（分析化学专业论文）荧光共振能量转移体系的建立及其在核酸和抗体检测中的应用.pdf

原创性声明 幽川洲f | j y 1 7 9 0 芗芝攀 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进f 珊 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包台饪乖彦断入 燃已型搦姬媸靼挝韵科燃。撇的腓出重要贡黼 和集 体均已槲以咖冠扔捌。本声明的法僦由本人承担。 关于学位论文使用授权的声明 席沙矬了解山东杰等肄徽留、使用学啦嘲毡赶内j 够啶，同意掣爿交保留或 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被崮郧 借阅； 一 本脓山东栅以将本学位论= 如! 陛窖瓶睹盼内容编入有嬲库黼 索，可以采用影印、缩e 或剐：蝮锘! 序段保存沦妇胁盛觑鹾御蔓论文。 ：盥导月酩赳日 膏 山东人学硕l ：学位论文 目录 中文摘要i a b s t r a c t i i i 符号与缩写v 第一章绪论1 1 1f r e t 原理1 1 2f r e t 的理论计算2 1 3f r e t 探针研究进展3 1 4f r e t 体系在生物分析中的应用4 1 4 1 核酸检测4 1 4 2 免疫分析5 1 4 3 其他生物大分子的研究7 1 5 本论文的研究目的和研究内容8 1 5 1 研究目的8 1 5 2 研究内容8 1 6 参考文献9 第二章基于表面活性剂c p b 实现的荧光共振能量转移定量检测核酸分子2 0 2 1 引言2 0 2 2 实验部分2 2 2 2 1 仪器装置2 2 2 2 2 试剂2 2 2 2 1 3 实验方法2 2 2 3 结果与讨论2 3 2 3 1f r e t 体系的构建及其荧光特性2 3 2 3 2c p b 加入阶段的影响2 5 2 3 3c p b 浓度的影响2 6 2 3 4 探针d n a 与靶d n a 浓度比例的选择2 7 2 3 5 靶d n a 的定量检测2 8 2 3 6 机理探讨3 0 山东人学硕士学位论文 2 4 结论一3 1 2 5 参考文献3 l 第三章基于表面活性剂c t a b 增敏的荧光共振能量转移定量检测抗体分子3 6 3 1 引言3 6 3 2 实验部分3 7 3 2 1 仪器装置3 7 3 2 2 试剂3 7 3 2 3 实验方法3 7 3 3 结果与讨论3 8 3 3 1f r e t 体系的组成和荧光性质3 8 3 3 2 加样顺序的影响4 1 3 3 3 表面活性剂对f r e t 体系的影响4 1 3 3 4a b 2 与a b l 浓度比的选择4 3 3 3 55 2 5 q d s 与a b l 浓度比的选择4 4 3 3 6 利用f r e t 体系定量检测a b l 4 5 3 4 结论4 6 3 5 参考文献4 7 第四章利用d n a 增补染料j o j o 1 作为供体的荧光共振能量转移体系定量检测 核酸分子5 0 4 1 引言5 0 4 2 实验部分5 1 4 2 1 仪器装置5 1 4 2 2 试剂5 l 4 2 3 实验方法。5 2 4 3结果与讨论5 2 4 3 1f r e t 体系的组成和荧光性质5 2 4 3 2j o j o 1 稳定时间的影响5 4 4 3 3j o j o 1 浓度的影响5 5 4 3 4 靶d n a 的定量检测5 6 山东人学硕i ：学位论文 4 4 结论5 7 4 5 参考文献5 8 致谢6 1 硕士期间发表论文6 1 山东大学硕十学位论文 c o n t e n t s c h i n e s ea b s t r a c t i e n g l i s ha b s t r a c t i i i s y m b o la n da b b r e v i a t i o n v c h a p t e r1 p r e f a c e 1 1 1t h em e c h a n i s mo ff r e t 1 1 2t h et h e o r e t i c a lc a l c u l a t i o no f f r e t 2 1 3t h er e s e a r c hp r o g r e s so f f r e tp r o b e s 3 1 4t h ea p p l i c a t i o no ff r e ts y s t e m si nb i o l o g i c a la n a l y s i s 4 1 4 1t h ed e t e c t i o no f n u c l e i ca c i d 4 1 4 2t h ea n a l y s i so f i m m u n i t y 5 1 4 31 1 1 es t u d yo f o t h e rm a c r o m o l e c u l e s 7 1 5t h er e s e a r c hp u r p o s e sa n dc o n t e n t so f t h i st h e s i s 8 1 5 1t h er e s e a r c hp u r p o s e s 8 1 ! ；2t h er e s e a r c hc o n t e n t s 8 1 6r e f e r e n c e 9 c h a p t e r2 d n aq u a n t i f i c a t i o n b a s e do nf r e tr e a l i z e db yc o m b i n a t i o nw i t h s u r f a n c t a n tc p b 2 0 2 1i n t r o d u c t i o n 2 0 2 2 e x p e