（病原生物学专业论文）结核杆菌ag85aesat6il21dna疫苗鼻粘膜免疫效应研究.pdf

东南大学学位论文独创性声明 i 叭y 洲1 7 m 6 帆吣1 呲7 帆9 1 6 眦 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构 的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 立墓整 日 期：功f 翌当一6 东南大学学位论文使用授权声明 东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位 论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人 电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论 文被查阅和借阅，可以公布( 包括刊登) 论文的全部或部分内容。论文的公布( 包 括干0 登) 授权东南大学研究生院办理。 研究生签名：避导师签名：锋日 中义摘要 结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 一i l 一21 d n a 疫苗鼻粘膜免疫效应研究 研究生王亚琴 导师窦骏教授 东南大学医学院病原生物学与免疫学系 中文摘要 结核病( t u b e r c u l o s i s ，t b ) 是由结核分枝杆菌( m y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s ，m t b ) 引起的慢性传染病，目前仍是危害全球公共卫生与健康的主要疾病之一。据w h o 公布的( 2 0 0 9 年结核病控制报告显示，2 0 0 7 年t b 的新增病例约达9 2 7 万，流行 病例达到1 3 7 0 万，约有1 3 2 万死亡病例( 仅指非感染h i v 的t b 病例) 年1 1 4 6 万h i v ( h u m a ni m m u n o d e f i c i e n c yv i r u s ) 阳性的t b 死亡病例。近年来，随着人口流动 的增加、多重耐药菌株( m u l t d r u gr e s i s t a n c e ，m d r t b ) 的出现、m t b 与h i v 病 毒伴发感染的发生以及卡介苗( b a c i l l u sc a l m e t t eg u e r i n ，b c g ) 接种防护的自身局 限性，结核病的发生率在全球呈上升趋势。 当前唯一可用的疫苗是b c g ，其免疫保护效果存在显著差异( 保护率o 8 0 ) 。b c g 在降低儿章原发性结核、结核性脑膜炎、粟粒性肺结核的发生方面 发挥了重要作用，但对成人结核病预防作用则较小，且艾滋病( a c q u i r e di m m u n e d e f i c i e n c ys y n d r o m e ，a i d s ) 病人接种b c g 后可引起全身播散性感染。鉴于b c g 的不足，研制新型疫苗以及对已研制的疫苗制定新的免疫策略增强抗结核效应就 迫在眉睫。 我们实验室在前期的研究中，构建了结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 融合基因与 i l 2 1 共表达的d n a 疫苗，通过肌肉注射的途径免疫实验动物，显示了一定的 免疫效应。由于m t b 的主要传播途径为呼吸道，鼻粘膜免疫在有效控制结核感 染方面显得尤为重要。鼻腔生理环境温和，抗原诱导免疫反应的阈值较低，加上 鼻腔内含有丰富的血管，而且鼻腔免疫操作方便、创伤小等有利条件，因此，在 前期实验基础上，我们采用鼻粘膜免疫的途径来观察其对实验动物的免疫及保护 效果。本实验分为三部分： 一、 鉴定结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 i l 2 1 d n a 疫苗靶抗原的表达 目的：鉴定结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 i l 2 1 d n a 疫苗靶抗原在小鼠黑色素瘤 ( b 1 6 f 1 0 ) 细胞中的表达。 方法：采用脂质体转染的方法，将结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 与i l 2 1 共表达 d n a 疫苗转染b 1 6 f 1 0 细胞，通过g 4 1 8 压力筛选出稳定转染的单细胞克隆。将 该克隆扩增，采用l m p c r 的方法鉴定靶抗原i l 2 1 的表达；采用w e s t e mb l o t 方法鉴定其中靶抗原a 9 8 5 a 、e s a t - 6 的表达。 中文摘要 结果：通过转染及r t - p c r 、w e s t e r nb l o t 鉴定，结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 - i l 2 1 d n a 疫苗能稳定表达目的基因i l - 2 1 、a 9 8 5 a 、e s a t - 6 。 结论：成功鉴定了结核杆菌a 9 8 5 a e s a t 0 6 i l - 2 1 d n a 疫苗靶抗原表达，为 下一步研究其对实验动物的免疫效应奠定了基础。 二、 结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 与i l 2 1 d n a 疫苗鼻粘膜免疫效应研究 目的：探讨结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 i l 2 1 d n a 疫苗，鼻粘膜免疫诱导 c 5 7 b l 6 小鼠免疫应答效应，寻求合适免疫途径诱发小鼠产生更强的免疫应答。 