（发育生物学专业论文）颌下腺对雄性大鼠生精功能的影响及生精细胞凋亡机制的研究.pdf

学位论文独创性声明 本人郑重声明： 1 、坚持以“求实、创新”的科学精神从事研究工作。 2 、本论文鼹我个人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究 成柒。 3 、本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。 4 、本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构 已经发表绒撰写过的研究成果。 5 、其他同志对本研究所做的贡献均已在论文t p 作了声明h 并表示 了谢意。 俸纛签名： 日期： 学位论文使用授权声明 彳堡翌 q j ：近 本人完全了解南京师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学 校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电 子艇和纸质舨；有权将学位论文溺于非赢利目的的! ! 癸复制并允许论 进入学校图书馆被查阅；有权将学位论文的内容编入有关数据库进 行检索；有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在 解密后适媚本规定。 作者签名：型盈2 旦 同 期： o ? ：至仁： 颌下腺对雄性大鼠生精功能的影响及生精 细胞凋亡机制的研究 中文摘要 颌下腺( s u b m a n d i b u l a rg l a n d ，s m g ) 是一种具有外分泌和内分泌双重功能 的腺体。在雄性，颁下腺可通道内分泌方式分泌表皮生长因子( e p i d e r m a lg r o w t h f a a o r ，e g f ) 、棒经生长因予( n g l v eg r o w t hf a c t o r ，n g f ) 帮蓊缨脆生长因予 ( h e p a t o e y t eg r o w t hf a c t o r ，h g f ) 等多种生物活性物质。有研究表明：在雄性动 物黎丸阕质细胞、支持细胞以及糖原细胞等多种细胞内都存在这些生物活性物质 的受俸。露颁下艨细胞毽存在雄激素魏黎蘸( t e s t o s t e r o n e ，t ) 鞠二氢睾酮 ( d i h y d r o t e s t o s t e r o n e ，d h t ) 镎的受体，因此睾丸可通过分泌雄激索来反馈性调 ：箨籁下黥的功能。为此有学者提出：在雄性动物体内，不仅存在下& 脑一垂体一 睾丸辘，还存在颢下腺一睾丸轴调控雄健动物的生殪功镌。 e g f 是由5 3 个氨基酸组成的单链多肽，能增加核酸和蛋白质的合成，从而 促邀多秘缨胞豹攒殖与分化。w o n g 等研究驻示：过表达e g f 的小鼠能搀到耪予 的产生。t s u t s u m i 等研究发现：切除颁下膝可导致煎 l 鼙e g f 含量葫箍降低，小 鼠附鼙内精子数嫩显著减少。提示颌下腺可能对雄性动物精子的发生和成熟等功 能共骞重要的佟瘸。由予颁下艨不仅可分泌e g f 露虽逐熊分泌n g f 鄹h g f 等 多种生物活经物质，单纯研究e g f 并不足良全面反映颁下腺对雄性袋殖系统的 作用。因此，很脊必要通过切除颌下腺的动物模型来系统全面的研究颁下腺对雄 性魂妨生耱功能豹影穗。 生精细胞凋它是哺乳动物精子发生过程中的一个鼹著特点，其嫩避性凋亡 对于去除受损的缴精细胞，控制细胞数量和保证精子的臌量具有重要意义，但生 精缨貔瓣过疫稳亡霹雩l 起生精功戆低下，使糖子戆数量秘鹱量降低。毒磅究表弱； 促卵泡生成素( f o l l i c l es t i m u l a t i n gh o r m o n e ，f s h ) 和荧体生成索( 1 u t e o t r o p i c h o r m o n e ，l h ) 镣促性腺激素水平异常、犟丸内t 水平降低等与生精细胞的过度 弱亡有关。我弱戆磅究发瑰：甥涂领下藏锭精予数量减少、盘清l h 巍t 农平 异常改变。因此，切除颌下腺w 能引起了黎丸生精细胞的过度凋亡。本研究通过 观察去颁下腺大鼠肇丸内生精细胞的凋亡情况及凋亡相荧基因b c l2 、b a x 和凋 亡关镳溱c a s p a s e3 在大鬣睾惫内表这豹改变，激溪碉切狳矮下艨黢致戆大鼠穗 子数爨降低的机璁。 膜联蛋白5 ( a n n e x i n5 ) 是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白，是膜联蛋白 家族嫒重要熬成受之一。骚究袤镄：a n n e x i n5 程六鬣睾曳潮矮纲照( l e y d i gc e l l ) 和支持细胞( s e r t o l ic e l l ) 均有分布，且可能对t 和抑制索b ( i n h i b i nb ) 的合成与 分泌凝有调控作用。睾酮在睾丸发育、精子的发生与成熟和正常性功能的维持等 方瑟鄂起羞至关鬟冀魏终禹。i n h i b i nb 与精予发生密韬糖笑，冀拳孚霹爱浃睾氛 生糟功能。因此，a n n e x i n5 可能通过影响t 和i n h i b i nb 的合成分泌在缴殖系统 发挥调节作用。