r i m e n t 2 0 2 2 1a p p a r a m s 2 2 2 2 2m a t e r i a l s 2 2 2 2 3m e t h o d s 2 2 2 3r e s u l t sa n dd i s c u s s i o n 2 3 2 3 1f o r m a t i o no ft h ef r e ts y s t e ma n di t sf l u o r e s c e n c ep r o p e r t i e s 2 3 2 3 2e f f e c to f d i f f e r e n tc p ba d d i t i o ns e q u e n c e s 2 5 2 3 3e 行e c to f c p bc o n c e n t r a t i o n 2 6 2 3 4e f f e c to f t h ep r o b e t a r g e tc o n c e n t r a t i o nr a t i o 2 7 2 3 5q u a n t i f i c a t i o no f t d n a 2 8 2 3 6t h em e c h a n i s mo f t h i sf r e ts y s t e m 3 0 山东人学硕 ：学位论文 2 。4c o n c l u s i o n s 3l ：! 5r e f e f e n c e 31 c h a p t e r3 a n t i b o d yd e t e c t i o nb a s e do nf r e ts e n s i t i z e db yc o m b i n a t i o nw i t h s u r f a c t a n tc t a b 3 6 ：；1i n t r o d u c t i o n ：；6 3 2e x p e r i m e n t 3 7 3 2 1a p p a r a t u s 3 7 3 2 2m a t e r i a l s 3 7 ：；2 3m e t h o d s 3 7 ：；3r e s u l t sa n dd i s c u s s i o n 3 8 3 3 1f o r m a t i o no f t h ef r e t s y s t e ma n di t sf l u o r e s c e n c ep r o p e r t i e s 3 8 3 3 2e f f e c to f a d d i t i o ns e q u e n c e s 4 0 3 3 3e f k c to f t h es u r f a c t a n t 4 1 3 3 4e 骶c to f t h ea b 2 a b lc o n c e n t r a t i o nr a t i o 4 3 3 3 5e f f e c to f t h e5 2 5 q d s a b lc o n c e n t r a t i o nr a t i o 4 4 3 3 6q u a n t i f i c a t i o no f a b l 4 5 ：；4c o n c l u s i o n s 4 6 3 5r e f e r e n c e 4 7 c h a p t e r4 d n aq u a n t i f i c a t i o nb a s e do nt h ef r e ts y s t e mu s i n gi n t e r c a l a t i n g c h r o m o p h o mj o j o - 1a sd o n o r 5 0 4 1i n t r o d u c t i o n ! ；( ) 4 2e x p e r i m e n t 51 4 2 1a p p a r a t u s 51 4 2 ：! m a t e r i a l s 5 1 4 2 ：；m e t h o d s 5 2 4 3r e s u l t sa n dd i s c u s s i o n 5 2 4 3 1f o r m a t i o no f t h ef r e t s y s t e ma n di t sf l u o r e s c e n c ep r o p e r t i e s 5 2 4 3 2e f f e c to f j o j o 1i n c u b a t i o nt i m e 5 4 4 3 3e f f e c to f j o j 0 1c o n c e n t r a t i o n 5 5 4 3 4q u a n t i f i c a t i o no f t - d n a 5 6 v 山东大学顾。 ：学位论文 4 4c o n c l u s i o n s 5 7 4 5r e f e r e n c e 5 ； a c k n o w l e d g e m e n t s 6 1 p u b l i c a t i o n s 6 1 山东人学硕1 ：学位论文 中文摘要 k r a s 基因是一种癌基因，在肿瘤中的突变率较高。它就像体内的一个“开关”， 调控着肿瘤细胞生长和血管生成过程中的信号传导，影响着肿瘤的生长和扩散。 k r a s 基因的检测能够为肿瘤的临床诊断，病情评估和预后判断以及基因的靶向治 疗提供重要依据。因此，对组成k r a s 基因及其突变体的寡核苷酸分子进行定量检 测，在癌症的诊疗方面具有重要意义。 白细胞介素8 ( i l 8 ) 是白细胞介素家族中的一员，是具有多效性和重叠性 的生物活性因子。i l 8 能够调控血细胞的生长发育和分化成熟以及机体的免疫应 答，同时与多种癌症有关。人源化的抗i l 8 单克隆抗体已经应用于相关疾病的临 床研究中。