方法：实验分为生理盐水对照组、空质粒组、a 9 8 5 a e s a t - 6 组和a 9 8 5 a e s a t - 6 i l 2 1 组，采用鼻粘膜免疫c 5 7 b l 6 小鼠的方法，1 0 0 9 9 不同疫苗只， 每次f b j 隔一周，共免疫三次。通过n k 细胞和脾细胞杀伤活性、脾淋巴细胞增殖 实验，以及小鼠血清抗体、i f n 吖和i l 4 水平的检测，评价鼻粘膜免疫诱导 c 5 7 b l 6 小鼠免疫应答效果。 结果：结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 i l 2 l d n a 疫苗组，与对照组相比，在n k 细胞杀伤活性、脾细胞杀伤活性、脾淋巴细胞增殖方面显示出较好的免疫效应。 同时，免疫鼠的血清中抗体水平、i f n 吖和i l 4 水平也有明显上升，差异有显著 性意义。 结论：结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 与a 9 8 5 a e s a t - 6 i l 2 1 d n a 疫苗能够诱导 c 5 7 b l 6 小鼠产生有效的免疫应答，为进一步在动物体内进行保护性实验提供了 依据。 三、 结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 与i l 2 1 共表达d n a 疫苗初免b c g 鼻粘 膜加强免疫及其保护效应研究 目的：采用结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 与a 9 8 5 a e s a t - 6 i l 2 1 d n a 疫苗初免 b c g 加强( p r i m e b o o s t ) 策略，研究鼻粘膜免疫对c 5 7 b l 6 小鼠的免疫效果及 对结核杆菌的保护效应，为结核d n a 疫苗采用新的免疫方法提供新的思路。 方法：实验分为b c g 皮下对照组、空质粒组、a 9 8 5 a e s a t 0 6 组、a 9 8 5 a e s a t 6 i l 2 l 组和b c g 粘膜免疫组。采用鼻粘膜免疫c 5 7 b l 6 小鼠的方法， 1 0 0 9 9 不同疫苗只，每次间隔一周，不同d n a 疫苗初免两次，再用b c g 加强 免疫一次，共免疫三次：b c g 皮下组和b c g 粘膜组三次均采用b c g 进行免疫。 末次免疫两周后，每只鼠用2 0 0 9 1 1 1 0 6 c f u 结核杆菌h 3 7 r v 菌液通过尾静脉注 射，进行攻击实验，评价不同疫苗对结核杆菌的保护效果。 结果：与单独b c g 皮下组相比，d n a 疫苗初免b c g 加强组的n k 细胞杀 伤活性、脾细胞杀伤活性、脾淋巴细胞增殖有一定增强；脾细胞上清与攻击前后 血清中i f n 丫的分泌水平明显上升：同时支气管肺泡灌沈液( b a l ) 中的分泌性 i g a ( s i g a ) 的量在攻击前后显示一定的变化：b c g 皮下组 a 9 8 5 a e s a t - 6 i l 2 l 组 b c g 粘膜组。攻击后，a 9 8 5 a e s a t 0 6 i l 2 l 组与b c g 粘膜组肺组织载菌量 与b c g 皮下组相比，有所减少。 结论：结核杆菌a 9 8 5 a e s a t 0 6 及i l 2 l 共表达d n a 疫苗在采用p r i m e b o o s t 策略后，对实验鼠能产生较好的免疫效果及保护效应。 关键词：结核杆菌：a 9 8 5 a ；e s a t - 6 ；i l 2 1 ；d n a 疫苗；鼻粘膜免疫； 英文摘要 s t u d yo fi m m u n ee f f i c a c yo fi n t r a n a s a la d m i n i s t r a t i o n i n d u c e db yd n av a c c i n ee x p r e s s i n gm y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i sa 9 8 5 a - e s a t - 6a n di n t e r l e u k i n 一21i nm o u s e m o d e l a b s t r a ct t u b e r c u l o s i s ( t b li so n eo fm o s ti m p o r t a n tc h r o n i ci n f e c t i o u sd i s e a s e sw h i c hw a s c a u s e db ym y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s ( m t b ) a tp r e s e n t t br e m a i n sam a j o rg l o b a l h e a l t hp r o b l e m a c c o r d i n gt og 1 0 b a lt u b e r c u l o s i sc o n t r o l2 0 0 9p u b l i s h e db vw 6 r l d h e a l t ho r g a n i z a t i o n ( w h o ) ，t h el a t e s te s t i m a t e so ft h eg l o b a lb u r d e no ft bs h o wt h a t t h e r ew e r e9 2 7m i l l i o nn e wc a s e so ft bi n2 0 0 7 13 7m i l l i o np r e v a l e n tc a s e s a n d 1 3 2m i