（运动人体科学专业论文）不同耐力训练水平大鼠血乳酸拐点与自由基拐点动态变化规律的研究.pdf

iii 摘 要 研究目的研究目的：探讨不同耐力训练水平,大鼠血乳酸拐点、血自由基拐点的动态变化规 律。实证“自由基阈”客观存在，为深入研究血乳酸拐点、血自由基拐点的动态变化与 线粒体功能的关系奠定基础。 研究内容： 研究内容：通过对不同耐力水平三组大鼠，进行连续递增负荷至力竭的游泳运动训 练，在不同时间段观察：1.大鼠血清、股直肌、腓肠肌中 ros、mda 含量与血乳酸含量 的动态变化趋势。2.比较不同训练水平，大鼠血清、腓肠肌、股直肌 ros、mda 拐点和 血乳酸拐点随训练水平的提高是否同步向后移动的规律性变化。 3.分析血乳酸阈与自由 基阈出现拐点的时间及先后顺序。4、观察血乳酸拐点丙酮酸浓度变化。 研究方法： 研究方法： sd 雄性大鼠 108 只，随机分为三组，每组 36 只，每小组又随机分为 6 个亚组，每亚组 6 只。对三组大鼠进行 9 周不同强度的耐力训练，分别记为低耐力水平 t1 组，中等耐力水平 t2 组，高耐力水平 t3 组。t1 组分别进行 40、60、80 分钟无负荷 游泳训练各三周；t2 组按大鼠体重 1%的负荷进行 40、60、80 分钟游泳训练各三周；t3 组按大鼠体重 2%的负荷进行 40、60、80 分钟游泳训练各三周。取材时，分别完成递增 负荷游泳运动，从大鼠的 2%体重负荷开始，按大鼠体重的 1%负荷递增，每组大鼠各完 成六级负荷。大鼠运动结束后心尖抽血，取股直肌、腓肠肌，采用比色法（试剂盒）测 定大鼠血清、股直肌和腓肠肌 mda、ros 含量及血乳酸浓度和丙酮酸浓度。 结果：结果：1、三组不同耐力水平大鼠血乳酸浓度在拐点出现前随运动强度的增加呈缓 慢上升趋势。t1 组血乳酸拐点出现在 5%负荷时，t2 组血乳酸拐点出现在 6%负荷时，t3 组血乳酸拐点出现在 8%负荷时。 说明血乳酸拐点随耐力水平的提高而向后移动， 耐力水 平越高乳酸拐点出现的时间越晚、强度越大。 2、三组不同耐力水平大鼠血清、股直肌、腓肠肌的 mda、ros 的变化趋势基本一致， 随运动时间的延长和强度的加大均呈缓慢上升的趋势。t1 组 6%负荷组浓度与 5%负荷组 浓度相比非常显著升高 （p0.01） ， t2 组 7%负荷组浓度与 6%负荷组浓度相比非常显著升 高（p0.01） ；t3 组 8%负荷组浓度与 7%负荷组浓度相比非常显著升高（p0.01） 。说明 mda、ros 拐点随耐力水平的提高而向后移动。 3、三组不同耐力水平大鼠血清、股直肌、腓肠肌中 ros、mda 含量与血乳酸含量的 动态变化趋势基本一致， 同一时间负荷下， 中等水平训练组、 高水平训练组的 ros、 mda、 iv 血乳酸含量低于低水平训练组。 ros、 mda 拐点与血乳酸拐点均随耐力水平的提高同步向 后移动，并且血自由基拐点出现的时间和强度滞后于血乳酸拐点出现的时间和强度。 4、丙酮酸变化： 三组大鼠在 5%-7%负荷组浓度变化不大，t1 组 8%负荷组与 7%负 荷组相比显著升高（p0.05） ；t2 组 9%负荷组与 8%负荷组相比显著升高（p0.05） ；t3 组 9%负荷组与 8%负荷组相比显著升高（p0.05） ，10%负荷组与 9%负荷组相比显著升高 （p0.05） 。 结论： 结论： 1、三组不同耐力训练水平的大鼠，血乳酸的浓度和 mda、ros 的含量在同等负荷条 件下随耐力水平的提高而减少， 可能是训练提高了线粒体氧化磷酸化的供能能力和抗氧 化能力。 2、不同耐力训练水平大鼠股直肌、腓肠肌血液的 mda、ros 拐点变化趋势与血乳酸 拐点变化趋势基本一致，随耐力水平的提高同步向后移动，说明有同步变化的规律性。 3、三组不同练耐力训水平大鼠递增负荷至力竭运动后，血乳酸拐点出现的时间先 于血自由基拐点， 提示运动中除可用血乳酸拐点作为运动强度的监测指标外，还可用 血自由基拐点作为运动强度监控的上限指标。 4、血乳酸拐点时丙酮酸浓度变化不大，说明血乳酸拐点时丙酮酸并没有出现堆积。 关键词：关键词：耐力训练, 递增负荷,乳酸阈, 自由基, 自由基阈, 丙酮酸 v abstract research purposes：the paper aims to explore the blood lactate inflection point and blood free radicals inflection points dynamic changing rules in different levels of endurance training rats. and it will demonstrate the existance of threshold of free radicals, lay the foundation for an in-depth study of dynamic changes about the blood lactate