在大鼠睾丸间质细胞和支持细胞都存在颌下腺分泌的多种活性因 子懿鞠瘦受葵，撬示鼷f 骧霹魏鼹搴充a n n e x i n5 魏表达爨有调节终臻。因瑟， 我们初步探索性研究了颌下腺对大鼠睾丸内a n n e x i n5 表达的影响以便避一步了 解a t m e x i n5 在雄饿生殖系统的功能。 本研究显示： l 、切除颌下腺能使大鼠零丸和附睾重量降低、附睾内成熟精子数蹰减少， 睾丸缴精小管结构发生异常改燮，血清t 水平显著降低、l h 水平显著升高。、 2 、甥除矮下稼能傻大鬣肇魏沟b a xm r n a 熬表这秀麓、b c l2m r n a 夔表 达降低，改变b a x ，b c t2 的比值，同时促进大鼠睾丸内c a s p a s e3 表达也升高，导 致大鼠睾丸生精细胞凋亡的异常增加。 3 、术后第1 4d ，两缝大箴黎楚a n n e x i n5m r n a 耧蛋巍质表达无疑魏统诗学 差异；术后第2 8d 和4 2d ，实验组大鼠睾丸内a n n e x i n5m r n a 和蛋自成表达显 著赢予对照组。 黧瑟霹戳缮滋如下绪论： l 、颌下腺能调节大鼠血清t 和l h 等嫩殖激素水平，促进睾丸和附睾的正 常发肖，减少生糖小管结构的黪常改变，从瓤维持正常的生糖功能。 2 、大鼠鼷下艨能通过改变b c l2 帮b a x 的表达永平乘籀涮擎丸垡精缩施过 度凋亡，从而维持难常的生精功能。 3 、颁下腺对维持大鼠睾丸内a n n e x i n5 嬲燕常水平起到重要的调节作用。 笑键词：镢下艨；表皮生长阂子；膜联鬣舀5 ；凋亡；荧光定量p 蠛；擎丸； 2 e f f e c t so fs u b m a n d i b u l a rg l a n do i ls p e r m a t o g e n e s i sa n do i l a p o p t o s i so fs p e r m a t o g e n i c c e l l si nr a tt e s t i s a b s t r a c t t h es u b m a n d i b u l a rg l a n di sav e r yi m p o r t a n tg l a n d u l a ro r g a nw i t he n d o c r i n ea n d e x o e r i n ef o rm a m m a l i tc a l ls e c r e tm a n yb i o a c t i v es u b s t a n c e ss u c ha se p i d e r m a l g r o w t h 蠡溉n e r v eg r o w t hf a c t o ra n dh e p a t o e y t eg r o w t hf a c t o rb ye n d o c r i n ei nm a l e p r e v i o u ss t u d i e ss h o w e dt h a t 雠1 e r ew e r es o m er e c e p t o r so f t h e s eb i o a c t i v e 枞b s t a n c e s i nt e s t i s m o r e o v e r , t h ea n d r o g e nr e c e p t o r sa l s oe x i s t e di n 残缱s u b m a n d i b u l a rg l a n d t h et e s t i sc o u l da f f e c ts o m ef i m e t i o n so fs u b m a n d i b u l a rg l a n db ya n d r o g e ns e c r e t i o n s os o m er e s e a r c h e r st h o u g h tt h a tt h e r ew a sas u b m a n d i b u l a rg l a n d - t e s t i sa x i sb e s i d e s h y p o t h a l a m u s - p i t u i t a r yg l a n d - t e s t i sa x i si nm a l em a m m a c u r r e n t l y , r e s e a r c h sf o u n dt h a te g fw a si n v o l v e di ns p e r m a t o g e n i cf u n c t i o n ， e g fi sas i n g l ep o l y p e p t i d ec h a i nw h i c hi sc o m p o s e do f5 3a m i n oa c i d i tc a n i n c r e a s et h es y n t h e s i so fp r o t e i na n dn u c l e i ca c i da n dp r o m o t ep r o l i f e r a t i o na n