（内科学专业论文）羟苯磺酸钙对慢性肾功能不全大鼠tpa、pai1表达的影响.pdf

中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名薹丞日期：诬包茎：z 星 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名：至显 指导教师签名：遂必缓 日 期： 五匕【：丛 6 6 7 l 2 2 介 一 简述谢人综致个 中文论著摘要 羟苯磺酸钙对慢性肾功能不全大鼠t - p a 、p a l 1 表达 的影响 目的 慢性肾功能不全( c r f ) 患者体内组织型纤溶酶原激活物( t p a ) 活性下降，纤 溶酶原激活剂抑制物i ( p a i 1 ) 活性增强所致的两者平衡紊乱可加重凝血亢进和 纤溶减退，加速肾脏纤维化，促进c r f 的发展。本实验的目的是观察羟苯磺酸钙 ( 安多明) 对5 6 肾切除大鼠残肾组织t p a 及p a l 1 表达的影响，探讨羟苯磺酸钙改 善c r f 肾脏微循环障碍、延缓纤维化的作用机制。 方法 5 6 肾切除制备大鼠c r f 模型，随机分为模型组和治疗组。模型组( n - - 9 ) 予 饮用水灌胃8 周；治疗组( n - - 9 ) 予羟苯磺酸钙1 2 0 m g k g d 灌胃8 周。另设假手 术组( n = 6 ) 仅剥离肾包膜。实验第l o 周所有大鼠称重、处死，下腔静脉采血， 测定血肌酐( s 0 0 ，尿素氮( b u n ) 。摘除肾脏，称重、固定、做光镜观察及t - p a 和 p a l 1 免疫组织化学检测。 鼽b田 ：口木 羟苯磺酸钙治疗组和模型组大鼠s c r ，b u n 较假手术组增高，模型组与假手 术组比较差异有统计学意义( p ，o 0 1 ) ，治疗组较模型组有显著降低；h e 染色： 假手术组肾小球，肾间质基本正常。模型组及治疗组均有不同程度的肾小球节段 性硬化，肾小球系膜细胞及基质增生，模型组还可见球囊黏连，毛细血管袢塌陷； 肾小管间质呈慢性病理改变，肾小管上皮细胞空泡变性，多灶状的肾小管萎缩、 炎性细胞浸润以及肾间质纤维化。治疗组小球硬化程度及间质病变程度明显轻于 模型组，肾小球硬化指数( g i ) 及间质病变程度半定量分级，两组数据差异有统 计学意义( 尸 0 0 1 ) ；t - p a 表达：假手术组t - p a 在肾小球毛细血管袢的表达区域 和染色强度强于治疗组和模型组，治疗组t p a 表达较模型组明显增加， 计学意义( 氏0 0 1 ) ；p a l 1 表达：假手术组p a l 1 表达区域和染色强度 和治疗组减少，治疗组p a l 1 表达较模型组明显减少，差异有统计学意义( 结论 羟苯磺酸钙能升高c r f 大鼠t p a 活性，改善肾脏局部微循环：羟苯 抑制c r f 大鼠p a l 1 活性，抑制血栓形成，改善肾组织纤维化程度；羟 能显著降低c r f 大鼠s c r , b u n 水平，改善肾功能。 关键词 羟苯磺酸钙；慢性肾功能不全；t p a ：p a l 1 2 英文论著摘要 i m p a c to f c a l c i u nd o b e s i l a t eo nt h ee x p r e s s i o no ft - - p a a n dp a i 1i nr e n a lt i s s u eo fc h r o n i cr e n a lf a i l u r er a t s o b j e c t i v e c k o m cr e n a lf a i l u r e ( c r f ) p a t i e n t si st i s s u e t y p ep l a s m i n o g e na c t i v a t o r ( t - p a ) a c t i v i t yd e c r e a s e d ，p l a s m i n o g e na c t i v a t o ri n h i b i t o r - 1 ( p a i - 1 ) a c t i v i t yi n c r e a s e dd u e t o b o t hab a l a n c ed i s o r d e rm a yi n c r e a s et h eb l o o dc o a g u l a t i o nh y p e r a c t i v i t ya n d f i b r i n o l y t i cd e c l i n e ，a c c e l e r a t e dr e n a lf i b r o s i s ，f o rr e n a lf a i l u r ed e v e l o p m e n t p u r p o s eo f t h i ss t u d yi st oo b s e r v et h ee f f e c to fc a l c i u md o b e s i l a t e ( a nd u o m i n g ) o nt h e e