（药物化学专业论文）刺松藻codium+fragilesuringarhariot多糖的提取分离、结构表征及其抗凝活性研究.pdf

一 、， 一。 i 、， lt*zt3tt$ 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得( 注：如没有其他需要特别声 明的：奎拦亘窒或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的 同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：描画纠 签字日期：妒i p 年歹月加日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下 事项： 1 、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论 文被查阅和借阅。 2 、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采 用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国 学术期刊( 光盘版) 电子杂志社 用于出版和编入c n k 中国知识资源总库，授权 中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库。( 保 密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：他词j 5 c 签字日期：伽i o 年罗月沙日 导师 签字日期 鼍，慧 摘要 本文以刺松藻( c o d i u mf r a t e ( s u r i n g a r ) h a r i o t ) 为原料，经8 5 乙醇脱 脂后采用室温水、9 0 ( 2 热水和7 0 ( 22 n a 2 c 0 3 水溶液提取，分别得到了3 种粗 多糖c f c 、c f h 和c f a ，其得率分别为7 o ，8 1 和0 9 。运用高效凝胶渗 透色谱( 口g p c ) 、高效离子色谱( ，i c ) 及傅里叶变换红外光谱( f 1 i r ) 等 方法对其分子量、单糖组成和结构特征进行了分析。结果表明，c f c 、c f h 和 c f a 均含有不同含量的半乳糖( g a d 、阿拉伯糖( a r b ) 、葡萄糖( g l e ) 、甘_ 露糖( m a n ) 和木糖( x y l ) ，其摩尔比分别为3 6 5 ：2 7 1 ：1 0 0 - o 8 5 ：0 5 5 和1 1 0 - - ：+ ： 1 0 1 ：1 0 0 ：0 9 2 ：0 2 1 及o 5 1 ：o 3 4 ：。1 o o ：o 6 1 ：o 0 5 。c f c 硫酸化程度最高j j c f h 次之；e f a 硫酸化程度最低，其硫酸基含量分别为2 3 4 ，1 7 5 和9 7 蠢。 在上述理化性质分析基础上，采用离子交换色谱分离技术，从c f c 和c f h 中纯化得到了组分c f c p l p 6 和c f h p l - p 5 共1 1 种多糖。对c f c p 4 和c f c p 6 进 一步采用s e p h a r o s e6 b f f 柱层析纯化得到分子量均一的多糖组分。 结果表明， c f c p 4 和c f c p 6 分子量分别为2 9k d 和5 6k d ，硫酸基含量分别为2 1 o 和3 2 4 ： 工： ： ，单糖组成分别以g a l 和a r a 为主。通过核磁共振波谱( n m r ) 和脱硫前后甲 ：o o j 。 基化分析表明jc f c p 4 是硫酸半乳聚糖，以p l ，3 连接为主链( 6 0 ) ，1 3 1 ，穆| f 一 ：，? ：一。：，：，。：i ：一： 链接为支链( 4 0 ) ；链内硫酸基位于c 4 位，分支末端硫酸基位于c 6 位；分 ；：_ - 支末端c 3 和c 4 位o h 与丙酮酸环化形成五元环。c f c p 6 是硫酸阿拉伯聚糖，：_ j 以p 1 ，3 连接为主链，3 0 的阿拉伯糖在c 2 一o h 处有分支，硫酸基位于阿拉伯糖， 的c 4 位和c 2 位，分子中含有少量半乳糖。