d d i f f e r e n t i a t i o no f c e l l s w o n g ss t u d i e sh a ds h o w n ：e g fo v e r e x p r e s s i o nc o u l di n h i b i t s p e r mp r o d u c t i o ni nm i c e t s u t s u m i ss t u d yf o u n dt h a t l e v e lo fs e r u n le g fa n d e p i d i d y m a ls p e r mv o l u m ed e c l i n e ds i g n i f i c a n t l ya f t e rs u b m a n d i b u t a rg l a n de x c i s i o n i nm i c e a n a l y z i n gt h er e s u l t so ft h e s es t u d i e s ，w ef o u n dt h a ts u b m a n d i b u l a rg l a n d m a yp l a y a l li m p o r t a n tr o l ei ns p e r m a t o g e n e s i sa n ds p e n nm a t u r e s u b m a n d i b u l a r g l a n dc a n s e c r e te g f , n g f , h g fa n do t h e rb i o a c t i v es u b s t a n c e s t t m r e f o r e ，i ti sv e r y n e c e s s a r y 协i n v e s t i g a t et h ee f f e c t so f s u b m a n d i b u l a rg l a n d o ns p e r m a t o g e n i cf u n c t i o n u s i n ga l la n i m a lm o d e lo f s u b m a n d i b u l a rg l a n de x c i s i o n o e r mc e l ld e a t hh a sl o n gb e e nr e c o g n i z e da sas i g n i f i c a n tf e a t u r e o f m a m m a l i a n s p e r m a t o g e n e s i s s p o n t a n e o u sg e r mc e l ld e a t hi sv e r yi m p o r t a n tf o rt h er e m o v a lo f g e r mc e l l sa n dc o n t r o lo ft h eq u a n t i t ya n dq u a l i t yo fs p e r m ，b u te x c e s s i v eg e r mc e l l d e a t hw i l ll e a dt od i m i n i s hs p e r m a t o g e n i cf u n c t i o na n dd e c r e a s et h eq u a l i t ya n d q u a n t i t yo fs p e r m e x c e s s i v eg e r mc e l ld e a t ht r i g g e r e db yv a r i o u sr e g u l a t o r ys t i m u l i ， 3 i n c l u d i n gd e p r i v a t i o no fg o n a d o t r o p i n sa n di n t r a t e s t i c u l a rt e s t o s t e r o n e o rb ye s t r a d i o l t r e a t m e n ti nr a t sv i aa p o p t o s i s o u rs t u d i e ss h o w e dt h a ts e r t n nl u t e i n i z i n gh o r m o n e d e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l ya n ds e l q l l nt e s t o s t e r o n ei n c r e a s e dm a r k e d l yi nr a ta f t e r r e m o v i n gt h es u b m a n d i b u l a rg l a n d m e a n w h i l et h es p e r mn u m b e ri nr a tt e s t i sa l s o d e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l ya f t