x p r e s s i o no ft - p a a n dp a i 1i n5 6n e p h r e c t o m y r e m n a n tr e n a lt i s s u eo fc r fr a t sa n d t oe x p l o r et h ep o s s i b l em e c h a n i s mo f t h ed r u g m e t h o d s 5 6n e p h r e c t o m yp r e p a r a t i o no fr a t sw i t hc r fw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t om o d e l g r o u pa n dt r e a t m e n tg r o u p t h em o d e lg r o u p ( n - - - 9 ) f e dw i t hd r i n k i n gw a t e r f o r8w e e k s ， t r e a t m e n tg r o u p ( n = 9 ) f o rc a l c i u md o b e s i l a t e12 0 m g k g dg a v a g ef o r8w e e k s a s e p a r a t es h a m - o p e r a t e dg r o u p ( n = 6 ) o n l yt h es p i n - o f fr e n a lc a p s u l e a l lt h er a t sw e r e w e i g h e d ，s a c r i f i c e d ，i n f e r i o rv e n a c a v ab l o o dt o m e a s u r e ds e r u mc r e a t i n i n e ( s c o ， b l o o du r e an i t r o g e n ( b u n ) a f t e rt e nw e e k s r e m o v a lk i d n e yw e r ew e i g h e d , f i x e d ，t h e n o b s e r v e dw i t hl i g h tm i c r o s c o p ea n di m m u n o h i s t o c h e m i s t r yd e t e r m i n d e do ft - p aa n d p a i - 1 r e s u l t s c a l c i u md o b e s i l a t et r e a t m e n tg r o u pa n dm o d a lg r o u pr a t ss c r , b u na l eh i g h e r t h a ns h a mg r o u p ，m o d e lg r o u pt h a ns h a mg r o u ps i g n i f i c a n t l yi n e a s e d 衅0 0 1 ) ， t r e a t m e n tg r o u pt h a nm o d e lg r o u ps i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e d ；h e ：s h a mg r o u pg l o m e r u l a r , 3 r e n a li n t e r s t i t i a la r en o r m a l m o d e lg r o u pa n dt r e a t m e n tg r o u pd i f f e r e n td e g r e e s g l o m e r u l a rs e g m e n t a ls c l e r o s i s ，m e s a n g i a lc e l l sa n dm a t r i xh y p e r p l a s i a , m o d e lg r o u p a l s ov i s i b l eb a l l o o na d h e s i o n s ，c a p i l l a r yl o o p sc o l l a p s e t u b u l a r - i n t e r s t i t i a ls h o w e d c h r o n i cr a t i o n a l ec h a n g et u b u l a re p i t h e l i a lv a c u o l a rd e g e n e r a t i o n ，m u l t if o c is h a p e d t u b u l a ra t r o p h ya n dv i s i b l em u l t if o e is h a p e dr e n a li n t e r s