l l i o nd e a t hc a s e sf r o mt bw i t h o u ti n f e c t i o nw i t hh u m a ni m m u n o d e f i c i e n c y v i i u s ( h i v ) a n da na d d i t i o n a l0 4 6m i l l i o nt bd e a t hc a s e si n f e c t e dw i t hh i v r e c e n t l y ，t h ei n c i d e n c eo ft bh a st r e n d e di n c r e a s e d l yi nt h ew o r l d w i d ed u et ot h e m o b i l ep o p u l a t i o nr i s i n g ，t h em t bb e c o m i n gm u l t i d r u gr e s i s t a n c e ，t h ep a t i e n t s i n f e c t e dw i t hb o t hm t ba n dh i va sw e l la st h es e l f - l i m i t a t i o ni np r o t e c t i n gf r o mm t b i n f e c t i o nb yi n o c u l a t i o no fb c g t h ec u r r e n t l yo n l ya v a i l a b l ev a c c i n ea g a i n s tt bi sb c gt h a tt h ep r o t e c t i v e e 衔c a c yv a r i e sf r o mo t o8 0 t h o u g hb c gp l a y sa ni m p o r t a n tr o l ei nr e d u c i n gt h e p r i m a r yt b ，t u b e r c u l o u sm e n i n g i t i sa n dp h t h i s i sm i l i a r i si nc h i l d r e n 。h o w e v e r ，b c g h a sf a i l e dt oc o n f e re f f e c t i v ei m m u n ep r o t e c t i o nf r o mm t bi n f e c t i o ni na d u l t s i n a d d i t i o n ，t h ep a t i e n t sw i t ha c q u i r e di m m u n ed e f i c i e n c ys y n d r o m e ( a i d s ) m a yb e i n d u c e dt ob ed i s s e m i n a t e di n f e c t i o nw i t ht bb yb c gi n o c u l a t i o n i nv i e wo ft h e w e a k n e s so fb c gi ti su r g e n tt or e s e a r c han e wv a c c i n eo rm a k ean e wi m m u n e s t r a t e g yt op r o t e c ta g a i n s tt bi n f e c t i o n i np r e v i o u ss t u d i e s ，o u rl a bh a dc o n s t r u c t e dd n av a c c i n ee x p r e s s i n gm t b a 9 8 5 a e s a t - 6a n di l 21 a n di tw a sd e m o n s t r a t e dt h a tt h ec o e x p r e s s i n gd n a v a c c i n ec o u l de l i c i ti m m u n o l o g i c a le f f e c to nm o u s ei m m u n es y s t e mb yi n t r a m u s c u l a r i n o c u l a t i o n s i n c et bi sp r i m a r i l yar e s p i r a t o r ya i r w a yi n f e c t i o u sd i s e a s e i ti s s u p p o s e dt h a tm u c o s a lv a c c i n a t i o nd i r e c t e dt ot h er e s p i r a t o r ys y s t e mm a yp r o v i d ea b e t t e rp r o t e c t i o na g a i n s tp u l m o n a r yt bi n f e c t i o n i n t r a n a s a ld e l i v e r yo f f e r sd e s i r a b l e a d v a n t a g e s s u c ha se n v i r o n m e n te a s e ，al o wi m m u n o r e a c t i v et h r e s h o l di n d u c e db y a n t i g e n ，a b u n d a n tb l o o dv e s s e l i nn a s a lc a v i t y , af e a s i b l et om a n i