设计出快速高效的检测抗i l 8 单克隆抗体的方法，将为各种炎症的治 疗和肿瘤的研究提供有利条件。 本文对三种新型荧光共振能量转移( f r e t ) 体系进行了系统的研究，并将这 些体系应用于核酸检测和免疫分析，定量检测了突变型k r a s 基因片段和生物 素化的抗i l 8 单克隆抗体。 本文第一章为绪论部分，该部分全面总结了f r e t 的原理，理论计算方法和 荧光探针的研究进展，重点介绍了f r e t 体系在生物分析中的应用，对核酸检测， 免疫分析，蛋白质相互作用等方面作了详细的叙述。 本文第二章对表面活性齐t j c p b 作用下的f r e t 体系进行了详细的研究。该体系 通过阳离子表面活性剂对d n a 的压缩作用来增强f r e t 信号，在不必分离过剩探 针的情况下实现了长间距的供受体之间的f r e t ，并对含有3 0 个碱基的靶d n a 进 行了定量检测。此外，利用圆二色谱法初步探讨了c p b 与双链d n a 的作用机理， 对实验现象进行了合理解释。 本文第三章对表面活性剂c t a b 增敏的f r e t 体系进行了详细的研究。该体 系通过阳离子表面活性剂与量子点和染料标记的二抗分子的相互作用来实现 f r e t ，不必对抗体的特定区域进行标记或使用特殊的抗体片段。基于f r e t 导致 的受体荧光峰面积的增加，对生物素化的i l 8 的单克隆抗体实现了定量检测。 本文第四章对d n a 嵌入型染料j o j o 1 作为供体的f r e t 体系进行了研究。 研究发现，利用d n a 嵌入染料j o j o 1 作为供体构建f r e t 体系，不必对捕获 山东大学硕 ：学位论文 d n a 进行标记，而且可以有效降低空白中的假阳性，提高方法的选择性。基于 f r e t 造成的受体荧光峰面积的增加，成功的对含有3 0 个碱基的靶d n a 进行了 定量分析。 本论文的主要特点： 一、研究表面活性剂对f r e t 体系的影响，并利用静电相互作用，建立起 两种新的定量检测长链核酸和抗体分子的方法。 二、研究d n a 嵌入型染料作为供体的f r e t 体系，建立了一种不必标记 捕获探针，高信噪比，高选择性的核酸检测方法。 三、上述研究工作为开创新的f r e t 体系，选择新型荧光探针提供了一定 的理论和实践基础，在核酸，抗体等生物大分子的定量检测方面具有潜在的应用 价值。 关键词：荧光共振能量转移；突变型k r a s 基因；白细胞介素8 抗体；表面活性剂； d n a 嵌入型染料 i l 山东人学硕j ：学位论文 a b s t r a c t k r a sg e n e ，o n eo ft h eo n c o g e n s ，i sf r e q u e n t l ym u t a t e di nt u m o r s i tw o r k sl i k ea s w i t c h o fo r g a n i s mt h a tr e g u l a t e sc e l lg r o w t ha n dt u m o ra n g i o g e n e s i si nt h ep r o c e s s o fs i g n a lt r a n s d u c t i o n ，e f f e c t i n gt h eg r o w t ha n dd i f f u s i o no ft u m o r s t h ed e t e c t i o no f k r a sg e n ec o u l dp r o v i d ea ni m p o r t a n tb a s i sf o rc l i n i c a lt u m o rd i a g n o s i s ，p a t i e n t c o n d i t i o nv a l u a t i o na n dp r o g n o s i cj u d g m e n t ，a n dg e n et h e r a p y d u et ot h er o l eo fk r a s g e n e i nt u m o rd i a g n o s i sa n dt h e r a p y ，i th a sn e c e s s i t a t e dt h ed e v e l o p m e n to fa q u a n t i t a t i v ed e t e c t i o nm e t h o df o rt h em u t a t e dk r a sg e n e a sat y p eo fi n t e r l e u k i n ，i n t e r l e u k i n 一8 ( i l 一8 ) i sap l e i o t r o p i ca n do v e r l a p p i n gf a c t o r w i t hb i o l o g i c a la c t i v i t y i th a st h ec o n t r i b u t i o nt or e g u l a t et h ed i f f e r e n t i a t i o na n d m a t u r a t i o no fh e m o c y t e s ，d o m i n a t et h ei m m u n er e s p o n s ea n dr e l a t ew i t has e r i e so f c a n c e r s n o w a d a y sh u m a n i z e da n t i i l - 8m o n o c l o n a la n t i b o d yh a sb e e nu s e di nc l i