e rs u b m a n d i b u l a rg l a n de x c i s i o n w e ，h e n c e ，t h o u g h tt h a t e x c e s s i v eg e r mc e l ld e a t hm a y b eo c c u r r e di nr a tt e s t i sa f t e rr e m o v i n gt h e s u b m a n d i b u l a rg l a n d i np r e s e n te x p e r i m e n t s ，w ei n v e s t i g a t e dt h ea p o p t o s i so fg e r m c e l l si nr a tt e s t i su s i n gt h ei ns i t ue n dl a b e l i n gm e t h o d ( t u n e l ) w ea l s od e t e c t e dt h e c h a n g e so fb e l2 ，b a xa n dc a s p a s e3e x p r e s s i o n i nr a tt e s t i sb yf l u o r e s c e n t q u a n t i t a t i v er t - p c ra n dw e s t e r nb l o t t i n g a n n e x i n5 ，ac a l c i u m d e p e n d e n tp h o s p h o l i p i db i n d i n gp r o t e i n ，i so n eo ft h e m o s ti m p o r t a n tm e m b e r si na n n e x i n ss u p e r f a m i l y a n n e x i n5h a v eb e e nd i s t r i b u t e di n r a tl e y d i gc e l l sa n ds e r t o l ie e l l s i tm a yb ei n v o l v e di nt h es y n t h e s i sa n ds e c r e t i o no f t e s t o s t e r o n ea n di n h i b i nbi nr a tt e s t i s t e s t o s t e r o n ep l a y e dac r i t i c a lr o l ei nt h ea r e a s o f t h et e s t i sd e v e l o p m e n t ，t h es p e r mm a t u r a t i o na n dt h em a i n t e n a n c eo f n o r m a ls e x u a l f u n c t i o n i n h i b i nbi sc l o s e l yr e l a t e dt os p e r m a t o g e n e s i sa n dc a nr e f l e c tt h el e v e lo f s p e r m a t o g e n i cf u n c t i o n t h u s ，a n n e x i n5m i g h tp l a ya ni m p o r t a n tr o l ei n t h e r e p r o d u c t i v es y s t e mb yr e g u l a t i n gt h es e c r e t i o no ft e s t o s t e r o n ea n di n h i b i nb t h e c o r r e s p o n d i n gr e c e p t o r so f t h eb i o a c t i v es u b s t a n c e ss e c r e t e df r o mt h es u b m a n d i b u l a r g l a n de x i s t e di nr a tl e y d i gc e l l sa n ds e r t o l ic e l l s i ts e e m st h a tt h es u b s t a n c e ss e c r e t e d f r o mt h es u b m a n d i b u l a rg l a n dm i g h tc o n t r o lt h ee x p r e s s i o no fa n n e x i n5i nr a tt e s t i s t h e r e f o r e ，i no r d e rt of u r t h e ru n d e r s t a n dt h ee f f e c t so fa n n e x i n5o nt h em a l e r e p r o d u c t i v es y s t e m ，w ei n v e s t i g a t e dt h ec