inflection point and the free radicals inflection point and their relationship with mitochondrial function. research contents: through different levels of endurance training ,three groups of rats experience continuous incremental load to exhaustive swimming exercise. we observe them at various time periods: 1. rat serum, stock rectus, gastrocnemius in ros, mda content and blood lactate concents dynamic changing trend. 2. after the comparison of different training levels,we observe if the rat serum, gastrocnemius, rectus shares ros, mda and blood lactate inflection point inflection point move backward with the improving of training leveland if they change in regularity. 3. analyze the blood lactate threshold and free radicals thresholds emergence time and sequence of inflection point. research methods: sd male rats 108 were randomly divided into three groups, each 36 and each group also were randomly divided into six subgroups, each subgroup 6. three groups of rats go through 9 weekss different levels endurance training. and they were recorded as low endurance level of t1 group, middle-level endurance t2 group and high endurance level of t3 group. t1 group take no-load swimming training for 40min, 60min, 80min of each three weeks, t2 group take swimming training burdened with 1% of their body weight for 40min, 60min, 80min of each three weeks, t3 group take swimming training burdened with 2% of their body weight for 40min, 60min, 80min of each three weeks. when choosing materials ,the rats respectively completed incremental load of swimming exercise.starting from 2% of rat body weight load, the load increased according to 1% of rat body weight. all rats in each group completed six degrees of load. after rats sport ,we extract the cardiac apex blood, take stock rectus, gastrocnemius, and measure rat serum, stock rectus and gastrocnemius mda, ros content and blood lactate concentration using colorimetry (kit). vi results: 1, three different endurance levels of blood lactate concentration before the appearance of inflection point is slowly rising with the exercise intensity increasing, t1 