n i c a l s t u d i e so nr e l a t e dd i s e a s e s a sar e s u l t ，d e s i g naf a s ta n de f f i c i e n td e t e c t i o no fa n t i - i l 一8 m o n o c l o n a la n t i b o d yw o u l ds u p p l yf a v o r a b l ec o n d i t i o n sf o ri n f l a m m a t i o na n dc a n c e l r e s e a r c h i nt h i st h e s i s ，d i f f e r e n tf l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e r ( f r e t ) s y s t e m sh a v e b e e ns y s t e m a t i cs t u d i e d i na d d i t i o n ，w eh a v es u c c e s s f u l l ya p p l i e dt h e s ef r e ts y s t e m s t on u c l e i cd e t e c t i o na n di m m u n ea n a l y s i s ，i n c l u d i n gq u a n t i f i c a t i o no fm u t a t e dk r a s g e n ea n db i o t i n y l a t e da n t i i l 一8m o n o c l o n a la n t i b o d y t h ef i r s tc h a p t e ri sa l li n t r o d u c t i o np a r tt os u m m a r i z et h ef r e tp r i n c i p l e ，t h e o r i c a l c a l c u l a t i o nm e t h o d s ，r e s e a r c h e so ff l u o r e s c e n tp r o b e sa n dt h ef r e ta p p l i c a t i o n so f b i o l o g i c a la n a l y s i s t h ea s p e c t s o fn u c l e i ca c i d d e t e c t i o n ，i m m u n o a s s a y a n d p r o t e i n - p r o t e i ni n t e r a c t i o nh a v eb e e nd e s c r i b e di nd e t a i l i nt h es e c o n dc h a p t e r , t h ef r e tr e a l i z e db yc o m b i n a t i o nw i t hs u r f a c t a n tc p bh a s b e e nd e t a i l e ds t u d i e d i ti sf o u n dt h a tc a t i o n i cs u r f a c t a n tc o u l db eu s e dt oe n h a n c et h e f r e ts i g n a lb yi t sc o m p r e s s i o ne f f e c to nd n as t r a n d s t h ef r e tb e t w e e nd o n o ra n d a c c e p t o rw i t hl a r g es p a c i n gh a sb e e na c h i e v e di n as e p a r a t i o n - f r e ef o r m a ta n dt h e q u a n t i f i c a t i o no ft a r g e td n a o f3 0b p sh a sb e e nc o m p l e t e d i na d d i t i o n ，t os t u d yt h e 山东大学硕士学位论文 i n t e r a c t i o no fc p ba n dd o u b l e - s t r a n d e dd n a ，c ds p e c t r ah a v eb e e nu t i l i z e da n dt h e n t h ee x p e r i m e n t a lp h e n o m e n ah a v e b e e nr e a s o n a b l yi n t e r p r e t e d i nt h et h i r dc h a p t e r ，t h ef r e ts e n s i t i z e db yc o m b i n a t i o nw i t hs u r f a c t a n tc t a bh a s b e e ns t u d i e di nd e t a i l i nt h i ss y s t e m ，f r e ti sr e a l i z e db yt h ei n t e r a c t i o nb e t w e e n c a t i o n i cs u r f a c t a n ta n dq u a n t u md o tw i t ht h es e c o n d a r ya n t i b o