： 为了确定其细微结构，纯化的c f c p 4 和c f c p 6 分别经氢型强阳离子交换树 脂和自由基降解获得寡糖混合物，再经b i o g e l p 4 柱分离法，从中获得了1 4 种 寡糖，并通过电喷雾碰撞诱导串联质谱法( e s i c i d m s m s ) 对c f c p 4 中8 种 硫酸半乳寡糖和c f c p 6 中6 种硫酸阿拉伯寡糖进行了序列分析，确定其结构序 列分别是：+ g a l p 6 s 1 3 1 - - - , 6 g a l p 、 g a l p l 31 _ 6 g a 切p1 - - , , 3 g a l p 4 s 、g a 驴6 s p l 6 + g 咖p l _ 6 g 却p l _ 6 g 却、g a l p 6 s 1 31 _ 3 g 却p 1 3g a l p f 3 1 - 3 g a l p f 3 1 - ，6 g a l p 、 g a 6 s dl _ 6 g a 耻珥s dl _ 6 g a 、g a 耻巧s d1 叶6 g a 切pl _ 6 g a k ，4 s p1 6 g a 、 g 咖6 s p l 叶6 g 咖p 1 - 6 g 却p 1 6 g 咖p 1 _ 6 g 却4 s 、3 , 4 p y r g a l p 6 s 1 3 1 - * 6 g a l p 以 及a r b p 3 1 - - * 3 a r b p 4 s 、a r b p 4 s f l l - - - 3 a r b p l 3 1 - - * 3 a r b p 、a r b p 4 s l b l - * 3 a r b p 4 s 、 州s p l _ 3 a 曲以s p l 3 ) 时印、a r b p 4 s 1 3 1 - - 3 a r b p 2 s 1 31 - - * 3 a r b p l 31 3 加切、 加i b s p l _ 3 加电p p l 3 i b 陀s p l 3 加坳p1 2 加切。这些寡糖结构进一步证明 c f c p 4 是b1 , 6 一链接为支链的硫酸半乳聚糖，c f c p 6 是1 31 , 3 链接为主链的硫酸化 阿拉伯聚糖。这些结构特殊的寡糖不仅丰富了海洋寡糖库数据，也为进一步从事 糖生物芯片研究，探讨其与蛋白之间的相互作用提供了基础。 在上述结构研究基础上，以a p t t 、t t 、p t 为评价指标，对三种粗多糖 c f c 、c f h 和c f a 以及三种纯化多糖c f c p l 、c f c p 4 和c f c p 6 的抗凝血活性进 行了评价。通过与肝素对照的结果揭示，c f c 及其纯化组分c f c p l 抗凝活性较 强，而c f c p 6 的抗凝活性较弱，说明刺松藻多糖的抗凝活性除了与结构有关外， 还与分子量有关，分子量越高，抗凝活性越强。c f c p l 主要通过抑制内源性凝血 途径和共同凝血途径起作用，而对外源性凝血途径影响较弱。该结果为开发海洋 抗凝血药物提供了基础。 关键词：刺松藻；硫酸多糖；寡糖；电喷雾串联质谱；丙酮酸；抗凝活性 a b s t r a c t i nt h i sp a p e r , t h eg r e e na l g ac o d i u mf r a g i l e ( s u r i n g a r ) h a r i o t ，w a su s e da s s t a r t i n gm a t e r i a l ，t h ea l g aw a sf i r s t l yd e l i p i d e d 晰n l8 5 e t h a n o l ，t h e ne x t r a c t e dw i t h r o o mt e m p e r a t u r ew a t e r , 9 0 h o tw a t e ra n d2 s i d i u mb i c a r b o n a t ew a t e rs o l u t i o n a t7 0 c ，t h r e et y p e so fc r u d ep o l y s a c c h a r i d e s ，w h i c hn a m e da sc f c ，c f ha n dc 飚 w e l ea c q u i r e d r n l ey i e l d so fc f c ，c f ha n d jc f aw e r e7 0 ，8 1 a n d0 9 ， r e s p e c t i v e l y t h e i rr e l a t i v em o l e c u l a rw e i g h t ，m o n o s a c c h a r i d ec o m p o s i t i o na n d s t r u c t u r a lf e a t u r e sw e r ed e t e r m i n e d w i t h l l i g hp e r f o r m a n c eg e lp e r m e a t i o n ：j ：j0 c h r o m a t o g r a p h y ( h p g p c ) ，h i g hp e r f o 肌a 码每i i o nc h r o m a t o g r a p h y ( 8 p i c ) a n d f o u r i e rt r a n s f o r mi n f r a r e ds p e c t r o s c o p y ( f t i r ) , 。