t i t i a lf i b r o s i sa n di n f l a m m a t o r y i n f i l t r a t i o n t r e a t m e n tg r o u pb a l ls c l e r o s i sd e g r e ea n di n t e r s t i t i a ll e s i o n o b v i o u s l y l i g h t e rt h a nm o d e lg r o u p g l o m e r u l o s c l e r o s i si n d e x ( g i ) a n di n t e r s t i t i a ll e s i o ns e m i q u a n t i t a t i v eg r a d i n g , t w od a t ad i f f e r e n c es i g n i f i c a n t ( 尸 0 o1 ) ；t o p ae x p r e s s i o n ：s h a m g r o u pt - p ai ng l o m e r u l a rc a p i l l a r yl o o p se x p r e s s i o nr e g i o n a la n ds t a i n i n gi n t e n s i t y s t r o n g e rt h a nt r e a t m e n tg r o u pa n dm o d e lg r o u p ，t r e a t m e n tg r o u pt - p ae x p r e s s i o nt h a n m o d e lg r o u pi n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y ( 尸 o 0 1 ) ；p a l 1e x p r e s s i o n ：s h a mg r o u pp a i - 1 e x p r e s s i o nr e g i o n a l a n ds t a i n i n gi n t e n s i t yt h a nm o d e lg r o u pa n dt r e a t m e n tg r o u p r e d u c e d ，t r e a t m e n tg r o u pp a i 1e x p r e s s i o nt h a nm o d e lg r o u pr e d u c e ds i g n i f i c a n t l y ( p 0 0 1 ) c o n c l u s i o n c a l c i u md o b e s i l a t ec o u l di n c r e a s ec r fr a t st - p aa c t i v i t y , i m p r o v er e g i o n a lr e n a l m i c r o c i r c u l a t i o n ；c a l c i u md o b e s i l a t ec o u l di n h i b i tc r fr a t sp a i 一1a c t i v i t yi n h i b i t i o n t h r o m b o s i s ，l i g h t e nr e n a lf i b r o s i s ；c a l c i u md o b e s i l a t es i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e dc r fr a t s s c r , b u nl e v e l ，p r o t e c tr e n a lf u n c t i o n k e yw o r d s c a l c i u md o b e s i l a t e ；c h r o n i cr e n a lf a i l u r e ；t - p a ；a i 一1 4 英文缩略语 5 论文 羟苯磺酸钙对慢性肾功能不全大鼠t - p a 、p a l 1 表达 的影响 前言 慢性肾功能不全( c r f ) 患者体内组织型纤溶酶原激活物( t p a ) 活性下降， 纤溶酶原激活剂抑制物i ( p a l 1 ) 活性增强所致的两者平衡紊乱可加重凝血亢进 和纤溶减退，加速肾脏纤维化，促进c r f 的发展。近年来临床及动物试验证明微 血管保护剂羟苯磺酸钙可显著升高c r f 患者的肾小球滤过率，降低血肌酐( s c 0 ， 尿素氮( b u n ) 水平，延缓c r f 进展。但其具体通过何种途径降低s c r 尚未明确。 本文拟采用免疫组织化学方法观察5 6 。肾切除大鼠残肾组织t - p a 和其抑制物p a l 1 的表达及羟苯磺酸钙治疗对其表达的影响。 材料和方法 一、材料 l 、实验动物 6 - 8 周龄，体重1 8 0 2 0 0 9 清洁级s d 雌性大鼠2 4 只，中国医科大学动物部提 供。 