d yl a b l e dw i t hd y e s i ti s i l l u s t r a t e dt h a ta n t i b o d yd o e sn o tn e e dt ob em a r k e do ns p e c i f i cr e g i o n so rp r o c e s s e dt o s p e c i a lf r a g m e n t s b a s e do nt h ei n c r e a s eo fa c c e p t o rf l u o r e s c e n c ep e a ka r e ac a u s e db y f r e t ，q u a n t i t a t i v ea n a l y s i so fb i o t i n y l a t e di l - 8a n t i b o d yh a sb e e na c h i e v e d i nt h ef o u r t hc h a p t e r ，t h ef r e ts y s t e mu s e dd n ai n t e r c a l a t i n gc h r o m o p h o r e j o j o 1a sd o n o rh a sb e e ns t u d i e d i ti sf o u n dt h a tu s i n gj o j o - 1a sd o n o rt of o r m f r e ts y s t e m ，t h ec a p t u r ed n ad o e sn o tn e e dt ob el a b e l e d ，t h ef a l s ep o s i t i v ec o u l db e e f f e c t i v e l yd e c r e a s e da n dt h es e l e c t i v i t yc o u l db ei m p r o v e d b a s e do nt h ei n c r e a s eo f a c c e p t o rf l u o r e s c e n c ep e a ka r e ac a u s e db yf r e t ，t a r g e td n ac o n t a i n i n g3 0b p sh a s b e e ns u c c e s s f u l l yq u a n t i f i e d t h em a i nc h a r a c t e r i s t i c so ft h i st h e s i sa r ea sf o l l o w s ： 1 t h ee f f e c t so fs u r f a c t a n t so nf r e ts y s t e m sh a v eb e e ns t u d i e da n dt w on o v e l q u a n t i f i c a t i o na p p r o a c h e so fl o n g - s t r a n d e dn u c l e i ca c i d sa n da n t i b o d yh a v e b e e n e s t a b l i s h e db yu t i l i z i n gt h e i ri n t e r a c t i o n 2 t h ef r e ts y s t e mu s e dd n ai n t e r c a l a t i n gc h r o m o p h o r ej o j o 一1a sd o n o rh a s b e e ns t u d i e da n dt h ea p p r o a c hf o rn u c l e i ca c i d sd e t e c t i o nh a sb e e ne s t a b l i s h e d ，w h i c h h a sa h i g hs i g n a lt on o s i er a t i oa n dh i g hs e l e c t i v i t y 3 t h ea b o v er e s e a r c h e sp r o v i d eac e r t a i nt h e o r e t i c a la n de x p e r i m e n t a lb a s i st o e x p l o r en o v e l f r e ts y s t e m sa n ds e l e c tn o v e lf l u o r e s c e n c e p r o b e s ，w h i c hh a v e p o t e n t i a lv a l u eo fa p p l i c a t i o n st o t h ea n a l y s i so fn u c l e i ca c i d s ，a n t i b o d ya n do t h e r m a c r o m o l e c u l e s k e y w o r d s ：f l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e r ；m u t a t e dk r a sg e n e ；i l 一8a n t i b o d y ； i v s u r f a c t a n t ；d n ai n t e r c a l a t i n gc h r o m o p h o r e 山东人学顾1 ：学位论文 英文缩写 f r e t c r e t b r e t d a t d n a c d n a r - d