h a n g eo fa r m e x i n5e x p r e s s i o ni nr a tt e s t i s b y f l u o r e s c e n t q u a n t i t a t i v e r t - p c ra n dw e s t e r n b l o t t i n g a f t e r r e m o v i n g s u b m a n d i b u l a rg l a n di nr a t s c o n c l u s i o n ： 1 s u b m a n d i b u l a rg l a n dc a l la d j u s ts e r u ml h ，ta n do t h e rr e p r o d u c t i v eh o r m o n e l e v e l s ，p r o m o t et h en o r m a ld e v e l o p m e n tf o rt e s t i sa n de p i d i d y m i s ，r e d u c ea b n o r m a l c h a n g e so f t h es e m i n i f e r o u st u b u l es t r u c t u r ea n dm a i n t a i nn o r m a ls p e r m a t o g e n e s i sb y s e c r e t i n gm u c h b i o a c t i v es u b s t a n c e 4 2 s u b m a n d i b u l a rg l a n dc a l le h a n g et h ee x p r e s s i o no fb e l2a n db a xm r n a r e s p e c t i v e l y , a n d f u r t h e ri n h i b i te x c e s s i v ea p o p t o s i so fs p e r m a t o g e n i ec e l l st o m a i n t a i nn o r m a ls p e r m a t o g e n e s i sb ys e c r e t i n gm u c hb i o a e t i v es u b s t a n c e 3 s u b m a n d i b u l a rg l a n dp l a y sa l li m p o r t a n tr e g u l a t o r yr o l eo fa m a e x i n5i nr a t 招s t i s k e y w o r d s ：s u b m a n d i b u l a rg l a n d ；e p i d e r m a lg r o w t hf a c t o r ；a l m e x i n5 ；a p o p t o s i s ； f l u o m g e n i eq u a n t i t a t i v ep c r ；t e s t i s 5 前言 颌下腺是哺乳动物三大唾液腺之一，7 0 的唾液是由颌下腺分泌的，是所 有涎腺中分泌量最大的腺体。光镜下，颌下腺实质由分泌部和导管组成。分泌部 以浆液性腺泡为主，少数为混合性腺泡或粘液性腺泡。导管的组成则因不同物种 而异，在啮齿类( 主要是大鼠和小鼠) 动物则是由闰管、颗粒曲管、纹状管和小 叶间导管组成。 传统观点认为，颌下腺是典型的外分泌腺，其主要功能是分泌唾液、参与摄 食与消化。1 9 6 2 年，c o h e n 等【i l 最先从雄性小鼠颌下腺中分离得到了e g f ，之后 颌下腺的内分泌功能逐渐受到人们关注。近年来，从小鼠和大鼠等啮齿类动物的 颌下腺中相继发现或分离出近3 0 种有显著生物活性的多肽类物质，是产生生物活 性物质种类最多的器官之一。颌下腺分泌生物活性物质的方式主要有两种【2 】： 一种是通过颌下腺导管细胞直接将这些生物活性物质分泌入血；另外一种是导管 细胞将活性物质释放入导管腔内随唾液进入消化道再由胃肠吸收入血进而对全 身多种组织和细胞的生理活动发挥调节作用。此外，颌下腺导管细胞内生物活性 物质还可能以旁分泌方式分泌到细胞间隙直接或间接调节颌下腺自身复杂的分 泌活动。因此颌下腺被认为是一种既具有外分泌功能又具有内分泌功能的双重功 能腺体。 在雄性动物，颌下腺可分泌e g f 、n g f 和h g f 等多种生物活性物质1 3 - s 。有 研究表明睁】：在睾丸阗质细胞、支持细胞以及精原细胞等多种细胞内都存在这 些生物活性物质的受体。研究还表明【1 2 - 1 3 ：颌下腺细胞存在雄激素如t 和d h t 等 的受体，睾丸可通过分泌雄激素来反馈性调节颁下腺的功能。因此有学者提出 1 4 - 1 5 1 ：在雄性动物体内，不仅存在下丘脑一垂体一睾丸轴，还存在颌下腺一睾丸 轴。 目前对颌下腺与雄性生精功能的关系主要集中在e g f 和n g f 等对睾丸激素 的合成分泌及精子发生的功能研究上。e g f 是由5 3 个氨基酸残基组成的多肽单 链，相对分子质量( h 血) 为6 0 4 5 ，雄性体e g f 主要来源于颌下腺，是一种促 细胞分裂剂，能增加核酸和蛋白质的合成，促进多种细胞的增殖与分化【i “。