（外科学专业论文）cxcr4、vegf和mmp9在胆囊癌中的表达及意义.pdf

-r， 、r ：l 土l ，j 目录 中文摘要o ooooo oooooo oooeo0 1 英文摘要4 研究论文c x c r 4 、v e g f 和m m p 9 在胆囊癌中的表达及意义 前言8日u 舌“”“”“”“”“”“”“”一”一”8 材料与方法9 结果1 2 附图1 5 附表2 3 讨论3 0 结论3 5 参考文献3 5 综述c x c l l 2 c x c r 4 在肿瘤发生与转移中的作用4 2 致谢5 6 个人简历5 7 中文摘要 c x c r 4 、v e g f 和m m p 9 在胆囊癌中的表达及意义 摘要 目的：胆囊癌为胆道系统常见的恶性肿瘤，在胆道系统中其恶性度最 高，近年来随着胆囊结石发病率的增加，其发病率在我国有增高趋势。胆 囊癌缺乏特异性的临床症状和体征，起病隐匿，早期诊断困难，因此多数 患者就诊时已有局部侵犯或淋巴转移。而当作出诊断时常常已经是晚期， 其预后差，严重威胁着人民生命健康。 二 c x c r 4 ( c x cc h e m o k i n er e c e p t o r - 4 ，c x c r 4 ) 为一种g 蛋白偶联受体， 通过与趋化因子c x c l l 2 ( c x cc h e m o k i n el i g a n d 1 2 ，c x c l l 2 ) 结合， 参与机体内多种生理和病理过程，包括调节肿瘤相关的血管生成、激活宿 主对肿瘤的特异性免疫应答、以及调控肿瘤细胞对细胞外基质分子的粘附 等。c x c r 4 与c x c l l 2 构成的生物轴在肿瘤定向转移中发挥着关键作用。 血管内皮生长因子( v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r , v e g f ) 是最有效的 促血管生长因子，能直接作用于血管内皮细胞，调控血管发生和维持血管 内皮细胞的功能，在组织正常增生和异常增殖的发生和发展过程中起着非 常重要的作用。同时v e g f 也是肿瘤血管生成过程中的重要调节因子。 基质金属蛋白酶9 ( m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 9 ，m m p 9 ) 是基质金属蛋白酶 家族中分子量最大的酶，它以酶原的形式分泌，被激活后形成型胶原酶， 起降解、破坏靠近肿瘤表面的细胞外基质中的型、v 型胶原和明胶的作 用，然后肿瘤细胞沿着缺失的基底膜向周围组织浸润，最终导致肿瘤的侵 j 袭和转移。 本实验通过免疫组化技术检测c x c r 4 、v e g f 及m m p 9 在胆囊癌标 本的表达，分别并联合分析它们在胆囊癌组织中的表达水平与临床特征的 关系，探讨在胆囊癌侵袭转移中的作用，为今后用于临床预测患者预后和 临床干预效果的评价提供依据。 方法：选取河北医科大学第二医院病理科2 0 0 0 年1 月至2 0 0 7 年1 2 月间 手术切除、经病理证实的胆囊癌存档蜡块4 6 例，取慢性胆囊炎组织ll 陟l j 作 为对照组。 采用免疫组织化学s p 法，在胆囊癌及慢性胆囊炎组织中检测 中文摘要 c x c r 4 、v e g f 及m m p 9 蛋白的表达，分析其不同表达与年龄、性别、j t n m 分期、n e v i n 分期、肿瘤的分化程度以及临近器官有无转移等临床 特征的关系。 实验数据应用s p s s l 3 0 软件进行统计学处理。计数资料的比较采用 f 检验、f i s h e r 确切概率计算法，等级相关分析采用s p e a r m a n 检验。检 验标准以p 0 0 5 为有统计学意义。 结果：4 6 例胆囊癌的临床资料：男性2 1 例( 4 5 6 5 ) ，女性2 5n ( 5 4 3 5 ) 。年龄4 0 岁7 7 岁，平均年龄6 2 3 0 9 3 9 岁。病理学类型包括胆囊腺 癌3 2 例( 6 9 5 7 ) ，黏液腺癌3 例( 6 5 2 ) ，乳头状腺癌3 例( 6 5 2 ) ，管状 腺癌l 例( 2 1 7 ) ，鳞癌3 例( 6 5 2 ) ，腺鳞癌1 例( 2 1 7 ) 及类癌3 例 ( 6 5 2 ) 。组织学分化程度包括高分化17 例( 3 6 9 6 ) ，中分化2 3 例( 5 0 j 及低分化6 例( 1 3 0 4 ) 。术中或病理证实淋巴结转移的1 6 例( 3 7 8 3 ) ， 无转移的3 0 例( 6 5 2 2 ) 。术中或病理证实附近脏器浸润的1 9 侈u ( 4 1 3 0 ) ， 无浸润的2 7 例( 5 8 7 0 ) 。 根据2 0 0 3 年w h o 消化系统肿瘤t n m 分期标准，i 期l0 例， i i 期者o 例，i i i 期1 2 例，期2 4 例。回顾临床资料，采用临床n e v i n 分 期标准：肿瘤位于黏膜层者为i 期，3 例；侵犯黏膜及肌层者为i i 期，7 例；侵犯黏膜、肌层和浆膜层者为i i i 期，0 例：侵犯全层且伴有淋巴结转 移者为期，1 2 例；有邻近器官浸润者为v 期，2 4 例。 lc x c r 4 在胆囊癌和慢性胆囊炎组织中的表达情况 c x c r 4 在胆囊癌组织中，c x c r 4 蛋白阳性表达率为6 5 2 2 ( 3 0 4 6 ) ； 在慢性胆囊炎组织中的无阳性表达。c x c r 4 在两者之间表达阳性率差异 有显著性( p o 0 1 ) 。 2v e g f 在胆囊癌和慢性胆囊炎组织中的表达情况 v e g f 在胆囊癌组织中的阳性表达率为7 3 9 1 ( 3 4 4 6 ) ，在慢性胆囊 炎组织中的无阳性表达。