2 、试剂和仪器 羟苯磺酸钙( 安多明，贵州天安药业) ；小鼠抗大鼠t - p a 单克隆抗体( s a n t ac r u z , u s a ) ；兔抗鼠p a l - 1 多克隆抗体、生物素化羊抗小鼠i g o ，羊抗兔i g g 、s a b c 即用型试剂盒、d a b 显色试剂盒( 武汉博士德生物公司) ；m e t a m o r p h s p o ti n s i g h t c o l o r b x 5 1 显微图像分析仪；日立7 6 0 0 1 1 0 全自动生化分析仪；日本o l y m p u s b x 6 0 光学显微镜；日本o l y m p u su t v 0 5 x c 显微照相仪；日本h i t c h ic f t d 2 离心机；英国l e i c ar m 2 0 2 5 石蜡切片机。 6 二、方法 一、 ，j ， l 、5 6 肾切除大鼠残肾模型的制备 6 8 周龄，体重1 8 0 2 0 0 9 清洁级s d 雌性大鼠，用1 0 水合氯醛腹腔麻醉， 行左背旁正中纵切口，暴露左侧肾脏，分离肾包膜，夹闭左肾蒂，剪掉左肾上下 各l 3 肾实质，明胶海绵止血后残肾还纳入腹腔，逐层缝合，消毒。l 周后切去右 肾，即制备成5 6 肾切除残肾模型。假手术组只剥离肾包膜，不切除肾实质。 2 、实验分组及处理 造模后随机分为两组：模型组9 只，予饮用水灌胃8 周；治疗组9 只，予羟 苯磺酸钙1 2 0 m g k g d 灌胃8 周。另设假手术组6 只，饮用水灌胃8 周。实验期间 大鼠均自由饮食，饮水。 3 、肾功能检测 下腔静脉采血，全自动生化分析仪检测s c r , b u n 。 4 、肾组织形态学检查 残肾组织标本用4 多聚甲醛固定，常规梯浓度酒精脱水，透明，石蜡包埋， 5 u m 切片，h e 染色。4 0 0 倍光镜下每张切片观察2 0 个视野，参照r 面和o i k a w a 法，根据每片上观察肾小球及小管间质病变程度半定量评价肾小球硬化程度和肾 小管间质纤维化程度。每个肾小球硬化程度分为0 3 级，即0 ：基本正常或 5 0 - 7 5 ；卅：”5 ，以肾小球硬化指数( g s i ) 表示肾 小球硬化程度，计算公式为g s i = 【( 1 * n l + 2 * n 2 + 3 * n 3 ) 每片肾小球总数】搴1 0 0 。 间质病变分为0 - 3 级，即0 ：间质正常；+ ：间质基本正常，轻度小管变性、扩张； + + ：间质纤维化，肾小管萎缩 2 0 ，散在和( 或) 弥漫炎性细胞浸润 5 、免疫组织化学检测 石蜡切片依次经脱蜡，水化，灭活及抗原修复，山羊血清封闭非特异染色， 分别滴n d 鼠抗大鼠t - p a 单克隆抗体，兔抗鼠p a l 1 多克隆抗体，3 7 c 孵育1 2 小时，加生物素化羊抗小鼠i g q 羊抗兔l g g ，3 7 c 孵育2 0 分钟，加链霉卯白素标记 7 的辣根过氧化物酶( h r p ) 工作液，室温孵育1 5 2 0 分钟，d a b 发色1 5 分钟，苏 木素复染2 分钟，脱水，透明，中性树脂封片，显微镜下观察t - p a ，p a l 1 抗原阳 性表达呈棕褐色。 6 、免疫组织化学结果分析 用显微图像分析仪对图像进行定量分析，每张切片随机选取5 个高倍视野 ( 4 0 0 倍) ，测定其阳性物质积分光密度( i o d ) 值。 7 、统计学分析 计量数据用x + s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，两均数比较采用t 检验处理，s p s s l 3 0 软件包分析处理。 结果 l 、肾功能检测 与假手术组比较，模型组和治疗组s c r , b u n 均显著升高，差异有统计学意义 ( p 0 0 1 ) 。与模型组比较，治疗组s c r , b u n 均显著降低，差异有统计学意 ( p o 0 1 ) 。结果见( 表1 ) 2 、肾组织病理改变 h e 染色：假手术组肾小球，肾间质基本正常。模型组及治疗组均有不同程度 的肾小球节段性硬化，肾小球系膜细胞及基质增生，模型组还可见球囊黏连，毛 细血管袢塌陷；肾小管间质呈慢性病理改变，肾小管上皮细胞空泡变性，多灶状 的肾小管萎缩、炎性细胞浸润以及肾间质纤维化。治疗组小球硬化程度及间质病 变程度明显轻于模型组，g i 及间质半定量分级，两组数据差异有统计学意义( p o 0 1 ) 。结果见( 图1 ) ( 表2 ) 3 、免疫组织化学染色 ( 1 ) t - p a 染色结果：假手术组t - p a 在肾小球毛细血管袢的表达区域和染色 强度强于治疗组和模型组，治疗组t - p a 表达较模型组明显增加，差异有统计学意 义( p 0 0 1 ) 。见( 图1 ) ( 表3 ) 8 ( 2 ) p a l 1 染色结果：假手术组p a l 1 表达区域和染色强度较模型组和治疗 组减少，治疗组p a i 1 表达较模型组明显减少，差异有统计学意义( 氏o 。0 1 ) 。