p u l a t e ，a n dt h ea b i l i t y t ot r i g g e rn o to n l ym u c o s a li m m u n er e s p o n s eb u ta l s os y s t e m i ci m m u n er e s p o n s e t h e r e f o r e w ed e s i g n e dt h i se x p e r i m e n tt oo b s e r v et h ei m m u n ee f f e c tb yi n t r a n a s a l a d m i n i s t r a t i o nw h i c hw a si n o c u l a t e dw i t ht h ec o e x p r e s s i n gd n av a c c i n e t h i ss t u d y c o n s i s t e do ft h r e ep a r t sa sf o l l o w i n g ： 英义摘要 1 1 r oi d e n t i f yd n av a c c i n ee x p r e s s i n gm t b a 9 8 5 a - e s a t 6a n di l - 2l o b j e c t i v e ：t oi d e n t i f yt h et a r g e ta n t i g e ne x p r e s s i o n so fm t ba 9 8 5 a - e s a t - 6 一i l - 21i n b 1 6 f 1 0c e l l s m e t h o d s ：d n av a c c i n e c o e x p r e s s i n g m t ba 9 8 5 a e s a t - 6a n di l 21w a s t r a n s f e c t e di n t ot h ebl6 fl0c e l l sw i t hl i p o f e c t a m i n e t m2 0 0 0r e a g e n t a n dt h es t a b l e t r a n s f e c t e de e l lc l o n e sw e r es e l e c t e dt h r o u g hg 418s e l e c t i n gp r e s s u r e t h et a r g e t a n t i g e n i ce x p r e s s i o n so fa 9 8 5 a a n de s a t - 6i nt h es t a b l et r a n s f e c t e de e l lc l o n e sw e r e i d e n t i f i e db yw e s t e mb l o ta s s a y , a n di l 21w a si d e n t i f i e db vi m p c r r e s u l t s ：d n av a c c i n ei n c l u d i n gt h eg e n e so fm t ba 9 8 5 a e s a t - 6a n di l 21c a n e x p r e s st h et a r g e ta n t i g e n e si nt h ef f a n s f e c t e db i6 f10c e l l sb yw e s t e r nb l o ta s s a ya n d i m p c r c o n c l u s i o n ：d n av a c c i n ee x p r e s s i n g i d e n t i f i e ds u c c e s s f u l l y , a n di ti se s s e n t i a l e f f e c to ne x p e r i m e n t a la n i m a l s m t ba 9 8 5 a e s a t - 6a n di l - 21h a sb e e n f o rf u r t h e rs t u d y i n gd n av a c c i n e si m m u n e 2 1 s t u d yo ft h en a s a lm u c o s ai m m u n ee f f e c te l i c i t e db vd n av a c c i n e e x p r e s s i n gm t ba 9 8 5 a - e s a ，r 6a n di l 一2li nm o u s em o d e l o b j e c t i v e ：t oi n v e s t i g a t e a ni m m u n ee f f e c to fd n av a c c i n e e x p r e s s i n gm t b a 9 8 5 a e s 气t 6a n di l - 2 1i nc 5 7 b l 6m i c eb yn a s a lm u c o s ai m m u n i z a t i o na n dt o e x p l o r em o r es t r o n g ei m m u n er e s p o n s et oa 9 8 5 a - e s a t - 6i nt h em i c ei n d u c e db ya n a p p r o p r i a t ei m m u n er o u t e m e t h o d s ：c 5 7 b l 6m i c ew e r ed i v i d e di n t of o u rg r o u p sr a n d o m l y t h