v e g f 在两者之间表达阳性率有显著性差异 ( p o 0 1 ) 。 3m m p 9 在胆囊癌和慢性胆囊炎组织中的表达情况 m m p 9 在胆囊癌组织中的阳性表达率为7 6 0 9 ( 3 5 4 6 ) ；在慢性胆囊 炎组织中阳性率为1 8 1 8 ，均为弱表达。m m p 9 在两者之间表达阳性率 差异有显著性( p o 0 1 ) 。 中文摘要 4c x c r 4 、v e g f 和m m p 9 在胆囊癌组织中表达相关性及与临床特征关 系 胆囊癌组织中c x c r 4 、v e g f 和m m p 9 的表达两两之间有相关性 ( c x c r 4 与v e g f ：r = 0 3 9 8 ，p 0 0 1 ；c x c r 4 与m m p - 9 ：r = 0 4 4 7 ，p 0 0 1 ； v e g f 与m m p 9 ：r = 0 4 7 9 ，p 0 0 1 ) 。 胆囊癌组织中c x c r 4 v e g f 和m m p 9 蛋白的表达与t n m 分期、 临床分级和淋巴结转移有相关性( p o 0 5 ) ；4 6 例胆囊癌组织中有2 1 例 共同高表达c x c r 4 、v e g f 和m m p 9 蛋白，与t n m 分期、临床分级和 淋巴结转移有相关性( p o 0 5 ) 。 结论：胆囊癌组织中c x c r 4 、v e g f 和m m p 9 表达增高，可能协同 促进胆囊癌的侵袭转移。胆囊癌中c x c r 4 、v e g f 和m m p 9 的表达有相 关性，c x c r 4 、v e g f 和m m p 9 的同时高表达可能提示肿瘤具有更高的 侵袭转移能力。 关键词：胆囊癌；c x c r 4 ；v e g f ；m m p 9 ；转移 英文摘要 e x p r e s s i o na n ds i g n i f i c a n c eo fc x c r 4 、v e g fa n dm m p 9i n c a r c i n o m ao fg a l l b l a d d e r a b s t r a c t o b j e c t i v e ：g a l l b l a d d e r c a r c i n o m aw a so l l eo ft h em o s t c o m m o n m a l i g n a n c i e so ft h eb i l i a r yt r a c tw h o s ei n c i d e n c er a t ew a si n c r e a s i n gi nr e c e n t y e a r sw i t ht h ei n c r e a s ei nt h ei n c i d e n c eo fg a l l b l a d d e rs t o n e s ，f o rt h el a c ko f t y p i c a lc l i n i c a ls y m p t o m sa n ds i g n sf o re a r l yd i a g n o s i s ，t h ec a r c i n o m ah a d m e t a s t a s i z e df o rm o s t p a t i e n t sb y t h et i m eo fd i a g n o s i s t h ep r o g n o s i si sp o o r , a n di tt h r e a tl i f ea n dh e a l t ho f p a t i e n t ss e r i o u s l y c x c r 4 ( c x cc h e m o k i n er e c e p t o r - 4 ) i sa g p r o t e i n c o u p l e dr e c e p t o r ，。 w i t ht h ec h e m o k i n ec x c l 12 ( c x cc h e m o k i n el i g a n d 1 2 ) b i n d e d ，w h i c h t a k e sp a r ti nav a r i e t yo f p h y s i o l o g i c a la n dp a t h o l o g i c a lp r o c e s s e s ，i n c l u d i n g r e g u l a t i o no ft u m o r - a s s o c i a t e da n g i o g e n e s i s ，a n da c t i v a t i o no ft u m o r - s p e c i f i c h o s ti m m u n er e s p o n s e ，a sw e l la st h er e g u l a t i o no ft u m o rc e l l st oe x t r a c e l l u l a r m a t r i xa d h e s i o nm o l e c u l e sa n ds oo n t h eb i o l o g i c a la x i st om e t a s t a s i si n t u m o rm e t a s t a s i sp l a yak e yr o l ei no r i e n t a t i o n v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t h f a c t o r ( v e g f ) i st h em o s te f f e c t i v et op r o m o t eb l o o dv e s s e lg r o w t h ，w h i c hc a n a c to nv a s c u l a re n d o t h e l i a lc e l l sd i r e c t l y , r e g u l a t ea n g i o g e n e s i sa n dm a i n t e n e n o r m a lf u n c t i o no fe n d o t h e l i a lc e l l sa n dp l a ya 。