见 ( 图1 ) ( 表3 ) 表1 ，各组大鼠肾功能指标比较( 石士s ) 组别例数 s c r ( g m o l l )b u n ( m m o l l ) 假手术组64 1 3 3 4 - 1 9 74 7 1 4 - 0 8 0 模型组97 2 6 7 4 - 4 4 4 81 4 4 8 4 - 2 3 6 a 治疗组 9 5 9 4 4 - 7 5 7 曲10 7 2 4 - 2 8 8 a b 注：与假手术组比较p a 0 0 1 ：与模型组比较，p b o o l 表2 ，各组大鼠8 周末肾小球硬化及间质纤维化比较 组别例数肾小球硬化指数 小管间质病变程度 o+ 假手术组 60 0 4 + 0 0 25 l 0 0 模型组 9 1 7 6 - 士- 0 1 6 a0342 治疗组 91 1 9 士o 1 2 曲l5 30 注：与假手术组比较pa 0 0 1 ；与模型组比较，p b 0 0 1 表3 ，各组大鼠免疫组化i o d 值定量分析比较( x 士s ) t p a p a i 1 组别 肾小球肾间质肾小球肾间质 假手术组 5 5 8 3 士1 5 9 0 2 7 5 7 + 5 4 72 9 5 4 - 1 3 52 6 2 = 1 = 1 4 1 模型组 1 6 9 9 士5 5 1 45 7 3 4 - 2 7 0 a 1 1 2 8 4 - 3 2 2 81 5 1 0 圭4 3 矿 治疗组 3 3 9 0 士7 7 8 曲15 9 8 4 - 4 31 a b 5 0 7 4 - 1 2 6 a b6 9 2 4 - 2 2 2 a b 9 注：a 、d 、g ：假手术组；b 、e 、 h ：模型组；c 、f 、i ：治疗组；a c ： h e 染色；d - f ：t - p a 免疫组化染色 ( 棕色) ；g i ：p a i 1 免疫组化染色 ( 棕色) 。 图1 ，各组大鼠肾脏病理、t - p a 及p a i 1 表达的变化( 4 0 0 ) 1 0 讨论 纤溶系统在组织重构、基质降解和血栓溶解等病理生理过程中具有重要作用， 其中p a s p a i s 是介导纤溶与抗纤溶平衡并参与调节e c m 代谢的关键酶系。p a s 由p a ，纤溶酶原( p l g ) 及纤溶酶( p l ) 组成。p a 属丝氨酸蛋白酶家族，是p l g 活化为p l 的催化剂，在哺乳动物分为两种：组织型纤溶酶原激活物( t - p a ) 和尿 激酶型纤溶酶原激活物( u - p a ) 。p a 通过切断m g v a l 链，使p l g 转化为p l 。p l 本身可降解细胞外基质( e c m ) 某些成分，如纤维连接蛋白，层粘蛋白及纤维蛋 白等，并可激活其下游的基质金属蛋白酶，潜在型生长因子，从而影响e c m 的降 解。p l 可激活潜伏态的转化生长因子p ，后者促进e c m 沉积。p a l s 包括：p a i l 、 p a 心、p a i 3 、p r o t e a s e n c x i n ( p n ) 、a 一抗纤溶酶。血浆中主要为p a i - 1 ，对t - p a 和u o p a 均有高亲和力。p a s 的生理功能尚未完全阐明，目前已知：胚胎发育： 滋养层侵袭的胚胎细胞表达p a ，u - p a 呈短暂表达，参与胚受精卵在子宫内膜着 床和胚胎早期发育一致；中枢神经元的生长：神经脊( 胫) 和中枢含颗粒的神 经元可产生p a ，并促进神经足突的生长；促进排卵：啮齿动物卵巢产生p a ，t - p a 介导卵泡破裂，促进卵母细胞成熟及其受精，促进排卵；维持官腔的完整性和 通畅：许多官腔上皮细胞均合成分泌p a ，如乳腺管上皮、输精管及精囊均产生 u - p a ，尤其肾脏远端小管合成u p a 并释放入尿，起类似于e g f 的功效，维持小 管通畅及上皮细胞增殖及完整性；调节生长因子、激素受体和中枢神经递质受 体的表达；在炎症反应，伤口愈合及血管再生过程中起重要作用：炎症过程中 单核巨噬细胞和中性巨噬细胞产生u - p a ，促进炎症细胞迁移到炎症部位，伤口愈 合过程中e c m 的重塑及血管再生均与u - p a 有关：肿瘤浸润：肿瘤产生大量 u - p a ，其水平与肿瘤浸润正相关，可使肿瘤周围基质降解，抗u - p a 抗体可阻滞鸡 胚肿瘤细胞浸润，p a i 则通过特异地抑制p a 活性，从而影响细胞迁移、组织修复、 神经生长及肿瘤转移等。 t - p a 及其抑制物p a l 1 是p a s f p a i s 的主要成分1 2 , s , 6 。t - p a 是一种丝氨酸蛋白 酶，经过修饰后分泌到血液中的t - p a 含5 2 7 个氨基酸，分子量为6 8 0 0 0 ，它是体 内已明确的最强烈的纤溶激活物，它以纤维蛋白结合的形式来提高纤溶活性，将 p l g 裂解为p l ，从而使纤维蛋白的凝块溶解。p a i 是体内调节t - p a 活性并且是纤 溶和抗纤溶系统最重要的物质，p a i 1 能特异地抑制t p a 激活p l g 它与t p a 形成 l ：l 复合物，使他们失去活性。