ec o n t r o lg r o u p m i c ew e r ei n o c u l a t e dw i t hs o d i u mc h l o r i d e t h et h r e ee x p e r i m e n t a lg r o u p sw e r et h e m o c kp l a s m i dg r o u p ，t h ea 9 8 5 a - e s a t - 6v a c c i n eg r o u pa n dt h ea 9 8 5 a - e s a t 6 i l 21v a c c i n eg r o u p ，r e s p e c t i v e l y 1o o g gd n av a c c i n ew a s r e s p e c t i v e l yi n j e c t e di n t op e r m o u s eb yi n t r a n a s a la d m i n i s t r a t i o n ，i nt o t a lo ft h r e et i m ei m m u n i z a t i o na ti n t e r v a l so f o n ew e e k t oe v a l u a t et h en a s a lm u c o s ai m m u n ee f f i c a c yi nm i c e t h ec y t o t o x i c i t i e so f n a t u r a lk i l l e r ( n k ) c e l l sa n ds p l e e nc e l l s ，t h ep r o l i f e r a t i v ea c t i v i t yo fs p l e e nc e l l sa s w e l la st h el e v e l so fa n t i b o d y , i f n 吖a n di l 4w e r er e s p e c t i v e l yd e t e c t e di nt h es e r u m f r o mt h ei m m u n i z e dm i c e r e s u l t s ：c o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o lg r o u p ，d n av a c c i n ee x p r e s s i n gm t ba 9 8 5 a e s a t - 6a n di l - 2lg r o u ps h o w e ds o m ei m m u n ee f f e c ti nm i c ea c c o r d i n gt ot h ed a t ao f t h ec y t o t o x i c i t i e so fn kc e l l sa n ds p l e e nc e l l s ，t h ep r o l i f e r a t i v ea c t i v i t yo fs p l e e nc e l l s a tt h es a m et i m e ，t h ea n t i b o d y , i f n 吖a n di l 4w e r ei n c r e a s e di nt h ei m m u n i z e d m i c e ss e r u m ，r e s p e c t i v e l y c o n c l u s i o n ：d n av a c c i n ee x p r e s s i n gm t ba 9 8 5 a e s a r - 6a n di l 2lc a ni n d u c e c 5 7 b l 6m i c et op r o d u c ee f - f e c t i v ei m m u n er e s p o n s e a n dt h er e s u l t sm a yp r o v i d ea c o n d i t i o nf o rf u r t h e rm a k i n gp r o t e c t i v ee x p e r i m e n t si nm i c e 3 t os t u d yo fi m m u n es t r a t e g ya n de f f i c i e n c yb a s e do nd n av a c c i n ee x p r e s s i n g m t b a 9 8 5 a - e s a t - 6a n di l - 21p r i m i n ga n db c gb o o s t i n gi nm i c e o b j e c t i v e ：t os t u d yo fi m m u n es t r a t e g ya n de f f i c i e n c yb a s e do nd n av a c c i n e c o 。