v e r y i m p o r t a n tr o l e i nt h e o c c u r r e n c ea n dd e v e l o p m e n to ft h y p e r p l a s i a d y s p l a s i a a tt h es a m et i m e v e g fi sa ni m p o r t a n t r e g u l a t o r i nt h ep r o c e s so ft u m o r a n g i o g e n e s i s m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e - 9 ( m m p 9 ) h a sab i g g e s tm o l e c u l a rw e i g h ti nt h em a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s ef a m i l y , w h i c hi s s e c r e t e di nt h ef o r mo fz y m o g e n ，a n d f o r m e dc o l l a g e n a s et y p ei va f t e rb e i n ga c t i v a t e d ，a n dd e g r a d a t e st h ec o l l a g e n t y p eb a n dva sw e l la s g e l a t i ne x t r a c e l l u l a rm a t r i xn e a rt h es u r f a c eo f t u m o r , a n dt h e nt h em i s s i n gc e l lo ft u m o ri n f i l t r a t e a l o n gt h eb a s e m e n t i n e m b r a n et ot h es u r r o u n d i n gt i s s u e ，e v e n t u a l l yl e a d i n gt ot u m o ri n v a s i o na n d m e t a s t a s i s i nt h i se x p e r i m e n t ，t h ee x p r e s s i o no fc x c r 4 ，v e g fa n dm m p 9w a s 一一。 4 英文摘要 d e t e c t e db yi m m u n o h i s t o c h e m i s t r yi nt h eg a l l b l a d d e rc a r c i n o m as p e c i m e n a n dt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e ne a c he x p r e s s i o na n dt oc l i n i c a lf e a t u r e sw a s a n a l y s e dr e s p e c t i v e l y , a n d s t u d i e dt h e i rr o l ef o ri n v a s i o na n dm a t a s t a s i si n p a t i e n t sw i t hg a l l b l a d d e rc a r c i n o m aw e r es t u d i e d ，i no r d e rt op r e d i c tt h e ， c l i n i c a lp r o g n o s i so f p a t i e n t sa n de v a l u a t ei n t e r v e n t i o ne f f e c tf o rt r e a t m e n t m e t h o d s ：4 6c a s e so fg a l l b l a d d e rc a r c i n o m aa n d1 1c a s e so fc h r o n i c c h o l e c y s t i t i sw e r ec o l l e c t e df r o mt h ed e p a r t m e n to fp a t h o l o g y , t h es e c o n d h o s p i t a l ，h e b e im e d i c a lu n i v e r s i t yf r o mj a n u a r y2 0 0 0t od e c e m b e r2 0 0 7 a l l t h e s ec a s e sw e r et r e a t e db ys u r g i c a lo p e r a t i o n ，t h es p e c i