group blood lactate inflection point occurred at 5% load,and t2 group blood lactate inflection point occurred at 6% load, while t3 group blood lactate inflection point occurred at 8% load. note blood lactate inflection point moves back with the endurance improved, endurance levels appear higher,the later the lactate inflection point appears, and the greater the intensity. 2, three different endurance levels of mda, ros in rat serum, stock rectus, gastrocnemius are basically the same , showing a slow increase upward trend, with the duration of the exercises and the strengthen of intensity . load group 6% concentration enhances greatly compared with the concentration of 5% load group referring to t1group (p 0.01), t2 group 7% load group concentration was significantly higher compared to the concentration of 6% the load group (p 0.01); t3 group group eight percent load concentration was significantly higher compared to the concentration of 7% the load group (p 0.01). it illustrates that mda, ros level of inflection point moves backward with the endurance improved . 3, three different endurance levels of ros, mda in rat serum, stock rectus, gastrocnemius are corresponding to the dynamic change trend of the blood lactic acid content ,under the condition of the same time load, ros, mda , blood lactate concentration of the middle-level training group, high-level training group of is lower than that of low-level training group. inflection points of ros, mda , blood lactate move backward with the endurance level elevated. at the same time , time and intensity of blood free radicals inflection point lag behind that of blood lactate inflection point . 4, three rats in the 5%-7% load group, concentration t1 group 8% and 7% load group compared significantly increased (p 0.05), t2 group 9% and 8% load is significant rise group (p 0.05), t3 group 8% and 9% load group compared with significantly increased (p 0.05), 10%and 9% load is significant rise group (p 0.05). conclusion: 1, endurance training in different levels ,by improving energy capacity of mitochondrial, can reduce blood lactate generation. 