在肾组织中t - p a 主要由内皮细胞合成与分泌，作 为纤溶的生理激活剂，维持纤溶的内环境稳定，主要参与肾小球及血管内血栓溶 解和e c m 降解。p a b l 参与肾小球和肾小管间质e c m 的稳定性，使b p a 不可逆 地失活，从而抑制纤溶系统功能，抑制系膜细胞e c m 降解，导致系膜区e c m 的 积聚及肾小球硬化【1 5 1 。近年国内外研究证实，肾组织局部p a p a i 失衡参与多种 肾病的发生发展，影响组织中p l g 向p l 的转化，干预e c m 代谢调控系统，影 响e c m 局部代谢，导致血栓性微血管病变和e c m 异常沉积，促进病变进展，病 理表现为肾小球硬化和间质纤维化，临床表现为c r f ( 4 , 7 1 。c r f 时血管内皮细胞受 损，其合成t - p a 的能力下降，而其抑制物p a i 1 上升，纤溶平衡被打破，肾小球 基底膜的沉积纤维无法及时降解，基底膜增生变厚，肾小球滤过功能下降，肾小 球硬化，肾功能进行性损害【1 捌。针对p a p a i 的治疗旨在上调p a ，下调p a i - l ， 清除沉积的纤维蛋白，延缓肾脏疾病的进展，这将是防治肾脏疾病进展新手段之 一。 微血管保护剂羟苯磺酸钙在欧美国家主要用于预防和治疗微血管循环障碍疾 病。国内近年来已将其应用于c r y ，糖尿病肾病( d n ) ，慢性间质性肾炎( c 玳) 等的治疗，通过临床及动物试验证明其可显著升高c r f 患者的肾小球滤过率，降 s c r ，b u n 水平，延缓c r f 进展，但具体通过何种途径降低s c r 尚未明确。本研究 用5 6 肾切除模型模拟c r f 肾脏病变，观察病变进展过程中，肾脏组织中t - p a 及 其抑制物p a b l 蛋白表达的变化，首次观察了羟苯磺酸钙对残肾组织t - p a 及其抑 制物p a l 1 蛋白表达的干预作用。治疗组大鼠s c r ，b u n 较模型组显著下降，残 肾组织病理提示肾小球硬化程度及趋于硬化的肾小球数目明显减少，系膜细胞增 殖、系膜基质加宽改善，肾小管扩张或萎缩性变化趋于好转，小管间质纤维化程 度及炎性细胞浸润改善。免疫组织化学染色提示：在正常肾组织中( 假手术组) t - p a 广泛表达于肾小球毛细血管袢，远端集合管及小部分远曲小管，呈局灶节段 性分布，而慢性增殖性病变肾组织( 模型组) t - p a 蛋白表达则明显减少，提示在 慢性进展性纤维化肾脏病变过程中存在纤溶系统功能障碍。给予羟苯磺酸钙治疗 1 2 后t - p a 的表达明显增强，组织化学染色定量分析提示，治疗组与模型组比较差异 有统计学意义( p o 0 1 ) ，与t p a 相反，残肾组织中p a l 1 表达增加主要见于模型 组，而治疗组p a l 1 表达趋于下降。提示干预性治疗后t - p a 表达增加与。肾组织病 变的修复密切相关。故羟苯磺酸钙能抑制p a l 1 活性，升高t - - p a 活性的作用可能 是其抗血栓、改善微循环、延缓肾脏纤维化，降低s c r 的分子机制之一。羟苯磺 酸钙调节纤溶作用的精确机制还不完全清楚，有待深入探讨。 结论 l 、羟苯磺酸钙能升高c r f 大鼠t - p a 活性，改善肾脏局部微循环。 2 、羟苯磺酸钙能抑制c r f 大鼠p a i 1 活性，抑制血栓形成，改善肾组织纤 维化程度。 3 、羟苯磺酸钙能显著降低c r f 大鼠s c r , b u n 水平，改善肾功能。 1 3 本研究创新性的自我评价 首次证明羟苯磺酸钙能升高c r f 大鼠肾组织t - p a 活性，抑制c r f 大鼠肾组 织p a i - l 活性；该作用可能是其抗血栓、改善微循环、延缓肾脏纤维化，降低s c r 的分子机制之一。 1 4 参考文献 i 庄永泽，谢福安纤溶酶原激活物及其抑制剂与肾脏疾病【综述】国外医学泌尿系统分 册 2 0 0 1 ，2 1 ( 4 ) ：1 5 8 1 6 1 2o i k a w at ，f r e e m a nm ，l owe ta lm o d u l a t i o no fp l a s m i n o g e na c t i v a t o ri n h i b i t o rli nv i v o ：a n e wm e c h a n i s mf o r t h ea n t i f i b r o t i ce f f e c to f r e n i n - a n g i o t e n s i ni n h i b i t i o n k i d n e yi n t ，19 9 7 ，51 ： 1 6 4 1 7 2 3j o h n s o nr j h a v ew ei g n o r e dt h er o l eo f0 1 1 c 0 t i cp r c s s l l r ei nt h ep a t h o g 髓e s i so f g l o m e r u l o s c l e r o s i s ? a mjl ( i d i l e yd i s ，1 9 9 7 ，2 9 ( 1 ) ：1 4 7 - 1 5 2 4 