m e nw e r ep a r a f f i n - e m b e d d e da n d h a db e e nc o l l e c t e d t h ee x p r e s s i o no fc x c r 4 ，v e g fa n dm 瓜压p 9w a se v a l u a t e d b y i m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t u d yi n4 6c a s e so fg a l l b l a d d e rc a r c i n o m aa n d1 lc a s e s o fc h r o n i cc h o l e c y s t i t i s t h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h es t a i n i n ge x p r e s s i o na n d c l i n i c o p a t h o l o g i c a l f e a t u r e s i n c l u d i n ga g e ，t u m o rs e x ，删s t a g e ，n e v i n s t a g e ，p a t h o l o g i c a lg r a d e ，a n dl y m p hn o d em e t a s t a s i sw a se x a m i n e d t h ed a t ew a st r e a t e dw i t hs t a s t i c ss o f t w a r eo fs p s sl3 0e d i t i o n t h e e x p e r i m e n t a ld a t aw e r ea n a l y z e dw i t hc h i - s q u a r et e s t ，f i s h e r se x a c tt e s t ，a n d c o r r e l a t i o nt e s tw a sa n a l y z eb ys p e a r m a nt e s t t e s tf o rp o 0 5s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t r e s u l t ：1 1 1 ec l i n i c a ld a t ao f 4 6p a t i e n t sw i t hg a l l b l a d d e rc a n c e r ：m a l e21 c a s e s ( 4 5 6 5 ) ，f e m a l e2 5c a s e s ( 5 4 3 5 ) ；a g ef r o m4 0t o7 7y e a ro l d ，w i t h a na v e r a g ea g eo f6 2 3 04 - 9 3 9 p a t h o l o g i c a lt y p e si n c l u d ea d e n o c a r c i n o m ai n 3 2c a s e s ( 6 9 5 7 ) ，m u c i n o u sa d e n o c a r c i n o m ai n3c a s e s ( 6 5 2 ) ，p a p i l l a r y a d e n o c a r c i n o m ai n3c a s e s ( 6 5 2 ) ，t u b u l a ra d e n o c a r c i n o m ai nlc a s e ( 2 1 7 ) ， s q u a m o u sc e l lc a r c i n o m ai n3c a s e s6 5 2 ) ，a d e n o s q u a m o u sc a r c i n o m ai n1 c a s e ( 2 17 ) ，a n dc a r c i n o i di n3c a s e s ( 6 5 2 ) h i s t o l o g i c a lg r a d e si n c l u d e w e l i d i f f e r e n t i a t e di n17p a t i e n t s ( 3 6 9 6 ) ，m o d e r a t e l yd i f f e r e n t i a t e di n2 3 c a s e s ( 5 0 ) ，a n dp o o r l yd i f f e r e n t i a t e di n6c a s e s ( 13 0 4 ) l y m p hn o d e m e t a s t a s i si n16 c a s e s ( 3 7 8 3 ) ，w i t h o u t m e t a s t a s i si n3 0c a s e s ( 6 5 2 2 ) ，s u r g e r yo rp a t h o l o g yc o n f i r m e dt h ei n f i l t r a t i o no fn e a r b yo r g a n si n 19c a s e s ( 41 3 0 ) ，n oi n f i l t r a t i o ni n2 7c a s e s ( 5 8 7 0 ) j 英文摘要 一 a c c o r d i n g t ot n m s t a g i n gi n ( ( d i g e s t i v es y s t e mn e o p l a s m s ) ) b