欧盟水飞蓟提取物质量标准中的含量测定研究及启示.doc

欧盟水飞蓟提取物质量标准中的含量测定研究及启示 赵红菊赵双春 （辽宁省药品认证中心，辽宁沈阳110003） 摘要：通过对欧盟水飞蓟提取物质量标准和我国水飞蓟素质量标准进行对比分析研究，指出了目前我国水飞蓟素质量标准与欧盟水飞蓟提取物质量标准之间存在的差异，并提出了相关的建议。 关键词：欧盟；水飞蓟提取物；水飞蓟素；含量 1水飞蓟提取物的定义 中华人民共和国药典（xx年版）对“水飞蓟”的定义为菊科植物水飞蓟Silybummarianum（L.）Gaertn.的干燥成熟果实。待秋季水飞蓟果实成熟时，采收其果序，晒干，打下果实，除去杂质，再晒干。在国家药品标准中，则将“水飞蓟素”（Silymarn）描述为由菊科植物水飞蓟的果实，经提取精制所得的松散粉末。 欧盟药典8.0对“水飞蓟干燥提取物（以下简称为水飞蓟提取物）”（MilkThistleDryExtract）进行了定义，即为水飞蓟果实经精炼提取后制备而成。从其定义可以看出，欧盟药典中的“水飞蓟干燥提取物”即我国药品标准中的“水飞蓟素”。 2水飞蓟提取物质量标准研究 2.1水飞蓟提取物含量限度 2.1.1欧盟水飞蓟提取物含量限度 欧盟对水飞蓟提取物的含量进行了详细的规定：以水飞蓟宾计，含水飞蓟素应为标示量的90%110%；水飞蓟素在干燥提取物中的含量应在30%65%。以水飞蓟素计，含水飞蓟亭和水飞蓟宁总量为20%45%，含水飞蓟宾A和水飞蓟宾B总量为40%65%，含异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B总量为10%20%。 2.1.2我国水飞蓟素含量限度 我国国家药品质量标准中对“水飞蓟素”的含量测定为按干燥品计算，含水飞蓟素以水飞蓟宾（C25H22O10）计算，不得少于68%；含水飞蓟宾和异水飞蓟宾不得少于30%。 2.2水飞蓟提取物含量测定方法 2.2.1欧盟水飞蓟提取物含量测定方法 欧盟对水飞蓟提取物含量测定进行了详细的规定，其含量测定选择液相色谱法，具体方法药典规定如下： 测试溶液：在甲醇溶液中溶解60mg提取物，并且用同样溶剂稀释至100mL。 对照溶液：在甲醇中溶解相当于10mg水飞蓟宾的水飞蓟对照提取物，并且用同样溶剂稀释至100mL。 色谱柱：柱长=0.125m，柱直径=4mm。 流动相A：磷酸-甲醇-水（0.5:35:65）。 流动相B：磷酸-甲醇-水（0.5:50:50）。 时间流动相情况如表1所示。 流速：0.8mL/min。 检测波长：288nm。 注射对照溶液：10L。 鉴别峰：通过水飞蓟对照提取物色谱图，可得到水飞蓟宁、水飞蓟亭、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B的色谱峰。但测试溶液中的水飞蓟宁色谱峰可能在大小上会有差异或者消失。 保留时间：水飞蓟宾B约30min，如果需要，调整梯度时间段。 分离度：水飞蓟宾A峰和水飞蓟宾B峰之间的分离度应不小于1.8。 水飞蓟素总含量以水飞蓟宾计，其公式为： 总水飞蓟素中水飞蓟宁和水飞蓟亭的含量，其公式为： 总水飞蓟素中水飞蓟宾A和水飞蓟宾B的含量，其公式为： 总水飞蓟素中异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B的含量，其公式为： 在上述公式中所涉及的参数分别表示为： A1=供试品色谱图中得到的水飞蓟亭峰面积； A2=供试品色谱图中得到的水飞蓟宁峰面积； A3=供试品色谱图中得到的水飞蓟宾A峰面积； A4=供试品色谱图中得到的水飞蓟宾B峰面积； A5=供试品色谱图中得到的异水飞蓟宾A峰面积； A6=供试品色谱图中得到的异水飞蓟宾B峰面积； A7=对照品色谱图中得到的水飞蓟宾A峰面积； A8=对照品色谱图中得到的水飞蓟宾B峰面积； m1=制备对照品溶液所使用的对照提取物质量，g； m2=制备供试品溶液所使用的提取物质量，g； p=对照提取物中水飞蓟宾A和水飞蓟宾B总的百分含量。 2.2.2我国水飞蓟素含量测定方法 水飞蓟素（总黄酮）对照品溶液的制备：取水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，将其置25mL量瓶中，加甲醇适量，水浴加热使其溶解，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 供试品溶液的制备：取本品50mg，精密称定，将其置100mL量瓶中，加甲醇适量，水浴加热使其溶解，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 水飞蓟素测定法：精密量取对照品溶液和供试品溶液各5mL，分别置25mL量瓶中，分别精密加入2，4二硝基苯肼溶液2mL，置5055水浴中反应50min，冷却，加氢氧化钾-甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，离心10min，精密量取上清液5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按照分光光度法，在490nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。 水飞蓟宾按照中华人民共和国药典（2000年版）二部附录VD高效液相色谱法测定。 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:0.5）为流动相；检测波长为288nm。理论板数按水飞蓟宾峰计算应不低于5000。 水飞蓟宾测定法：取本品0.11g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另外精密称取经60减压干燥3h的水飞蓟宾对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.1mg水飞蓟宾的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述两种溶液各5L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以水飞蓟宾与异水飞蓟宾峰面积之和计算，即得。 3欧盟水飞蓟提取物含量测定与我国水飞蓟素含量测定对比启示 通过对比欧盟水飞蓟提取物含量测定标准与我国水飞蓟素含量测定标准可知： （1）欧盟对水飞蓟提取物中各有效成分的划分更加细致，规定了6种有效成分，同时也将有效成分的含量限度要求写明在质量标准中。目前我国水飞蓟素质量标准中只规定了水飞蓟宾和异水飞蓟宾总的含量限度要求，有效成分检验项目相对较少。 （2）欧盟对水飞蓟提取物的含量测定方法进行了详细的描述，规定了详细的试验方法和计算公式，6种有效成分均采用色谱法进行计算，这有利于企业和相关检测机构统一执行标准。目前我国水飞蓟素质量标准中缺少对有效成分详细的计算公式描述，水飞蓟素含量采用分光光度法，而水飞蓟宾和异水飞蓟宾总量采用高效液相色谱法，两种不同的方法也许会对最终的结论产生影响。 4结语 目前，我国共有11家药品生产企业拥有水飞蓟素品种，部