王学寅，张玉侠，赵霞，等羟苯磺酸钙对慢性肾功能不全大鼠t g f p l ，b m p 7 表达的影 响【j 】中国医科大学学报，2 0 0 9 ，3 8 ( 3 ) ：2 0 8 - 21 0 5 崔建军，赵丽君，常晋福辛普利对慢性肾功能衰竭幼鼠凝血纤溶变化的干预影响【j 】 中国药物与嘘床，2 0 0 7 ，7 ( 6 ) ：4 2 9 = 4 3 2 6 s a p p i n oa p , h u a r t ej ，v a s s a l i ij d ，e ta s i t e so fs y n t h e s i so fu r o k i n a s e - a n dt i s s u e - t y p e p l a s m i n o g a aa c t i v a t o r si nt h em u r i n ek i d n e y 【j 】jc l i ni n v e s t , 1 9 9 1 ，8 7 ：9 6 2 - 9 7 0 7 陈香美凝血纤溶系统与细胞外基质调控系统在肾脏疾病中的作用唧中华肾脏病杂志， 2 0 0 1 ，1 7 ( 5 ) ：3 4 8 - 3 4 9 8 马宏，陈香美，王建中7 8 肾切除大鼠凝血纤溶系统的变化及干预治疗的影响【j 】中华 肾脏病杂志，2 0 0 1 1 7 ( 4 ) ：2 5 0 - 2 5 4 9 赵霞，张玉侠，王学寅，等羟苯磺酸钙对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织形态学和t g f q 3 1 ， v e g f 表达的影响【j 】2 0 0 9 1 5 综述 羟苯磺酸钙治疗肾脏病的临床研究概况 羟苯磺酸钙胶囊是一种微血管保护剂，具有降低毛细血管通透性、抑制血小 板聚集反应、降低血小板黏附和血黏度【，改善异常的血液流变学和微循环状态 等作用，已被欧美国家公认为预防和治疗微血管循环障碍疾病( 特别是糖尿病性 视网膜病变) 唯一成熟产品。其广泛用于肾脏疾病、慢性静脉功能不全、血栓性 疾病以及某些心脏疾病等的预防和治疗，本文就其在肾脏病临床治疗范围研究概 况进行综述。 一、糖尿病肾病( d n ) d n 是糖尿病主要的微血管慢性并发症，是糖尿病患者主要致死的原因之一。 随着病情的发展，病程的延长，患者最后因肾衰竭而死亡，严重危害着糖尿病患 者的身心健康和生活质量。而糖尿病肾病微量清蛋白尿期即早期糖尿病肾病是可 逆的，若在这一时期积极治疗，有可能减少蛋白尿，从而减轻肾脏损害，这样延 缓了肾功能不全的进展，大大提高糖尿病患者的生活质量，延长糖尿病患者的寿 命。 近年来许多临床研究证明羟苯磺酸钙治疗d n 疗效显著。1 9 8 7 年v i n a z z e 等【2 】 在研究该药对d r 患者血液浓度的影响中发现，羟苯磺酸钙还能降低蛋白尿而治 疗d n 。我国翁建平等【3 1 对2 1 例1 型糖尿病患者用药3 个月后观察，治疗后尿白 蛋白排泄率较对照组明显下降，其作用机制是部分纠正血液流变学异常。罗佐杰 等【4 】也得出相同结论，1 2 例2 型糖尿病合并d r 及d n 患者用羟苯磺酸钙治疗2 个月后，尿微量白蛋白显著下降。董静等【5 】对2 1 例早期糖尿病肾病患者，采用常 规降糖加用羟苯磺酸钙5 0 0m gt i d 治疗1 2 周后尿白蛋白排泄明显减少，证明羟苯 磺酸钙可通过降低血浆e t 、增加血清n o 以实现对肾脏的保护作用，延缓糖尿病 肾病的进展。潘鸵兰等 6 1 5 观察发现羟苯磺酸钙和培哚普利联合应用对早期d n 患 者( 尿白蛋白排泄率( a e r ) 均在2 0 - 2 0 0 9 9 m i n 之间糖尿病患者) 减少尿蛋白 1 6 和保护肾功能有良好的效果，其长期应用疗效优于培哚普利单独应用；池卫明等 1 7 】通过临床观察5 6 例早期d n 患者羟苯磺酸钙治疗结果证明其可降低尿蛋白排 泄，阻止肾脏损害的发展，保护肾功能；杨志霞等【s 】观察到羟苯磺酸钙能明显降 低2 型糖尿病早期肾病微量清蛋白，具有减少糖尿病早期肾病患者蛋白尿排泄作 用，可逆转早期糖尿病肾病，且治疗效果明显优于单用a c e i 的结论；樊国华等【9 】 羟苯磺酸钙治疗糖尿病肾病临床观察，发现治疗组3 6 例2 4 h 尿蛋白沉降率较治疗 前有明显下降( 氏0 0 5 ) 。且与对照组治疗后相比较均有显著性差异( 尸 0 0 5 ) ，肾脏病变均得到不同程度改变；张秀丽【l i 】还发现 羟苯磺酸钙除了可显著降低早期糖尿病肾病患者s c r 、b u n 、2 4 h 尿蛋白含量，升 高g f r 外，还可降低患者血脂水平；梁翠格【1 2 】探讨羟苯磺酸钙可能是通过降低血 液粘稠度，降低循环中p a i 1 ( 血浆纤溶酶原激活剂抑制物1 ) ，f o g ( 纤维蛋白原) ， e t ( 内皮素) ，增加血清的n o ( 一氧化氮) 水平实现降低d n 患者尿蛋白排泄的； 杨金奎等【l3 】观察国产羟苯磺酸钙胶囊治疗糖尿病肾病和视网膜病变的疗效及安全 性，证明羟苯磺酸钙可降低血小板聚集比率、粘附性和血浆、血清的粘度，能增 强微循环和改善障碍性微循环的血流状态，且临床应用安全性较好。 