a s e 阴c a n c e rr e s ，2 0 0 0 ，6 0 ( 17 ) ：4 7 6 7 - 4 7 7 0 8 d o n gj ，k u k u l aa k t o y o s h i m am ，e t a l g e n o m i co r g a n i z a t i o na n dc h r o m o s o m el o c a l i z a t i o n o f t h en e w l yi d e n t i f i e dh u m a nh e p a r a n a s eg e n e j 】g e n e ，2 0 0 0 ，2 5 3 ( 2 ) ：1 7 1 - 1 7 8 9 p i i l a r i s e t t is ，p a k al ，s a s a k ia ，e t a l e n d o t h e l i a lc e l lh e p a r a n a s em o d u l a t i o no fl i p o p r o t e i n l i p a s ea c t i v i t y e n d e n c et h a th e p a r a ns u l f a t eo l i g o s a c c h a r i d ei sa ne x t r a c e l l u l a rc h a p e r o n e j 】j b i o lc h e m ，1 9 9 7 ，2 7 2 ( 2 5 ) ：1 5 7 5 3 - 1 5 7 5 9 1 0 t a n gw w g l o m e r u l a re x t r a c e l l u l a rm a t r i xa c c u m u l a t i o n i ne x p e r i m e n t a la n t i g b ma b g l o m e r u l o n e p h r i t i s j n e p h r o n ，2 0 0 0 ，8 4 ( 1 ) ：4 0 - 5 0 1 l v a d a yg g ，l i d e ro e x t r a c e l l u l a rm a t r i xm o i e t i e s ，c y t o k i n e s ，a n de n z y m e s ：d y n a m i ce f f e c t s o ni m m u n ec e l lb e h a v i o ra n di n f l a m m a t i o n j 】jl e u kb i o l ，2 0 0 0 ，6 7 ( 2 ) ：1 4 9 1 5 8 1 2g r a h a ml d c o m p a r i s o no ft h eh e p a r a n a s ee n z y m e sf r o mm o u s em e l a n o m ac e l l s ，m o u s e m a c r o p h a g e sa n dh u m a np l a t e l e t s j 】b i o c h e mm o lb i o l ，19 9 6 ，3 9 ：5 6 3 - 5 7 1 1 3v l o d a v s k yi ，e l k i nm ，p a p p oo ，e t a l m a m m a l i a nh e p a r a n a s ea sm e d i a t o ro ft u m o r m e t a s t a s i sa n da n g i o g e n e s i s j 】i s rm e da s s o cj ，2 0 0 0 ，2 ( s u p p l ) ：3 7 - 4 5 1 4m i a nh q ，o r n i t zd ma i n g o r ne ，ea 1 m o d u l a t i o no ff i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o rr e c e p t o r i n d i n g , d i m e r i z a t i o n ，s i g n a l i n g , a - 1 5n da n g i o g e n i ca c t i v i t yb ys y n t h e t i ch e p a r i n m i m i c l i gp o l y a n i o n i cc o m p o u n d j ，jc l i ni n v e s t ， 1 9 9 7 ；9 9 ( 7 ) ：1 5 6 5 - 1 5 7 5 16i k u t am ，p o d y m ak a ，m a r u y a m ak e x p r e s s i o no fh e p a r a n a s ei no r a lc a n c e rc e l ll i n e sa n d o r a lc 锄c c rt i s s u e s j 】o r a lo n t o l ，2 0 0 1 ，3 7 ( 2 ) ：17 7 - l8 4 17p a r i s hc r ，f r e e m a nc ，b r o w nk j ，ea i d e n t i f i c a t i o no fs u l f a t e do l i g o s a c c h a r i d e 2 b a s e d 1 4 i n h i b i t o r so ft u m o rg r o w t ha n dm e t a s t a s i su s i n gn o v e li nv i t r of o ra n g i o g e n s i sa n dh e p a r a n a s e a c t i v i t y j 】c a n c e rr e s ，1 9 9 9 ，5 9 ( 1 4 ) ：3 4 3 3 3 4 4 1 2 3 1 4 18z c h a r i ae ，m e t z g e rs ，c h a j e k 2 s h a u lj m o l e c u l a rp r o p e r t i e sa n di n v o l v e m e n to fh e p a r a n a s e i nc , a n c 七rp r o g r e s s i o na n dm a m m a r yg l a n dm o r p h o g e n e s i s 【j 】m a m m a r yg l o u n db i o l o g y n e o p l a s m ，2 0 0 1 ，6 ( 2 ) ：3 11 - 3 2 2 1 9e n d ok , m a e j a r au ，b a b ah ，e t a l h e p a r a n a s eg e n ee x p r e s s i o na n dm e t a s t a t i cp o t e n t i a li n h u m a n g a s l r i cc a n c e r j a n t i c a n c e rr e s ，2 0 0 1 ，2 1 ( 5 ) ：3 3 6 5 - 3 3 6 9 2 0a k a o k am , n a o m o t oy ，o h