yw h o p u b k s h e di n2 0 0 3 ，p e r i o d i10c a s e s ，p e r i o d1 10c a s e ，p e r i o di i i 12c a s e s ， p e d o di v2 4c a s e s r e v i e w i n gc l i n i c a ld a t aa n du s i n gc l i n i c a ln e v i ns t a g i n g ： t h e r ea r e3c a s e si ns t a g eit h a tt h et u m o ri so n l yi nt h em u c o s a ll a y e r , 7c a s e s i n s t a g e i ii n v a t i n gm u c o s a la n dm u s c u l a r l a y e r 0 c a s e i n v a l i n g m u c o s a ，m u s c u l a ra n ds e r o s al a y e r 1 2c a s e si ni vs t a g et h a ti n v a t e f u l l t h i c k n e s sa s s o c i a t e dw i t hl y m p hn o d em e t a s t a s i sa n d2 4c a s e si ns t a g e vt h a te n f i l t r a t ea d j a c e n to r g a n s 1 e x p r e s s i o n o fc x c r 4i n g a l l b l a d d e r c a r c i n o m aa n dc h r o n i c c h o l e c y s t i t i st i s s u e t h e p o s i t i v ee x p r e s s i o n r a t eo fc x c r 4w a s6 5 2 2 ( 30 4 6 ) i n g a l l b l a d d e rc a r c i n o m aa n do i nc h r o n i cc h o l e c y s t i t i s t h ed i f f e r e n c eo ft h e p o s i t i v er a t e w a s s i g n i f i c a n t ( p o 01 ) 2e x p r e s s i o no fv e g fi ng a ll b l a d d e rc a r c i n o m aa n dc h r o n i cc h o l e c y s t i t i s t i s s u e t h e p o s i t i v ee x p r e s s i o nr a t eo fv e g f w a s7 3 91 ( 3 4 4 6 ) i ng a l l b l a d d e r c a r c i n o m aa n do i nc h r o n i cc h o l e c y s t i t i st h ed i f f e r e n c eo ft h ep o s i t i v er a t e w a ss i g n i f i c a n t ( p o o1 ) 3 e x p r e s s i o n o fm m p 一9i n g a l l b l a d d e r c a r c i n o m aa n dc h r o n i c c h o l e c v s t l t l st i s s u e ， t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o nr a t eo fv e g fw a s7 6 0 9 ( 3 5 4 6 ) i ng a l l b l a d d e r c a r c i n o m aa n d18 18 i nc h r o n i cc h o l e c y s t i t i s t h ed i f f e r e n c eo ft h ep o s i t i v e r a t ew a ss i g n i f i c a n t ( p o 01 ) 4t h ec o r r e l a t i o no ft h ee x p r e s s i o no fc x c r 4 ，v e g fa n dl 、压i 、压p - 9i nt h e g a l l b l a d d e rc a r c i n o m a t h eo v e re x p r e s s i o no fc x c r 4w a sr e l a t e dt ot h o s eo fv e g fa n d m m p 一9i n g a l l b l a d d e rc a r c i n o m a ( c x c r 4a n d v e g f ：r = o 3 9 8 ，p 0 0 1 ； c x c r 4a n dm i 、但一9 ：r = 0 4 4 7 ，p 0 0 1 ：；v e g fa n dm m p 一9 ：r - - 0 4 7 9 ，p 0 0 1 ) 1 1 1 ee x p r e s s i o nr a t eo fc x c r 4 ，v e g fa n dm m p - 9i n4 6g a l l b l a d d