r e s p e c t i v e l y n er e s u l t ss h o w e dt h a t c f c ，c f ha n dc f aw e r ec o m p o s e do fd i f f e r e n tc o n t e n t so fg a l ，a r a , g i c ，m a na n d x y l ，w i t ht h em o l a rr a t i oo f3 6 5 ：2 7 1 ：1 o o ：0 ；8 1 5 i o 5 5 ，1 10 ：1 0 1 ：1 0 0 ：0 9 2 ：0 2 1 a n d 0 - 5 1 ：o 3 4 ：1 0 0 ：0 6 1 ：0 0 5 t h e i rs u l f a t ec o n t e n t sw e r ed i f f e r e n t ，c f ch a v et h eh i g h e s t s u l f a t ec o n t e n t ，t h e nw a sc f ha n dc f a ，o fw h i c hw e r e2 3 4 ，17 5 a n d9 7 ， ： r e s p e c t i v e l y ；- ：0 ：。 一b a s e do nt h e p h y s i c o c h e m i c a la n a l y s i s j + o f c f ca n dc f h ，s i xk i n d so f p 0 1 y s a c c h a r i d e s ( c f c p i - p 6 ) a n df i v ek i n d s 。o f p o l y s a c c h a r i d e s ( c f h p i - p s ) w e r e ? r e s p e c t i v e l ys e p a r a t e df r o mc f ca n dc f hb yu s i n gq s e p h a r o s ef fa n i o n e x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h y t w ok i n d so fm o l e c u l a ru n i f o r mp u r ef r a c t i o n sc f c p 4a n dc f c p 6 w e r ef u r t h e ra c q u i r e df r o mc f cw i t hs e p h a r o s e6 bf a s tf l o wg e lp e r m e a t i o n c h r o m a t o g r a p h y n em w o fc f c p 4a n dc f c p 6w e r e2 9a n d5 6k d ，s e p a r a t e l y ；t h e s u l f a t ec o n t e n tw e r e21 0 a n d3 2 4 ，r e s p e c t i v e l y c f c p 4a n dc f c p 6w a sm a i n l y c o m p o s e db yg a l a c t o s ea n da r a b i n o s e ，s e p a r a t e l y b a s e do nt h en m r a n dm e t h y l a t i o n a n a l y s i st oc f c p 4a n dc f c p 6a n dt h e i rd e s u l f a t e d ，c o u n t e r p a r t ，c f c p 4a n dc f c p 6 ? ， ：，： ， ， ：一。 j 。： j ，； j f ，f 。， ， - ； ， ；0 ：。： 二二、： 0 ：， ；一： - 。：； ! ：! | ， 一v- j + ： ： 。 - 7 ? ， j ，o _ r ? ； ：， ： r ： ?+ ： - f ： - ： ： 二 w e r ed e t e r m i n e da ss u l f a t e dg a l a c t a na n ds u l f a t e da r a b i n a n t h eb a c k k i o n eo fc f c p 4 w a sp ( 1 - - 3 ) - l i n k e dg a l a c t o s e ( 6 0 ) ，a n dt h eb r a n c h e dc h a i nw a sp ( 1 - - - 6 ) 一l i n k e d g a l a c t o s er e s i d u e s ( 4 0 ) t h es u l f a t eg r o u p sw e r el o c a t e da tc 4 一o h a n dc 6 一o h ，a n d p y r u v i