e x p r e s s i n gm t ba 9 8 5 a - e s a t - 6a n di l 一21p r i m i n ga n db c gb o o s t i n gi nc 5 7 b l 6 m i c e t h i sm a y p r o v i d ea n e wm e t h o dt os t u d yt bd n av a c c i n e 英文摘要 m e t h o d s ：c 5 7 b l 6m i c ew e r ed i v i d e di n t of i v eg r o u p sr a n d o m l y b c gg r o u pm i c e w e r ei n o c u l a t e dw i t hb c gs u b c u t a n e o u si n j e c t i o n ( s c ) t h r e et i m e s t h ef o u r e x p e r i m e n t a lg r o u p sw e r et h em o c kp l a s m i dg r o u p ，t h ea 9 8 5 a e s a i t - 6v a c c i n eg r o u p ， t h ea 9 8 5 a e s a t - 6 i l 21v a c c i n eg r o u pa n db c gi n t r a n a s a l ( i n ) a d m i n i s t r a t i o n g r o u p ，r e s p e c t i v e l y 10 0 i t gd n a v a c c i n ew a sr e s p e c t i v e l yi n je c t e di n t op e rm o u s eb y i na d m i n i s t r a t i o ni nt h ee x p e r i m e n t a lg r o u p s ，t w i c ep r i m i n gi m m u n i z a t i o na n db c g b o o s t i n g i nt o t a lo ft h r e et i m ei m m u n i z a t i o na ti n t e r v a l so fo n ew e e k b c gi n a d m i n i s t r a t i o ng r o u pi st h a tm i c ew e r ei ni n o c u l a t e db c gt h r e et i m e sw i t h1 w e e k i n t e r v a l s a l lf i v eg r o u p sw e r ec h a l l e n g e dw i t h2 0 0 p i1 10 0c o l o n y f o r m i n gu n i t ( c f u lm t bh 37 r vs t r a i nb yc a u d a lv e i ni n j e c t i o na n di tw a se v a l u a t e dt h a tm i c e p r o t e c t e da g a i n s tt bi n f e c t i o nt w ow e e k sa f t e ri m m u n i z e dw i t ht h ed i f f e r e n tv a c c i n e s t h r e et i m e s r e s u l t s ：c o m p a r e dw i t ht h es i n g l e b c gs c g r o u p ，t h ed n a - p r i m i n g a n d b c g b o o s t i n gg r o u p si n c r e a s e di nt h ec y t o t o x i c i t i e so fn kc e l l sa n ds p l e e nc e l l sa s w e l la st h ep r o l i f e r a t i v ea c t i v i t yo fs p l e e nc e l l s t h es e c r e t o r ya m o u n to fi f n - vw a s i n c r e a s e do b v i o u s l yi nt h es u p e r n a t a n to ft h ep r o l i f e r a t i v es p l e e nc e l l sa n dt h es e r u m f r o mt h ei m m u n e dm i c ei nc o m p a r i s o no fp r e a n dp o s t c h a l l e n g e db ym t bh 37 r v s t r a i n a n dt h eq u a n t i t yo ft h es e c r e t o r yi g a ( s i g a ) i nt h eb r o n c h o a l v e o l a rl a v a g ef l u i d ( b a l ) v a r i e di nt h ep r e a n dp o s t c h a l l e n g e db vm t bh 37 r vs t r a i n i ts h o w e dt h a t b c gs cg r o u pw a st h eh i g h e s ta m o n gg r o u p s c o m p a r e dw i t ho t h e rg r o u p s ，t h e n u m b e ro fb a c t e r i ab u r d e ni nt h el u n gt i s s u ei nt h em i c ep o s t c h a l l e n g e db ym t b h 37 r vs t r a i nw a sd e c r e a s e di nb o t ho fa 9 8 5 a e s a l - 6 i l 2l g r o u pa n db c gi n g r o u p c o n c l u s i o n ：d n av a c c i n ee x p r e s s i n gm t ba 9 8 5 a e s 气t - 6a n di l 21 g e n e r