表 皮生长因子受体( e g f r ) 位于细胞膜内表面，是一个由1 1 8 6 个氨基酸残基组成 6 的m r 为1 7 00 0 0 的跨膜糖蛋白，含有较多的酪氨酸残基且具有酪氨酸激酶活性， 由结合区域( 暴露于细胞膜外表面) 、跨膜区域和依赖e g f 的蛋白激酶( p k ) 结构区域构成f 1 7 - 1 8 1 。在大鼠睾丸问质细胞、支持细胞等多种细胞都存在e g f r ， e g f 通过与e g f r 结合来调节睾酮合成分泌以及精子发生与成熟【1 9 1 。n g f 是神经 营养因子的一种，由葩、p 和t 2 三种亚基组成，相对分子质量为7 80 0 0 ，其主要 生物学功能是促进细胞存活、生长和分化等。在大鼠睾丸间质细胞、精原细胞和 精母细胞等多种细胞都存在神经生长因子受体( n g f r ) 。n g f r 是一种酪氨酸 蛋白激酶受体，是由4 2 7 个氨基酸残基组成的蛋白分子。研究显示1 2 0 】：n g f 也可 与睾丸间质细胞附g f r 结合调节睾酮的分泌，还可与睾丸生精细胞上的受体相结 合直接参与精子的发生与成熟。 近年来，人们对e g f 与雄性生殖系统的功能研究主要集中在其对睾酮的合 成与分泌、精子的发生与成熟等方面。w o n g 等研究显示【2 l 】：过表达e g f 的小 鼠能抑制精子的产生。t s u t s u m i 等研究发现【l8 】：切除颌下腺可导致血清e g f 含 量明显降低，血清睾酮水平降低，小鼠附睾内精子数量显著减少。分析这些研究 结果，我们发现：颌下腺可能对雄性动物精子的发生和成熟等功能具有重要的作 用。结合颌下腺的内分泌功能分析：颌下腺可分泌e g f 、n g f 和1 4 g f 等多种生 物活性物质，单纯研究e g f 或n g f 并不足以全面地反映颌下腺对雄性生殖系统 的作用。因此，很有必要通过切除颌下腺的动物模型来系统全面的研究颌下腺对 雄性动物生殖功能的影响。 生精细胞凋亡是哺乳动物精子发生过程中的一个显著特点，其生理性凋亡对 于去除受损的生精细胞，控制其数量，保证精子的质量具有重要意义，但生精细 胞的过度凋亡可引起生精功能低下，导致精子的数量和质量降低【2 2 j 。研究表明 ：促卵泡生成素( f s h ) 和黄体生成素( l h ) 等促性腺激素水平异常、睾丸 内t 水平降低等与生精细胞的过度凋亡有关。我们的研究发现：切除颌下腺能 使精子数量减少、血清l h 水平升高和t 水平降低。因此，颌下腺可能与睾丸生 精细胞的过度凋亡有密切关系。b e l2 家族在哺乳动物细胞的凋亡过程中发挥重 要的调节作用 2 4 - 2 5 1 。b e l2 与b a x 是该家族的两个重要成员，b e l2 是凋亡抑制基 因，b a x 是凋亡促进基因，这二者可以通过形成同二聚体或异二聚体而发挥不同 的生物学作用。b a x 表达的增加可使细胞内b e l2 b a x 异二聚体含量增加，促使 7 细胞发生凋亡，因此这两种蛋白之间的比例对细胞的存亡起着至关重要的作用 2 6 - 2 7 1 。已有研究表b , q t 2 8 - 2 9 ：b a x 和b c l2 参与了小鼠和大鼠生精细胞的生理性凋 亡，而且在实验性隐睾大鼠睾丸细胞凋亡中也检测到这二者表达发生了改变。因 此，我们采用t u n e l 方法对去颌下腺大鼠睾丸生精细胞凋亡情况进行了观察， 同时对凋亡相关基因b c l2 、b a x 和凋亡关键酶c a s p a s e3 在大鼠睾丸内的表达进 行了研究，探讨了其可能的发生机制。 膜联蛋白5 ( a n n e x i n5 ) 是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白，是膜联蛋白 家族最重要的成员之一【3 0 】。k a w a m i n a m i 等口1 l 研究发现：a n n e x i n5 在大鼠的多种 内分泌细胞如滤泡上皮细胞、甲状腺滤泡旁细胞、肾上腺皮质细胞、卵巢黄体细 胞等均有分布。a n n e x i n5 在大鼠睾丸间质细胞和支持细胞也有分布，且可能对 t 和i n h i b i nb 的合成与分泌具有调控作用。t 在睾丸发育、精子的发生与成熟和 正常性功能的维持等方面都起着至关重要的作用。i n h i b i nb 与精子发生密切相 关，其水平可反映睾丸生精功能。由此可见，a n n e x i n5 可能通过影响t 和i n h i b i n b 的合成分泌在生殖系统发挥调节作用。在大鼠睾丸问质细胞和支持细胞都存在 颌下腺分泌的多种活性因子的相应受体，提示颌下腺可能通过这些活性物质来调 节大鼠睾丸内a n n e x i n5 的表达，然而目前国内外均没有这方面的研究。因此， 本研究建立颌下腺切除大鼠模型，采用实时荧光定量r t - p c r 、w e s t e r nb l o t t i n g 和免疫组织化学的方法对颌下腺切除大鼠睾丸内a n n e x i n5 表达的改变进行了初 步的探索性研究。 