免疫学应用.ppt

免疫学应用,湘潭职业技术学院检验教研室邓阳勇,第一节免疫学诊断,一、抗原抗体的检测二、淋巴细胞的检测,一、抗原抗体的检测,原理：Ag与相应Ab在体内与体外可发生特异性结合检测原则：1.已知Ag检测未知Ab2.已知Ab检测未知Ag,细菌学诊断,标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。尽可能采集病变明显部位的材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当的保存方式。,标本采集与送检原则,致病菌的检验程序,人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。,血清学诊断,体外抗原抗体反应,抗原抗体反应,1、抗原抗体的结合与析出2、抗原抗体反应的特点3、抗原抗体反应的影响因素,引起抗原抗体结合的作用力,1、电荷引力（库仑引力）2、电子云引力（VanderWaals力）3、氢键结合力4、疏水作用力,抗原抗体结合物析出的原因,析出,电解质,抗原抗体反应的特点,1、特异性2、适合比例性3、可逆性,网格学说（latticetheory）,抗体过剩,抗原过剩,抗体抗体比例合适,可逆性,K（亲和常数）=,Ag+Ab,AgAb,抗原抗体反应的影响因素,1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度（37-42。C）,经典的血清学反应,抗原或抗体的检测方法,类型抗原抗体辅助物敏感度（g抗体氮）凝集反应颗粒性凝集素0.01沉淀反应可溶性沉淀素5-10补体溶血反应红细胞溶血素补体0.001-0.3G-细菌溶菌素补体（同上）补体结合反应固定补体抗体补体SRBC溶血素0.1中和反应外毒素抗毒素靶细胞0.01病毒中和抗体靶细胞（同上）,凝集反应,直接凝集反应玻片法：ABO血型鉴定试管法：肥达试验,颗粒性抗原,抗体（凝集素）,正向间接凝集反应如：类风湿因子的检测,可溶性抗原,载体颗粒,抗体（凝集素）,反向间接凝集反应,抗体,可溶性抗原,载体颗粒,间接凝集抑制反应如妊娠诊断试验检测HCG,凝集,凝集抑制,待检样品,待检样品,沉淀反应,液相内沉淀反应,絮状沉淀反应,环状沉淀反应如法医学血迹鉴定,+,+,抗血清,抗原,抗原,抗体,凝胶内沉淀反应,免疫扩散技术,免疫电泳技术,单向扩散试验,双向扩散试验,火箭电泳,对流电泳,免疫电泳,免疫标记技术,主要的免疫标记物,类别标记物用途荧光素FITC、RB200、TRITC免疫组化镧系元素螯合物免疫分析测定放射性核素3H、14C、32P、57Gr免疫分析测定125I、131I酶HRP、AP免疫组化免疫分析测定化学发光物Luminol、lucigenin免疫分析测定金属颗粒胶体金、铁蛋白免疫组化免疫分析测定,标记免疫技术的分类,一、按测定用途分类：1、免疫组化技术2、免疫测定技术二、按标记物分类：1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术,免疫荧光技术,直接法,间接法,补体法,双标记法,放射免疫分析,结合相,游离相,酶联免疫吸附试验,ELISA,间接法,夹心法,竞争法,二、免疫细胞检测技术,1、细胞表面标志检测2、细胞功能检测3、细胞因子检测,表面标志检测,常用的免疫细胞表面标志检测技术,一、免疫标记检测1、荧光抗体法2、酶免疫检测法3、免疫金银染色法二、补体依赖的细胞毒试验（CDC）三、E花环形成试验,SmIg的荧光抗体检测法,SmIg的酶免疫检测法,补体依赖的细胞毒试验（CDC）,染料,补体,E-花环,T细胞,B细胞,花环形成细胞,绵羊红细胞,细胞功能检测,一、转化、增殖试验1、淋巴细胞转化试验2、混合淋巴细胞培养二、细胞毒检测1、T细胞介导的细胞毒试验2、NK活性测定3、ADCC作用测