a t e d s t r o n g e ri m m u n er e s p o n s ea n dp r o t e c t i o na g a i n s tt bi n f e c t i o ni nm i c eb yu s i n g p r i m e b o o s ti m m u n es t r a t e g y k e y w o r d s ：m y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s ；a 9 8 5 a ；e s a t - 6 ；i l - 21 ；d n av a c c i n e ； i n t r a n a s a la d m i n i s t r a t i o n v 目录 目录 中文摘要一一 页码 i 英文摘要i i i 目勇乇 符号、变量、缩略词等本论文的专用术语注释表 文i 献绢；述一一1 1 厶 日舌8 第一部分鉴定结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 i l 2 1 d n a 疫苗靶抗原的表达 一材料与方法1o 二结果l3 三讨论l4 第二部分结核杆菌a 9 8 5 a e s a t - 6 与i l 2 1 d n a 疫苗鼻粘膜免疫效应研究 一材料与方法1 6 二结果19 三讨论一 第三部分结核杆菌a 9 8 5 a - e s a t - 6 与i l - 2 1 共表达d n a 疫苗初免b c g 鼻粘膜 加强免疫及其保护效应研究 一材料与方法2 3 二结果2 7 三讨论3 4 结论38 参考文献3 9 附录4 4 致谢一4 8 作者简介4 9 v i 专业术语注释表 符号、变量、缩略词等本论文的专用术语注释表 v i i 文献综述 粘膜免疫：结核疫苗免疫的新途径 摘要：机体的粘膜免疫是抵御从粘膜途径入侵的外来物质的第一道防线。由粘膜 途径进行疫苗接种可在感染部位直接诱导局部保护性免疫应答，防止感染和疾 病。结核分枝杆菌主要通过呼吸道传播，因此，诱导有效的粘膜免疫应答对结核 分枝杆菌感染的预防和治疗具有重要的意义。 关键词：结核分枝杆菌；粘膜免疫；疫苗 a b s t r a c t ：m u c o s a li m m u n i t y , a st h ef i r s tp r o t e c t i v eb a r r i e ri nt h eo r g a n i s m f i g h t a g a i n s tt h ef o r e i g na n t i g e n st h r o u g ht h em u c o s a lr o u t ei n v a d i n g v a c c i n ei n o c u l a t e d b ym u c o s a lt r a c tc a ni n d u c el o c a lp r o t e c t i v ei m m u n i t yi ni n f e c t i o u sp o s i t i o n st of i g h t a g a i n s ti n f e c t i o n sa n dd i s e a s e s m y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s si sm a i n l yd i s s e m i n a t e d b yt h er e s p i r a t o r yt r a c t t h e r e f o r e a ne f f e c t i v em u c o s a li m m u n i t ys h o u l dp l a ya n i m p o r t a n tr o l ei nt h ep r e v e n t i o na n dt r e a t m e n to ft u b e r c u l o s i si n f e c t i o n k e yw o r d s ：m y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s ：m u c o s a li m m u n i t y ；v a c c i n e 粘膜是许多病原微生物入侵机体的重要通道，除由虫媒传播引起的疾病外， 大多数的病毒和细菌性病原体都是经粘膜途径感染机体的。因此，粘膜免疫在疾 病的预防和治疗及疫苗的研制中具有重要的意义。粘膜免疫系统是指粘膜相关淋 巴组织( m u c o s a la s s o c i a t e dl y m p h o i dt i s s u e ，m a l t ) ，包括鼻粘膜相关淋巴组织 ( n a s a la s s o c i a t e dl y m p h o i dt i s s u e ，n a l t ) 、肠相关淋巴组织( g u ta s s o c i a t e d l y m p h o i dt i s s u e ，g a l t ) 、支气管相关淋巴组织( b r o n c h u sa s s o c i a t e dl y m p h o i d t i s s u e ，b a l t ) 以及泌尿生殖道粘膜下淋巴组织及某些外分泌腺( 如唾液腺、乳腺 等) 粘膜相关淋巴组织共同构成的一个相对独立的体系。该系统在体内的覆盖面 积很大( 超过4 0 0 m 2 ) ，形成机体防御外界病原体的第一道屏障，同时由于其所 处的解剖位置和分布部位的特殊性，粘膜免疫系统既是机体系统免疫的重要组成 部分，又具有其相对独立性，因此在机体免疫中发挥着相对重要的作用_ 1 。 结核分枝杆菌( m y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s ，