n a q d s a b i l 8 c p b c t a b d t a b s d s s d b s i b - c d t r i s e d t a 英文全称 符号与缩写 f l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g y t r a n s f e r c h e m i l u m i n e s c e n c er e s o n a n c e e n e r g yt r a n s f e r b i o l u m i n e s c e n c er e s o n a n c e e n e r g yt r a n s f e r 中文全称 荧光共振能量转移 化学发光共振能量转移 生物发光共振能量转移 d o n o r供体 a c c e p t o r受体 t a r g e td n a 靶d n a c a p t u r ep r o b e 捕获探针 r e p o r t e rp r o b e 指示探针 q u a n t u md o t s 量子点 a n t i b o d y 抗体 i n t e r l e u k i n 8 白细胞介素8 c e t y lp y r i d i n eb r o m i d e 溴代十六烷基吡啶 c e t y l t r i m e t h y la m m o n i u m b r o m i d e十六烷基三甲基溴化铵 d o d e c y l t r i m e t h y la m m o n i u m 十二烷基三甲基溴化铵 b r o m i d e s o d i u md o d e c y ls u l f a t e十二烷基硫酸钠 s o d i u md o d e c y l b e n z e n es u l f o n a t e十二烷基苯磺酸钠 p - c y c l o d e x t r i n 1 3 - 环糊精 t r i h y d r o x y m e t h y la m i n o m e t h a n e 三羟甲基氨基甲烷 e t h y l e n e d i a m i n e t e t r aa c e t i c a c i d 乙二胺四乙酸 v 山东大学硕_ ：学位论文 山东人学硕j ：学位论文 第一章绪论 早在1 9 4 8 年，f o r s t e r l 就创立了荧光共振能量转移( f l u o r e s c e n c er e s o n a n c e e n e r g y t r a n s f e r ，f r e t ) 的原则，并预见了能量转移效率与供受体间距离的六次方 成反比，因此f r e t 又被称为f o r s t e r 能量转移。当供体的发射光谱与受体的吸收光 谱存在重叠，并且两个荧光团的距离在几个原子直径范围以内时，供受体之间能 够发生一种非辐射性的能量转移，这种现象叫做f r e t 。这项技术最初被用来测量 同一分子内或不同分子间的距离2 一。探针分子间发生的f r e t 为生物大分子内部结 构的测定及动态监视提供了快速，简单而且灵敏的途径。近年来，随着新型荧光 探针的出现和新的技术方法的开创，f r e t 作为一种极为有效的光学“分子尺”不 断地得到发展和完善，已经越来越多地应用于核酸检测、免疫分析以及其他生物 大分子结构和功能的研究等方面7 8 。 1 1f r e t 原理 荧光共振能量转移是一种非辐射的能量跃迁方式9 。一对合适的荧光物质构成 能量供体( d o n o r ，d ) 和受体( a c c e p t o r ，a ) 对，当两者相隔1 0 10 0 n m 时，用供体 的激发光激发，可以使供体分子由基态跃迁到激发态而产生振荡偶极子，供体的 振荡偶极子与近处的受体偶极子能够产生共振。通过这种电偶极相互作用，将供 体激发态能量非辐射性的转移到受体激发态，使得供体荧光强度降低，而受体可 以发射出强于本身的特征荧光( 敏化荧光) ，也可以不发荧光( 荧光猝灭) ，同 时还伴随着荧光寿命的相应缩短或延长1 0 - 1 2 ( 见图1 1 ) 。分子发光的激发模式除 了有光致发光( 且o f r e t ) 外，还有化学发光( c h e m i l u m i n e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g y t r a n s f e r ，c r e t ) 、生物发光( b i o l u m i n e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e r ，b r e t ) 等方式，当有合适的能量受体时，它们一样可作为供体光源发生共振能量转移。 供受体之间发生f r e t 的条件是苛刻的，主要包括：( 1 ) 供体的荧光量子产 率较高，能量供体与受体的荧光生色团必须以适当的方式排列；( 2 ) 供体的发射 光谱与受体的吸收光谱能有效地重叠，重叠程度越大，能量转移效率越高；( 3 ) 供 体与受体间的距离要在1 - 4 - 0 5 轧之内( r o 表示能量转移为5 0 b 寸供受体之间的距 些查盔兰堡主兰垡笙奎 离) 1 0 - 1 2 。此外，对于合适的供受体分子，在消光系数、水溶性、抗干扰能力等 方面还有众多的要求。 d o n o r 1 2f r e t 的理论计算 图1 1f r e t 能级图 a c c e p t o r 能量转移的效率和供体的发射光谱与受体的吸收光谱的重叠程度，供体与受 体的跃迁偶极的相对取向以及供受体之间的距离等因素有关9 ，1 3 。在供受体确定的 情况下，两个相距为r 的独立分子d a 之间的能量转移效率可以表示为8