定,常用的免疫细胞功能检测技术,放射性测定,3H-TdR,丝裂原（抗原）刺激,淋巴细胞转化试验原理示意,放射性测定,细胞毒试验原理示意,靶细胞,效应细胞,分离上清,细胞因子检测,可检测的细胞因子,白细胞介素（Interleukin）IL-1、IL-2、IL-18干扰素（Interferon）IFN-、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子（Tumornecrosisfactor）TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony-stimulatingfactor）M-CSF、G-CSF转化生长因子（Transforminggrowthfactor）TGF-趋化因子（Chemokine）IL-8、GROs、MCP-1生长因子（Growthfactor）EGF、FGF、IGF、PDGF,细胞因子检测的特点,1、免疫原性较弱2、样品含量低3、样品具有时效性4、生物效应特异性差,细胞因子检测的方法,1、免疫标记技术检测抗原性测定2、细胞生物学方法检测生物活性测定3、分子生物学技术检测mRNA表达测定,特异性免疫获得方式：自然免疫、人工免疫自然被动免疫：如胎儿从母体获得IgG婴儿从母体获得IgM自然自动免疫：感染病原体后获得免疫力人工自动免疫:接种类毒素、疫苗等人工被动免疫：注射抗毒素、丙种球蛋白等,第二节免疫预防,思考题：1.你知道注射“乙肝疫苗、卡介苗、白白破三联疫苗”的目的是什么？机制？属于何种免疫？2.你知道注射“丙球、胎盘球蛋白、抗毒素、IL-2、IFN”的目的是什么？机制？属于何种免疫？3.注射疫苗和注射丙球等制剂获得免疫力的方式各有什么特点？4请你举一个实例说明何时使用疫苗、何时使用丙球等制剂？理由及注意事项。,人工免疫,定义：根据特异性免疫应答的原理，采用人工方法将Ag/Ab制成各种制剂，接种于人体，使其产生/获得特异性免疫力，达到预防某些疾病的目的。分类：1、人工主动免疫用疫苗或类毒素等抗原接种机体，使之产生特异免疫，从而预防感染的措施。2、人工被动免疫用抗体或细胞因子等制剂，使之获得特异免疫，以治疗或紧急预防感染的措施。,一、人工主动免疫(artificialactiveimmunity)：,定义：人工主动免疫将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。,人工主动免疫生物制剂：,灭活疫苗（死疫苗）：选用免疫原性强的细菌，经人工大量培养后，用理化方法杀死而成。减毒活疫苗：用减毒或无毒力的活病原体制成。类毒素：细菌外毒素经0.3%-0.4%甲醛液作用3-4周后，毒性消失但仍保持免疫原性。亚单位疫苗：根据细菌抗原分析，查明不同致病菌的主要保护性免疫原存在的组分，然后将之制成的疫苗。DNA重组疫苗：通过DNA重组技术制备所需的疫苗。核酸疫苗：或称DNA疫苗、基因疫苗，是将能编码引起保护性免疫应答的病原体免疫原基因片段和质粒载体直接注射入宿主体以表达目的免疫原，进而诱导出体液和细胞免疫的新型疫苗。治疗性疫苗,1、疫苗死疫苗与活疫苗的比较,2、类毒素（接种2次，吸收缓慢，间隔4-6周）外毒素0.3-0.4%甲醛类毒素如：百-白-破精致吸附类毒素3、新型疫苗1）亚单位疫苗：提取有效免疫原成分。(减少不良反应，排除致癌的可能性）如HA、NA，HBSAg,2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。（无需培养微生物，可大量生产，无致癌、返祖的危险性）3）基因工程疫苗图示：编码免疫原基因载体体内酵母菌、大肠杆菌（体外培养）如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、DNA疫苗、转基因植物疫苗等,人工主动免疫注意事项,接种对象：凡免疫力差、与病原体接触机会多、疾病危害大、流行地区易感者。