e r c a r c i n o m as p e c i m e nw a s6 5 2 2 、7 3 91 a n d7 6 0 9 r e s p e c t i v e l y n e e x p r e s s i o nl e v e lo fc x c r 4 ，v e g fa n dm m p 一9w a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e ri n 6 英文摘要 g a l l b l a d d e rc a r c i n o m at h a ni nc h r o n i cc h o l e c y s t i t i st i s s u e ( p o 01 ) t h eh i g h e x p r e s s i o no fc x c r 4 ，v e g f a n dm m p 9w a sc o r r e l a t e dw i t ht n m s t a g e ， c l i n i c a ls t a g e ，i n f i l t r a t i o na n dl y m p hn o d em e t a s t a s i sr e s p e c t i v e l y ( p o 0 5 ) t h e r ew e r e21g a l l b l a d d e rc a r c i n o m as p e c i m e nw i t hh i g hc o - e x p r e s s i o no f c x c r 4 ，v e g fa n d m m p 一9i n4 6g a l l b l a d d e rc a r c i n o m as p e c i m e n t h eh i g h e r c o e x p r e s s i o no fc x c r 4 ，v e g f a n dm m p - 9w a sa s s o c i a t e dw i t ht n m s t a g e ， c l i n i c a ls t a g e ，i n f i l t r a t i o na n dl y m p hn o d em e t a s t a s i s ( p o 0 5 ) c o n c l u s i o n s ：t h ee x p r e s s i o nl e v e lo fc x c r 4 ，v e g fa n dm m p 一9w a s s i g n i f i c a n t l y e n h a n c e di n g a l l b l a d d e rc a r c i n o m a t h eh i g he x p r e s s i o n o f c x c r 4 ，v e g fa n dm m p - 9 ，a l o n ea n dt o g e t h e r , p r o m o t et h e i n v a s i o na n d m e t a s t a s i so fg a l l b l a d d e rc a r c i n o m a k e yw o r d s ：g a ll b l a d d e rc a r c i n o m a ；c x c r 4 ；v e g f ；m m p 一9 1m e t a s t a s i s 7 研究论文 c x c r 4 、v e g f 和m m p 9 在胆囊癌中的表达及意义 ， - j - 丽罱 胆囊癌为胆道系统常见的恶性肿瘤，在胆道系统中其恶性度最高，近 年来随着胆囊结石发病率的增加，其发病率在我国有增高趋势【l 】。胆囊癌 缺乏特异性的临床症状和体征，起病隐匿，早期诊断困难，因此多数患者 就诊时已有局部侵犯或淋巴转移。而当作出诊断时常常已经是晚期，其预 后差，严重威胁着人民生命健康。研究表明基因的突变和蛋白的改变能够 导致肿瘤的发生和发展，因此迫切需要通过了解这些生物指标与临床特征 及肿瘤发展的关系，用于预测患者预后，并指导选择更合适的治疗方案， 以达到改善预后的目的。 c x c r 4 ( c x cc h e m o k i n er e c e p t o r - 4 ，c x c r 4 ) 为一种g 蛋白偶联受体， c x c l l 2 ( c x cc h e m o k i n el i g a n d 1 2 ) 是目前已知唯一与c x c r 4 结合并 激活的天然趋化因子【2 】，参与机体内多种病理和生理过程，包括调节肿瘤 相关的血管生成、激活宿主对肿瘤的特异性免疫应答、以及调控肿瘤细胞 向细胞外基质分子的粘附等 3 - 5 1 ，并在人类免疫缺陷病毒( h u m a n i m m u n o d e f i c i e n c yv i r u s ，m v ) 感染c d 4 + 淋巴细胞中起协同受体作用等【6 1 ， 最近研究表明c x c r 4 在许多恶性肿瘤组织中其表达水平明显升高【7 。1 ， 在癌细胞生长浸润中发挥重要作用，c x c r 4 与c x c l l 2 构成的生物轴在 肿瘤定向转移中发挥关键作用【12 1 。 实体肿瘤的持续生长和侵袭转移有赖于充足的血液供应，肿瘤新生血 管形成是必备的条件【l3 1 。血管内皮生长因子( v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t h f a c t o r , v e g f ) 是目前所知的作用最强、选择性最高的内皮细胞丝裂原， 是肿瘤血管生成过程中的重要调节因子。