ca c i dw a sl i n k e da tc 3 一o ha n dc 4 一o ho ft e r m i n a lg a l a c t o s er e s i d u e s t h e b a c k b o n eo ft h ec f c p 6w a sc o n s i s t so fd ( 1 _ 3 ) 一a r a b i n o s er e s i d u e s ，a n dt h eb r a n c h p o i n t sw e r ef o u n da tc 2 o h ( 3 0 ) ，a n dt h es u l f a t el o c a t e d a tc 4 o ha n dc 2 一o h t od e t e r m i n e 廿1 e i rf i n es t r u c t u r e s , t h ep u r i f i e dp o l y s a c c h a r i d ec f c p 4a n dc f c p 6 w e r ed e g r a d e dw i t ht h em e t h o d so fh y d r o g e nf o r ms t r o n g - c a t i o ne x c h a n g er e s i na n d f r e er a d i c a ld e g r a d a t i o n ，t h eo l i g o s a c c h a r i d e sm i x t u r ew a ss e p a r a t e do nb i o g e l - p 4 c o l u m n , 1 4k i n d so fo l i o g o s a c c h a r i d e sw e r ea c q u i r e d t h es e q u e n c ea n ds t r u c t u r eo f e i g h tg a l a c t o o l i g o s a c c h a r i d e sa n ds i xa r a b i n o o l i g o s a c c h a r i d e sw e r ei d e n t i f i e dw i t h e l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o nt a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r y ( e s i c i d m s m s ) t h e i r s t r u c t u r e sw e r ea s f o l l o w i n g ：g a l p 6 s 1 31 - - 6 g a l p ，g 却p1 - - - 6 g a l p l 3l - - - 3 g a l p 4 s ， g a l p 6 sp 1 6 g 却p l 一6 g a p p l _ 6 g a 驷，g a l l p 6 s 1 3 1 - + 3 g a l p l 5 1 - - - 3g a l p l 3 1 - - - ，3 g a l p l 3 1 6g a 驷，g a l p 6 s 1 3 1 - - _ , 6 g a l p 4 s 1 3 l - - - 6 g a l p ，g a l p 6 s 1 3 1 - * 6 g a l p l 31 6 g 却4 s d l 一6 g a 概g 她嘶s pl 叶6 g a 珍p 1 6 g a 珈pl _ 6 g a p1 6 g a k 码s ，3 ，4 p y r g a l p 6 s 1 3l - * 6 g a l p ； a n da r b p l 3 1 - - 3 a r b p 4 s ，a r b p 4 s 1 3 1 - - - 3 a r b p l 3 1 - - - * 3 a r b p ，a r b p 4 s 1 3 l - - * 3 a r b p 4 s ， a 曲一s pl 一3 加印2 s p1 _ 3 ) 甜印，a r b p 4 s 1 31 - * 3 a r b p 2 s 1 3l - - - + 3 a r b p l 31 - - ，3 a r b p ，a n d a r b p 4 s 1 31 - - - , 3 a r b p l 3l - - - * 3 a r b p 2 s 1 3l 一3 a r b p l 31 - - 2 a r b p a l l t h e s eu n i q u e o l i g o s a c c h a r i d e so f f e r e du s e f u lm e s s a g ef o rc o n s t r u c t i o no fm a r i n ec a r b o