8 参考文献： l 、c o h e ns i s o l a t i o no f am o u s es u b m a x i l l a r yg l a n dp r o t e i na c c e l e r a t i n gi n c i s o r e r u p t i o na n de y e l i do p e n i n gi nt h en e w b o r na n i m a l 们jb i o lc h e m 1 9 6 2 ；2 3 7 ( 3 ) ： 1 5 5 5 。1 5 6 6 2 、g r e s i ke w 。t h eg r a n u l a rc o n v o l u t e dt u b u l e ( g c t ) c e l lo f r o d e n ts u b m a n d i b u t a r g l a n d s 阴m i c r o sr e st e e h 1 9 9 4 ；2 7 ( 1 ) ：i - 2 4 3 、r o u g e o tc ，r o s i n s k i - c h u p i ni ，m a t h i s o n e ta 1 r o d e n ts u b m a n d i b u l a rg l a n d p e p t i d eh o r m o n e sa n do t h e rb i o l o g i c a l l ya c t i v ep e p t i d e s 豳，p e p t i d e s 2 0 0 0 ；2 l ) ： 4 4 3 - 4 5 5 4 、f a l m e s t o c km ，l uq n e r v eg r o w t hf a c t o rs y n t h e s i sb ym o u s es u b m a n d i b u l a rg l a n d c e l l si nc u l t u r e 翻。b r a i nr e s 1 9 9 3 ；6 2 1 ( 2 ) ：3 3 9 - 3 4 2 。 5 、a n a n oo ，m a t s u m o t okn a k a m u r at e ta 1 e x p r e s s i o na n dl o c a l i z a t i o no f h e p a t o c y t eg r o w t hf a c t o ri nr a ts u b m a n d i b u l a rg l a n d j g r o w t hf a c t o r s 1 9 9 4 ；l o ( 2 ) ： 1 4 5 1 5 1 6 、n a k a z u m ih ，s a s a n oh ，m a e t m r al ，e ta 1 t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - a l p h a , e p i d e r m a lg r o w t hf a c t o r , a n de p i d e r m a lg r o w t hf a c t o rr e c e p t o ri nh u m a nt e s t i s o b t a i n e df r o mb i o p s ya n dc a s t r a t i o n ：i m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t u d y j 。t o h o k uj e x p m e d 1 9 9 6 ；1 7 8 ( 4 ) ：3 8 1 3 8 8 7 、x uz i m m u n o h i s t o c h e m i c a ll o c a l i z a t i o no f t h ee p i d e r m a lg r o w t hf a c t o rr e c e p t o ri n n l o u s et e s t e s 瞬z h o n g g u oy ix u ek ex u ey u a nx u eb a o 。1 9 9 3 ；1 5 ( 5 ) ：3 3 0 - 3 3 4 。 8 、s e i d lk ，h o l s t e i na f e v i d e n c ef o rt i l ep r e s e n c eo f n e r v eg r o w t hf a c t o r ( n 乏m ) a n d n g f r e c e p t o r si nh u m a nt e s t i s 嘲c e l lt i s s u er e s 1 9 9 0 ；2 6 1 ( 3 ) ：5 4 9 5 5 4 9 、d j a k i e wd ，p f l u gb ，d i o n n ec ，痰a 1 p o s t n a t a le x p r e s s i o no f n e r v eg r o w t hf a c t o r r e c e p t o r s i n t h er a t v e s t i s j b i o l r e p r o d 1 9 9 4 ；5 1 ( 2 ) ：2 1 4 - 2 2 1 1 0 、m u l l e rd ，p a u s ti - i f , m i d d e n d o r f f r , e ta 1 n e r v eg r o w t hf a c t o r ( n g f ) r e c e p t o r si n m a l er e p r o d u c t i v eo r g a n s 圈a d ve x pm e d b i o l 。