v e g f 表达对胆囊癌的生长、浸 润和转移起着非常重要的作用4 五0 1 。 肿瘤的浸润和转移是十分复杂的过程，其中关键之一是基底膜的降 解。型胶原是基底膜的主要支架，基质金属蛋白酶能够降解细胞外基质 ( e x t r a c e l l u l a rm a t r i x ，e c m ) ，促进肿瘤的侵袭与转移1 2 1 】。基质金属蛋白酶 9 ( m a r xm e t a l l o p r o t e i n a s e 9 ，m m p 9 ) 是基质金属蛋白酶家族中分子量最 大的酶，它以酶原的形式分泌，被激活后形成型胶原酶，降解、破坏靠 研究论文 近肿瘤表面的细胞外基质中的型、v 型胶原和明胶，然后肿瘤细胞沿着 缺失的基底膜向周围组织浸润，最终导致肿瘤的侵袭和转移1 2 列。 近年有实验报道c x c l l 2 作用于c x c r 4 促进肿瘤分泌m m p - 9 【2 3 。 肿瘤能通过自分泌v e g f 途径上调c x c r 4 的表达；c x c r 4 也可能通 过上调v e g f 影响新生血管的形成，在肿瘤的生长浸润和转移中起重要 作用【2 5 1 。然而这些结论均局限于体外实验，在胆囊癌中未出现类似实验研 究，也未分析这些蛋白表达与临床特征之间的关系。本实验通过免疫组化 技术检测c x c r 4 、v e g f 及m m p 9 在胆囊癌标本的表达，分别并联合分 析它们在胆囊癌组织中的表达水平与临床特征的关系，探讨在胆囊癌侵袭 转移中的作用，为今后用于临床预测患者预后和临床干预效果的评价提供 依据。 材料与方法 l 材料 1 1 标本 1 1 1 标本选取 选取河北医科大学第二医院病理科2 0 0 0 年1 月至2 0 0 7 年l2 月间手 术切除、经病理证实的胆囊癌存档蜡块4 6 例，取慢性胆囊炎组织1 1 例为 对照组。所有病例切片均由两位高年资病理医师按2 0 0 3 年w h o 消化 系统肿瘤的诊断标准复核。 1 1 2 分类 按照2 0 0 3 年w h o 消化系统肿瘤的诊断标准。本研究中，胆囊 癌的临床资料( t a b l e1 ) ：其中男性2 l 例( 4 5 6 5 ) ，女性2 5 例( 5 4 3 5 ) ， 年龄4 0 岁7 7 岁，平均年龄6 2 3 0 - 4 - 9 3 9 岁。病理学类型包括胆囊腺癌3 2 例( 6 9 5 7 ) ，黏液腺癌3 例( 6 5 2 ) ，乳头状腺癌3 例( 6 5 2 ) ，管状腺癌l 例( 2 1 7 ) ，鳞癌3 例( 6 5 2 ) ，腺鳞癌1 歹l j ( 2 1 7 ) ，类癌3 例( 6 5 2 ) 。 组织学分化程度包括高分化l7 例( 3 6 9 6 ) ，中分化2 3 例( 5 0 ) ，低分化 6 侈t j ( 1 3 0 4 ) 。术中或病理证实淋巴结转移的1 6 例( 3 7 8 3 ) ，无转移的 3 0 例( 6 5 2 2 ) 。术中或病理证实附近脏器浸润的1 9 侈i j ( 4 1 3 0 ) ，无浸润 的2 7 例( 5 8 7 0 ) 。 j 研究论文 1 1 3 t n m 分期 根据2 0 0 3 年w h o 消化系统肿瘤t n m 分期标准，i 期1o 例， i i 期者o 例，i i i 期1 2 例，期2 4 例。 1 1 4 n e v i n 分期 回顾临床资料，采用临床n e v i n 分期标准：肿瘤位于黏膜层者为i 期， 3 例；侵犯黏膜及肌层者为i i 期，7 例；侵犯黏膜、肌层和浆膜层者为i i i 期，0 例；侵犯全层且伴有淋巴结转移者为期，1 2 例；有邻近器官浸润 者为v 期，2 4 例。 1 2 试剂， 鼠抗人c x c r 4 单克隆抗体a b c a m 公司 兔抗人v e g f 单抗北京中杉金桥生物公司 兔抗人m m p 9 单抗( 即用型)福州迈新生物公司 h i s t o s t a n r m p l u s k i t ss p 免疫组化试剂北京中杉金桥公司 d a b 显色试剂福州迈新生物公司 柠檬酸盐抗原修复液福州迈新生物公司 a p e s 防脱片剂福州迈新生物公司 ， 苏木素染液台湾b a s o 贝索企业 伊红染液台湾b a s o 贝索企业 1 3 仪器 旋转切片机：m i c r o m ( 德国m i c r o m 公司) 摊片烤片机：亚鹏c s v i 型( 孝感市宏业医用仪器有限公司) 保温箱：3 0 3 - 4 a 数显电热保温箱 冰箱： e l e x t r o l u x ( 长沙伊莱克斯电器有限公司) 光学显微镜： o l y m p u sc x 2 1 ，日本 照相机：o l y m p u sp m 2 0 ，日本 2 方法 2 1h e 染色 2 1 1 切片常规脱蜡至水。 2 1 2 苏木素染色3 分钟，自来水冲洗。 2 1 31 盐酸酒精中分化后立即取出，自来水冲洗。 2 1 41 的氨水返蓝1 0 秒，自来水冲洗。 研究论文 2 1 5 伊红染色1 分钟，自来水冲洗。 2 1 6 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 2 1 7 常规病理形态学观察。 2 2 免疫组织化学染色： 免疫组织化学染色，各例石蜡组织均取切片五张，三张分别做 c x c r 4 、v e g f 及m m p 9 免疫组化染色，一张进行h e 染色，一张备用。 染色过程中均设有阳性和阴性对照。用已知阳性切片作对照，阴性对照以 p b s 替代一抗，具体步骤如下：， 2 2 1组织蜡块经4um 厚度连续切片后，置烤箱6 0 干燥，贴附4 0 分 钟； 2 2 2 切片常规脱蜡至水：二甲苯i 、i i 、i i i 各1