h y d r a t e l i b r a r y m o r ei m p o r t a n t l y , t h e yp r o v i d et h ef o u n d a t i o nf o rt h ep r e p a r a t i o no ft h e o l i g o s a c c h a r i d e c h i pa n dt h ei n v e s t i g a t i o no nt h eo l i g o s a c c h a r i d e - p r o t e i ni n t e r a c t i o n b a s e do nt h es t r u c t u r ea n a l y s i s ，t h ea n t i c o a g u l a n ta c t i v i t i e so ft h r e ec r u d e p o l y s a c c h a r i d e s ( c f c ，c f ha n dc f a ) a n dt h r e ep u r i f i e dp o l y s a c c h a r i d e s ( c f c p i ， c f c p 4a n dc f c p 6 ) w e r ee v a l u a t e db ya s s a y so ft h ea c t i v a t e dp a r t i a lt h r o m b o p l a s t i n t i m e ( a p t r ) ，t h r o m b i nt i m e ( y r ) ，p r o t h r o m b i nt i m e ( p a 3 t h er e s u l t ss h o w e dt h a t c f ca n dc f c p is h o w e dh i g ha n t i c o a g u l a n ta c t i v i t i e sw i t hh e p a r i na sp o s i t i v ec o n t r o l ， c f c p 6 ，w h i c hh a v es i m i l a rp h y s i c o c h e m i c a ip r o p e r t i e st oc f c p t ，s h o w e dl o w e r a n t i c o a g u l a n ta c t i v i t i e s a p a r tf r o mt h es t r u c t u r a lf e a t u r e s ，t h em a j o rd i f f e r e n c e so f a n t i c o a g u l a n ta c t i v i t i e sb e t w e e nt h e s ep o l y s a c c h a r i d e sw e r ea s s o c i a t e dw i t hr e l a t i v e m o l e c u l a rw e i g h t ，t h eh i g h e rm ws h o w e dt h es t r o n g e ra n t i c o a g u l a n t t h em e c h a n i s mo f a n t i c o a g u l a n to fc f c p lw a s d u et oi n t r i n s i ca n dc o m m o np a t h w a y , b u tn o te x t r i n s i cp a t h w a y t h e r e s u l t sp r o v i d e dt h e o r e t i c a lf o u n d a t i o nt om a r i n ed r u g sd e v e l o p m e n t k e y w o r d s ：c o d i u mf r a g i l e ( s u r i n g a r ) h a r i o t , s u l f a t e dp o l y s a c c h a r i d e s , o f i g o s a c c h a r i d e , e s i - m s m s ，p y r u v i ca c i d ，a n t i c o a g u l a n ta c t i v i t i e s 目录 第一章前言”l l 绿藻多糖1 1 1 绿藻多糖的结构1 1 1 1 木聚糖1 1 1 2 甘露聚糖”2 1 1 3 葡聚糖2 1 1 4 硫酸杂屎糖2 1 1 4 1 木糖半乳糖阿拉伯糖聚合物2 1 1 4 2 葡萄糖醛酸木糖鼠李糖聚合物3 1 2 绿藻多糖的生物学活性3 1 2 1 抗凝血活性3 1 2 2 免疫调节作用4 1 2 3 抗氧化活性啊一i 一- ”一4 1 2 4 抗病毒作用j ! ：? ：? j j ? j ! ? ：? ：二：? 