2, endurance training in different levels, by improving energy capacity of vii mitochondrial, cause the reduction of blood free radical content by taking mda, ros as an indicator . 3, endurance training in different levels, inflection point of ros, mda is corresponding to the inflection point of blood lactic acid ,move backward with the elevation of the endurance level, with the regularity of the simultaneous changes. 4, when the blood lactate inflection point occurs the pyruvate changed little, indicating there is no accumulation of pyruvate as the blood lactate inflection point occurs key words: endurance training, incremental load swimming, lactate threshold, free radicals, free radicals threshold ii 学位论文原创性声明 学位论文原创性声明 本人所提交的学位论文 不同耐力训练水平大鼠血乳酸拐点与自由基拐点动态变化 规律的研究 ，是在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的原创性成果。除文中已 经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成 果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中标明。 本声明的法律后果由本人承担。 论文作者（签名） ： 指导教师确认（签名） ： 年 月 日 年 月 日 学位论文版权使用授权书 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解河北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学 位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北师范大学可以将学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保 存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在 年解密后适用本授权书） 论文作者（签名） ： 指导教师（签名） ： 年 月 日 年 月 日 1 1 前 言 研究表明，急性高强度超负荷运动，不仅能引起体内血乳酸的急剧增加，而且还会 引起体内“自由基”的显著增加， 给人体带来一系列病理性的运动损伤。 大量研究表明， 人体的许多病理过程如炎症、缺血再灌注、衰老等都与自由基大量生成有关。大量研究 表明：自由基与肿瘤和其它疾病有关 1；自由基与衰老有关2；自由基与运动疲劳、运 动损伤有关 3。自由基是诱发组织细胞损伤、运动性疲劳的原因之一，可以加速细胞乃 至机体的损伤及衰老过程 4-6。研究发现，长期高强度的力竭性运动，能够增加自由基的 生成，并且使细胞的脂质过氧化反应加剧 7-9。还有研究结果发现，进行适量的有氧运动 可以有效地降低机体内自由基水平，使机体抗氧化系统的防御能力得到提高，从而减轻 机体内脂质过氧化程度 10-15。应用自由基理论、研究方法以及测试技术对由运动引起的 疲劳机制的探讨和研究，目前已经成为运动人体科学领域近些年来研究的一个热门话 题。探索运动与自由基的关系，如何清除运动引起的自由基，有效促进运动后疲劳的恢 复，也成了运动医学界研究的热点。 1.1 选题依据 运动导致体内出现高氧化应激现象发生，与运动量、运动强度关系密切。通过文献 网络检索综合分析， 发现对运动与自由基代谢的研究大多集中在对运动后不同时刻自由 基代谢的研究和整体与局部组织自由基代谢，以及运动过程中氧化-抗氧化的关系的研 究上。近些年来，对运动训练或一次急性运动对机体抗氧化能力和机体各组织内自由基 代谢的研究结论因实验条件的不同而略有偏差。有研究表明，机体内组织中的自由基水 平或血清中自由基含量并不是随着运动强度的加大和运动时间的延长而呈直线上升趋 势；机体内的抗氧化系统水平也并非随运动时间的延长和强度的加大而呈直线下降趋 势。大多研究结论基本相同，认为运动能破坏氧化-抗氧化的平衡，导致体内自由基含 量的增加。