在动物试验方面：陈星华等【1 4 】通过试验观察得出羟苯磺酸钙可能是通过减轻 足细胞足突融合，减少足细胞的脱落而减轻早期糖尿病肾病大鼠蛋白尿的结论； 刘新明等【1 5 】探讨了羟苯磺酸钙可以通过抑制肾脏蛋白激酶，转化生长因子，型 胶原的表达等机制来改善糖尿病大鼠的肾脏病理改变；徐双双【1 6 】通过试验得出羟 苯磺酸钙对2 型糖尿病大鼠的肾脏有保护作用，其机制可能与降低肾组织e t 和 t g f j l 水平有关结论；董骏武等观察羟苯磺酸钙可改善大鼠肾脏超微结构，抑 制型胶原过度积聚，减轻肾小球基底膜增厚，保护肾小球滤过屏障。可能与抑 制糖尿病( d m ) 大鼠肾小球基质金属蛋白酶组织抑制因子l ( t i m p l ) 表达，上 调m m p 9 t i m p l 比值有关；蒋玲【1 8 】发现羟苯磺酸钙可抑制型胶原过度积聚，机 1 7 泉琨【1 9 】等对羟苯磺酸钙对2 过对糖尿病大鼠肾小球直接或间接降低细胞间粘附分子和血管细胞粘附分子的表 达来改善d n 大鼠肾脏改变。 二、慢性肾功能衰竭( c r f ) c r f 是不同肾脏疾病进展到晚期的共同结局。近年来研究证明羟苯磺酸钙可 显著升高c r f 患者的g f r ，降低s c r 、b u n 水平，与其抑制血管活性物质( 前 列腺素等) ，改善肾脏局部代谢供氧，纠正a g 比值，从而提高胶体渗透压及肾 血流量有关，其还可通过肾外机制如抑制肌酸的代谢作用而降低血c r 或通过抑制 蛋白激酶c ( p k c ) ，使转化生长因子p l ( t g f p 1 ) 的表达下斛2 2 1 ，减慢肾小球 硬化及肾间质纤维化的进程，从而延缓肾脏纤维化进展。羟苯磺酸钙还可通过减 少血小板聚集因子的合成与释放，减轻毛细血管内皮的损害及血小板激活因子的 合成，抑制血管活性物质的作用，降低纤维蛋白水平，降低血小板活性，抑制血 栓形成，并通过减少毛细血管活性物质达到降低毛细血管通透性，达到减少胶原 蛋白在血管内皮下的沉积，阻止基底膜增厚的作用，此外羟苯磺酸钙还具有免疫 调节作用，可使肾小球滤过膜的通透性降低，蛋白尿的排泄减少，改善肾功，延 缓c r f 进展。吕永曼等【2 3 】对羟苯磺酸钙治疗c r f 疗效进行了临床观察和实验观 察：临床观察部分，7 3 例c r y 患者在常规综合治疗的基础上加用羟苯磺酸钙胶囊 0 5 9 ，3 次d ，治疗2 周后，患者血肌酐( s c r ) 即明显降低，内生肌酐清除率( c a t ) 上升，并维持至第8 周；血尿酸( u a ) 治疗后明显降低。动物实验部分：羟苯磺 酸钙治疗大鼠3 个月后较5 6 肾切除组肾功能改善，残肾组织病理改变明显减轻。 证明羟苯磺酸钙在c r f 的治疗方面具有一定的应用价值，能够抑制肾脏纤维化的 进展，改善肾脏功能；刘晓城等【2 4 】通过对1 0 5 例c r f 病人使用羟苯磺酸钙治疗临 床效果观察亦得到相似结论，8 周后与对照组相比较，b u n 、s c r ，u a 均有显著 下降。张饰等【2 5 】还发现羟苯磺酸钙还能降低c r f 患者的血脂、尿蛋白，从而在慢 1 8 性肾功能不全中发挥更好的治疗作用；吴庆等【2 6 】观察羟苯磺酸钙治疗慢性肾衰竭 患者2 0 例，1 月后s c r 、b u n 水平均显著下降( 尸 o 0 5 ) ；王丹等唧观察到经羟苯磺酸钙治疗后大鼠尿蛋白及肾功能明 显改善，残肾组织肾小球硬指数以及肾小管一问质病变减轻，羟苯磺酸钙可能通 过减少肾脏转化生长因p 1 的表达和降低肾脏局部血栓素a 2 含量起到对慢性肾衰 肾脏的保护作用。赵霞【2 8 】通过试验证实羟苯磺酸钙能抑制c r f 大鼠肾组织局部 t g f b l 的合成，改善肾组织纤维化程度，能增加c r f 大鼠肾组织v e g f 的表达， 改善肾脏局部微循环，显著降低c r f 大鼠的s c r ，b u n 。肾间质纤维化是慢性肾 脏病进展到终末期肾衰竭的共同途径的最终组成部分，在慢性肾脏病进展中起决 定性作用。王黎萍【2 9 】分别采用病理及免疫组织化学方法观察肾间质纤维化组大鼠 梗阻侧肾脏的组织化学变化和m m p 9 和t i m p 1 表达情况以评价羟苯磺酸钙对单 侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响，得出羟苯磺酸钙可能通过调节 m m p 9 t i m p 1 紊乱改善基质代谢而缓解输尿管梗阻导致的肾间质纤维化；鲁淑 敏掣删观察了羟苯磺酸钙联合序贯透析治疗早中期慢性肾衰竭的临床疗效，治疗 组( 在对照组基础上加用序贯结肠透析治疗，包括肠道清洗，结肠透析，中药保 留灌肠三部分) 。在治疗前后b u n ，u a ，s c r 与对照组( 在常规治疗基础上加 用羟苯磺酸钙0 5 ，日三次口服) 相比有统计学差异，结果显示羟苯磺酸钙联合序 贯结肠透析治疗慢性肾功不全疗效显著，对降低b u n ，u a 、增加c c r 有显著疗 效，改善了c r f 患者的临床症状，利于保存残余肾功能，延缓了c r f 的进展， 提高了患者的生存