1 9 9 7 ；4 2 4 ：1 5 7 - 1 5 8 11 、r i c c ig ，c a t i z o n ea ，o a l d i e r im e x p r e s s i o na n df u n c t i o n a lr o l eo f h e p a t o c y t e g r o w t hf a c t o ra n di t sr e c e p t o r ( c - m e t ) d u r i n gf e t a lm o u s et e s t i sd e v e l o p m e n t 明j e n d o c r i n 0 1 2 0 0 6 ；1 9 1 0 ) ：5 5 9 - 5 7 0 9 1 2 、t a k e m u r as ，t a m im ，k o s h i k as ，e ta 1 a n d r o g e nr e c e p t o r si nt h er a t s u b m a n d i b u l a rs a l i v a r yg l a n d r e l e a s eo f d i h y d r o t e s t o s t e r o n e ( d h t ) b i n d i n gp r o t e i n f r o ma n d r o g e nb i n d i n gp r o t e i ni nt h ec y t o s o l 叽k a n a g a w as h i g a k u 1 9 8 4 ；1 9 ( 2 ) ： 1 3 8 1 4 8 1 3 、z h u a n gy h ，b l a u e rm ，s y v a l ah ，e ta 1 a n d r o g e nr e c e p t o r i nr a th a r d e r i a na n d s u b m a n d i b u l a r 出柚d s 【j 】h i s t o c h e mj 1 9 9 6 ；2 8 ( 7 ) ：4 7 7 - 4 8 3 1 4 、k o s h i k as ，t a r u im ，y a m a g u c h ikn a k a y a m ay a n d r o g e na c t i o ni n s u b m a n d i b u l a rg l a n d 明b u l lk a n a g a w ad e n tc o i l 1 9 8 9 ；1 7 ( 2 ) ：1 4 1 1 4 4 1 5 、k o s h i k as ，n i s h i m u r at ，y o n e d at ，n a k a y a m ay s u b m a n d i b u l a rg l a n da n d r e p r o d u c t i v ef u n c t i o n j b u l lk a n a g a w ad e n tc u l l 1 9 8 9 ；1 7 ( 2 ) ：1 4 5 1 5 0 1 6 、c a r p e n t e rg ，c o h e ns e p i d e r m a lg r o w t hf a c t o r j jb i o lc h e m 1 9 9 0 ；2 6 5 ( 1 4 ) ： 7 7 0 9 7 7 1 2 1 7 、r a d h a k r i s h n a nb ，o k eb o ，p a p a d o p o u l o sv ，e ta 1 c h a r a c t e r i z a t i o no f e p i d e r m a l g r o w t hf a c t o ri nm o u s et e s t i s 阴e n d o c r i n o l o g y 1 9 9 2 ；1 3 1 ( 6 ) ：3 0 9 1 - 3 0 9 9 1 8 、t s u t s u m io ，k u r a c h ih ，o k at ap h y s i o l o g i c a lr o l eo f e g fi nm a l er e p r o d u c t i v e f u n c t i o n j s c i e n c e 1 9 8 6 ；2 3 3 ( 4 7 6 7 ) ：9 7 5 - 9 7 7 1 9 、s u a r e z q u i a nc a ，o k eb o ，r a d h a k r i s h n a nb r e l a t i o n s h i pb e t w e e n s u b m a n d i b u l a rg l a n de p i d e r m