任昭君 16发现不同强度的运动训练都能提高大鼠安静状态下骨骼肌中 sod、 cat 的活性,降低 mda 含量, 而且中、 大强度运动训练的效果强于小强度运动训练。 吴瑕 17通过递增负荷游泳运动对大鼠血清、腓肠肌、心肌 ros、mda 含量变化的研究中发现， 自由基在代谢过程中出现了明显的拐点，并首次提出了“自由基阈”的定义。赵红喜 18 和郭娜 19在吴瑕研究的基础上，通过整体水平连续递增负荷至力竭性游泳运动，在不同 负荷不同时相下，观察多器官组织中超氧化物歧化酶（sod） 、活性氧（ros） 、总抗氧化 2 能力（t-aoc） 、丙二醛（mda） 、及血乳酸（bla）等指标的动态变化时发现：不同器官 组织的抗氧化能力存在着强弱差异， 各器官组织中自由基曲线升高趋势均出现了明显的 拐点，表明“自由基阈”存在，血乳酸拐点与血液自由基拐点之间有时间先后的关联。 目前对不同耐力水平，不同负荷运动中自由基动态变化的相关研究较少，把自由基 拐点动态变化与血乳酸拐点动态变化联系起来的研究更是很少见到。 在同一实验条件下 不同耐力水平训练后， 递增负荷游泳运动血自由基拐点与血乳酸拐点运动后的对比研究 有待进一步探讨。本研究在吴瑕、赵红喜和郭娜等人研究成果的基础上深入探讨不同耐 力训练对自由基拐点与血乳酸拐点随耐力水平的提高同步向后移动的变化规律。 1.2 研究目的 适量的有氧运动可提高机体有氧氧化能力，提高抗氧化系统的防御能力，降低机体 的自由基水平，减轻机体内脂质过氧化程度。吴瑕通过递增负荷游泳运动对大鼠血清、 腓肠肌、心肌 ros、mda 含量变化的研究，发现血液、腓肠肌和心肌中出现了自由基拐 点，并根据乳酸阈的定义首次提出了“自由基阈” 。赵红喜和郭娜通过整体水平连续递 增负荷力竭性游泳运动不同负荷、不同时相下的研究发现，整体水平下不同器官组织中 ros、mda 含量变化均出现了明显的拐点，验证了“自由基阈”的存在。 本研究是在吴瑕、赵红喜和郭娜等人的研究基础上，通过耐力训练连续递增负荷力 竭性游泳运动，探讨不同耐力训练水平大鼠血乳酸拐点、自由基拐点与腓肠肌、股直肌 自由基拐点随耐力水平的提高是否同步向后移动的动态变化存在规律性；实证“自由基 阈”确实存在及概念的成立；为今后深入研究血乳酸拐点、血自由基拐点的动态变化与 线粒体功能的关系奠定基础。 1.3 研究内容 本实验通过低耐力水平 t1 组、中等耐力水平 t2 组、高耐力水平 t3 组三组大鼠分 别进行 9 周耐力游泳运动训练， 分析不同耐力水平对递增负荷游泳大鼠在不同运动强度 与时间下，血清、股直肌、腓肠肌中 ros、mda 含量与血乳酸含量的动态变化趋势；分 析血清中活性氧（ros） 、丙二醛（mda）为指标的自由基曲线拐点与血乳酸曲线拐点的 动态变化趋势是否同步向后移动（与 t1 组比较） ，观察不同耐力水平不同强度时相下， 大鼠血清、腓肠肌、股直肌 ros、mda 拐点和血乳酸拐点随耐力训练水平的提高同步向 后移动的动态变化规律；分析“自由基阈”与血乳酸阈出现拐点的时间、强度，探讨自 由基阈与血乳酸阈在时间和强度上出现的先后顺序等。 。 3 1.4 研究意义 把血乳酸动态变化与血自由基动态变化联系起来，探讨有氧代谢（线粒体）与无氧 代谢（胞浆）的关系，抓住血乳酸曲线拐点与自由基曲线拐点之间的动态变化探讨其可 能机理，有重要的理论和实践意义。 自由基曲线拐点与血乳酸曲线拐点的动态变化趋势同步向后移动的研究结果， 可以 证实： （1）通过训练，提高线粒体抗氧化能力是减少自由基生成的关键。 （2）提高线粒体氧化磷酸化供能能力是推迟糖酵解代谢和乳酸生成减少的关键。 （3）这一现象的生理机制是否有着普遍规律性意义。 4 2 研究对象与方法 2.1 实验动物及分组 将大鼠（共 108 只）随机分为 3 组，每组 36 只，每组又随机分为 6 个亚组，每组 6 只，进行不同强度的耐力训练，分别记为低耐力水平 t1 组，中等耐力水平 t2 组，高耐 力水平 t3 组，分别完成递增负荷游泳运动中不同时相下的负荷。 2.2 实验设计和运动训练方案 大鼠购回后，适应性饲养 2 天，第 3 天进行一次 20 分钟的适应性游泳，第 4 天开 始正式训练。每周 6 次，周日休息。9 周耐力训练结束 48 小时后取材，以排除急性运动 对生理指标的影响。 2.2.1 运动条件 2.2.1 运动条件 内壁光滑的白色塑料大桶， 内径 50cm， 水深 70cm， 大于大鼠身长的 2 倍， 水温 32 1，恒温热水器保证水温。训练时每桶 3 只进行游泳，每次训练结束后用干毛巾擦 拭大鼠，并用电吹风吹干。疲劳的标准行为状态: 神情疲倦，呼吸深急、幅度大， “表 情”逐渐呆滞，反应能力下降，爪子划水动作逐渐缓慢，游泳动作明显变形等。 判断大鼠游泳力竭的标准：大鼠沉入水底经 10 秒钟仍不能回到水面。 