接种剂量、次数和间隔时间（计划免疫程序表）接种途径：皮内、皮下、吸入、口服接种后反应：24h内局部红肿、疼痛、淋巴结大；全身发热、头痛、恶心，数天恢复。禁忌症：高热、急性传染病、严重心血管病、自身免疫病、免疫缺陷病。,二、人工被动免疫(artificialpasstiveimmunity),人工被动免疫定义：注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。,人工被动免疫生物制品：抗毒素(antitoxin)：外/类毒素马Ab丙种球蛋白：正常人血清或健康产妇胎盘中提取人特异性Ig：1.含高效价特异性抗体且超敏反应发生率低2.来源恢复期病人，含高效价特异性抗体供血者血浆接种疫苗/类毒素的免疫者血浆。,人工被动免疫注意事项：注意防止超敏反应早期和足量不滥用丙球应用范围：易感人群、患者,人工主动免疫与人工被动免疫的区别,区别点,第三节免疫治疗,概念：根据免疫学原理，应用物理、化学和生物学的方法增强或抑制机体的免疫机能，人为地纠正免疫异常状态，达到治疗的目的的措施。,分类（作用机制）：,1、免疫增强疗法免疫抑制疗法2、特异性免疫治疗非特异性免疫治疗3、主动免疫治疗：主动增强，“疫苗”，直接作用被动免疫治疗：被动增强，抗体、免疫效应细胞、小分子免疫肽，间接作用，过继免疫,一抗体为基础的免疫治疗二抗原为基础的免疫治疗三细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗四细胞为基础的免疫治疗五免疫调节剂治疗六免疫重建,一、特异性被动免疫治疗（抗体为基础的免疫治疗）,定义：输入特异性免疫效应物质，使机体立即获得某种特定的免疫力，以达到治疗目的。特点：见效快，维持时间短作用：紧急预防和治疗传染病、抗肿瘤和抗移植物排斥反应。如：破伤风、白喉抗毒素，丙种球蛋白抗病毒血清、抗淋巴细胞丙种球蛋白肿瘤特异性McAb（免疫导向疗法）,二、特异性主动免疫治疗（抗原为基础的免疫治疗）,定义：利用抗原性疫苗对机体进行免疫接种，诱导产生特异性免疫应答或免疫耐受，达到治疗目的。特点：见效慢，维持时间长作用：预防传染病、抗肿瘤。如：卡介苗、乙肝V多肽疫苗、流感V亚单位疫苗、肿瘤疫苗,三、非特异性免疫治疗（细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗）,定义：采用非特异性免疫调节剂（如细胞因子及其拮抗剂）来调节机体免疫功能失衡的状况，以达到治疗或辅助治疗的目的。BRM：（生物应答调节剂）调节机体免疫功能，抵抗病原微生物或癌细胞的侵袭。,四、过继性细胞免疫治疗（细胞为基础的免疫治疗）,定义：将自体或同种异体的免疫细胞，经体外激活诱导增殖后输给患者，使其获得免疫效应细胞，在体内发挥作用，达到治疗疾病的作用。（一）活化的免疫细胞（供者/自身）淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK，Lymphokineactivatedkillercells）肿瘤浸润淋巴细胞（TIL，Tumorinfiltratinglymphocyte）,（二）免疫重建,定义：将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋巴干细胞，移植给免疫缺陷个体，使后者的造血能力、免疫功能全部或部分得到恢复。方法：骨髓移植、脐血干细胞移植作用：治疗免疫缺陷病、白血病、再障,（一）免疫增强剂肿瘤、免缺1、免疫因子：细胞因子、免疫核糖核酸、胸腺肽2、化学药物：左旋咪唑TNK，西咪替丁Ts3、微生物制剂：BCG、短小棒状杆菌MCK4、多糖类以及中草药：灵芝、香菇等,五、免疫调节剂治疗,二、免疫抑制疗法,定义：用人工方法减弱或抑制对