4 1 2 5 抗肿瘤作用7 ? 一_ 7 ? 5 2 糖链结构分析方法? ：j ? j ：j ：5 2 1 化学方法：j ”5 2 2 仪器分析方法“二7 2 3 酶学方法9 2 4 免疫学方法“”9 +j 3 寡糖的制备分离及其结构研究方法“9 3 1 寡糖的制备j “j _ 9 3 2 寡糖的分离纯化? - ，一0 000 0 b ；1 0 3 3 寡糖的结构研究? o ? 1 1 4 刺松藻：1 2 4 1 刺松藻概述；：一1 2 4 1 1刺松藻的分类学地位与生长环境及分布1 2 4 1 2 刺松藻的化学成分“1 2 4 1 3刺松藻多糖的研究进展及药理作用1 3 5 本课题研究目的和意义1 3 第二章刺松藻多糖的提取及理化性质研究一1 5 l 材料与仪器”1 5 1 1 实验材料厶+ 1 5 1 2 实验试剂1 5 1 3 实验仪器1 5 2 实验方法1 6 2 1 多糖的提取16 2 1 2 脱脂1 6 2 1 3 室温水提取1 6 2 1 4 热水提取1 6 2 1 5 热碱提取1 6 2 1 6 多糖样品脱盐1 6 2 2 纯度鉴定及分子量测定1 7 2 3 理化性质分析1 8 2 3 1总糖含量测定o o oo o o 1 8 2 3 2 蛋白含量测定1 8 2 3 3 硫酸基含量测定1 8 2 3 4 糖醛酸含量测定1 8 2 4 单糖组成分析1 9 2 4 1 完全酸水解o o oo o o 1 9 2 4 2 薄层层析( t l c ) 分析1 9 2 4 3 高效离子色谱分析_ 2 0 2 5 红外光谱( i r ) 分析二小”2 0 “ 3 实验结果与讨论一od ? 2 0 3 1 多糖的提取? ? ：? ? 2 0 3 2 纯度鉴定及分子量测定2 2 3 3 理化性质分析2 3 3 3 1 总糖含量测定“2 3 3 3 2 蛋白含量测定2 4 3 - 3 3 硫酸基含量2 4 3 3 4 糖醛酸含量测定一2 5 3 3 5 单糖组成分析。2 6 3 3 6 红外光谱分析；小一2 8 4 本章小结3 1 第三章刺哺黼吣和觚的铆移蜊，圾结懒”3 2 l 材料与仪器3 2 1 1 实验材料3 2 1 2 实验试剂3 2 1 3 实验仪器3 2 2 实验方法3 2 2 1 粗多糖c f c 和c f h 的分离纯化3 2 2 2c f c p - 6 和c f h l 5 纯度及分子量分析3 3 3 1 粗多糖c f c 和c f h 的分离纯化3 5 3 2c f c p l 6 和c f h l 5 纯度及分子量分析3 6 3 3c f c p l 6 和c f h l 。5 理化性质及单糖组成分析3 7 3 4 红外光谱分析4 1 3 5 脱硫酸根反应i 。4 3 3 6 甲基化分析咖4 4 3 ：6 ，1 1c f c p 4 和d s c f c p 4 甲基化及g c m s 分析? j ；一4 5 3 6 2 c f c p 6 和d s c f c p 6 甲基化及g c m s 分析_ ? 5 l 3 7 核磁共振波谱( n m r ) 分析6 1 3 7 ；卜c f c p 4 的核磁共振波谱分析0 0 0000 一! o 6 l 3 7 2 c f c p 6 的核磁共振波谱分析_ 6 3 4 本章小结j 6 9 第四章刺松藻c f c i 4 寡糖的制备及其结构与序列分析一：7 0 1 材料与仪器7 0 1 1 实验材料7 0 1 2 实验试剂_ 7 0 1 乌：实验仪器7 0 2 方法_ ? o ? 7 0 2 1 固相酸降解法制备寡糖7 0 2 2 。自由基降解法制备寡糖一“”7 0 2 3 寡糖的还原7 1 2 4 电喷雾离子化质谱分析7 1 3 结果与讨论一7 1 3 1 固相酸降解法制备寡糖7 l 3 2 自由基降解法制备寡糖7 1 3 3 电喷雾离子化质谱分析 7 2 3 3 1电喷雾一级质谱( e s i c i d m s ) 分析7 2 3 3 1 1 固相酸降解寡糖的e s i c i d m s 分析：7 2 3 3 1 2 自由基降解寡糖的e s i c i d m s 分析7 5 3 3 2电喷雾串联质谱( e s i c i d m s m s ) 分析7 5 3 3 2 1g 2 的e s i c 1 d m s m s 序列分析7 6 3 3 2 2g 3 的e s i c i d m s m s 序列分析7 7 3 3 2 3 ( 3 4 的e s i c i d m s m s 序列分析7 7 3 3 2 4g 5 的e s i c i d - m s m s 序列分析7 8 3 3 2 5g 6 的e s i c i d m s m s 序列分析7 9 3 3 2 6g 7 的e s i c i d m s m s 序列分析8 0 3 3 2 7g 8 的e s i c i d m s m s 序列分析一8 1 3 3 2 8f g 5 的e s i c i d m s m s 序列分析8 2 4 本章小结一8 4 第五章刺松藻c f c p 6 寡糖的制备及其结构与序列分析8 5 l 材料与仪器8 5 1 1 实验材料_ 8 5 1 2 实验试剂一8 5 1 3 实验仪器：! ：? ? 