2.2.2 正式取材前大鼠的适应性游泳训练 9 周2.2.2 正式取材前大鼠的适应性游泳训练 9 周 分组 第 13 周 第 46 周 第 79 周 低耐力水平 t1 中等耐力水平 t2 高耐力水平 t3 无负重游 40 分钟 负体重 1%游 40 分钟 负体重 2%游 40 分钟 无负重游 60 分钟 负体重 1%游 60 分钟 负体重 2%游 60 分钟 无负重游 80 分钟 负体重 1%游 80 分钟 负体重 2%游 80 分钟 2.2.2.1 第一组（t1 组）：无负重游泳训练2.2.2.1 第一组（t1 组）：无负重游泳训练 t1 组： 第一天进行适应性游泳训练 20 分钟， 从第二天开始进行三周的 40 分钟游泳 训练，第三周末递增至 60 分钟，从第四周开始进行 60 分钟的无负重游泳训练，第六周 末增至 80 分钟，从第七周至第九周进行 80 分钟的游泳训练。 2.2.2.2 第二、三组（t2 、t3 组） ：大鼠进行负重游泳训练 2.2.2.2 第二、三组（t2 、t3 组） ：大鼠进行负重游泳训练 t2 组： 第一天进行适应性游泳训练 20 分钟， 第一周进行 40 分钟的无负重游泳训练， 从第二周至第三周负体重的 1%训练 40 分钟， 第三周末递增至 60 分钟， 第四周负体重的 1%训练 60 分钟， 第六周末增至 80 分钟， 第七周至第九周进行负体重的 1%训练 80 分钟。 5 t3 组：第一天进行适应性游泳训练 20 分钟，第一周进行 1%的负重游泳训练 40 分 钟，从第二周开始至第三周进行负体重的 2%训练 40 分钟，第三周末递增至 60 分钟，从 第四周开始进行负体重的 2%训练 60 分钟， 第六周末增至 80 分钟， 第七周至第九周进行 负体重的 2%训练 80 分钟。 2.3 正式实验时运动方案 低耐力水平 t1 组 分组 0-3min 4-6min 7-9min 10-12min13-15min16-18min 19min-力竭 t1-1 t1-2 t1-3 t1-4 t1-5 ti-6 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 中等耐力水平 t2 组 分组 0-3min 4-6min 7-9min 10-12min13-15min16-18min19-21min 22-力竭 t2-1 t2-2 t2-3 t2-4 t2-5 t2-6 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 高耐力水平 t3 组 分组 0-3 4-6 7-9 10-1213-15 16-18 19-21 22-24 25-力竭 t2-1 t2-2 t2-3 t2-4 t2-5 t2-6 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 6 2.4 取材 大鼠完成既定负荷后迅速捞出，用 1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（200g 体重/1ml） ， 0.9%冷生理盐水（4）灌流，分别取血液（左心室取血） 、股直肌、腓肠肌，装入 ep 管，置于液氮中，-70冰柜中保存待测。 2.5 指标测试 2.5.1 测试指标2.5.1 测试指标 股直肌 mda、ros，腓肠肌 ros 、mda，丙酮酸、血清 ros、mda，血乳酸。 2.5.2 测试试剂盒 2.5.2 测试试剂盒 ros 试剂盒、血乳酸试剂盒、mda 试剂盒、丙酮酸试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定 试剂盒。以上测试试剂盒全部由南京建成生物工程研究所提供。 2.5.3 主要的实验仪器 2.5.3 主要的实验仪器 jx92-超声波细胞粉碎仪选自宁波新芝生物科技股份有限公司 mp200a 电子天平选自上海第二天平仪器厂 0516-1 高速离心机选自上海医疗器械有限公司 ikat10 高速匀浆机选自德国伊卡高速匀浆机 1-15k 高速冷冻离心机选自美国 sigma 公司 tu-1810 分光光度计选自北京普析通用仪器有限责任公司 mvs-1 高速旋涡混合器选自北京金北德工贸有限公司 tda-8002 恒温水浴箱选自天津市泰斯特仪器有限公司 2.5.4 测试方法 2.5.4 测试方法 剪取测试组织 200mg 左右，放入 ep 管中，按照 m/v=1:9 的比例加入冷生理盐水， 用眼科小手术剪刀将组织快速剪碎成小块状，此操作要在冰水浴中进行。将剪碎的组织 块用组织匀浆机制备成组织匀浆液(匀浆时间 10s/次，连续 3-5 次，每次间隙 30s，此项 操作将试管放在冰水中进行。再用超声细胞波粉碎仪进行粉碎（5s/次，反复 3-5 次，每 次间隙 10s） 。用 4的冷冻离心机将组织匀浆液以 1500rm 离心，离心时间 35min，然 后取上清液，保存在-30的冰箱中待测。 2.5.4.1 mda 测定方法：硫代巴比妥酸比色法测定 2.5.4.1 mda 测定方法：硫代巴比妥酸比色法测定 测定原理： 根据过氧化脂质降解后产物中的丙二醛(mda)可与硫代巴比妥酸(tba)进 行缩合，形成一种红色的产物，在 532nm 处有最大的吸收峰。 7 测定 mda 含量的计算见公式： 组织中的 mda 含量(nmol/mgprot)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)/（标准 管吸光度-标准空白管吸光度)标准品浓度(lonmol/ml)蛋白含量(mgprot/ml) (注：nmol/mgprot 为纳摩尔/毫克蛋白，mgprot/ml 为毫克蛋白/毫升) 血清中的mda含量(nmol/ml)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度- 标准空白管吸光度)标准品浓度(lonmol/ml)样本测试前稀释的倍数。 mda 测定操作方法表 标准管 标准空白管 测定管 l0nmol/ml 标准品(ml) 无水乙醇(ml) 测试样品(ml) 试剂二(ml) 试剂三(ml) 0.1 3 1 0.1 3 1 0.1 3 1 先用高速漩涡混匀器将溶液充分混匀，然后用保鲜膜将试管口扎紧，用针头在试管 口刺一小孔，放入 95的恒温水浴锅内进行水浴，水浴 40 分钟取出后流水冷却，然后 放入离心机内按每分钟 4000 转的速度离心，离心 l0min，然后取上清，532nm 处测定。 2.5.4.2 ros 测定方法：严格按照试剂盒说明进行操作 2.5.4.2 ros 测定方法：严格按照试剂盒说明进行操作 测定原理：fenton 反应是最常见的产生 ros 的化学反应，h2o2的量和 fenton 反应产生的 oh .的多少成正比关系。 2.5.4.3 血乳酸测定方法 2.5.4.3 血乳酸测定方法 测定原理：以 nad+为氢受体，ldh 催化乳酸脱氢产生丙酮酸，使 nad+转化成 nadh。 其中 pms 递氢使 nbt 还原为紫色呈色物， 呈色物吸光度在 530nm 时与乳酸含量呈线性关 系。 测定方法： 取血清 0.1ml 加入蛋白沉淀剂 0.3ml， 静置 10min 后， 3500rpm 离心 10min， 取上清，再按照试剂盒说明加入试剂、进行水浴、测试和计算. 2.5.4.4 丙酮酸测定 2.5.4.4 丙酮酸测定 原理：丙酮酸与显色剂反应，反应产物在碱性溶液中显红棕色，颜色深浅与丙酮酸 的含量成正比，通过比色可以测定出丙酮酸的含量。 2.5.4.5 蛋白含量的测定 2.5.4.5 蛋白含量的测定 8 测定原理：蛋白分子上具有-nh3+基团，为棕色的 cbbg250，在蛋白标准液或样 品中加入显色剂时，cbbg250 染料上阴离子可与蛋白分子上的-nh3+结合，使溶液变 为蓝色，通过测吸光度可计算出蛋白含量。 2.6 统计方法 数据处理采用 spss11.5 软件包进行数据分析，结果以平均数标准差表示。数据 的处理方法采用单因素方差分析法，多组间的比较采用 snk 多重比较法，显著性水平 用 p0.05 表示，非常显著性水平为用 p0.01 表示。 9 3 实验结果 3.1 耐力训练递增负荷游泳训练大鼠血乳酸浓度变化 表 1 三组不同耐力水平大鼠血乳酸浓度变化 (mmol/l) 分组 t1 t2 t3 2% 4% 5% 6% 7% 8% 9% 10% 8.060.67 8.340.7 9.520.7* 12.561.36* 13.510.77* 16.251.12* 7.370.7 7.610.66 8.750.87 9.881.17* 13.321.66* 15.111.02* 18.051.27* 6.50.78 7.150.51 7.830.52 8.500.87 9.870.66 11.231.1* 16.501.3* 18.330.86* 注：* 表示与前一组比有显著差异 p0.05 *与前一组相比有非常显著性 p0.01 表示与 2%组相比有显著相差异p0.05表示与2%组相比有非常显著性差异p0.01 图1 三组不同耐力水平大鼠血乳酸变化 表 2 三组不同耐力水平大鼠血乳酸拐点浓度变化(mmol/l) 分组 t1 t2 t3 拐点浓度 9.520.7 9.881.17 11.231.1 0 5 10 15 20 25 2% 4% 5% 6%7%8%9%10% 体重百分比负荷 血 乳 酸 (mmo l/ml ) 低水平组 中水平组 高水平组 10 由表 1、表 2、图 1 可见，在耐力训练递增负荷游泳条件下，大鼠血乳酸含量呈上 升趋势，t1 组大鼠 2%负荷的血乳酸至 5%负荷的血乳酸浓度上升幅度较小，6%负荷与 5%负荷血乳酸浓度相比具有非常显著性升高 （p0.01） 。 t2 组大鼠体重的 2%至 6%负荷 处血乳酸浓度上升幅度较小，7%负荷与 6%负荷处相比具有非常显著性升高（p0.01） ， 9%负荷与 8%负荷是的浓度相比也非常显著的升高（p0.01） 。