8 5 2 方法“南i “；“小8 5 一j ；j ：jjj 2 1 固相酸降解法制备寡糖一；8 5 2 2 寡糖的还原? ? ? ? ! ? 7 ? ? ：? ? 8 5 2 4 电喷雾离子化质谱分析一d oo b0 00 8 6 3 实验结果与讨论o o 8 6 +f。?，? c ? f ，f 3 1 固相酸降解法制备寡糖：8 6 3 2 电喷雾离子化质谱分析? j 8 7 3 2 1 电喷雾一级质谱( e s i c i d m s ) 分析8 7 3 2 2电喷雾串联质谱( e s i c i d - m s 删分析8 7 3 2 2 1 a 2 1 ( d p 2 ) 的，e s ! - c i d m s m s 序列分析o 8 7 3 2 2 2 a 2 2 ( d p 3 ) 的e s i c i d m s m s 序列分析o o oo oooo 8 8 3 2 2 3a 3 的e s i c i d - m s m s 序列分析“8 9 3 2 2 4 a 4 1 ( d p 3 ) 的e s i c i d m s m s 序列分析9 0 3 2 2 5 a 4 2 ( d p 4 ) 的e s i c i d m s m s 序列分析9 l 3 2 2 6 a 5 ( d p 5 ) 的e s i c i d m s m s 序列分析9 l 4 本章小结：9 3 第六章刺松藻多糖的抗凝血活性研究一9 4 1 材料与仪器：9 4 1 1 实验材料9 4 1 2 实验试剂一一9 4 硕士期间参与课题及获奖情况。- _ ：1 0 9 致谢i ：之j ：110 刺松藻( c o c h u m f r a g i l e ( s u r i n g a r ) h a r i o t ) 多糖的提取分离、结构表征及其抗凝活性研究 l j l 日i j舌 刺松藻( c o d i u mf r a g i l e ( s u r i n g a r ) h a r i o t ) 为多年生绿藻，属于绿藻门。 绿藻是藻类植物中最大的一门，约有3 5 0 个属，7 5 0 0 8 0 0 0 种。绿藻分为两个纲， 即绿藻纲和纶藻纲。分为1 3 个目，即团藻目、四孢藻目、色球藻目、丝藻目、胶 毛藻目、石莼目、溪菜目、鞘藻目、刚毛藻目、管藻日、管枝藻目、绒枝藻目和 双星藻目。绿藻分布广泛，在淡水和海水中均有分布，海产种类约占1 0 ，淡水 种类约占9 0 。绿藻含有大量糖、蛋白质、脂肪、无机盐和各种维生素等。 我国绿藻资源十分丰富，绿藻多糖在医药、食品、饲料、化工和化妆品等领 域具有广阔的开发应用前景，近年来有关绿藻多糖的研究已经引起了越来越多的 关注。刺松藻作为一种重要的绿藻资源，更是受到了越来越广泛的关注；首先将 绿藻多糖资源及其结构与活性研究情况综述如下，为刺松藻结构活性研究提供参 考。 j ： r 绿藻多糖 ? ： 1 1 绿藻多糖的结构 o j 绿藻多糖主要位于细胞间质中，多为水溶性硫酸多糖；它也存在于细胞壁之 中，：细胞壁微纤维主要不是由纤维素组成，而是由木聚糖( x y l a n ) 或甘露聚糖 ( m a r m a n ) 构成；另外，细胞质内尚有少量的多糖存在。水溶性硫酸多糖是绿藻 多糖的主要成分，其组成和结构随绿藻种类的不同而不同，通常可分为两类，一 类为木糖一阿拉伯糖半乳糖聚合物，另一类为葡萄糖醛酸一木糖鼠李糖聚合物1 1 1 。 1 1 1 木聚糖 绿藻水溶性多糖普遍含有d 一木糖，碱提可得到只由d 一木糖构成的木聚糖。 m a c k i e 等2 】从丝状厥藻中提取出了纯的木聚糖，经甲基化和水解后的产物分析表 明：有2 ，3 ，4 一三一o 甲基木糖、2 , 4 - - - - = ，0 甲基木糖和2 和4 0 一甲基木糖，摩尔比为 2 1 ：9 6 6 ：1 2 ，这证明该藻所含的木聚糖只由p 1 ，3 一d 一木糖单位连接成的聚合物。 已确定，厥藻属的丝状厥藻、锯叶厥藻、总状厥藻、扁平厥藻、楔形仙掌藻 ( h a l i m e d ac u n e a t ah e r i n g ) 、东方钙扇藻( u d o t e ao r i e n t a l i s a e tz s g e p p ) 、 台湾绿毛藻( c h l o r o d e s m s f o r m o s a n ay a m ) 和假双管藻( a m p h i s o l e n i as t e i n ) 所 刺松藻( c o d i u m f r a g i l e ( s u r i n g a r ) h a r i o t ) 多糖的提取分离、结构表征及其