t3 组大鼠体重的 2%至 8%缓慢上升，9%负荷与 8%负荷时浓度相比具有非常显著性升高（p0.01） ，10%与 9% 负荷浓度相比也非常显著的升高（p0.05） 。 3.2 耐力训练递增负荷游泳大鼠血丙酮酸浓度变化 表 3 大鼠丙酮酸变化(umol/ml) 分组 t1 t2 t3 5% 6% 7% 8% 9% 10% 0.260.04 0.270.04 0.290.03 0.330.03* 0.230.04 0.240.04 0.270.04 0.290.02 0.350.03* 0.220.04 0.230.05 0.240.04 0.270.04 0.300.03* 0.370.03* 注：* 表示与前一组比具有显著差异 p0.05 *与前一组相比具有非常显著性 p0.01 表示与 2%组相比具有显著相差异 p0.05表示与 2%组相比具有非常显著性差异 p0.01 图 2 三组不同耐力水平大鼠丙酮酸浓度变化 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 5% 6%7%8%9%10% 体重百分比负荷 丙 酮 酸 含 量 (umol /ml) 低水平组 中等水平组 高水平组 11 表4 三组大鼠丙酮酸浓度变化(umol/ml) 分组 t1 t2 t3 拐点浓度 0.290.03 0.290.02 0.300.03 由表 3、表 4、图 2 可以看出，耐力训练递增负荷条件下的三组大鼠的丙酮酸含量 在整个过程中都呈上升趋势。t1 组 8%负荷的大鼠的丙酮酸含量与 7%负荷时相比具有非 常显著性差异（p0.01） ， t2 组 9%负荷的大鼠的丙酮酸含量与 8%负荷组相比具有非常 显著性差异（p0.01） ，t3 组 10%大鼠的丙酮酸含量与 9%负荷组相比具有非常显著性差 异（p0.05） 。 3.3 耐力训练递增负荷游泳大鼠血 mda 浓度变化 表 5 大鼠血 mda 浓度变化(nmol/ml) 分组 t1 t2 t3 2% 4% 5% 6% 7% 8% 9% 10% 1.990.93 2.340.84 2.530.76 2.770.72 3.850.90* 4.560.62* 1.901.01 2.161.14 2.340.71 2.510.88 2.870.67 3.950.42* 4.951.56* 1.870.57 2.141.07 2.300.65 2.470.81 2.780.87 3.090.60 4.830.92* 5.330.94 注：* 表示与前一组比具有显著差异 p0.05 *与前一组相比具有非常显著性 p0.01 表示与2%组具有显著相差异p0.05 表示与2%组相比具有非常显著性差异p0.01 表6 不同耐力水平的三组大鼠拐点处mda浓度变化(nmol/ml) 分组 t1 t2 t3 拐点浓度 2.770.72 2.870.67 3.090.60* 注：*表示与t1组相比具有非常显著性差异p0.01 12 图3 不同耐力训练递增负荷游泳大鼠mda浓度变化 由表 5、表 6、图三可以看出，在耐力训练递增负荷游泳运动条件下，三组大鼠的 血液 mda 含量都呈上升趋势，t1 组在 2%至 6%负荷时浓度上升幅度不大，7% 负荷组与 6%负荷组相比显著升高（p0.05） ，t2 组 2%至 7%负荷组血液 mda 浓度上升幅度不大，8% 负荷组与 7%负荷组相比显著升高（p0.05）,t3 组 2%至 8%负荷组上升幅度不大，9%负 荷组与 8%负荷组相比有非常显著相升高（p0.01） 。t3 组拐点处的浓度与 t1 组相比显 著性升高，具有非常显著性差异（p0.01） 。 3.4 耐力训练递增负荷游泳大鼠血 ros 浓度变化 表 7 血液ros浓度表(u/ml) 分组 t1 t2 t3 2% 4% 5% 6% 7% 8% 9% 10% 546.1166.6 581.3722.8* 590.361.2 608.1563.3 700.891.7 * 728.8299.06 523.9330.9 561.557.5 580.963.48 595.7570.1 617.7675.2 703.2685.47* 736.2298.25* 517.433.75 512.4715.9 526.8151.9 559.359.2 579.150.8 610.6353.4 696.3856.6* 743.6778.28 注：* 表示与前一组比具有显著差异 p0.05 *与前一组相比具有非常显著性差异 p0.01 表示与 2%组相比有显著相差异 p0.05 表示与 2%组相比有非常显著性差异 p0.01 0 1 2 3 4 5 6 2% 4% 5%6%7%8%9%10% 体重百分比负荷 血 液 mda 含 量 (nmol /ml) 低水平组 中等水平组 高水平组 13 表 8 三组大鼠血液ros拐点处浓度变化(u/ml) 分组 t1 t2 t3 拐点浓度 608.1563.3 617.7675.2 610.6353.4 图4 不同耐力训练递增负荷